一种山羊ACE2的基因克隆和鼠抗羊多克隆抗体的制备的制作方法

技术特征：
1.一种山羊的ace2蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如ahi85757.1所示。2.一种编码上述山羊的ace2蛋白的基因，其特征在于，所述基因编码如权利要求1所述蛋白的氨基酸序列，或所述基因的核苷酸序列如ahi85757.1所示。3.一种山羊的ace2的连接载体或表达载体，其特征在于，所述连接载体或表达载体含有如ahi85757.1所示的核苷酸序列。4.一种山羊的ace2克隆载体或表达载体的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：s1、选取山羊肾脏组织，经生理盐水漂洗后迅速放入液氮速冻。提取组织rna，使用随机引物将rna反转录为cdna。设计ace2的上下游引物用于ace2全长基因扩增，并在ace2基因片段两侧分别加入bamhi和hindiii两个酶切位点，以cdna为模板，扩增获得ace2基因全长。s2、切胶纯化目的片段，然后用ta克隆的方法将目的片段连接到pmd19t载体上，获得质粒pmd19t-ace2。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，还包括步骤：s3、分别用bamhi和hindiii酶切pet28a载体和pmd19t-ace2质粒，切胶回收目的片段，利用t4连接的方法将目的片段连接到载体上，获得质粒pet28a-ace2。6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤s1中，所述ace2引物的序列如ahi85757.1所示，扩增条件为：95℃、3min；95℃、10s；59℃、30s；72℃、1min30s；35个循环；72℃、10min。7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤s2中，具体连接体系：取0.5ul pmd19-t载体，4.5ul纯化产物，5ulsolutioni于200ulep管中，混匀后在pcr仪器上运行16℃，14h，进行连接。8.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤s3中，具体步骤为：用t4连接酶将pet28a和pet32a载体回收产物和pmd-19t-ace2重组质粒回收产物进行连接，连接体系(10ul)；1ul pet28a或pet32a载体，7ul目的序列，1ult4连接酶，1ul 10
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buffer于200ulep管中，混匀后在pcr仪器上运行16℃，进行过夜连接，获得质粒pet28a-ace2和pet32a-ace2。9.一种山羊的ace2蛋白的制备方法，将权利要求5制备的山羊的ace2原核表达载体，转入dh5α、bl21感受态细胞中，经iptg诱导表达，kcl切胶纯化获得pet32a-ace2重组蛋白。10.一种抗ace2蛋白多克隆抗体的制备，其包括如下步骤：将获得权利要求9获得的山羊pet28a-ace2重组蛋白免疫wistar大鼠，接种方式为颈背部皮下多点注射，首免使用弗氏完全佐剂，分别于第二周进行一免，二免、三免和四免使用弗氏不完全佐剂，于加强免疫后7天取大鼠血清。

技术总结
本发明提供了山羊ACE2基因的克隆、蛋白的表达和纯化及其多克隆抗体的制备。提供了ACE2蛋白的氨基酸序列和基因序列，构建了ACE2原核表达载体，并对蛋白进行纯化。纯化后的蛋白能够制备效价较高的多克隆抗体，并且本发明中的抗原和多克隆抗体可以为进一步开发检测试剂盒奠定基础。ACE2自发现以来，对其多种功能进行了研究，ACE2作为一种强有力的负调节分子，平衡ACE的多种功能，通过靶向降解AngII，在全身各器官中表现出了保护性的作用；其次，作为SARS冠状病毒的必要受体，下调ACE2能够诱发严重的肺衰竭；ACE2和它的同源物Collectrin都同氨基酸转运载体相联系，分别在肾脏和肠道氨基酸吸收中起重要的作用。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。


技术研发人员：张源淑 闫书平 杨维维 何晟 谢娜娜 陈希
受保护的技术使用者：南京农业大学
技术研发日：2020.04.29
技术公布日：2021/10/28