一种促创面愈合的抑菌软膏及其制备方法与流程

1.本发明涉及一种软膏及其制备方法，具体涉及一种促创面愈合的抑菌软膏及其制备方法，属于治疗皮肤外伤及感染等医药领域。


背景技术：

2.目前治疗创面感染的外用化学药多以抗生素、银盐等为主要成分，但化学药作用机制单一、缺乏综合疗效，特别是近些年抗生素滥用、细菌耐药等现象的增多，使化学药在治疗皮肤创面疾病中面临诸多难题。中医认为烧烫伤是热毒入侵、气滞血淤所致，治疗时应以防火邪内攻、清热解毒、活血逐淤、去腐排脓等原则为主。
3.目前中药五谷虫已经通过美国fda和欧洲ce认证，可以将活体中药五谷虫应用于临床，中国糖尿病足防治指南(2019版)指出，活体中药五谷虫可以对糖尿病足进行清创治疗。但由于饲养活体中药五谷虫并不方便，活体中药五谷虫的活动也受季节、温度的影响，因此发明一种含有中药五谷虫有效成分的现代中药制剂显得更为重要。目前中药五谷虫相关抑菌产品较少，经检索专利可知，《用于抑菌修复的手性超分子水凝胶皮肤软膏的制备方法》涉及一种含有中药五谷虫提取物的软膏，但该专利所述产品中的中药五谷虫提取物制备方法不清楚，产品促创面愈合效果不明确，并且该产品所含有的一种手性超分子水凝胶成分制备方法复杂，势必导致该产品不易扩大生产。因此亟需一种制备方法简单、促创面愈合效果明确的产品。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种促创面愈合的抑菌软膏及其制备方法，其主要成分为中药五谷虫，该软膏具有使用方便、无副作用、具有抗菌谱广、快速杀菌、促创面愈合作用显著等特点。
5.为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
6.一种促创面愈合的抑菌软膏，各组分的重量比例为：中药五谷虫提取物10～20％、天然蜂蜡20～30％、液体石蜡30～40％、凡士林30～40％、尼泊金乙酯0.5～2.0％。
7.对于上文所述的技术方案，进一步优选的，步骤(1)中所述的中药五谷虫来源为蝇科或丽蝇科昆虫的干燥幼虫。具体的，步骤(1)中所述的天然蜂蜡一般为医用黄色天然蜂蜡；步骤(1)中所述的液体石蜡一般为医用液体石蜡轻蜡；步骤(1)中所述的尼泊金乙酯一般为医用尼泊金乙酯。
8.本发明的另一方面在于保护一种促创面愈合的抑菌软膏制备方法，包括以下制备步骤：
9.(1)中药五谷虫提取物的制备：采用co2超临界萃取法对中药五谷虫干燥粉末进行萃取，过滤，既得中药五谷虫提取物。
10.(2)熔和：水浴条件下，取蜂蜡、液体石蜡，凡士林，搅拌至完全互溶，停止加热继续搅拌。待温度下降，加入尼泊金乙酯和步骤(1)制备的中药五谷虫提取物，继续搅拌。待温度
降到40℃后停止搅拌，灌装，既得所述软膏。
11.对于上文所述的技术方案，进一步优选的，所述步骤(1)中，co2超临界萃取工艺条件为萃取压力26～28mpa。
12.对于上文所述的技术方案，进一步优选的，所述步骤(1)中，co2超临界萃取工艺条件为萃取温度为45～50℃。
13.对于上文所述的技术方案，进一步优选的，所述步骤(1)中，co2超临界萃取工艺条件为co2流量20～25kg/h。
14.对于上文所述的技术方案，进一步优选的，所述步骤(1)中，co2超临界萃取工艺条件为分离压力为6～8mpa，分离温度为50～55℃，萃取时间1～2h。
15.对于上文所述的技术方案，进一步优选的，所述步骤(2)中，水浴温度为70～80℃，温度降至50～55℃时加入中药五谷虫提取物、尼泊金乙酯。
16.本发明的另一方面在于保护一种收文所述的促创面愈合的抑菌软膏在抑菌和/或促创面愈合中的应用。
17.本发明的有益效果：
18.1.采用本发明方法制备的软膏，制备方法简单，容易实现规模化生产；
19.2.采用本发明方法制备的软膏，外敷使用，质地细腻、稠度适宜，容易涂抹，方便使用；
20.3.采用本发明方法制备的软膏，其原料成分安全，无副作用，广泛适用于各类人群；
21.4.采用本发明方法制备的软膏，抗菌谱广，对革兰氏阳性菌或阴性菌都有很好的抗菌作用；且尤其是在快速杀菌方面，效果尤为显著；在2min内快速杀菌，对大肠杆菌而言，由对比例组的30～75％提高到99％以上；对金黄色葡萄球菌的作用效果也是由对比例组的43～80％提高到99％以上；对白色念珠菌的作用效果由对比例组的60～85％提高到99％以上，效果尤其突出；
22.5.采用本发明方法制备的软膏，其促创面愈合作用显著。对创面的愈合率，在第三、七、十天分别达到了15％、65％和81.3％以上，超出本领域技术人员的预期效果。
附图说明
23.图1.实施例21样品(软膏)促创面愈合观察结果。
具体实施方式
24.下面结合实例，对本发明的具体实施方式作进一步的详细说明。
25.实施例1～6和对比例1～5
26.中药五谷虫提取物与尼泊金乙酯配伍的抗菌试验
27.试验材料：中药五谷虫提取物和尼泊金乙酯按照不同的重量比例混合；试验所用菌株为金黄色葡萄球菌(atcc6538)第4代(北京陆桥技术有限责任公司)、白色念珠菌(atcc10231)第4代(北京陆桥技术有限公司)。
28.试验方法：杀菌效果(金黄色葡萄球菌)评价：依照《溶出性(抗)抑菌产品抑菌性能试验方法》(gb15979-2002)，对中药五谷虫提取物与尼泊金乙酯不同配伍进行抑菌性能试
验，作用20min后，测定其对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的杀菌率。
29.表1中药五谷虫提取物与尼泊金乙酯不同配伍杀菌率的比较
[0030][0031]
试验结果如表1，表明，当中药五谷虫提取物重量份为0份、尼泊金乙酯重量份为0.5～2.0之间时，二者组合物对金黄色葡萄球菌杀菌率为50.6～50.9％、对白色念珠菌杀菌率为87.4～88.1％。当尼泊金乙酯重量份为0、中药五谷虫提取物重量份为10～20之间时，二者组合物对金黄色葡萄球菌杀菌率为80.5～82.3％，对白色念珠菌杀菌率为60.6～62.1％。当二者同时存在，中药五谷虫提取物重量份为10～20、尼泊金乙酯重量份为0.5～2.0之间时，二者组合物对金黄色葡萄球菌杀菌率为99.7～99.9％，对白色念珠菌杀菌率为97.2～98.2％。
[0032]
根据以上配伍试验结果可知，中药五谷虫提取物对金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌)作用较强，对白色念球菌(真菌)作用较弱；尼泊金乙酯对金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌)作用较弱，对白色念球菌(真菌)作用较强。当二者同时存在时，其对金黄色葡萄球菌和白色念珠的杀菌率高于二者单独存在时对以上两种菌的杀菌作用。根据以上试验结果可以推测，中药五谷虫提取物与尼泊金乙酯在杀菌作用方面，存在一定的协同作用。因此该发明涉及的一种促创面愈合抑菌软膏的处方组成包括中药五谷虫提取物和尼泊金乙酯这两种成分较为合理。当中药五谷虫提取物重量份为10～20之间，尼泊金乙酯重量份为0.5～2.0之间时其组合物具有较广抗菌谱以及抗菌效果。因此限定本发明涉及的软膏中中药五谷虫提取物和尼泊金乙酯比例为：中药五谷虫提取物10～20重量份、尼泊金乙酯0.5～2.0重量份。
[0033]
实施例7～17和对比例7～11co2超临界萃取条件考察试验
[0034]
试验材料：中药五谷虫干燥粉末、ha5006超临界萃取仪(江苏华安超临界仪器有限
公司)、acs分子电子天平(常州电子设备有限公司)
[0035]
试验方法：
[0036]
(1)超临界萃取条件考察：取干燥五谷虫粉末100g，在不同条件下进行萃取，不同萃取条件见表3。以提取率为指标对超临界萃取条件进行考察。
[0037]
(2)中药五谷虫提取物和尼泊金乙酯按重量比10:1混合，检测该混合物的杀菌效果(金黄色葡萄球菌)评价：依照《溶出性(抗)抑菌产品抑菌性能试验方法》(gb15979-2002)，对上述制备得到的中药五谷虫提取物和尼泊金乙酯的混合物进行抑菌性能试验，作用20min后，测定其对金黄色葡萄球菌的杀菌率，如表2。
[0038]
表2不同萃取条件下的提取率与杀菌率的比较(％)
[0039][0040][0041]
表2的试验结果：样品1号～4号萃取时间不同，其他萃取条件相同，样品1号提取率为15.2％，低于样品2号～4号的提取率，而样品4号与3号的提取率相似。萃取时间0.5h的提取率远低于萃取时间1～3h的提取率，综合考虑萃取效率，当萃取时间为1～3h小时，尤其是1～2h时较为合理。
[0042]
样品3号、5号～7号萃取压力不同，其他萃取条件相同，样品5号提取率为25.1％，低于样品3号、6号、7号提取率，而样品7号与6号的提取率相似。可见当萃取压力在26～30mpa，尤其是26～28mpa时较为合理。
[0043]
样品6号、8号～10号co2流量不同，其他萃取条件相同，样品8号提取率为27.6％，低于样品6号、9号、10号提取率，而样品9号与10号的提取率相似。可见co2流量为20～30kg/h，尤其是20～25kg/h时较为合理。
[0044]
样品6号、11号～13号萃取温度不同，其他萃取条件相同，样品11号提取率为25.1％，低于样品6号、12号、13号提取率，而样品6号与13号的提取率相似，但样品13号杀菌
率为80.2％明显低于其他样品，可能是温度过高，导致活性成分失活。可见萃取温度为45～50℃时较为合理。
[0045]
样品9号、14号、15号，分离压力和分离温度发生改变，其他萃取条件没有改变，结果发现3个样品提取率、杀菌率相似，且分别达到了30％、99％以上，可见分离压力和分离温度对提取率与杀菌率没有太大的影响。因此分离压力为6～8mpa、分离温度为50～55℃时较为合理。
[0046]
通过改变萃取条件，比较提取率与杀菌率，可以得到以下结论，co2超临界萃取中药五谷虫活性成分的合理范围为：萃取压力26-28mpa、萃取温度为45～50℃，co2流量20～25kg/h，分离压力为6～8mpa，分离温度为50～55℃，萃取时间1～2h。
[0047]
实施例17～20和对比例12～20
[0048]
处方组成考察试验
[0049]
试验材料：中药五谷虫提取物、尼泊金乙酯、天然蜂蜡、液体石蜡、凡士林；其中中药五谷虫提取物和尼泊金乙酯按重量比10:1混合；试验所用菌株为金黄色葡萄球菌(atcc6538)第4代(北京陆桥技术有限责任公司)。
[0050]
试验方法：
[0051]
(1)软膏外观评价：70℃水浴条件下，取不同比例蜂蜡、液体石蜡，凡士林，各组分含量见表1。经研磨至完全互溶，停止加热，继续搅拌。待温度下降至50℃时，加入固定比例的中药五谷虫提取物和尼泊金乙酯(10:1)，继续研磨。待温度降到40℃后停止搅拌，静置至室温，观察制得软膏的外观。
[0052]
(2)软膏杀菌效果(金黄色葡萄球菌)评价：依照《溶出性(抗)抑菌产品抑菌性能试验方法》(gb15979-2002)，对上述制备软膏进行抑菌性能试验，作用20min后，测定其对金黄色葡萄球菌的杀菌率。
[0053]
表3不同处方组成制得软膏的外观与杀菌率的比较(％)
[0054][0055][0056]
试验结果：上述表3中的4号～15号软膏的杀菌率均大于99.4％，2号、5号、7号、8号、9号软膏质地细腻、稠度适宜。1号～3号软膏的杀菌率明显低于其他组，这与软膏中中药
五谷虫提取物含量有关，当软膏中中药五谷虫含量在10％～30％区间时，其杀菌效果较好。综合考虑软膏外观与杀菌效果，可以判断5号、7号、8号、9号软膏中处方组成较为合理。根据以上四组软膏组成可以推测，中药五谷虫提取物含量在10～20％之间，天然蜂蜡含量在20％～30％之间，液体石蜡含量在30％～40％之间，凡士林含量在30％～40％之间较为合理。
[0057]
根据以上对比试验结果可知，当中药五谷虫提取物10～20％、天然蜂蜡20～30％、液体石蜡30～40％、凡士林30～40％时，软膏外观评价合格，对金黄色葡萄球菌杀菌率能够达到99.4％。结合试验例1结果，最终限定本发明涉及的软膏中各组分重量比例为：中药五谷虫提取物和尼泊金乙酯(10:1)10～20％、天然蜂蜡20～30％、液体石蜡30～40％、凡士林30～40％、尼泊金乙酯0.5～2.0％。
[0058]
实施例21
[0059]
一种促创面愈合的抑菌软膏，其处方构成为：
[0060]
中药五谷虫提取物10kg、天然蜂蜡19.5kg、液体石蜡35kg、凡士林35kg、尼泊金乙酯0.5kg。
[0061]
一种促创面愈合的抑菌软膏制备方法，包括以下制备步骤：
[0062]
(1)粉碎：取丽蝇科昆虫大头金蝇干燥幼虫进行粉碎。
[0063]
(2)超临界萃取：采用co2超临界萃取法，在萃取压力为28mpa、萃取温度为50℃，co2流量为20kg/h，分离压力为8mpa，分离温度为55℃的萃取条件下，对中药五谷虫粉末进行萃取，萃取时间为2h，合并萃取液。
[0064]
(3)过滤：将上述萃取液过滤，既得中药五谷虫提取物。
[0065]
(4)熔和：80℃水浴条件下，取蜂蜡、液体石蜡，凡士林，搅拌至完全互溶，停止加热继续搅拌。待软膏温度下降至55℃，加入中药五谷虫提取物、尼泊金乙酯，继续搅拌。待温度降到40℃后停止搅拌，灌装，既得所述软膏。
[0066]
对比例23
[0067]
处方构成为：中药五谷虫提取物10kg、天然蜂蜡19.5kg、液体石蜡35kg、凡士林35kg
[0068]
制备工艺：同实施例21。
[0069]
实施例22
[0070]
一种促创面愈合的抑菌软膏，其处方构成为：
[0071]
中药五谷虫提取物14kg、天然蜂蜡25kg、液体石蜡30kg、凡士林30kg、尼泊金乙酯1kg。
[0072]
一种促创面愈合的抑菌软膏制备方法，包括以下制备步骤：
[0073]
(1)粉碎：取蝇科昆虫家蝇干燥幼虫进行粉碎。
[0074]
(2)超临界萃取：采用co2超临界萃取法，在萃取压力为26mpa、萃取温度为45℃，co2流量为25kg/h，分离压力为6mpa，分离温度为50℃的萃取条件下，对中药五谷虫粉末进行萃取，萃取时间为1.5h，合并萃取液。
[0075]
(3)过滤：将上述萃取液过滤，既得中药五谷虫提取物。
[0076]
(4)熔和：75℃水浴条件下，取蜂蜡、液体石蜡，凡士林，搅拌至完全互溶，停止加热继续搅拌。待软膏温度下降至50℃，加入中药五谷虫提取物、尼泊金乙酯，继续搅拌。待温度
降到40℃后停止搅拌，灌装，既得所述软膏。
[0077]
对比例24
[0078]
处方构成为：天然蜂蜡25kg、液体石蜡30kg、凡士林30kg、尼泊金乙酯1kg。
[0079]
制备工艺：同实施例22。
[0080]
实施例23
[0081]
一种促创面愈合的抑菌软膏，其处方构成为：
[0082]
中药五谷虫提取物18kg、天然蜂蜡60kg、液体石蜡60kg、凡士林60kg、尼泊金乙酯2kg。
[0083]
一种促创面愈合的抑菌软膏制备方法，包括以下制备步骤：
[0084]
(1)粉碎：取丽蝇科昆虫大头金蝇干燥幼虫进行粉碎。
[0085]
(2)超临界萃取：采用co2超临界萃取法，在萃取压力为27mpa、萃取温度为45℃，co2流量为20kg/h，分离压力为8mpa，分离温度为55℃的萃取条件下，对中药五谷虫粉末进行萃取，萃取时间为1h，合并萃取液。
[0086]
(3)过滤：将上述萃取液过滤，既得中药五谷虫提取物。
[0087]
(4)熔和：75℃水浴条件下，取蜂蜡、液体石蜡，凡士林，搅拌至完全互溶，停止加热继续搅拌。待软膏温度下降至50℃，加入中药五谷虫提取物、尼泊金乙酯，继续搅拌。待温度降到40℃后停止搅拌，灌装，既得所述软膏。
[0088]
对比例25
[0089]
处方构成为：同实施例23
[0090]
制备工艺：中药五谷虫提取物超临界萃取：采用co2超临界萃取法，萃取温度为60℃，其余同实施例23
[0091]
实施例24
[0092]
一种促创面愈合的抑菌软膏，其处方构成为：
[0093]
中药五谷虫提取物1kg、天然蜂蜡3kg、液体石蜡3kg、凡士林3kg、尼泊金乙酯0.2kg。
[0094]
一种促创面愈合的抑菌软膏制备方法，包括以下制备步骤：
[0095]
(1)粉碎：取蝇科昆虫家蝇干燥幼虫进行粉碎。
[0096]
(2)超临界萃取：采用co2超临界萃取法，在萃取压力为26mpa、萃取温度为45℃，co2流量为20kg/h，分离压力为6mpa，分离温度为50℃的萃取条件下，对中药五谷虫粉末进行萃取，萃取时间为1h，合并萃取液。
[0097]
(3)过滤：将上述萃取液过滤，既得中药五谷虫提取物。
[0098]
(4)熔和：70℃水浴条件下，取蜂蜡、液体石蜡，凡士林，搅拌至完全互溶，停止加热继续搅拌。待软膏温度下降至50℃，加入中药五谷虫提取物、尼泊金乙酯，继续搅拌。待温度降到40℃后停止搅拌，灌装，既得所述软膏。
[0099]
实施例25
[0100]
一种促创面愈合的抑菌软膏，其处方构成为：
[0101]
中药五谷虫提取物2kg、天然蜂蜡2kg、液体石蜡3kg、凡士林3kg、尼泊金乙酯0.1kg。
[0102]
一种促创面愈合的抑菌软膏制备方法，包括以下制备步骤：
[0103]
(1)粉碎：取蝇科昆虫家蝇干燥幼虫进行粉碎。
[0104]
(2)超临界萃取：采用co2超临界萃取法，在萃取压力为27mpa、萃取温度为50℃，co2流量为25kg/h，分离压力为7mpa，分离温度为55℃的萃取条件下，对中药五谷虫粉末进行萃取，萃取时间为1.5h，合并萃取液。
[0105]
(3)过滤：将上述萃取液过滤，既得中药五谷虫提取物。
[0106]
(4)熔和：75℃水浴条件下，取蜂蜡、液体石蜡，凡士林，搅拌至完全互溶，停止加热继续搅拌。待软膏温度下降至50℃，加入中药五谷虫提取物、尼泊金乙酯，继续搅拌。待温度降到40℃后停止搅拌，灌装，既得所述软膏。
[0107]
实施例21～25及对比例23～25的抑菌作用试验
[0108]
试验材料：
[0109]
(1)试验菌：金黄色葡萄球菌(atcc6538)第4代(北京陆桥技术有限责任公司)、大肠杆菌(8099)第4代(北京陆桥技术有限责任公司)、白色念珠菌(atcc10231)第4代(北京陆桥技术有限公司)。
[0110]
(2)样品：一种促创面愈合的抑菌软膏(实施例1～5样品)、对比例1～3样品。
[0111]
(3)中和剂：含2％组氨酸、8％卵磷脂、10％吐温-80的d/e肉汤。
[0112]
(4)培养基：营养琼脂、沙氏琼脂。
[0113]
(5)lhh-150sd药品稳定性试验箱(上海一恒科学仪器有限公司)(编号：stc-521)。
[0114]
(6)数字秒表(ps-363)。
[0115]
(7)电热恒温水槽(dk-8ax)(上海一恒科学仪器有限公司)(编号：stc-522)。
[0116]
(8)精密恒温培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)(编号：stc-500)。
[0117]
试验方法：该试验依照《溶出性(抗)抑菌产品抑菌性能试验方法》(gb15979-2002)，对上述软膏进行抑菌性能试验。
[0118]
试验结果：试验温度为25℃
±
1℃时，实施例21～25样品作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的杀菌率均能达到99.3％以上。对比组23～25样品抗菌谱及抗菌效果与实施例21～25样品比较存在差异，本发明方法制备的软膏产品与对比例组产品相比，尤其是在2min中快速杀菌效果上尤为突出，对大肠杆菌而言，由对比例组的30～75％提高到99％以上；对金黄色葡萄球菌的作用效果也是由对比例组的43～80％提高到99％以上；对白色念珠菌的作用效果由对比例组的60～85％提高到99％以上，可见效果尤其突出，结果见表4。
[0119]
表4：软膏对试验菌的杀菌效果
[0120][0121]
注：大肠杆菌阳性对照菌量为3.0
×
104(2.2
×
104～3.8
×
104)cfu/片，金黄色葡萄球菌阳性对照菌量为3.4
×
104(2.6
×
104～4.2
×
104)cfu/片，白色念珠菌阳性对照菌量为3.3
×
104(2.3
×
104～5.0
×
104)cfu/片。
[0122]
实施例21～25及对比例23～25的促压疮创面愈合试验
[0123]
试验材料：雄性昆明小鼠
[0124]
试验方法：采用10％水合氯醛对小鼠进行腹腔注射麻醉，麻药剂量为0.3ml/100g。小鼠背部剃毛，面积约3cm
×
2cm，75％乙醇消毒。轻提小鼠皮肤，放置在两个圆形磁碟之间(直径12mm，厚5mm)，形成一个5mm的“皮肤桥”。施压周期：(16h挤压 8h释放)2个周期。造模完成后去除磁碟，见创面局部皮缘红肿溃烂，即造模成功。将实施例21～25样品、对比组23～25样品(5mg)分别涂抹于压疮创面，每日1次。第3、7、10天，分别取创伤小鼠，麻醉后，应用涤纶投影薄膜覆盖于创面，描记创面轮廓，并将其复印于坐标纸上，计算创面面积。
[0125]
试验结果：软膏对小鼠压疮创面具有促愈合作用，见表5软膏促创面愈合结果和图1实施例1样品(软膏)促创面愈合观察结果。
[0126]
表5：软膏促创面愈合结果
[0127][0128]
根据试验结果可见，对比组23～25样品促创面愈合作用与实施例21～25样品比较存在差异，具体差异体现在创面愈合率上分别为，对比组23～25第三天仅为13.2％以下，第七天的创面愈合率低于50.2％,第十天愈合率低于60.7％，相比之下，本发明的药膏对创面的愈合率，在第三、七、十天分别达到了15％、65％和81.3％以上，可见效果提高非常显著，超出本领域技术人员的预期效果；结果见表5。可见，当改变发明中所述处方组成或制备条件，所制备软膏的促创面愈合效果将会改变。
[0129]
由图1实施例21样品(软膏)促创面愈合观察结果显示，在用药后第10天，小鼠皮肤创面愈合明显。
[0130]
根据以上药效学试验结果，该发明涉及的一种促创面愈合的抑菌软膏，具有显著抑菌及促创面愈合功效。
[0131]
以上所揭露的仅为本发明最佳实施例，不能以此来限定本发明的权利范围，本领域技术人员可以实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于本发明所涵盖范围。