局部组合物的制作方法

局部组合物
1.本技术是分案申请，其原申请的国际申请号为pct/ep2019/056735，国际申请日为2019年03月18日，中国国家申请号为201980019695.9，进入中国国家阶段的进入日为2020年09月16日，发明名称为“局部组合物”。
2.本发明涉及一种局部组合物。特别是，本发明涉及包含卡泊三醇和倍他米松二丙酸酯的局部组合物。与包含卡泊三醇和倍他米松二丙酸酯的现有组合物相比，本发明的组合物具有改善的化学稳定性、皮肤渗透性、美观性和/或患者依从性。
3.已知使用包含卡泊三醇和倍他米松二丙酸酯的局部制剂来治疗银屑病。传统上，已证明两种成分都稳定的局部制剂的制造具有挑战性。这是因为两种化合物在不同的ph值下稳定。特别是，卡泊三醇需要大于8的ph值才能获得最大稳定性，而倍他米松(9
‑
氟
‑
11,17,21
‑
三羟基
‑
16
‑
甲基孕甾
‑
1,4
‑
二烯
‑
3,20
‑
二酮)及其酯则需要ph值在4至6范围内以获得最大稳定性。因此，如果在制剂中存在水，则难以在维持活性化合物的良好稳定性的同时将两种活性成分组合在单一制剂中。
4.实现两种活性物质稳定性的一种方法是将它们配制成不含水的组合物。在三种市售产品的开发中都采用了这种方法：软膏、凝胶和泡沫。水的不存在限制了由于水解或ph不相容性而导致的化学降解，并且大量赋形剂的闭塞特性产生了高度的闭塞，有助于活性物质的渗透。然而，像大多数软膏和油基制剂一样，缺乏水以及石蜡和蜡成分的存在使制剂的美学特征很差(s.e.wolverton，comprehensive dermatologic drug therapy第三版(2012)，第13页)。不良的美学特征会限制患者的依从性。
5.在wo 2008/110815中，卡泊三醇和倍他米松二丙酸酯的ph不相容性的问题通过将它们掺入包含多微泡分散体的组合物中来克服。由于组合物包含水，因此可以将它们配制成乳膏，该乳膏比非水软膏和凝胶(例如，上述产品)具有更好的美学特征。这进而可以引起患者依从性的改善。
6.然而，尽管wo 2008/110815的实施例显示出良好的化学稳定性，但是本发明的发明人发现其化学稳定性可以如本文所述进行改善。
7.需要配制适合局部施用的改进的组合物，其解决了现有技术的组合物的至少某些问题。
8.因此，本发明的一个目的在于提供一种包含卡泊三醇和倍他米松二丙酸酯的制剂，其具有比现有技术的非水性制剂(如软膏、凝胶和泡沫)更好的美学效果。
9.本发明的替代和/或另外的方面在于提供一种包含卡泊三醇和倍他米松二丙酸酯的制剂，其可以比现有技术的非水性制剂(如软膏、凝胶和泡沫)引起更好的患者依从性。
10.本发明的替代和/或另外的方面在于提供一种包含卡泊三醇和倍他米松二丙酸酯的制剂，其与现有的乳膏制剂(如wo 2008/110815中公开的那些)相比具有改善的化学稳定性。
11.本发明的替代和/或另外的方面在于提供一种包含卡泊三醇和倍他米松二丙酸酯的制剂，其与现有技术的非水性制剂(如软膏、凝胶和泡沫)和/或现有的乳膏制剂(如wo 2008/110815中公开的那些)相比具有更好的皮肤渗透性。
12.根据第一方面，本发明提供了包含多微泡分散体的用于局部施用的组合物，所述多微泡分散体包含连续的水相和至少一种不连续的油相，
13.其中，所述多微泡分散体包含卡泊三醇，倍他米松二丙酸酯，α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚，并且
14.其中，所述组合物的ph为7.75
±
0.5。
15.本发明的发明人惊奇地发现，当组合物的ph在7.75
±
0.5的范围内时，抗氧化剂α
‑
生育酚和丁基化羟基茴香醚的特定组合相互作用以提供显著增强的卡泊三醇化学稳定性。测试抗氧化剂的其他组合时未观察到此现象。
16.现在将进一步描述本发明。在以下段落中，更详细地定义了本发明的不同方面/实施方式。如此定义的每个方面/实施方式可以与任何其他方面/实施方式或多个方面/实施方式组合，除非明确地有相反的指示。特别是，指示为优选或有利的任何特征可以与指示为优选或有利的任何其他一个或多个特征组合。
17.本发明提供了一种用于局部施用的组合物。用于局部施用的组合物在本文中定义为适合于直接施用至人体或动物身体的一部分的组合物。优选地，所述组合物适合直接施用于皮肤，例如面部、头皮、脚、四肢或躯干。
18.本发明的组合物包含多微泡分散体。在一般意义上使用的术语“多微泡分散体”是指一种特殊类型的亲水性液体包疏水性液体或疏水性液体包亲水性液体的分散体，其包含(a)亲水性液体可混溶相，(b)与第一相不混溶或基本不混溶的第二疏水相和(c)一种或多种表面活性剂，其中分散相或不连续相呈小液滴形式(例如，直径为微米至亚微米级，但更常见的是直径为至少1微米)，并且整体具有以下特征，这些特征将多微泡分散体与常规或普通洗剂和其他分散体类型区分开来：
19.1.它们能够以稳定的形式存在，其中分散相的体积分数(φ
ip
)大于0.7，并可以高达0.97(φ
ip
是不连续相与连续相的体积比，以分数表示)。
20.2.φ
ip
大于0.7的多微泡分散体的显微学外观是单个液滴的聚集体的显微学外观，这些单个液滴紧密地推在一起形成多面体形状，类似于气泡的外观。以这种形式，分散体具有凝胶状性质，并称为凝胶多微泡分散体(gpd)。
21.3.可以形成表面活性剂浓度小于总组合物重量的3％，更典型地小于2％的稳定的多微泡分散体。
22.4.当凝胶状性质消失时，可以通过添加更多的连续相而无需添加更多的表面活性剂，将凝胶多微泡分散体(如上文2中所述)稀释到任何程度。一旦φ
ip
降低至0.7以下后，内相的各个液滴就会分离为球形液滴形式，其保持稳定且完整无损，但是仍然可以松散缔合方式结合在一起，并漂浮到被稀释的分散液的顶部或沉入底部(取决于两相的相对密度)。以这种稀释的形式，每个液滴被称为胶体液体微泡(cla)。只需摇晃稀释的分散液即可立即再形成胶体液体微泡的均匀稳定的分散液。
23.上述每个特征及其组合清楚地将本发明的多微泡分散体与常规洗剂和不具有全部这些特征的其他分散体类型区分开。在以下文献参考中公开了多微泡分散体：sebba
“
biliquid foams”,j.colloid and interface science,40(1972)468
‑
474，和“the behaviour of minute oil droplets encapsulated in a water film”,colloid polymer sciences,257(1979)392
‑
396,hicks“investigating the generation,characterisation,and structure of biliquid foams”,phd thesis,university of bristol,2005,crutchley“the encapsulation of oils and oil soluble substances within polymer films”,phd thesis,the university of leeds,2006，及lye和stuckey,colloid and surfaces,131(1998)119
‑
136。在us
‑
a
‑
4,486,333和wo 97/32559中也公开了微泡。
24.多微泡分散体有时称为“双液泡沫”、“高内相洗剂(hipe)”、“高内相比洗剂(hipre)”和“凝胶洗剂”。在us 5,573,757中，将包含多微泡分散体的组合物描述为“粘弹性凝胶”。涉及具有上述特性的分散体的所有描述都是本发明中使用的多微泡分散体。
25.所述多微泡分散体包含连续的水相和至少一种不连续的油相。换句话说，所述多微泡分散体包含至少一种不连续油相在连续水相中的分散体。如上所述，在多微泡分散体中，不连续相为小液滴形式。因此，本文所用的术语“不连续相”是指形成该特定油相的多个油滴。它不用于表示单个油滴。连续相在物理上与不连续油相不同。
26.与软膏相反，在本发明的组合物中包含连续的水相使其能够以洗剂或乳膏的形式提供。因此，相对于现有技术的软膏，本发明的组合物具有改善的美学性质，从而改善了患者的依从性。优选地，该组合物为洗剂、乳膏或喷雾剂的形式，最优选为乳膏的形式。
27.将理解的是，至少一种不连续相中的每一个都包含药学上可接受的油。可用于本发明的药学上可接受的油的实例包括椰子油、角鲨烷、肉豆蔻酸异丙酯、异硬脂酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、改性甘油三酯、辛酸癸酸甘油酯、分馏甘油三酯、甘油三癸酸酯、甘油三己酸酯，甘油三辛酸酯、甘油三辛酸/癸酸酯、甘油三辛酸/癸酸酯、甘油三辛酸/癸酸/月桂酸酯、甘油三辛酸酯/癸酸酯/亚油酸酯、甘油三辛酸/癸酸/硬脂酸酯、甘油三月桂酸酯、甘油三亚油酸酯、甘油三亚麻酸酯、甘油三油酸酯、甘油三(十一烷酸)酯、亚油酸甘油酯、饱和聚乙二醇甘油酯、主要含有c8
‑
c12脂肪酸链的合成中链甘油三酸酯、中链甘油三酯、长链甘油三酯、改性甘油三酯、分馏甘油三酯、异硬脂酸异硬脂醇酯、己二酸二异丙酯、矿物油、二甲硅油、环甲硅油、氢化聚异丁烯、七甲基壬烷及它们的混合物。优选地，该组合物不包含在25℃时为固体的蜡组分。
28.优选地，所述不连续油相中的至少一种包括辛酸癸酸甘油三酯(cct)和肉豆蔻酸异丙酯(ipm)。优选地，相对于组合物的重量，辛酸癸酸甘油三酯的总量为2重量％至12重量％，更优选为4重量％至10重量％，最优选为5重量％至8重量％。优选地，肉豆蔻酸异丙酯的总量为30重量％至50重量％，更优选35重量％至45重量％，最优选37重量％至43重量％。优选地，肉豆蔻酸异丙酯和辛酸癸酸甘油三酯的重量比为3:1至12:1，更优选4:1至8:1。本发明人已经发现，与单独使用ipm时相比，将少量的cct掺混到至少一种不连续相中导致倍他米松二丙酸酯和卡泊三醇的皮肤扩散改善。这是令人惊讶的，因为ipm是已知的渗透促进剂，会预见到与cct和ipm的组合相比，单独的ipm会提供更好的活性物质扩散。已经发现仅当cct和ipm以上述(相对)量存在时，才获得改善的活性物扩散。已发现包括过多cct对活性物质的皮肤扩散具有负面影响。
29.优选地，相对于组合物的重量，至少一种不连续油相的存在总量为10重量％至90
重量％，更优选为40重量％至90重量％。优选地，相对于组合物的重量，至少一种不连续油相的存在总量为65重量％至80重量％，更优选为70重量％至75重量％。作为另一种选择，该组合物可包含较少量的不连续的油相。例如，至少一种不连续的油相的存在总量可以小于组合物重量的70重量％，更优选为50重量％至70重量％。这些较少量的不连续油相对于头皮产品是典型的。
30.所述多微泡分散体包含卡泊三醇。卡泊三醇是已知用于治疗银屑病的维生素d类似物。其化学式如图1所示。用于本发明的卡泊三醇的来源优选为无水卡泊三醇或卡泊三醇水合物，不过应理解的是，也可以使用其他来源的卡泊三醇，如其盐和溶剂化物。然而，合并到本文描述的组合物中的卡泊三醇的量以卡泊三醇的无水形式(即，基于图1所示的化学式的分子量)计。
31.所述多微泡分散体包含倍他米松二丙酸酯。倍他米松二丙酸酯是倍他米松的酯，已知与卡泊三醇联合用于银屑病的治疗。倍他米松二丙酸酯的化学式示于图2。用于本发明中的倍他米松二丙酸酯的来源优选为无水倍他米松二丙酸酯，不过应当理解的是，也可以使用其他来源的倍他米松二丙酸酯，如其盐、水合物和溶剂化物。然而，合并到本文所述的组合物中的倍他米松二丙酸酯的量以倍他米松二丙酸酯的无水形式(即，基于图2所示的化学式的分子量)计。
32.根据用于在最终组合物中提供所需的各自量的各个来源，调节在组合物的制备中所使用的卡泊三醇源和倍他米松二丙酸酯源的量将在技术人员的能力范围内。
33.本发明的组合物的ph为7.75
±
0.5。优选地，组合物的ph为7.75
±
0.25。将理解的是，可以使用任何合适的酸或碱来将ph调节至合适的值或ph范围。有利地和优选地，可以通过在连续水相中加入合适的缓冲剂来稳定组合物的ph。具有在指定范围内的ph的合适的缓冲系统是本领域技术人员熟知的。
34.令人惊讶且出人预料的是，本发明人发现了两种特定的抗氧化剂，丁基羟基茴香醚和α
‑
生育酚，在7.75
±
0.5的ph范围内相互作用，从而显著提高了卡泊三醇的化学稳定性。特别是，相对于对照(其中不使用抗氧化剂)，单独的丁基羟基茴香醚和单独的α
‑
生育酚对卡泊三醇稳定性没有显著影响，但两种抗氧化剂在一起的组合可显著改善卡泊三醇的稳定性，从而提高了组合物的总体稳定性。以其他抗氧化剂组合未观察到此现象。
35.因此，所述多微泡分散体包含α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚。基于本文提供的定义，包括这些抗氧化剂使得组合物在化学上是稳定的。术语“α
‑
生育酚”涵盖所有立体异构体。因此，α
‑
生育酚可以是rrr
‑
α
‑
生育酚。作为另一种选择，α
‑
生育酚可以是立体异构体的混合物，如全
‑
rac
‑
α
‑
生育酚。用于本发明的α
‑
生育酚的来源可以是无水α
‑
生育酚或其盐、水合物、溶剂化物或酯，如α
‑
生育酚乙酸酯。α
‑
生育酚的最优选来源是无水α
‑
生育酚。丁基羟基茴香醚通常由4
‑
甲氧基苯酚和异丁烯制备，并且通常是2
‑
叔丁基
‑4‑
羟基茴香醚和3
‑
叔丁基
‑4‑
羟基茴香醚异构体的混合物。作为另一种选择，可以分离使用一种异构体。用于本发明中的丁基羟基茴香醚的来源可以是无水丁基羟基茴香醚或其盐、水合物、溶剂化物或酯。最优选的丁基羟基茴香醚源是无水丁基羟基茴香醚。
36.所述多微泡分散体可以进一步包含除α
‑
生育酚以外的生育酚的异构体。特别是，所述多微泡分散体可以包含β
‑
生育酚、γ
‑
生育酚和/或δ
‑
生育酚。在这些实施方式中，相对于α
‑
生育酚的重量，β
‑
生育酚、γ
‑
生育酚和/或δ
‑
生育酚的总量优选至多100重量％，更优
选至多50重量％，还更优选至多30重量％，还更优选至多20重量％，最优选至多10重量％。
37.优选地，如在60％rh
±
5％下测量的，该组合物在25℃
±
2℃下化学稳定至少6个月。优选地，如在60％rh
±
5％下测量的，该组合物在5℃
±
3℃下化学稳定至少12个月。化学稳定性优选在将组合物储存在封闭的气密的琥珀色玻璃容器中之后测量，该容器的顶部空间的体积不超过容器总可用体积的5％。容器优选在未吹扫氮气的情况下密封。“化学稳定的”是指与t＝0相比，相对于卡泊三醇的重量，24
‑
表
‑
卡泊三醇(24
‑
epi)和5,6
‑
反
‑
卡泊三醇各自的量增加少于1重量％，和/或与t＝0相比，相对于倍他米松二丙酸酯的重量，倍他米松17
‑
丙酸酯(21
‑
prop)、倍他米松21
‑
丙酸酯和倍他米松21
‑
乙酸酯17
‑
丙酸酯各自的量增加少于1重量％。上面列出的杂质是卡泊三醇和倍他米松二丙酸酯在水性介质中的已知主要降解产物。优选地，通过测量hplc色谱图中杂质峰的面积与色谱图中与相关api相关联的所有峰的总面积之比来计算每种杂质的量，以百分比表示。
38.优选地，如在60％rh
±
5％下测量的，该组合物在25℃
±
2℃下至少6个月是物理稳定的。优选地，如在60％rh
±
5％下测量的，该组合物在5℃
±
3℃下至少12个月是物理稳定的。物理稳定性优选在将组合物储存在具有不超过容器总可用体积的5体积％的顶部空间的封闭气密琥珀色玻璃容器中之后测量。容器优选在未吹扫氮气的情况下密封。“物理上稳定的”是指与t＝0相比，组合物表现为均匀的乳膏，没有明显的流变或外观变化。
39.优选地，相对于组合物的重量，连续的水相包含至少10重量％的水，更优选10重量％至30重量％，更优选15重量％至25重量％，最优选18重量％至22重量％。作为另一种选择，所述组合物包含更高量的水。例如，相对于组合物的重量，连续的水相可以包含至少30重量％的水，更优选30重量％至50重量％。这些较高的水量常用于头皮产品。
40.优选地，相对于组合物的重量，连续的水相包含至少0.5重量％的异丙醇，更优选至少4重量％，更优选4重量％至10重量％，最优选5重量％至7重量％。尽管局部用组合物的醇含量由于它们在皮肤上的干燥作用而通常需要限制，但本发明人发现，连续水相中异丙醇的存在有助于改善两种活性物质的皮肤渗透性。异丙醇也有助于制剂的保存。
41.优选地，相对于组合物的重量，连续的水相的存在总量为10重量％至90重量％，更优选10重量％至60重量％。优选地，相对于组合物的重量，连续的水相的存在总量为20重量％至35重量％，最优选25重量％至30重量％。作为另一种选择，所述组合物可包含较高量的连续相。例如，相对于组合物的重量，连续的水相的存在量为至少30重量％，更优选30重量％至50重量％。这些较高量的连续水相常用于头皮产品。
42.优选地，相对于组合物的重量，所述组合物包含0.001重量％至0.01重量％的卡泊三醇，更优选0.002重量％至0.008重量％，最优选0.004重量％至0.006重量％。优选地，卡泊三醇主要存在于至少一种不连续的油相中。主要在至少一种不连续油相中是指至少60重量％的卡泊三醇在至少一种不连续油相中，优选至少70重量％，最优选至少80重量％。优选地，至多99重量％的卡泊三醇存在于至少一种不连续的油相中。
43.优选地，相对于组合物的重量，所述组合物包含0.02重量％至0.1重量％的倍他米松二丙酸酯，更优选0.04重量％至0.08重量％，最优选0.05重量％至0.07重量％。优选地，倍他米松二丙酸酯主要存在于至少一种不连续的油相中。主要在至少一种不连续油相中是指至少60重量％的倍他米松二丙酸酯在至少一种不连续油相中，优选至少70重量％，最优选至少80重量％。优选地，至多99重量％的倍他米松二丙酸酯存在于至少一种不连续的油
相中。
44.优选地，相对于组合物的重量，所述组合物包含0.001重量％至0.005重量％的α
‑
生育酚，更优选0.0015重量％至0.003重量％，最优选约0.002重量％。优选地，α
‑
生育酚主要存在于至少一种不连续的油相中。主要在至少一种不连续油相中是指至少60重量％的α
‑
生育酚在至少一种不连续油相中，优选至少70重量％，最优选至少80重量％。优选地，至多99重量％的α
‑
生育酚存在于至少一种不连续的油相中。
45.优选地，相对于组合物的重量，所述组合物包含0.05重量％至0.5重量％的丁基羟基茴香醚，更优选0.06重量％至0.4重量％，更优选0.08重量％至0.2重量％，最优选约0.1重量％。优选地，丁基羟基茴香醚主要存在于至少一种不连续的油相中。主要在至少一种不连续油相中是指至少60重量％的丁基羟基茴香醚在至少一种不连续油相中，优选至少70重量％，最优选至少80重量％。优选地，至多99重量％的丁基羟基茴香醚存在于至少一种不连续的油相中。
46.优选地，所述多微泡分散体进一步包含包括非溶剂油的不连续相。“非溶剂油”是指卡泊三醇和/或倍他米松在其中在20℃具有低溶解度(卡泊三醇小于0.0011重量％，且倍他米松小于0.0142重量％)的油。已经发现，包含另一种包含非溶剂油的不连续相可以改善闭塞性(occlusivity)，从而增强活性物质的渗透性。而且，因为另外的不连续相限制了制剂中存在的连续水相的量，所以它限制了活性物质向连续水相的分配。
47.优选地，相对于组合物的重量，非溶剂油的存在量为至少5重量％，更优选10重量％至40重量％，相对于组合物的重量，更优选20重量％至35重量％，最优选25重量％至30重量％。非溶剂油优选矿物油和/或硅油，更优选地矿物油。
48.优选地，不连续的油相包含第一不连续相、第二不连续相和可选的包含矿物油的第三不连续相，
49.其中，卡泊三醇主要处于第一不连续相，
50.其中，倍他米松二丙酸酯主要处于第二不连续相，并且
51.其中，α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚主要处于第一不连续相，或主要同时处于第一和第二不连续相。
52.词语“主要地”具有与以上定义相同的含义。应当理解的是，第一不连续相没有分散在第二不连续相中，反之亦然。换句话说，所述组合物不包含复杂的内相，例如wo 2005/082515中所公开的。
53.优选地，第一不连续相和第二不连续相各自包含药学上可接受的油。第一不连续相和第二不连续相可以各自包含相同的药学上可接受的油。作为另一种选择，第一不连续相和第二不连续相可以各自包含不同的药学上可接受的油。
54.优选地，药学上可接受的油是中链甘油三酯(mct)和肉豆蔻酸异丙酯(ipm)的混合物。优选地，相对于组合物的重量，中链甘油三酯的存在总量为2重量％至12重量％，更优选4重量％至10重量％，最优选5重量％至8重量％。优选地，肉豆蔻酸异丙酯的存在总量为30重量％至50重量％，更优选35重量％至45重量％最优选37重量％至43重量％。优选地，肉豆蔻酸异丙酯和中链甘油三酯的重量比为3:1至12:1，更优选4:1至8:1。本发明人已经发现，与单独使用ipm时相比，将少量的mct掺入到含有api的油相中可以提高活性物质的皮肤扩散性。这是令人惊讶的，因为ipm是一种已知的渗透促进剂，并且会预见到与mct和ipm的组
合相比，单独的ipm会提供更好的活性物质扩散。已经发现仅当mct和ipm以上述(相对)量存在时，才获得改善的活性物扩散；已经发现包括太多的mct对活性物质的皮肤扩散具有负面影响。“中链甘油三酯”是指其组成脂肪酸具有6至12个碳原子的脂族尾的甘油三酯。优选地，中链甘油三酯为辛酸癸酸甘油三酯。
55.α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚优选主要处于第一不连续相和第二不连续相。优选地，α
‑
生育酚以1:3至3:1的重量比存在于第一不连续相和第二不连续相中，更优选1:2至2:1，最优选约1:1。优选地，丁基羟基茴香醚以1:3至3:1的重量比存在于第一不连续相和第二不连续相中，更优选1:2至2:1，最优选约1:1。
56.优选地，相对于组合物的重量，第一不连续相的存在量为15重量％至30重量％，更优选20重量％至25重量％。
57.优选地，相对于组合物的重量，第二不连续相的存在量为15重量％至30重量％，更优选20重量％至25重量％。
58.优选地，第三不连续相，在存在的情况下，相对于组合物的重量，存在量为5重量％至40重量％，更优选20重量％至35重量％，最优选25重量％至30重量％。
59.优选地，第一不连续相和第二不连续相以1:3至3:1的重量比存在，更优选1:2至2:1，最优选约1:1。
60.优选地，本发明的组合物包含表面活性剂。可将表面活性剂掺入一种或多种不连续油相和/或连续水相中。合适的表面活性剂包括烷基聚乙二醇醚、烷基聚乙二醇酯、乙氧基化醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、离子或非离子表面活性剂、含有25至60个乙氧基的氢化蓖麻油/聚氧乙二醇加合物、含有25至45个乙氧基的蓖麻油/聚氧乙二醇加合物、脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如span 20或span80)、环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物(例如泊洛沙姆407或泊洛沙姆188)、或它们的混合物。
61.优选地，所述组合物包含两种以上表面活性剂，例如掺入一种或多种不连续油相中的第一表面活性剂，和掺入连续水相中的第二不同的表面活性剂。第一和第二表面活性剂优选选自以上列表。第一表面活性剂易于溶解或分散在不连续相的油中，并且优选选自laureth
‑
4(聚氧乙烯(4)单十二烷基醚)、聚山梨酯80、span 80及其两种以上的混合物。第二表面活性剂容易在连续水相中溶解或分散，并且优选选自聚山梨酯20、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、peg
‑
40氢化蓖麻油及其两种以上的混合物。最优选地，第一表面活性剂是laureth
‑
4(聚氧乙烯(4)单十二烷基醚)，并且第二表面活性剂是泊洛沙姆407。
62.优选地，相对于组合物的重量，本文公开的组合物的总表面活性剂含量小于5重量％，更优选小于3重量％，更优选小于2重量％。优选地，总表面活性剂含量为至少0.5重量％。
63.优选地，本发明的组合物可分散于水中。优选地，本发明的组合物可在水中稀释。这增加了本发明使用的灵活性，例如，通过使毛发保持湿润来改善组合物透过毛发在头皮上的施用，或在期望或需要时将制剂从任何局部表面上漂洗掉，或因意外污染衣物而容易通过漂洗去除产品。这些优点改善了用户的使用体验，并提高了患者的依从性。
64.优选地，本发明的组合物还包含胶凝剂和/或流变调节剂，如粘度调节剂。胶凝剂可以例如选自藻酸盐胶或其盐、瓜耳胶、刺槐豆胶、黄原胶、阿拉伯胶、明胶、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素或其盐、膨润土、硅酸铝镁、“卡波姆”(丙烯酸
的交联聚合物的盐)或聚甲基丙烯酸甘油酯或其在乙二醇中的分散体。应当理解的是，可以使用其他合适的胶凝剂。另外，已经发现某些胶凝剂(例如卡波姆)也可以起化学缓冲剂的作用，从而防止在储存和使用过程中组合物的ph值发生不希望的变化。在使用粘度调节剂的情况下，它优选是聚合物纤维素增稠剂。包含胶凝剂和/或流变调节剂可提供额外的抗乳化稳定性，并确保整个组合物中的活性浓度均匀。这些组分的使用在wo97/32559中进行了描述。胶凝剂/增稠剂的选择还可以控制从易于倾倒的稀洗剂到具有显著流动阻力的稠乳膏的制剂粘度。
65.优选地，相对于组合物的重量，本发明的组合物包含0.05重量％至5.0重量％的胶凝剂，优选0.1重量％至2.0重量％，更优选0.2重量％至1.0重量％。在本发明的一个实施方式中，所述组合物具有凝胶的稠度。
66.本发明的组合物还可包含其他添加剂，如防腐剂(例如用于防止微生物所致的腐败)、缓冲剂(用于控制ph并避免不稳定性和对皮肤酸皮的破坏)和抗氧化剂。在使用防腐剂的情况下，相对于组合物的重量，其存在量优选为0.5重量％至1重量％，更优选0.6重量％至0.8重量％。所述防腐剂优选选自苄醇、苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯及其中两种以上的混合物。最优选地，防腐剂是苯氧乙醇。这些添加剂可以包含在多微泡分散体的连续相或不连续相中。可以理解的是，这些添加剂的加入应为被认为有效和有用的水平和材料类型。这些添加剂的选择和数量需要注意，以防止损害本发明的其他性能优点。
67.现在将描述本发明的第一方面的特别优选的实施方式。
68.在一个特别优选的实施方式中，本发明的组合物包含多微泡分散体，所述多微泡分散体包含连续的水相和至少一种不连续的油相，
69.其中，所述多微泡分散体包含卡泊三醇、倍他米松二丙酸酯、α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚，并且
70.其中，所述组合物的ph为7.75
±
0.5，
71.其中，相对于组合物的重量，所述组合物包含：
72.0.002重量％至0.008重量％的卡泊三醇；
73.0.04重量％至0.08重量％的倍他米松；
74.0.0015重量％至0.003重量％的α
‑
生育酚；和
75.0.08重量％至0.2重量％的丁基羟基茴香醚；
76.其中，至少60重量％的卡泊三醇在至少一种所述不连续的油相中，
77.其中，至少60重量％的倍他米松二丙酸酯在至少一种所述不连续的油相中，
78.其中，至少60重量％的α
‑
生育酚在至少一种所述不连续的油相中，
79.其中，至少60重量％的丁基羟基茴香醚在至少一种所述不连续的油相中。
80.其中，所述多微泡分散体还包含含有矿物油的不连续相，并且
81.其中，所述组合物为洗剂或乳膏的形式。
82.在一个特别优选的实施方式中，本发明的组合物包含多微泡分散体，所述多微泡分散体包含连续的水相和至少一种不连续的油相，
83.其中，所述多微泡分散体包含卡泊三醇、倍他米松二丙酸酯、α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚，并且
84.其中，所述组合物的ph为7.75
±
0.5，
85.其中，相对于组合物的重量，所述组合物包含：
86.0.002重量％至0.008重量％的卡泊三醇；
87.0.04重量％至0.08重量％的倍他米松；
88.0.0015重量％至0.003重量％的α
‑
生育酚；和
89.0.08重量％至0.2重量％的丁基羟基茴香醚；
90.其中，至少60重量％的卡泊三醇在至少一种所述不连续的油相中，
91.其中，至少60重量％的倍他米松二丙酸酯在至少一种所述不连续的油相中，
92.其中，至少60重量％的α
‑
生育酚在至少一种所述不连续的油相中，
93.其中，至少60重量％的丁基羟基茴香醚在至少一种所述不连续的油相中，
94.其中，相对于组合物的重量，至少一种不连续的油相的存在总量为10重量％至90重量％，并且
95.其中，相对于组合物的重量，连续的水相的存在量为10重量％至90重量％。
96.在另一个特别优选的实施方式中，本发明的组合物包含多微泡分散体，所述多微泡分散体包含连续的水相和至少一种不连续的油相，
97.其中，所述多微泡分散体包含卡泊三醇、倍他米松二丙酸酯、α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚，并且
98.其中，所述组合物的ph为7.75
±
0.5，
99.其中，相对于组合物的重量，所述组合物包含：
100.0.002重量％至0.008重量％的卡泊三醇；
101.0.04重量％至0.08重量％的倍他米松；
102.0.0015重量％至0.003重量％的α
‑
生育酚；和
103.0.08重量％至0.2重量％的丁基羟基茴香醚；
104.其中，至少60重量％的卡泊三醇在至少一种所述不连续的油相中，
105.其中，至少60重量％的倍他米松二丙酸酯在至少一种所述不连续的油相中，
106.其中，至少60重量％的α
‑
生育酚在至少一种所述不连续的油相中，
107.其中，至少60重量％的丁基羟基茴香醚在至少一种所述不连续的油相中，
108.其中，至少一种所述不连续相包含辛酸癸酸甘油三酯和肉豆蔻酸异丙酯，其中，相对于组合物的重量，辛酸癸酸甘油三酯的存在总量为4重量％至10重量％，其中，相对于组合物的重量，肉豆蔻酸异丙酯的存在总量为35重量％至45重量％，并且其中，肉豆蔻酸异丙酯和辛酸癸酸甘油三酯以4:1至8:1的重量比存在，
109.其中，所述多微泡分散体进一步包含含有矿物油的不连续相，并且
110.其中，所述组合物为洗剂或乳膏形式。
111.在另一个特别优选的实施方式中，本发明的组合物包含多微泡分散体，所述多微泡分散体包含连续的水相和至少一种不连续的油相，
112.其中，所述多微泡分散体包含卡泊三醇、倍他米松二丙酸酯、α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚，并且
113.其中，所述组合物的ph为7.75
±
0.5，
114.其中，相对于组合物的重量，所述不连续的油相包含：
115.15重量％至30重量％的包含辛酸癸酸甘油三酯和肉豆蔻酸异丙酯的混合物的第一不连续相，其中，肉豆蔻酸异丙酯和辛酸癸酸甘油三酯以4:1至8:1的重量比存在，
116.15重量％至30重量％的包含辛酸癸酸甘油三酯和肉豆蔻酸异丙酯的混合物的第二不连续相，其中，肉豆蔻酸异丙酯和辛酸癸酸甘油三酯以4:1至8:1的重量比存在，
117.20重量％至30重量％的包含矿物油的第三不连续相，
118.其中，至少60重量％的卡泊三醇在第一不连续相中，
119.其中，至少60重量％的倍他米松二丙酸酯在第二不连续相中，
120.其中，至少60重量％的α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚在第一不连续相和第二不连续相中，
121.其中，相对于组合物的重量，连续的水相包含4重量％至10重量％的异丙醇，
122.其中，α
‑
生育酚以1:2至2:1的重量比存在于第一不连续相和第二不连续相中，
123.其中，丁基羟基茴香醚以1:2至2:1的重量比存在于第一不连续相和第二不连续相中，并且
124.其中，所述组合物为洗剂或乳膏形式。
125.在另一个特别优选的实施方式中，本发明的组合物包含多微泡分散体，所述多微泡分散体包含连续的水相和至少一种不连续的油相，
126.其中，所述多微泡分散体包含卡泊三醇、倍他米松二丙酸酯、α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚，并且
127.其中，所述组合物的ph为7.75
±
0.5，
128.其中，相对于组合物的重量，所述不连续的油相包含：
129.15重量％至30重量％的包含辛酸癸酸甘油三酯和肉豆蔻酸异丙酯的混合物的第一不连续相，其中，肉豆蔻酸异丙酯和辛酸癸酸甘油三酯以4:1至8:1的重量比存在，
130.15重量％至30重量％的包含辛酸癸酸甘油三酯和肉豆蔻酸异丙酯的混合物的第二不连续相，其中，肉豆蔻酸异丙酯和辛酸癸酸甘油三酯以4:1至8:1的重量比存在，
131.25重量％至35重量％的包含矿物油的第三不连续相，
132.其中，相对于组合物的重量，所述组合物包含：
133.0.002重量％至0.008重量％的卡泊三醇；
134.0.04重量％至0.08重量％的倍他米松；
135.0.0015重量％至0.003重量％的α
‑
生育酚；和
136.0.08重量％至0.2重量％的丁基羟基茴香醚；
137.其中，至少60重量％的卡泊三醇在第一不连续相中，
138.其中，至少60重量％的倍他米松二丙酸酯在第二不连续相中，
139.其中，至少60重量％的α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚在第一不连续相和第二不连续相中，
140.其中，相对于组合物的重量，连续的水相包含4重量％至10重量％的异丙醇，
141.其中，α
‑
生育酚以1:2至2:1的重量比存在于第一不连续相和第二不连续相中，
142.其中，丁基羟基茴香醚以1:2至2:1的重量比存在于第一不连续相和第二不连续相中，并且
143.其中，所述组合物为洗剂或乳膏形式。
144.在另一个特别优选的实施方式中，本发明的组合物包含多微泡分散体，所述多微泡分散体包含连续的水相和至少一种不连续的油相，
145.其中，所述多微泡分散体包含卡泊三醇、倍他米松二丙酸酯、α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚，并且
146.其中，所述组合物的ph为7.75
±
0.5，
147.其中，相对于组合物的重量，所述不连续的油相包含：
148.15重量％至30重量％的包含辛酸癸酸甘油三酯和肉豆蔻酸异丙酯的混合物的第一不连续相，其中，肉豆蔻酸异丙酯和辛酸癸酸甘油三酯以4:1至8:1的重量比存在，
149.15重量％至30重量％的包含辛酸癸酸甘油三酯和肉豆蔻酸异丙酯的混合物的第二不连续相，其中，肉豆蔻酸异丙酯和辛酸癸酸甘油三酯以4:1至8:1的重量比存在，
150.20重量％至35重量％的包含矿物油的第三不连续相，
151.其中，相对于组合物的重量，所述组合物包含：
152.0.002重量％至0.008重量％的卡泊三醇；
153.0.04重量％至0.08重量％的倍他米松；
154.0.0015重量％至0.003重量％的α
‑
生育酚；和
155.0.08重量％至0.2重量％的丁基羟基茴香醚；
156.其中，至少95重量％的卡泊三醇在第一不连续相中，
157.其中，至少95重量％的倍他米松二丙酸酯在第二不连续相中，
158.其中，至少95重量％的α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚在第一不连续相和第二不连续相中，
159.其中，相对于组合物的重量，连续的水相包含15重量％至25重量％的水和4重量％至10重量％的异丙醇，
160.其中，α
‑
生育酚以1:2至2:1的重量比存在于第一不连续相和第二不连续相中，
161.其中，丁基羟基茴香醚以1:2至2:1的重量比存在于第一不连续相和第二不连续相中，
162.其中，所述组合物为洗剂或乳膏形式，并且
163.其中，在60％rh
±
5％测量，所述组合物在25℃
±
2℃化学和物理稳定至少6个月。
164.前述特别优选的实施方式可以与说明书中其他地方描述的优选实施方式自由组合。
165.根据第二方面，提供了一种包含多微泡分散体的用于局部施用的组合物，所述多微泡分散体包含连续的水相和至少一种不连续的油相，
166.其中，所述多微泡分散体包含卡泊三醇、倍他米松二丙酸酯、α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚，
167.其中，至少一种所述不连续的油相包含中链甘油三酯和肉豆蔻酸异丙酯，并且
168.其中，肉豆蔻酸异丙酯和中链甘油三酯以3:1至12:1的重量比存在。
169.第二方面的组合物可以与第一方面的组合物的优选特征自由组合。
170.根据第三方面，提供了一种包含多微泡分散体的用于局部施用的组合物，其中，所述多微泡分散体包含：
171.(i)卡泊三醇；
172.(ii)倍他米松或其酯；
173.(iii)α
‑
生育酚；和
174.(iv)丁基羟基茴香醚。
175.第三方面的组合物可以与第一和第二方面的组合物的优选特征自由组合。
176.根据另一方面，提供了本文所述的用于通过疗法治疗人体或动物体的组合物。
177.根据另一方面，提供了一种通过疗法治疗人体或动物体的方法，该方法包括向所需受试者施用有效量的本文所述的组合物。
178.根据另一方面，提供了本文所述的组合物在制备用于通过疗法治疗人或动物受试者的药物中的应用。
179.根据另一方面，提供了本文所述的用于治疗银屑病的组合物。
180.根据另一方面，提供了一种在人或动物受试者中治疗银屑病的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的本文所述的组合物。
181.根据另一方面，提供了本文所述的组合物在制备用于治疗人或动物受试者的银屑病的药物中的应用。
182.本文所述的组合物可以通过毛发施用于头皮或其他皮肤表面。优选地，在该实施方式中，将毛发弄湿(例如，通过在使用或不使用洗发剂的情况下使用水，然后用毛巾擦干)。然后可以将产品以适当的量施加在头皮上，然后通过毛发按摩到头皮中。然后可以使毛发自然干燥或使用吹风机干燥。有利地，使用该方法，制剂的水分散性形式能够使活性物质在皮肤上均匀分布。作为另一种选择，或另外地可以通过干燥的毛发将组合物按摩到头皮中并保留适当的时间(可以是8小时至12小时)，之后可以在使用或不使用洗发剂的情况下使用水冲洗掉多余或剩余的组合物。
183.根据另一方面，提供了包含本文所述的组合物的包装。优选地，包装是管或无气泵。例如，可以挤压管以局部施加组合物。
184.根据另一方面，提供了一种制备用于局部施用的组合物的方法，该方法包括：
185.(a)制备包含卡泊三醇、α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚的第一多微泡分散体；
186.(b)制备第二多微泡分散体吗，第二多微泡分散体包含倍他米松二丙酸酯，优选还包含α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚；和
187.将第一和第二多微泡分散体混合在一起以形成组合物。
188.优选地，通过所述方法生产的组合物是如上定义的组合物。
189.将理解的是，尽管在制造方法期间将卡泊三醇和倍他米松二丙酸酯在分开的多微泡分散体中提供，但是它们在混合后形成包含两种不连续相的单一多微泡分散体：一种包含卡泊三醇的不连续相，和另一种包含倍他米松二丙酸酯的不连续相。因此，应当理解的是，在第一和第二多微泡分散体混合时，这些油相将保持不同，但是连续相将合并，即，将存在一个连续相，该连续相中将分散有源自第一和第二多微泡分散体的个体油滴。
190.优选地，所述方法进一步包括制备包含矿物油的第三多微泡分散体，并将第三多微泡分散体与第一和第二多微泡分散体混合以形成组合物。再次，尽管该实施方式涉及使用第三多微泡分散体，但是在与第一和第二多微泡分散体混合时，形成了包含三种不连续相的单一多微泡分散体：一种包含卡泊三醇的不连续相，包含倍他米松二丙酸酯的第二不连续相和包含矿物油的第三不连续相。因此，应当理解的是，在混合第一、第二和第三多微
泡分散体后，这些油相将保持不同，但连续相将合并，即，将存在一个连续相，在该连续相中分散有源自第一、第二和第三多微泡分散体的个体油滴。
191.优选地，所述方法进一步包括包装所述组合物。
192.根据另一方面，提供了可通过本文定义的方法获得的组合物。
193.根据另一方面，提供了α
‑
生育酚和丁基羟基茴香醚的组合在用于局部施用的组合物中稳定以下组分中的应用：
194.(i)卡泊三醇；和/或
195.(ii)倍他米松二丙酸酯。
196.现在将结合以下非限制性附图来描述本发明：
197.图1描绘了卡泊三醇的化学结构。
198.图2描绘了倍他米松二丙酸酯的化学结构。
199.图3显示了在含有两种活性成分的多微泡组合物中，在5℃存放9个月后测量的卡泊三醇的主要降解产物(24
‑
表卡泊三醇(24
‑
epi)，较浅的实心圆圈)和倍他米松二丙酸酯的主要降解产物(倍他米松21
‑
丙酸酯(21
‑
prop)，较深的实心圆圈)的量随ph的变化。y轴表示由hplc色谱图确定的包括相关峰的降解产物的水平，以衍生其的总活性药物成分的百分比表示。
200.图4显示了卡泊三醇在多微泡组合物中的化学稳定性，其通过本文所述的纯度方法针对抗氧化剂的不同组合所测定。误差线表示标准差。
201.图5显示了实施例9中测试的三种制剂在72小时透过人皮肤扩散的卡泊三醇的累积量。x轴表示以小时为单位的时间，y轴表示透过皮肤扩散的卡泊三醇的平均累积量，单位为ng/cm2。最深色的实心圆圈表示mc01
‑
53，中等深色的实心圆圈表示mc01
‑
42，最浅色的实心圆圈表示mc01
‑
54。误差线表示平均值的标准误。
202.图6显示了实施例9中测试的三种制剂在72小时内透过皮肤扩散的倍他米松二丙酸酯的累积量。x轴表示以小时为单位的时间，y轴表示透过皮肤扩散的倍他米松二丙酸酯的平均累积量，单位为ng/cm2。最深色的实心圆圈表示mc01
‑
53，中等深色的实心圆圈表示mc01
‑
42，最浅色的实心圆圈表示mc01
‑
54。误差线表示标准差。
203.图7显示了在实施例10中测试的含多微泡分散体的制剂在72小时内透过皮肤扩散的卡泊三醇的累积量。x轴表示以小时为单位的时间，y轴表示透过皮肤扩散的卡泊三醇的平均累积量，单位为ng/cm2。较小的深色三角形表示7％cct，较大的浅色三角形仅表示ipm，而正方形表示13％cct。误差线表示标准差。
204.图8显示了在实施例10中测试的含多微泡分散体的制剂在72小时内透过皮肤扩散的倍他米松二丙酸酯的累积量。x轴表示以小时为单位的时间，y轴表示透过皮肤扩散的倍他米松二丙酸酯的平均累积量，单位为ng/cm2。较小的深色三角形表示7％cct，较大的浅色三角形仅表示ipm，而正方形表示13％cct。误差线表示标准差。
205.图9显示了与可商购的软膏(菱形)相比，根据本发明的制剂(mc01
‑
17，三角形)在72小时内透过皮肤扩散的卡泊三醇的累积量。x轴表示以小时为单位的时间，y轴表示透过皮肤扩散的卡泊三醇的平均累积量，单位为ng/cm2。误差线表示标准差。
206.图10显示了与可商购的软膏(菱形)相比，根据本发明的制剂(mc01
‑
17，三角形)在72小时内透过皮肤扩散的倍他米松二丙酸酯的累积量。x轴表示以小时为单位的
时间，y轴表示透过皮肤扩散的倍他米松二丙酸酯的平均累积量，单位为ng/cm2。误差线表示标准差。
207.现在将结合以下非限制性实施例描述本发明。
208.实施例1
209.通过组合以下组分来制备根据本发明的组合物。
[0210][0211]
首先在40℃将油相的各组分混合在一起直至完全溶解，然后使其冷却，从而制得多微泡子组分a。水相组分也在适当的搅拌下混合直至完全溶解。然后在连续温和的搅拌下
将油相缓慢加入到水相中。油完全加入后，将分散体再混合30分钟。使用相同的方法制得多微泡子组分b和c。将缓冲相d在单独的容器中混合。在另一个合适的容器中，通过在剧烈混合下将卡波姆加入水中，直至完全分散并水合，从而制备凝胶相(e)。
[0212]
然后通过在容器中使用温和的混合将多微泡子组分(a、b和c)混合在一起，从而制成最终制剂。然后将凝胶相(e)加入其中并混合，随后加入缓冲相(d)和额外的异丙醇(f)。然后使用所需量的三乙醇胺50重量％水溶液将制剂调节至ph7.75，随后加入水调节至100重量％。该制剂以1kg规模制作。
[0213]
实施例2
[0214]
通过组合以下组分制备根据本发明的另一种组合物：
[0215][0216]
将各组分按照与实施例1相似的方式合并。
[0217]
实施例3
[0218]
通过组合以下组分制备根据本发明的组合物：
[0219][0220]
将各组分按照与实施例1相似的方式合并。
[0221]
实施例4
[0222]
通过组合以下组分制备根据本发明的组合物：
[0223][0224]
将各组分按照与实施例1相似的方式合并。
[0225]
实施例5
[0226]
通过组合以下组分制备根据本发明的组合物(mc01
‑
42)：
[0227][0228]
将各组分按照与实施例1相似的方式合并。
[0229]
实施例6
[0230]
通过组合以下组分制备根据本发明的另一种组合物(mc01
‑
17)：
[0231][0232]
首先在40℃将油相的各组分混合在一起直至完全溶解，然后使其冷却，从而制得多微泡子组分a。水相组分也在适当的搅拌下混合直至完全溶解。然后在连续温和的搅拌下将油相缓慢加入到水相中。油完全加入后，将分散体再混合30分钟。使用相同的方法制得多
微泡子组分b和c。将缓冲相d在单独的容器中混合。在另一个合适的容器中，通过将卡波姆加入到大量水中并剧烈混合直至完全分散和水合来制备凝胶相e。然后加入异丙醇，并加入足量的三乙醇胺(50重量％水溶液)以调节至ph7.0。然后添加水以使子组分达到重量。
[0233]
然后通过使用温和混合将多微泡子组分(a、b和c)混合在凝胶相(e)中来制成最终制剂。随后添加缓冲相(d)。然后使用所需量的三乙醇胺50重量％水溶液将制剂调节至ph7.75，随后加入水调节至100重量％。该制剂以1kg规模制作。
[0234]
实施例7
[0235]
通过与实施例6类似的方法制备mc01
‑
17的变体。制剂相同，不同之处在于在组分f中包含不量的tea以达到不同的制剂ph值。特别是，制备出ph为7、7.25、7.5、7.75和8.0的制剂。
[0236]
将样品在5℃的密封琥珀色玻璃罐中保存9个月，顶部空间少于5％。将罐在空气中密封。从hplc迹线中计算出纯度(％面积)值，作为分析中存在的api峰与其他api相关峰的比率。结果如图3所示。
[0237]
从图3可以看出，主要的卡泊三醇降解产物(24
‑
表卡泊三醇(24
‑
epi))的水平随着ph的升高而降低，而主要的bdp降解产物(倍他米松21
‑
丙酸酯(21
‑
prop))随ph的升高而升高。发现在低于7.25的ph值下卡泊三醇降解显著增加。因此优选ph值为7.75
±
0.5，优选为7.75
±
0.25。
[0238]
实施例8
[0239]
用不同的单独抗氧化剂及其组合开发了包括对照在内的六种制剂。将样品在40℃的密封琥珀色玻璃罐中保存6个月，顶部空间少于5％。将罐密封，但在密封前未用氮气吹扫。
[0240]
抗氧化剂在两个api油相之间均匀分配。所使用的抗氧化剂是α
‑
生育酚、丁基羟基茴香醚(bha)、丁基羟基甲苯(bht)、乙二胺四乙酸二钠(edta)和柠檬酸。bha和bht的水平为0.1％。edta的用量为0.05％，并且柠檬酸的用量为0.1％。
[0241]
制剂 mc01
‑
39仅bhamc01
‑
40仅α
‑
生育酚mc01
‑
41仅bhtmc01
‑
42bha α
‑
生育酚mc01
‑
43无抗氧化剂(对照)mc01
‑
46bht α
‑
生育酚
[0242]
mc01
‑
42在实施例5中进行了描述。表中其余制剂与mc01
‑
42相似，不同之处在于抗氧化剂的选择并且如上所述。
[0243]
对样品进行监测并每隔一段时间测试其ph和api纯度。
[0244]
使用以下方法测定卡泊三醇的纯度：
[0245]
色谱条件
[0246][0247]
样品制备
[0248]
乙腈用作样品稀释剂。
[0249]
过程：
[0250]
1.将准确称量的0.5g(
±
0.025g)样品放入10ml容量瓶中，最大程度地减少瓶颈上的样品。
[0251]
2.将约5ml样品稀释液加入容量瓶中并涡旋混合2分钟。
[0252]
3.使其平衡至室温。
[0253]
4.用样品稀释液将容量瓶定容，加入磁力搅拌器搅拌2小时。
[0254]
5.将溶液转移至20ml容量瓶中，用庚烷洗涤并定容。
[0255]
6.摇动1分钟，然后搅拌5分钟。
[0256]
7.将等分的下层样品转移到2ml离心管中，并以13000rpm(16,060g
‑
力)离心10分钟。
[0257]
标准制备
[0258]
制备卡泊三醇在乙腈中的浓度为2.5μg/ml的溶液。
[0259]
1.准确称重25mg卡泊三醇标准品，在250ml容量瓶中制备卡泊三醇原液，并用稀释液定容。
[0260]
2.通过将5.0ml的储备溶液移液到20ml的容量瓶中，并用稀释液定容来制备中间溶液。
[0261]
3.通过将1.0ml卡泊三醇中间溶液移入10ml容量瓶中并用稀释液定容，制备最终标准溶液。
[0262]
也可以使用合适的等效制剂。
[0263]
分析
[0264]
近似保留时间：
[0265][0266]
使用以下公式计算卡泊三醇的峰纯度百分比：
[0267]
峰纯度(％)＝(卡泊三醇峰面积 前
‑
卡泊三醇峰面积)/(卡泊三醇峰面积 前
‑
卡泊三醇峰面积 总卡泊三醇相关杂质峰面积)
[0268]
注意：对于分析计算，对前
‑
卡泊三醇峰面积的响应因子为1.9。
[0269]
使用以下方法确定bdp纯度：
[0270]
色谱条件
[0271][0272]
流动相
[0273]
流动相a：在加水之前用乙腈冲洗瓶子。建议使用琥珀色的瓶子，每5天更换一次水，以减少细菌的生长。
[0274]
流动相b：以40/60％的比例混合甲醇和乙腈，并声波处理10分钟。在室温下保存
时，稳定30天。
[0275]
样品制备
[0276]
乙腈用作样品稀释剂。在琥珀色玻璃器皿中进行准备，使用前用乙腈冲洗。样品在环境条件下稳定4天。
[0277]
过程：
[0278]
1.准确称量1.25g样品到25ml容量瓶中，最大程度减少瓶颈上的样品。
[0279]
2.添加约10ml样品稀释液并涡旋混合1分钟。
[0280]
3.超声5分钟。
[0281]
4.允许冷却至环境温度并用稀释剂定容。
[0282]
5.添加磁力搅拌器并搅拌2小时。
[0283]
6.保持15分钟。
[0284]
7.以13,000rpm离心10分钟。准备足够的小瓶以进行过滤。
[0285]
8.将溶液转移到注射器中，通过0.2μm ptfe注射器过滤器过滤，丢弃前1ml。
[0286]
标准品制备
[0287]
乙腈用作样品稀释剂。琥珀色玻璃器皿中进行准备，使用前用乙腈冲洗。样品在环境温度下储存，可稳定保存15天。
[0288]
制备bdp在乙腈中的二倍溶液，浓度为32μg/ml。
[0289]
示例程序：
[0290]
1.准确称量25.0mg(
±
2mg)bdp参考物质到25ml烧瓶中。用乙腈溶解并稀释至一定体积(100μg/ml储备溶液)。
[0291]
2.将0.8ml的储备溶液移入25ml的容量瓶中，并用稀释剂稀释至一定体积(32μg/ml工作标准溶液)。
[0292]
3.将1.0ml的储备溶液移入100ml的容量瓶中，并用稀释剂稀释至一定体积(0.32μg/ml的储备敏感性溶液)。
[0293]
4.将1.0ml的储备敏感性溶液移入10ml容量瓶中，并用稀释剂稀释至一定体积(0.032μg/ml工作敏感性溶液，loq)。
[0294]
5.将1.0ml的储备敏感性溶液移入20ml容量瓶中，并用稀释剂稀释至一定体积(0.016μg/ml工作敏感性溶液，lod)。
[0295]
分析
[0296]
相对保留时间(rrt)和相对响应因子(rrf)：
[0297][0298]
bdp保留时间约为18分钟。
[0299]
计算：
[0300]
在0
‑
5分钟到25
‑
35分钟之间抑制积分。忽略由于安慰剂、bha和卡泊三醇引起的峰。
[0301]
使用以下公式计算bdp和杂质的％w/w：
[0302]
分析(％)＝[样品面积
×
样品重量(mg)
×
纯度(作为小数)
×
稀释因子(3.2)]/[标准面积
×
样品重量(mg)
×
rrf]
[0303]
假设任何未知峰的rrf为1.0。
[0304]
下表显示了倍他米松二丙酸酯的结果。
[0305]
制剂 bdp纯度40℃6个月mc01
‑
46bht α
‑
生育酚95.13mc01
‑
43无抗氧化剂(对照)95.16mc01
‑
41仅bht95.14mc01
‑
42bha α
‑
生育酚95.04mc01
‑
40仅α
‑
生育酚95.37mc01
‑
39仅bha95.81
[0306]
关于bdp纯度，似乎没有明显的趋势或差异，而这不能由ph的轻微变化来解释。
[0307]
卡泊三醇的结果显示在下表和图4中。
[0308]
制剂 卡泊三醇纯度40℃6个月mc01
‑
42bha α
‑
生育酚95.17mc01
‑
46bht α
‑
生育酚93.87mc01
‑
39仅bha93.31mc01
‑
41仅bht92.81mc01
‑
43无抗氧化剂(对照)87.2mc01
‑
40仅α
‑
生育酚93.53
[0309]
发现组合的bht和α
‑
生育酚可显著改善卡泊三醇的稳定性。相反，发现单独的bha、
单独的bht、单独的α
‑
生育酚、以及组合的bht和α
‑
生育酚对卡泊三醇稳定性具有相似的作用。
[0310]
实施例9
[0311]
进行了扩散实验，来研究异丙醇(ipa)水平对通过人皮肤扩散的卡泊三醇和bdp量的影响。
[0312]
如表中总结的，对三种制剂进行了研究。
[0313]
fn idipa水平mc01
‑
425.7％mc01
‑
530.5％mc01
‑
540％
[0314]
mc01
‑
42在实施例5中进行了描述。表中的其余制剂与mc01
‑
42相似，不同之处在于ipa含量如上所述。
[0315]
皮肤扩散研究进行了72个小时。对于这三种制剂中的每一种，将九个小室充满受体相(70％磷酸盐缓冲液，30％异丙醇)并加载30mg制剂。在16h，24h，40h，48h，64h和72h收集受体相。在注入hplc之前，所有样品和标准品均通过ptfe过滤器(直径13mm，孔径0.45μm，亲水性ptfe，millipore，uk)过滤，以除去样品中的纸纤维和其他颗粒。
[0316]
使用waters h
‑
class uplc系统进行hplc分析。使用的柱为beh c18 50x2.1mm，1.7μm粒径(waters，uk)，其装有vanguard柱前过滤器(waters，uk)。整个柱保持在40℃。在分析运行期间将样品保持在环境温度下。不建议在运行过程中冷却样品，因为缓冲盐会从受体相基质中沉淀出来。
[0317]
使用等度hplc方法。将35/45/20v/v/v水/乙腈/甲醇的流动相以0.5ml/min的速度泵入。整个注射量为10μl。使用uv
‑
vis光电二极管阵列检测器进行检测，并在240nm(bdp)和263nm(卡泊三醇)处获取色谱图。使用3分钟的运行时间。观察到保留时间分别为0.9分钟(bdp)和1.3分钟(卡泊三醇)。
[0318]
下表总结了在每个时间点确定的两种活性物质的累积量。
[0319]
卡泊三醇通过人体皮肤扩散的累积量。
[0320]
时间(h)mc01
‑
42(ng/cm2)mc01
‑
53(ng/cm2)mc01
‑
54(ng/cm2)1617.5
±
5.817.8
±
1.632.3
±
8.72430.6
±
5.924.6
±
5.220.1
±
8.24090.2
±
11.669.5
±
12.357.7
±
15.648136.4
±
17.1112.1
±
15.286.3
±
18.464320.2
±
49.9203.6
±
30.0149.1
±
24.372510.3
±
96.8377.2
±
44.3203.6
±
32.0
[0321]
bdp通过人体皮肤扩散的累积量。
[0322]
时间(h)mc01
‑
42(ng/cm2)mc01
‑
53(ng/cm2)mc01
‑
54(ng/cm2)16123
±
7447
±
8136
±
8424253
±
91142
±
20203
±
10540758
±
163368
±
56521
±
215
481070
±
202667
±
66737
±
227641884
±
3331132
±
1421116
±
270722649
±
3931569
±
2411358
±
289
[0323]
结果如图5和6所示。
[0324]
对于倍他米松二丙酸酯和卡泊三醇，当包含5.7％异丙醇时，在72小时时的累积扩散明显高于0.5％和0％。
[0325]
实施例10
[0326]
制备了mc01
‑
17(请参见实施例6)的两种变体：一种组分a和b中每种的ipm的一部分用cct代替(得到的总cct含量为13％)，另一种用cct被ipm完全取代。mc01
‑
17本身总共包含7％的cct。
[0327]
使用与实施例9相同的方法测量三种制剂中每一种的人皮肤扩散。图7和8分别显示了在不同时间点的卡泊三醇和bdp的平均累积通量，单位为ng/cm2。
[0328]
从图7和图8可以看出，与纯(0％cct)或13％cct相比，7％的cct水平对于卡泊三醇(p＝0.0015)和bdp(p＝0.0162)而言均显示出明显更高的通量(anova)。结果令人惊讶，因为可以认为附加的ipm(一种已知的渗透促进剂)会更有益，但在这种情况下，似乎更多并不是必然更好。
[0329]
进行了进一步的实验，其中使用与上述相同的皮肤扩散测试，将mc01
‑
17与市售的软膏进行了比较。图9和10分别显示了在不同时间点的卡泊三醇和bdp的平均累积通量，单位为ng/cm2。从图9和10中可以看出，与相比，mc01
‑
17的卡泊三醇和bdp的皮肤渗透力令人惊讶地好。
[0330]
前面的详细描述已经通过解释和说明的方式提供，并且无意于限制所附权利要求的范围。对于本领域的普通技术人员而言，本文所示的当前优选实施方式中的许多变型将是显而易见的，并且落在所附权利要求及其等同物的范围内。