可注射的氯舒隆组合物、其方法和用途与流程

可注射的氯舒隆组合物、其方法和用途
发明领域
1.本发明提供了用于防治哺乳动物肝吸虫的包含氯舒隆的可注射兽医学组合物。本文呈现了这些组合物抗肝吸虫的用途和治疗哺乳动物寄生物感染和侵袭的方法。
2.相关申请的交叉引用
3.本技术要求2019年3月1日提交的美国临时申请号62/812,374的优先权权益，其通过引用并入本文。
4.发明背景
5.动物诸如哺乳动物(包括人类)通常容易受到寄生物感染和侵袭。这些寄生物可以是体外寄生物，诸如昆虫，以及体内寄生物诸如丝虫和其他虫(worm)。如母牛(cow)、猪(pig)、绵羊和山羊这样的生产动物可能感染一种或多种吸虫(trematode)(也称作“吸虫(fluke)”)。这里特别值得关注的是片形吸虫属(fasciola)(即肝吸虫)和拟片形吸虫属(fascioloides)(即鹿吸虫)。几个示例性物种为肝片形吸虫(fasciola hepatica)、巨片形吸虫(fasciola gigantica)和大拟片形吸虫(fascioloides magna)。
6.肝吸虫是一个特殊的问题，因为它们对动物或人类的健康产生不良影响，并且会给家养牲畜(domestic stock)种群造成重大的经济损失。据估计，肝片形吸虫(f.hepatica)对全世界至少2.5亿只绵羊和3.5亿头家牛(cattle)构成风险。此外，除绵羊和家牛以外的家畜(domestic animal)也可作为中间宿主。肝吸虫可引起肝谴责(liver condemnation)、继发感染、产奶量和产肉量减少、流产和生育问题。
7.在上世纪中，针对肝吸虫已经引入了几种类型的防治措施。首先，在1920年代为反刍动物引入了卤代烃(例如四氯化碳)。卤代烃的成功有限且不再使用，主要是因为它们的不良作用和可变的功效。其次，在1950年代后期施用卤代苯酚(例如六氯酚和硫双二氯酚亚砜)，然后是类似的卤代水杨酰苯胺(例如羟氯柳胺、溴沙尼特)。第四，发现苯并咪唑氨基甲酸酯(例如阿苯达唑、鲁苯达唑(luxabendazole))对线虫和成虫(adult)肝片形吸虫具有广泛的抗蠕虫(anthelmintic)谱。另一种苯并咪唑
–
氯化甲基硫代苯并咪唑衍生物三氯苯达唑
–
对肝片形吸虫有很高的成功率。第五，由于毒副作用，在1960年代引入的双苯胺基化合物是不能忍受的。最后，在1970年代研究了苯磺酰胺(例如氯舒隆)。此类广泛修饰的实例证明对成虫和未成熟(immature)的肝片形吸虫均具有很高的功效。
8.苯并咪唑抗蠕虫剂广泛用于治疗体内虫寄生物。这种抗蠕虫剂类别的代表可以在例如以下中找到：美国专利号4,197,307(公开了用于处理吸虫的6
‑
苯基取代的苯并咪唑)、美国专利号4,205,077(公开了作为抗蠕虫剂的苯并咪唑硫化物)、美国专利号4,336,262(公开了在苯并咪唑环的7
‑
位上高度取代的泼浇剂型(pour
‑
on)抗蠕虫剂)和美国专利号4,468,390(公开了抗蠕虫组合物，其为大环内酯抗生素与苯并咪唑、水杨酰胺或异喹啉化合物之一的混合物)。
9.实际上，三氯苯达唑是目前针对成虫和未成熟肝吸虫的选择的药物。然而，并不令人意外地，寄生物抗性的报道正在增加。例如，mottier等人报道一群抗性肝片形吸虫(sligo品系)可能使用改变的流入/流出机制来选择性地减少三氯苯达唑和三氯苯达唑亚
砜(但不是阿苯达唑)的量。参见，mottier等人,j.parasitol.,92(6),2006,pp.1355
‑
1360。mcconville等人报道，幼年三氯苯达唑
‑
抗性的肝片形吸虫经由微管蛋白独立机制(tubulin
‑
independent mechanism)比较易受化合物α(即5
‑
氯
‑2‑
甲硫基
‑6‑
(1
‑
萘氧基)
‑
1h
‑
苯并咪唑)的影响。参见mcconville等人,parasitol.res.,(2007)100:365
‑
377。此外，keiser等人报道了蒿甲醚和oz78在三氯苯达唑
‑
抗性肝片形吸虫中的测试，尽管浓度较高。有关三氯苯达唑抗性的简短综述，参见brennan等人,experimental and molecular pathology,82,(2007)pp.104
‑
109。
10.对三氯苯达唑的抗性和缺乏有效替代品在本领域产生了对表现出低副作用且不会污染作为食物来源的动物的可替代品的迫切需求。最佳组合物还应当是有效的，具有快速的起效活性(onset of activity)，并且对动物接受者及其人类所有者是安全的。
11.在这方面，已知上述类别的苯磺酰胺对肝吸虫具有抗寄生物活性。mrozik的美国专利号4,001,406讨论了1
‑
氨基
‑
卤代烷基
‑
4,6
‑
苯二磺酰胺衍生物的这种活性，而同样属于mrozik的美国专利号4,062,952聚焦于4
‑
氨基
‑
1,3
‑
苯二磺酰胺衍生物。
12.作为苯二磺酰胺类别的成员，氯舒隆已被用于对抗片形吸虫病。氯舒隆的报道的作用机制在于抑制吸虫糖酵解过程中涉及的各种酶，使得吸虫难以从葡萄糖中获取能量。因此，细胞燃料atp的水平被压低，且虫死亡。
13.典型地，氯舒隆以低百分比使用，并与另一种活性剂诸如阿维菌素(avermectin)结合使用。例如，komer的美国专利号5,773,422公开了含有和不含氯舒隆的依维菌素溶液。soll等人的美国专利号8,362,086公开了长效可注射制剂，其可以包括阿维菌素和至多约10％(w/v)的氯舒隆。所使用的组合可以靶向不同类型的寄生物，并且可以进一步对寄生物生命周期的某个时期具有特异性。目前，靶向肝吸虫的抗寄生物产品没有很好地解决虫的幼年阶段，从而需要采取组合策略，这可能仍不能有效地解决幼年肝吸虫抗性的问题。此外，组合策略带来了共同配制、共同施用和解释多于一种活性成分的洗脱期的困难。因此，目前的抗寄生物策略缺乏对肝吸虫所有阶段的综合治疗功效。
14.通过引用并入
15.任意前述专利和公开的申请，在其中或在其审查期间引用的全部文献(“申请所引文献”)和在申请所引文献中引用的或参考的全部文献，和在本文中引用的或参考的全部文献(“本文所引文献”)，和在本文所引文献中引用的或参考的全部文献，以及本文或通过引用并入本文的任意文献中提及的任意产品的任意生产商的说明、描述、产品说明书和产品页，在此处通过引用并入本文，并且可以用于本发明的实践中。
16.本技术中引用或指定任意文献并非承认该文献可以作为本发明的现有技术获得。
17.发明概述
18.本发明涉及包含如本文所述的抗蠕虫有效量的氯舒隆的用于治疗蠕虫侵袭的组合物及其防治哺乳动物中的寄生物的用途。根据本发明，已经发现该组合物对吸虫(包括未成熟和成虫肝吸虫，至少包括肝片形吸虫、巨片形吸虫和大拟片形吸虫)的所有生命周期阶段都显示出预料不到的功效。
19.本发明涵盖可注射组合物的用途或兽医学用途，所述可注射组合物包含抗蠕虫有效量的氯舒隆用于治疗动物(野生或家养)的寄生吸虫感染，所述动物包括家畜和伴侣动物，诸如猫、狗、马、绵羊、山羊、猪和家牛，目的在于使宿主摆脱这类动物遇到的肝吸虫。该
组合物也可以适合用于人类。
20.本发明还提供了用于治疗蠕虫感染的方法，包含向有此需要的动物施用抗蠕虫有效量的氯舒隆。令人惊讶地，已经发现，与本领域已知的较低浓度的氯舒隆组合物相比，本文所述的本发明组合物和制剂表现出优良的抗肝片形吸虫的功效。本发明的某些实施方案包括碳酸丙烯酯(propylene carbonate)和/或甘油缩甲醛组合物，其具有在低温下提供极佳的可注射性(syringeability)的预料不到的益处。某些实施方案还符合usp和ph.eur的抗微生物有效性的要求，且由此不需要添加防腐剂。
21.本发明无意寻求涵盖任何先前已知的产品、制造该产品的过程或使用该产品的方法，使得本技术人保留权利并在本文中公开对任何先前已知的产品、过程或方法的免责声明。进一步指出，本发明并不预期在本发明的范围内涵盖不符合uspto(35u.s.c.
§
112，第一段)或epo(epc第83条)的书面描述和可实施性要求的任何产品、制造该产品的过程或使用该产品的方法，使得申请人保留权利并在本文中公开对任何先前描述的产品、制造该产品的过程或使用该产品的方法的免责声明。本发明及其实施方案由以下详细描述公开。
22.附图简述
23.图1描绘了以下商品化可注射溶液的温度依赖性粘度曲线：(菱形符号)、(正方形符号)、(三角形符号)和gold(圆形符号)；和30％(w/v)氯舒隆在以下中的制剂：甘油缩甲醛(gf)/丙二醇(pg)[42.0％w/v gf/qs至100％pg](“x”符号)、gf(星形符号)和pc(
‘
’)。
[0024]
图2描绘了30％(w/v)氯舒隆在以下中的制剂的温度依赖性粘度曲线：甘油缩甲醛(gf)/丙二醇(pg)[42.0％w/v gf/qs至100％pg](“x”符号)、gf(星形符号)和碳酸丙烯酯(
‘
’)。
[0025]
图3比较了对每种制剂在5℃(左侧柱)和20℃(右侧柱)下30％(w/v)氯舒隆在不同溶剂和溶剂共混物中的可注射性(表示为平均力)。每个5℃/20℃温度对的溶剂，从左到右读取为：甘油缩甲醛(“gf”)；gf/pg(丙二醇)；gf/乙酸丁酯；碳酸丙烯酯；和二甲基异山梨醇醚(“dmi”)。
[0026]
图4描绘了30％(w/v)氯舒隆在以下中的温度依赖性粘度曲线：(a)100％碳酸丙烯酯(“pc”)，菱形图例符号，底部图和(b)20％丙二醇(“pg”)(w/v)/pc(qs至100％)，“x”图例符号，顶部图。将制剂(a)和(b)列于本文的表1a中。
[0027]
图5描绘了30％氯舒隆在以下从左到右以图例列出的制剂中的温度依赖性粘度曲线：(a)100/0，即100％碳酸丙烯酯(“pc”)(菱形符号)，(b)75/25pc/甘油缩甲醛(“gf”)(正方形符号)，(c)50/50pc/gf(三角形符号)，(d)30/70pc/gf(
‘
x’符号)，(e)10/90pc/gf(星形符号)，和(f)0/100，即100％gf(
‘
’符号)。所有比率均以制剂的％w/v计。
[0028]
图6描绘了研究编号5的以ng/ml计的组平均氯舒隆血浆水平。治疗组(trt)2
‑
5：trt 5为最上面的曲线，三角形符号；trt 4为正方形符号；trt 3是最下面的曲线，正方形符号；trt 2为菱形符号。
[0029]
详细描述
[0030]
在本公开内容中和在权利要求中，如“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“含有”和“具有”等这样的术语可以具有美国专利法中赋予它们的含义并且可以表示“包括
(includes)”、“包括(including)”等；“基本上由
……
组成(consisting essentially of)”或“基本上由
……
组成(consists essentially)”同样具有美国专利法中赋予的含义，并且该术语是开放式的，允许存在多于所引用的内容，只要所引用内容的基本或新颖性特征不会因多于所引用内容的存在而改变即可，但排除现有技术实施方案。
[0031]
定义
[0032]
除非另外指定，否则本文所用的术语将具有其在本领域中的常规含义。
[0033]
如本文所用，术语“约”在涉及数值时意在涵盖从指定量的以下变化：在一些实施方案中
±
20％、在一些实施方案中
±
10％、在一些实施方案中
±
5％、在一些实施方案中
±
1％、在一些实施方案中
±
0.5％，并且在一些实施方案中
±
0.1％，因为这样的变化适合于实施所公开的方法或使用所公开的组合物。
[0034]
如本文所用，表述“有效量”是指足以在向动物施用组合物后引发对目标寄生物的期望的生物学反应的组合物中活性剂的浓度，正如通过本领域已知的方法测量和/或在本文的实施例中所述的。在一些实施方案中，与未治疗的对照相比，组合物中活性剂的“有效量”将提供针对目标寄生物的至少70％的功效。在其他实施方案中，与未治疗的对照相比，活性剂的“有效量”将优选地提供至少80％或至少85％的功效。在其他实施方案中，活性剂的“有效量”将提供针对目标寄生物的至少90％、至少93％、至少95％或至少97％或至少98％的功效。
[0035]
缩写“qs”或“qs”根据其惯用含义(即“适量”)使用。因此，根据其惯用含义，qs至100％或qs 100％是指添加足量至等于100％。
[0036]
如本文所指，在流体或液体的上下文中的术语“可注射的”涵盖能够由注射器排出并且适合于经由注射施用于动物的粘度。图1、图2和图4描绘了不同可注射溶液的温度依赖性粘度曲线。如本文所用，如果组合物可以以<82n的柱塞力注射，则该组合物适合或适合于注射(即具有可接受的可注射性)。柱塞力可以使用实验室实验装置测量以比较不同溶液的可注射性。一种这样的装置由配备有用于推动注射器柱塞的圆柱板和固定注射器的夹具(fixture)的ta xt plus texture analyzer(texture technologies)组成。使用这种装置，可以测定在给定温度下通过针头(例如16g x3/4
″
)以速率(例如3.3ml/秒)注射组合物的柱塞力。举例来说，图3描绘了使用上述装置测量的注射力，以评价在5℃和20℃下不同溶剂和溶剂共混物中的30％氯舒隆(w/v)。正如本领域技术人员可以理解的，如果组合物表现出剪切稀化行为(即表观粘度随着压力增加而降低)，则一些高粘度组合物将在指定柱塞力或低于指定柱塞力时表现出可接受的可注射性。本发明的适合的粘度为实际使用过程中通常遇到的温度(诸如约5℃、20℃或两者之间的温度)下适合的粘度。对于某些组合物，可以将粘度上限定义为对于可注射组合物可接受的。例如，在5℃下为或低于约100cp的粘度适合用于注射某些组合物，诸如在碳酸丙烯酯和/或甘油缩甲醛中的30％(w/v)氯舒隆组合物。
[0037]
注射途径可以为肠胃外，例如肌内(im)、腹膜内(ip)或皮下(sq)。另一种注射途径为静脉内，如静脉内推注。皮下注射的位置可以是不同的，正如本领域技术人员将认识到的，包括颈的左侧或右侧。注射可在肩前(anterior to the shoulder)或肩的前面(in front of the shoulder)进行。另一个注射部位为耳。
[0038]
可以将可注射制剂单独包装或在多剂量容器中包装。多剂量瓶(bottle)或小瓶
(vial)含有一定体积的制剂用于给超过一种动物给药。多剂量容器可适用于配合注射器装置，诸如通过simcro
tm
商业销售的那些。常用剂量体积可以为5ml，但可以使用更低或更高的体积，范围例如为约0.2ml
‑
约20ml。例如，在一个注射部位的皮下注射可能限制在不超过约20ml。约10ml是肌内注射的常用上限。在需要更大体积的情况下，可以采用多部位注射。典型地，体积将取决于动物的体重和所施用的剂量。针头尺寸范围在14g
‑
22g，1/2"
‑
1.5"。例如，用于家牛肌内注射的常用针头尺寸为18g x 11/2
″
。通常用于家牛、马、肉猪(hog)、猪和绵羊的其他针头尺寸为16
‑
号(gauge)针头(16g)。在较小的动物(诸如狗和猫)中，可以使用20g或22g针头。在某些情况下，较短的针头，诸如1/2
″
或1
″
针头为适合的，特别是对于皮下注射而言。
[0039]
术语“动物”在本文中用于包括所有哺乳动物并且还包括所有脊椎动物。动物包括但不限于猫、狗、家牛、母牛、鹿、山羊、马、美洲驼、猪、绵羊和牦牛。它还包括处于所有发育阶段(包括胚胎和胎儿阶段)的个体动物。在一些实施方案中，动物可以为反刍动物，诸如肉家牛或奶家牛。
[0040]
在奶家牛中，例如，母牛在“干乳(dry)”与“哺乳”期之间交替。一般而言，干乳期是在产犊期之前用于母牛和包含乳房的组织的休息和恢复时间。一般而言，哺乳期是从产犊到产犊后约40至60天时的峰值生产水平。然后可以使母牛繁殖。此后生产稳步下降，直到产犊后约305天，母牛“干涸”(即为干乳期做好准备)，并且停止挤奶。约60天后或约其前一头犊牛出生后1年，母牛将再次产犊。一些母牛在这大约一年的时间间隔时更难以繁殖；13乃至14个月的周期可能更适合这些动物。
[0041]
在第一个方面，本发明提供了氯舒隆的新的可注射兽医学组合物，如下式(i)中所示：
[0042][0043]
根据第一个方面的一个实施方案，本发明的组合物包含在溶剂中的约25％(w/v)
‑
约35％(w/v)氯舒隆，所述溶剂选自甘油缩甲醛、碳酸丙烯酯及其混合物。该组合物任选地包括二醇溶剂。在一个实施方案中，二醇溶剂选自丙二醇、丁二醇及其混合物，以及任选地抗氧化剂。在一些实施方案中，可以将抗氧化剂诸如α生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、富马酸、苹果酸、抗坏血酸钠、连二硫酸钠(sodium metabisulfate)、没食子酸正丙酯、bha(丁羟茴醚)、bht(丁羟甲苯)一硫代甘油等添加到本制剂中。在一个实施方案中，所述抗氧化剂为丁羟甲苯(bht)。
[0044]
在一些实施方案中，根据本发明的组合物中bht的量为约0.005
‑
约0.03％。在一些实施方案中，bht的量为0.01％(w/v)或0.02％(w/v)。在一个实施方案中，bht的量为0.02％(w/v)。
[0045]
在优选的实施方案中，根据本发明的可注射组合物的粘度在约5℃下为约50
‑
约150cp。在优选的实施方案中，根据本发明的可注射组合物的粘度在约5℃下小于或等于约125cp。在另一个优选的实施方案中，根据本发明的可注射组合物的粘度在约5℃下为约80
‑
约120cp。在另一个优选的实施方案中，根据本发明的可注射组合物的粘度在约5℃下小于
约100cp。
[0046]
当组合物作为单次皮下注射施用时，根据本发明的可注射组合物优选地对未成熟和成虫阶段的吸虫具有功效。在一个实施方案中，未成熟阶段的吸虫为4周龄的吸虫，而成虫阶段的吸虫为大于4周龄。在某些实施方案中，未成熟阶段的吸虫为2周龄或3周龄。在某些实施方案中，当根据本发明的组合物单次皮下注射施用时显示出功效，并且对包括肝片形吸虫在内的吸虫的功效为至少约80％
‑
100％。在某些实施方案中，根据本发明组合物的单次皮下注射剂量对吸虫诸如肝片形吸虫的功效为至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少约95％或至少约98％。
[0047]
在某些实施方案中，当该组合物作为单次皮下注射施用时，根据本发明的可注射组合物可有效杀死至少约80％的任何感染动物的2、3和/或4周龄吸虫。在某些实施方案中，当该组合物作为单次皮下注射施用时，所述可注射组合物可有效杀死至少约90％的任何感染动物的2、3和/或4周龄吸虫。在某些实施方案中，当该组合物作为单次皮下注射施用时，所述可注射组合物可有效杀死至少约92％、至少约95％或至少约98％的任何感染动物的2、3和/或4周龄吸虫。在某些实施方案中，当该组合物作为单次皮下注射施用于动物时，所述可注射组合物可有效杀死至少约80％、至少约92％、至少约95％或至少约98％的任何感染动物的2、3和/或4周龄的肝片形吸虫。
[0048]
在一个实施方案中，本发明的可注射组合物包含甘油缩甲醛。在一些实施方案中，根据本发明的组合物包含甘油缩甲醛和丙二醇。正如在制剂领域公知的，甘油缩甲醛通常被用于增溶不溶于水的化合物以进行水稀释，并且是一种化学和染料乳化剂。丙二醇可以用作溶剂和/或稳定剂。
[0049]
在本发明的组合物的一个实施方案中，甘油缩甲醛的量为约20％(w/v)
‑
约60％(w/v)。在一个实施方案中，该组合物包含约20
‑
约40％(w/v)氯舒隆、约20％
‑
约60％(w/v)甘油缩甲醛，和丙二醇q.s.至100％(w/v)。在一个实施方案中，该组合物包含约25
‑
约35％(w/v)氯舒隆、约20％
‑
约60％(w/v)甘油缩甲醛，和丙二醇q.s.至100％(w/v)。
[0050]
在本发明的组合物的一个实施方案中，甘油缩甲醛的量为约35％(w/v)
‑
约45％(w/v)。在一个实施方案中，该组合物包含约25
‑
约35％(w/v)氯舒隆、约35％
‑
约45％(w/v)甘油缩甲醛，和丙二醇q.s.至100％(w/v)。
[0051]
在一个实施方案中，该组合物基本上由约25
‑
约35％(w/v)氯舒隆、约35％
‑
约45％(w/v)甘油缩甲醛，和丙二醇q.s.至100％(w/v)组成。在一个实施方案中，根据本发明的组合物基本上由约30％(w/v)氯舒隆、约42％甘油缩甲醛(w/v)，和丙二醇q.s.至100％(w/v)组成。在一个实施方案中，根据本发明的组合物由约30％(w/v)氯舒隆、约42％甘油缩甲醛(w/v)，和丙二醇q.s.至100％(w/v)组成。在一个实施方案中，根据本发明的氯舒隆、甘油缩甲醛、丙二醇组合物还含有抗氧化剂，诸如bht。
[0052]
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含氯舒隆、甘油缩甲醛和碳酸丙烯酯。在一个实施方案中，该组合物基本上由氯舒隆、甘油缩甲醛和碳酸丙烯酯组成。在一个实施方案中，该组合物由氯舒隆、甘油缩甲醛和碳酸丙烯酯组成。在一个实施方案中，根据本发明的氯舒隆、甘油缩甲醛、碳酸丙烯酯组合物还含有抗氧化剂，诸如bht。
[0053]
在本发明的某些实施方案中，碳酸丙烯酯与甘油缩甲醛的重量比为约25:75
‑
约95:5。在一个优选的实施方案中，碳酸丙烯酯与甘油缩甲醛的重量比为约30:70。在本发明
的一个实施方案中，碳酸丙烯酯的量为至少约25％(w/v)或为至少约30％(w/v)。在一个实施方案中，根据本发明的组合物优选地基本上由约30％w/v氯舒隆、至少约25％(w/v)或约30％(w/v)碳酸丙烯酯和甘油缩甲醛(q.s.至100％)组成。在一个实施方案中，根据本发明的组合物优选地由约30％w/v氯舒隆、至少约25％(w/v)或约30％(w/v)碳酸丙烯酯和甘油缩甲醛(q.s.至100％)组成。在某些实施方案中，根据本发明的氯舒隆、碳酸丙烯酯和甘油缩甲醛组合物还含有抗氧化剂，诸如bht。
[0054]
在一个优选的实施方案中，本发明的可注射组合物基本上由约30％氯舒隆(w/v)、约30％(w/v)碳酸丙烯酯，和甘油缩甲醛q.s.至100ml组成。在一个优选的实施方案中，本发明由约30％氯舒隆(w/v)、约30％(w/v)碳酸丙烯酯，和甘油缩甲醛q.s.至100％(w/v)组成。
[0055]
在一个实施方案中，本发明为治疗蠕虫感染的可注射组合物，其包含在碳酸丙烯酯(q.s.至100％(w/v)中的约25％(w/v)
‑
约35％(w/v)氯舒隆。在某些实施方案中，根据本发明的氯舒隆/碳酸丙烯酯组合物包括二醇和/或抗氧化剂，诸如bht。在某些实施方案中，根据本发明的氯舒隆/碳酸丙烯酯组合物包含丙二醇和任选地抗氧化剂，诸如bht。
[0056]
在一个实施方案中，本发明为基本上由氯舒隆、碳酸丙烯酯和丙二醇组成的可注射组合物。在某些实施方案中，所述氯舒隆/碳酸丙烯酯/丙二醇组合物包括抗氧化剂，诸如bht。在一个实施方案中，本发明为由氯舒隆、碳酸丙烯酯和丙二醇组成的可注射组合物。在一个实施方案中，本发明为由氯舒隆、碳酸丙烯酯、丙二醇和抗氧化剂诸如bht组成的可注射组合物。在本发明的另一个实施方案中，氯舒隆/碳酸丙烯酯/丙二醇组合物中丙二醇的量为约15
‑
约25％(w/v)。在一个实施方案中，丙二醇的量为约20％(w/v)。在一个实施方案中，本发明为由约30％(w/v)氯舒隆、约20％(w/v)丙二醇、0
‑
约0.03％bht，和碳酸丙烯酯q.s.至100％(w/v)组成的可注射组合物。
[0057]
根据一个实施方案，本发明的可注射组合物基本上由氯舒隆和碳酸丙烯酯组成。根据一个实施方案，本发明为由氯舒隆和碳酸丙烯酯组成的可注射组合物。根据本发明的一个实施方案，所述可注射组合物由氯舒隆、碳酸丙烯酯和抗氧化剂诸如bht组成。在一个实施方案中，本发明为基本上由在碳酸丙烯酯q.s.至100％(w/v)中的约30％(w/v)氯舒隆组成的可注射组合物。在一个实施方案中，本发明为由约30％(w/v)氯舒隆、0
‑
0.03％bht和碳酸丙烯酯(q.s.至100％(w/v))组成的可注射组合物。
[0058]
治疗方法
[0059]
在另一个方面，本发明为治疗蠕虫侵袭的方法，包含向有此需要的动物施用抗蠕虫有效量的氯舒隆。在一个实施方案中，所施用的组合物中氯舒隆的浓度为约25
‑
约35％(w/v)。在一个实施方案中，所述蠕虫为吸虫。在另一个实施方案中，所述蠕虫为肝吸虫肝片形吸虫、巨片形吸虫或大拟片形吸虫。
[0060]
在本发明的一个实施方案中，提供了治疗或预防家畜寄生物感染的方法，其包含对所述动物施用包含有效量的氯舒隆活性剂的可注射组合物。本发明的组合物和方法可有效对抗动物和人类的体内寄生物，特别是吸虫。
[0061]
在一个实施方案中，本发明提供了治疗和预防动物(野生或家养的)的寄生物感染和侵袭的方法，所述动物包括家畜和伴侣动物，诸如猫、狗、马、绵羊、山羊、猪和家牛，目的在于使宿主摆脱这类动物常遇到的肝吸虫。
[0062]
所谓“治疗(treating)”或“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”意指将本发明的
组合物应用或施用于具有寄生物侵袭的动物以根除寄生物或减少侵袭正在接受治疗的该动物的寄生物的数量。应注意，本发明的组合物可以用于预防此类寄生物侵袭。
[0063]
在一个实施方案中，本发明是治疗蠕虫感染的方法，包含向有此需要的动物施用有效量的如本文所述的第一个方面的组合物的步骤。在某些实施方案中，所述组合物对所有阶段的吸虫(包括未成熟和成虫的吸虫)均具有活性。在一个实施方案中，本发明是杀死动物宿主中所有阶段的吸虫的方法，包含向所述动物施用有效量的第一个方面的组合物。在某些实施方案中，本发明提供了杀死动物宿主中4周龄、3周龄或2周龄吸虫的方法，其中该方法包含向所述动物宿主施用有效量的第一个方面的组合物。
[0064]
在某些实施方案中，本发明是治疗蠕虫感染的方法，包含将根据第一个方面的组合物施用于反刍动物诸如牛的步骤。
[0065]
在一个实施方案中，本发明是治疗蠕虫感染的方法，包含向有此需要的动物施用根据第一个方面的组合物的步骤，其中施用组合物的步骤包含单次皮下注射，剂量为约2
‑
15mg/kg(氯舒隆质量/kg动物体重)或约3
–
12mg/kg；在某些实施方案中，剂量为约3、4、5、6、7、8、9、10、11或12mg/kg。
[0066]
在一个实施方案中，本发明是治疗蠕虫感染的方法，包含向有此需要的动物施用根据第一个方面的组合物的步骤，其中施用组合物的步骤包含单次皮下注射，剂量为约4
–
8mg/kg；在一些实施方案中，剂量为4、6或8mg/kg(氯舒隆质量/kg动物体重)。
[0067]
根据本发明的一些实施方案，治疗蠕虫感染的方法包含将有效量的第一个方面的组合物施用于有此需要的动物的步骤，其中所述蠕虫为选自肝片形吸虫、巨片形吸虫和大拟片形吸虫的吸虫。在优选的实施方案中，本发明是治疗蠕虫感染的方法，包含向有此需要的动物施用有效量的第一个方面的组合物的步骤，其中所述蠕虫为肝片形吸虫。在优选的实施方案中，本发明是治疗蠕虫感染的方法，包含向有此需要的反刍动物施用有效量的第一个方面的组合物的步骤，其中蠕虫是肝片形吸虫。在另一个优选的实施方案中，本发明是治疗蠕虫感染的方法，包含向有此需要的反刍动物施用有效量的第一个方面的30％(w/v)氯舒隆和碳酸丙烯酯组合物的步骤，其中所述蠕虫为肝片形吸虫，并且该组合物基本上由在碳酸丙烯酯中的约30％(w/v)氯舒隆组成。
[0068]
在一个实施方案中，本发明提供了治疗方法，其中单次施用第一个方面的组合物杀死至少约90％的任何感染动物的2、3和/或4周龄吸虫。在另一个实施方案中，单次施用第一个方面的组合物杀死至少约90％的任何3周龄吸虫和/或至少90％的任何低于3周龄的吸虫。在另一个实施方案中，单次施用第一个方面的组合物杀死至少约80％或至少约90％的任何2周龄吸虫。根据另一个实施方案，本发明为一种方法，其中单次施用第一个方面的组合物杀死至少约95％的任何感染动物的2、3或4周龄吸虫。在某些实施方案中，本发明为一种方法，其中单次施用第一个方面的组合物杀死至少约95％的任何感染动物的低于4周龄、低于3周龄或任何3周龄或2周龄吸虫。
[0069]
在另一个实施方案中，单次施用根据第一个方面的组合物杀死至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％或至少约98％的任何感染动物的吸虫。在某些实施方案中，单次施用根据第一个方面的组合物杀死三氯苯达唑抗性的吸虫。
[0070]
在一个实施方案中，单次施用根据第一个方面的组合物杀死至少约90％、至少约95％或至少约96％、97％或98％的三氯苯达唑抗性吸虫。
[0071]
在本发明的一个实施方案中，在有此需要的动物中治疗吸虫感染的方法包含施用根据第一个方面的组合物的步骤，其中施用组合物的步骤包含以约6
‑
8mg氯舒隆/kg动物体重的剂量单次皮下注射，且该剂量有效杀死至少约80％
‑
约90％、至少约80％
‑
约95％、至少约90
‑
至少约95％、至少约80％、至少约90％或至少约95％的任何感染动物的2、3或4周龄吸虫。在某些实施方案中，以约6
‑
8mg氯舒隆/kg体重的剂量单次皮下注射杀死至少约90
‑
95％或其中任意整数百分比的感染动物的吸虫。在某些实施方案中，以6
‑
8mg/kg氯舒隆/体重的剂量施用单次皮下注射的本发明组合物提供了对吸虫诸如肝片形吸虫的至少约96％的功效。在另外的实施方案中，以6或8mg/kg氯舒隆/体重的剂量作为单次皮下注射施用所述组合物提供了对吸虫诸如肝片形吸虫的至少约98％的功效。
[0072]
在本发明的一个实施方案中，在有此需要的动物中治疗吸虫感染的方法包含施用根据第一个方面的组合物的步骤，其中施用组合物的步骤包含以约6或约8mg氯舒隆/kg动物体重的剂量单次皮下注射，且该剂量有效杀死至少约80
‑
约95％、至少约80％
‑
约90％、至少约80％或至少约90％或至少约95％的任何感染动物的2、3或4周龄吸虫。在某些实施方案中，以约6或约8mg氯舒隆/kg体重的剂量单次皮下注射杀死至少约90
‑
95％或其中的任意整数百分比的感染动物的吸虫。在某些实施方案中，以约6或约8mg/kg氯舒隆/体重的剂量施用单次皮下注射的本发明组合物提供了对吸虫诸如肝片形吸虫的至少约96％的功效。在另外的实施方案中，以约6或约8mg/kg氯舒隆/体重的剂量作为单次皮下注射施用所述组合物提供了对吸虫诸如肝片形吸虫的至少约98％的功效。
[0073]
在一个实施方案中，本发明是治疗动物吸虫感染的方法，包含施用有效量的组合物的步骤，所述组合物包含(a)约25％(w/v)
‑
约35％(w/v)氯舒隆；(b)选自甘油缩甲醛、碳酸丙烯酯及其混合物的溶剂；(c)任选地，选自丁二醇、丙二醇及其混合物的二醇；和(d)任选地，bht。根据另一个实施方案，施用组合物的步骤包含以约6或8mg氯舒隆/kg动物体重的剂量单次皮下注射。
[0074]
在一个实施方案中，本发明是治疗吸虫感染的方法，包含施用单次皮下注射剂量的根据第一个方面的组合物，其中剂量为6或8mg氯舒隆/kg动物体重，并且该组合物基本上由约30％w/v氯舒隆和碳酸丙烯酯组成。
[0075]
在一个实施方案中，本发明是治疗吸虫感染的方法，包含施用单次皮下注射剂量的根据第一个方面的组合物，其中剂量为6或8mg氯舒隆/kg动物体重，并且该组合物基本上由约30％w/v氯舒隆、碳酸丙烯酯和丙二醇组成；在另一个实施方案中，丙二醇的量为约20％w/v。
[0076]
在一个实施方案中，本发明是治疗吸虫感染的方法，包含施用单次皮下注射剂量的根据第一个方面的组合物，其中所述剂量为6或8mg氯舒隆/kg动物体重，并且该组合物基本上由约30％w/v氯舒隆、碳酸丙烯酯和甘油缩甲醛组成；在另一个实施方案中，碳酸丙烯酯与甘油缩甲醛的重量比为25:75或更高。
[0077]
在一个实施方案中，本发明是治疗本文所述的吸虫感染的方法，其中所述吸虫包含三氯苯达唑抗性的吸虫。在另一个实施方案中，本发明是治疗如本文所述的吸虫感染的方法，其中施用组合物的步骤包含以有效杀死至少约80％、至少约90％、至少约92％、至少约94％、至少约95％或至少约96％、97％或98％的任何感染动物的三氯苯达唑抗性的吸虫的剂量单次皮下注射根据第一个方面的组合物。
[0078]
在一些实施方案中，本发明是治疗动物吸虫感染的方法，包含以下步骤：以约0.5ml、约1.00ml、约1.5ml或约2.0ml/50kg体重(“bwt”)的体积施用根据第一个方面的组合物。在一个实施方案中，以约1.00ml
‑
约1.33ml/50kg bwt的体积施用根据本发明的第一个方面的组合物。
[0079]
额外的活性剂
[0080]
在另一个方面，本发明为上述具有额外的活性剂的可注射氯舒隆组合物。根据以上详述的所有实施方案和方面，可以使用额外的兽医学/药物活性成分。在一些实施方案中，额外的活性剂可以包括但不限于杀螨剂、抗蠕虫剂、抗寄生物剂和杀虫剂。抗寄生物剂可以包括杀体外寄生物剂和杀体内寄生物剂。
[0081]
在一个实施方案中，额外的活性剂可以为大环内酯，诸如阿巴克丁、地马待克丁(dimadectin)、多拉克丁、埃玛菌素(emamectin)、依立诺克丁(eprinomectin)、依维菌素、拉替菌素(latidectin)、雷皮菌素(lepimectin)、莫昔克丁或司拉克丁(selamactin)。额外的活性剂可以为维拉帕米或本文讨论的另一种活性剂。蠕虫侵袭包括存在早期未成熟到成虫的肝吸虫，包括肝片形吸虫、巨片形吸虫和大拟片形吸虫。
[0082]
通常，额外的活性剂以约0.1μg
‑
约1000mg的量被包括在组合物中。更典型地，额外的活性剂可以以约10μg
‑
约500mg、约1mg
‑
约300mg、约10mg
‑
约200mg或约10mg
‑
约100mg/ml的量被包括。
[0083]
在本发明的其他实施方案中，额外的活性剂可以被包括在组合物中以递送约5μg/kg
‑
约50mg/kg动物重量的剂量。在其他实施方案中，额外的活性剂可以以足以递送约0.01mg/kg
‑
约30mg/kg、约0.1mg/kg
‑
约20mg/kg、约0.1mg/kg
‑
约10mg/kg的动物重量的剂量的量存在。在其他的实施方案中，额外的活性剂可以以约5μg/kg
‑
约200μg/kg或约0.1mg/kg
‑
约1mg/kg的动物重量的剂量存在。在本发明的另一个实施方案中，额外的活性剂以约0.5mg/kg
‑
约50mg/kg的剂量被包括。
[0084]
本发明的组合物通过混合适量的活性剂、药学上可接受的载体或稀释剂和任选地结晶抑制剂、抗氧化剂、防腐剂、成膜剂等来制备，以形成本发明的组合物。在一些实施方案中，该组合物可以通过按照在本领域技术人员已知的一般制剂文本(text)中找到的制备这些形式的描述，按照上述制备这些形式的方法获得，所述文本例如remington
–
the science and practice of pharmacy(第21版)(2005),goodman&gilman的the pharmacological basis of therapeutics(第11版)(2005)和ansel的pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems(第8版)，由allen等人编辑,lippincott williams&wilkins,(2005)。
[0085]
本发明的制剂可以含有其他惰性成分，诸如抗氧化剂、防腐剂或ph稳定剂。这些化合物在制剂领域是众所周知的。可以将抗氧化剂诸如α生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、富马酸、苹果酸、抗坏血酸钠、连二硫酸钠、没食子酸正丙酯、bha(丁羟茴醚)、bht(丁羟甲苯)一硫代甘油等添加到本制剂中。抗氧化剂通常以基于制剂的总重量约0.01
‑
约2.0％的量(诸如约0.05％
‑
约1.0％)被添加到制剂中。
[0086]
防腐剂，诸如对羟基苯甲酸酯(对羟基苯甲酸甲酯和/或对羟基苯甲酸丙酯)，以约0.01％
‑
约2.0％或约0.05％
‑
约1.0％范围的量适当地应用于制剂中。其他防腐剂包括苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲酸、苄醇、溴硝丙二醇、对羟基苯甲酸丁酯、西曲溴铵、氯己定、三氯叔
丁醇、氯甲酚、甲酚、对羟基苯甲酸乙酯、咪脲、对羟基苯甲酸甲酯、苯酚、苯氧乙醇、苯乙醇、醋酸苯汞、硼酸苯汞、硝酸苯汞、山梨酸钾、苯甲酸钠、丙酸钠、山梨酸、硫柳汞等。这些化合物的范围包括约0.01％
‑
约5％。
[0087]
还考虑了稳定制剂ph的化合物。此外，这类化合物以及如何使用这些化合物对于本领域从业者是众所周知的。缓冲系统包括，例如，选自乙酸/乙酸盐、苹果酸/苹果酸盐、柠檬酸/柠檬酸盐、酒石酸/酒石酸盐、乳酸/乳酸盐、磷酸/磷酸盐、甘氨酸/甘氨酸盐、三羟甲基氨基甲烷(tris)、谷氨酸/谷氨酸盐或碳酸钠的系统。
[0088]
除氯舒隆外，可以被包括在本发明的组合物中的兽医学药剂也是本领域众所周知的(参见，例如plumb’veterinary drug handbook,第5版,ed.donald c.plumb,blackwell publishing,(2005)或the merck veterinary manual,第9版,(2005年1月))，并且包括但不限于阿卡波糖、马来酸乙酰丙嗪、对乙酰氨基酚、乙酰唑胺、乙酰唑胺钠、乙酸、醋羟胺酸、乙酰半胱氨酸、阿维a、阿昔洛韦、阿苯达唑、硫酸沙丁胺醇、阿芬太尼、别嘌醇、阿普唑仑、烯丙孕素、金刚烷胺、硫酸阿米卡星、氨基己酸、氨戊酰胺硫酸氢盐、氨茶碱/茶碱、胺碘酮、阿米替林、苯磺酸氨氯地平、氯化铵、钼酸铵、阿莫西林、克拉维酸钾、两性霉素b脱氧胆酸盐、基于脂质的两性霉素b(amphotericin b lipid
‑
based)、氨苄西林、安普罗铵、抗酸剂(口服)、抗蛇毒血清、阿扑吗啡(apomorphione)、硫酸安普霉素、抗坏血酸、天冬酰胺酶、阿司匹林(aspiring)、阿替洛尔、阿替美唑、苯磺阿曲库铵、硫酸阿托品、金诺芬(aurnofin)、金硫葡糖、阿扎哌隆、硫唑嘌呤、阿奇霉素、巴氯芬、巴比妥酸盐(barbituates)、贝那普利、倍他米松、氯贝胆碱、比沙可啶、碱式水杨酸铋、博来霉素硫酸盐、十一烯酸勃地酮、溴化物、甲磺酸溴隐亭、budenoside、丁丙诺啡、丁螺环酮、白消安、酒石酸布托啡诺、卡麦角林、鲑鱼降钙素(calcitonin salmon)、骨化三醇(calcitrol)、钙盐、卡托普利、茚满酯酸苄青霉素(carbenicillin indanyl sodium)、卡比马唑、卡铂、卡尼汀、卡洛芬、卡维地洛、头孢羟氨苄、头孢唑林钠、头孢克肟、头孢哌酮钠、头孢噻肟钠、头孢替坦二钠、头孢西丁钠、头孢泊肟酯、头孢他啶、头孢噻呋钠、头孢噻呋、头孢三嗪钠(ceftiaxone sodium)、头孢氨苄(cephalexin)、头孢菌素、头孢匹林、炭(活性炭)、苯丁酸氮芥、氯霉素、氯氮、氯氮 /
‑
克利溴铵、氯噻嗪、马来酸氯苯那敏、氯丙嗪、氯磺丙脲、金霉素、绒促性素(hcg)、铬、西咪替丁、环丙沙星、西沙必利、顺铂、柠檬酸盐、克拉霉素、富马酸氯马斯汀、克仑特罗、克林霉素、氯法齐明、氯米帕明、氯硝西泮、可乐定、氯前列醇钠、二钾氯氮、氯舒隆、氯唑西林、磷酸可待因、秋水仙碱、促皮质激素(acth)、替可克肽、环磷酰胺、环胞素、赛庚啶、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达克霉素/放线菌素d、达肝素钠、达那唑、丹曲林钠、氨苯砜、地考喹酯、甲磺酸去铁胺、地拉考昔、地洛瑞林乙酸盐、去氨加压素乙酸盐、去氧皮质酮特戊酸盐、地托咪定、地塞米松、右泛醇、右雷佐生、右旋糖酐、地西泮、二氮嗪(口服)、双氯非那胺、双氯芬酸钠、双氯西林、枸橼酸乙胺嗪、己烯雌酚(des)、二氟沙星、地高辛、双氢速甾醇(dht)、地尔硫、茶苯海明、二巯丙醇/bal、二甲亚砜、地诺前列素氨丁三醇、二苯基羟基胺、丙吡胺磷酸盐、多巴酚丁胺、多库酯/dss、甲磺酸多拉司琼、多潘立酮、多巴胺、多拉克丁、多沙普仑、多塞平、多柔比星、多西环素、依地酸盐钙二钠、乙二胺四乙酸钙、依酚氯铵、依那普利/依那普利拉、依诺肝素钠、恩氟沙星、硫酸麻黄碱、肾上腺素、依泊汀/红细胞生成素、依立诺克丁、依西太尔、红霉素、艾司洛尔、环戊丙酸雌二醇、依他尼酸/依他尼酸钠、乙醇(醇)、依替膦酸钠、依托度酸、依托咪酯、安乐死剂w/戊巴比妥、法莫替丁、脂肪酸(必需/ω)、非尔氨酯、芬太尼、
硫酸亚铁、非格司亭、非那雄胺、非泼罗尼、氟苯尼考、氟康唑、氟胞嘧啶、氟氢可的松乙酸盐、氟马西尼、氟米松、氟尼辛葡甲胺、氟尿嘧啶(5
‑
fu)、氟西汀、丙酸氟替卡松、马来酸氟伏沙明、甲吡唑(4
‑
mp)、呋喃唑酮、呋塞米、加巴喷丁、吉西他滨、庆大霉素硫酸盐、格列美脲、格列吡嗪、胰高血糖素、糖皮质类固醇试剂、氨基葡萄糖/软骨素硫酸盐、谷氨酰胺、格列本脲、甘油(口服)、格隆溴铵、戈那瑞林、灰黄霉素、愈创甘油醚、氟烷、谷他血红蛋白
‑
200肝素、羟乙基淀粉、透明质酸钠、肼苯哒嗪、氢氯噻嗪(hydrazaline)、氢可酮二酒石酸盐、氢化可的松、氢吗啡酮、羟基脲、羟嗪、异环磷酰胺、吡虫啉、咪多卡二丙酸盐、亚胺硫霉素
‑
西司他丁钠、丙米嗪、inamrinone lactate、胰岛素、干扰素α
‑
2a(人类重组)、碘化物(钠/钾)、吐根(糖浆)、碘泊酸钠、右旋糖酐铁、异氟烷、异丙肾上腺素、异维a酸、异克舒令、伊曲康唑、依维菌素、高岭土/果胶、氯胺酮、酮康唑、酮洛芬、酮咯酸氨丁三醇、乳果糖、亮丙立德、左旋咪唑、左乙拉西坦、左甲状腺素钠、利多卡因、林可霉素、碘塞罗宁钠、赖诺普利、洛莫司汀(ccnu)、虱螨脲(lufenuron)、赖氨酸、镁、甘露糖醇、马波沙星、氮芥、美克洛嗪、甲氯芬那酸、美托咪定、中链甘油三酯、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、美拉索明、褪黑激素、美洛昔康、美法仑、麦啶、巯嘌呤、美罗培南、二甲双胍、美沙酮、醋甲唑胺、乌洛托品扁桃酸盐/马尿酸盐、甲巯咪唑、甲硫氨酸、美索巴莫、美索比妥钠、甲氨蝶呤、甲氧氟烷、亚甲蓝、哌甲酯、甲泼尼龙、甲氧氯普胺、美托洛尔、metronidaxole、美西律、米勃酮、咪达唑仑、米尔倍霉素肟(milbemycin oxime)、矿物油、米诺环素、米索前列醇、米托坦、米托蒽醌、吗啡硫酸盐、莫昔克丁、纳洛酮、癸酸诺龙、萘普生、麻醉药(阿片类)激动剂镇痛药、新霉素硫酸盐、新斯的明、烟酰胺、硝唑尼特、烯啶虫胺、呋喃妥因、硝酸甘油、硝普钠、尼扎替丁、新生霉素钠、制霉菌素、奥曲肽乙酸盐、奥沙拉秦钠、奥美拉唑、昂丹司琼、阿片止泻药、奥比沙星、苯唑西林钠、奥沙西泮、奥昔布宁氯化物、羟吗啡酮、氧四环素、缩宫素、帕米膦酸二钠、pancreplipase、泮库溴铵、巴龙霉素硫酸盐、parozetine、青霉胺、一般信息的青霉素类(general information penicillins)、青霉素g、青霉素v钾、喷他佐辛、戊巴比妥钠、木聚硫钠、己酮可可碱、甲磺酸培高利特、苯巴比妥、酚苄明、保泰松、苯肾上腺素、苯基丙醇胺、苯妥英钠、信息素类、非经肠道磷酸(parenteral phosphate)、植物甲萘醌/维生素k
‑
1、匹莫苯、哌嗪、吡利霉素、吡罗昔康、聚硫酸化的糖胺聚糖、泊那珠利、氯化钾、氯解磷定、哌唑嗪、泼尼松龙/泼尼松、扑米酮、普鲁卡因胺、丙卡巴肼、丙氯拉嗪、溴丙胺太林、疮疱丙酸杆菌(propionibacterium acnes)注射剂、丙泊酚、普萘洛尔、硫酸鱼精蛋白、伪麻黄碱、欧车前亲水胶(psyllium hydrophilic mucilloid)、溴吡斯的明、美吡拉敏马来酸盐、乙胺嘧啶、米帕林、奎尼丁、雷尼替丁、利福平、s
‑
腺苷基
‑
甲硫氨酸(same)、盐水/高渗性泻药、司拉克丁、司来吉兰/l
‑
得普尼林、舍曲林、司维拉姆、七氟烷、水飞蓟素/水飞蓟、碳酸氢钠、聚磺苯乙烯钠、葡萄糖酸锑钠、硫酸钠、硫代硫酸钠、垂体生长激素、索他洛尔、大观霉素、螺内酯、司坦唑醇、链激酶、链佐星、二巯丁二酸、琥珀酰氯化胆碱、硫糖铝、舒芬太尼柠檬酸盐、磺胺氯达嗪钠、磺胺嘧啶/trimethroprim、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、磺胺地索辛(sulfadimentoxine)、磺胺地索辛/奥美普林、柳氮磺吡啶、牛磺酸、替泊沙林、terbinafline、特布他林硫酸盐、睾酮、四环素、硫乙胂胺钠、硫胺素、硫鸟嘌呤、硫喷妥钠、噻替派、促甲状腺素、硫姆林、替卡西林二钠、替来他明/唑拉西泮、tilmocsin、硫普罗宁、妥布霉素硫酸盐、妥卡尼、妥拉唑林、托芬那酸、托吡酯、曲马多、曲安奈德、曲恩汀、曲洛司坦、阿利马嗪酒石酸盐w/泼尼松龙、曲吡那敏、泰洛星、urdosiol、丙戊酸、钒、万古霉素、加压
素、维库溴铵、维拉帕米、长春碱硫酸盐、长春新碱硫酸盐、维生素e/硒、华法令钠、赛拉嗪、育亨宾、扎鲁司特、齐多夫定(azt)、乙酸锌/硫酸锌、唑尼沙胺及其混合物。
[0089]
在本发明的一个实施方案中，可将充当杀螨剂、抗蠕虫剂和/或杀虫剂的一种或多种大环内酯或内酰胺添加到本发明的组合物。
[0090]
大环内酯包括但不限于，阿维菌素类，诸如阿巴克丁、地马待克丁、多拉克丁、埃玛菌素、依立诺克丁、依维菌素、拉替菌素、雷皮菌素、司拉克丁、ml
‑
1,694,554和米尔倍霉素类，诸如弥拜菌素(milbemectin)、米尔倍霉素d、莫西菌素和奈马克丁(nemadectin)。还包括所述阿维菌素类和米尔倍霉素类的5
‑
氧代和5
‑
肟衍生物。苯并咪唑化合物与大环内酯的组合的实例包括但不限于美国专利号7,396,820(virbac corp.和hartz mountain corporation)中描述的那些，该专利通过引用并入本文。'820专利公开了芬苯达唑与依维菌素以及至少两种其他活性成分的组合，用于治疗哺乳动物的蠕虫病，尤其是绦虫、线虫(roundworm)、蛔虫、鞭虫和犬恶丝虫(heartworm)。'820专利并未考虑治疗吸虫。
[0091]
大环内酯化合物是本领域已知的并且能够容易地商购获得或通过本领域已知的合成技术获得。可参见广泛可获得的技术和商业文献。对于阿维菌素类，依维菌素和阿巴克丁，可以参见例如著作“ivermectin and abamectin”,1989,m.h.fischer和h.mrozik,william c.campbell,springer verlag.出版；或等人(1981),“avermectins structure determination”,j.am.chem.soc.,103,4216
‑
4221。对于多拉克丁，可以查阅“veterinary parasitology”,第49卷,第1期，1993年7月，5
‑
15。对于米尔倍霉素类，尤其可以参见davies h.g.等人,1986,“avermectins and milbemycins”,nat.prod.rep.,3,87
‑
121,mrozik h.等人,1983,synthesis of milbemycins from avermectins,tetrahedron lett.,24,5333
‑
5336,美国专利号4,134,973和ep 0 677 054。
[0092]
大环内酯是天然产物或其半合成的衍生物。阿维菌素类和米尔倍霉素类的结构是密切相关的，例如，都具有复杂的16
‑
元大环内酯环。天然产品阿维菌素类公开于美国专利号4,310,519，而22,23
‑
二氢阿维菌素化合物公开于美国专利号4,199,569。还尤其提及美国专利号4,468,390，5,824,653，ep 0 007 812 a1，u.k.专利说明书1 390 336，ep 0 002 916，和新西兰专利号237 086。天然存在的米尔倍霉素类被描述于美国专利号3,950,360以及"the merck index"第12版,s.budavari,ed.,merck&co.,inc.whitehouse station,new jersey(1996)中引用的各种参考文献中。拉替菌素描述于“international nonproprietary names for pharmaceutical substances(inn)”,who drug information,第17卷,第4期,pp.263
‑
286,(2003)。这些类别化合物的半合成衍生物是本领域众所周知的并描述于例如美国专利号5,077,308、4,859,657、4,963,582、4,855,317、4,871,719、4,874,749、4,427,663、4,310,519、4,199,569、5,055,596、4,973,711、4,978,677、4,920,148和ep 0 667 054中。
[0093]
在另一个实施方案中，本发明包含组合物，所述组合物包含氯舒隆与维拉帕米组合。认为维拉帕米是p
‑
糖蛋白的抑制剂，p
‑
糖蛋白是一种膜蛋白，其已被证明可以将三氯苯达唑从三氯苯达唑
‑
抗性的肝片形吸虫中排出。抑制排出机制可能会使苯并咪唑衍生物在寄生物中蓄积至毒性水平。
[0094]
在另一个实施方案中，本发明包含组合物，所述组合物包含氯舒隆与一类称作昆虫生长调节剂(igr)的杀螨剂或杀虫剂组合。属于该组的化合物是从业者众所周知的，并且
代表了广泛的不同化学类别。这些化合物均通过干扰昆虫害虫的发育或生长而起作用。描述了昆虫生长调节剂，例如，在美国专利号3,748,356、3,818,047、4,225,598、4,798,837、4,751,225、ep 0 179 022或u.k.2 140 010以及美国专利号6,096,329和6,685,954中(均通过引用并入本文)。
[0095]
在一个实施方案中，igr为模拟保幼激素的化合物。保幼激素模拟物的实例包括印楝素、苯虫醚(diofenolan)、苯氧威、烯虫乙酯(hydroprene)、烯虫炔酯(kinoprene)、烯虫酯、吡丙醚(pyriproxyfen)、四氢印楝素和4
‑
氯
‑
2(2
‑
氯
‑2‑
甲基
‑
丙基)
‑5‑
(6
‑
碘
‑3‑
吡啶基甲氧基)pyridizine
‑
3(2h)
‑
酮。适合使用的igr的实例包括但不限于烯虫酯、吡丙醚、烯虫乙酯、环丙马秦(cyromazine)、氟佐隆(fluazuron)、氯芬奴隆(lufenuron)、氟酰脲(novaluron)、拟除虫菊酯、甲脒类诸如双甲脒、1
‑
(2,6
‑
二氟苯甲酰基)
‑3‑
(2
‑
氟
‑4‑
(三氟甲基)苯基脲和氟酰脲。
[0096]
在一个实施方案中，本发明的组合物包含氯舒隆与烯虫酯的组合以及药学上可接受的载体。
[0097]
在另一个实施方案中，igr化合物为几丁质合成抑制剂。几丁质合成抑制剂包括chlorofluazuron、环丙马秦、除虫脲、氟佐隆、氟螨脲(flucycloxuron)、氟虫脲、氟铃脲(hexaflumuron)、氯芬奴隆、虫酰肼、氟苯脲(teflubenzuron)、杀铃脲(triflumuron)、1
‑
(2,6
‑
二氟苯甲酰基)
‑3‑
(2
‑
氟
‑4‑
(三氟甲基)苯基脲、1
‑
(2,6
‑
二氟
‑
苯甲酰基)
‑3‑
(2
‑
氟
‑4‑
(1,1,2,2
‑
四氟乙氧基)
‑
苯基脲和1
‑
(2,6
‑
二氟苯甲酰基)
‑3‑
(2
‑
氟
‑4‑
三氟甲基)苯基脲。
[0098]
在本发明的又一个实施方案中，还可以将杀成虫杀虫剂和杀螨剂添加到本发明的组合物中。它们包括除虫菊酯类(其包括瓜菊酯i、瓜菊酯ii、茉莉菊酯i、茉莉菊酯ii、除虫菊酯i、除虫菊酯ii及其混合物)和拟除虫菊酯和氨基甲酸酯(其包括但不限于苯菌灵、氯灭杀威、胺甲萘、虫螨威、meththiocarb，速灭威、蜱虱威(promacyl)、残杀威、涕灭威、丁叉威(butocarboxim)、杀线威、抗虫威和久效威)。
[0099]
在一些实施方案中，本发明组合物可以包括一种或多种抗线虫剂(antinematodal agent)，包括但不限于苯并咪唑、咪唑并噻唑、四氢嘧啶、有机磷酸酯类别的化合物中的活性剂。在一些实施方案中，组合物中可以包括苯并咪唑，包括但不限于，噻苯哒唑、坎苯达唑、帕苯达唑、奥苯达唑、甲苯达唑、氟苯哒唑、芬苯达唑、奥芬达唑、阿苯达唑、环苯达唑、非班太尔、苯硫脲酯及其o,o
‑
二甲基类似物。
[0100]
在其它实施方式中，组合物可以包括咪唑并噻唑化合物，包括但不限于，四咪唑、左旋咪唑和丁咪唑。在其它实施方案中，本发明的组合物可以包括四氢嘧啶活性剂，包括但不限于，噻嘧啶、奥克太尔、和莫仑太尔。适宜的有机磷酸酯活性剂包括但不限于蝇毒磷、敌百虫、海罗松、萘肽磷和敌敌畏、庚烯磷、速灭磷、久效磷、tepp和杀虫畏。
[0101]
在其他实施方案中，所述组合物可以包括抗线虫化合物吩噻嗪、哌嗪(作为中性化合物和各种盐形式)，乙胺嗪，酚类诸如二碘硝基酚，砷剂诸如硫乙胂胺，乙醇胺诸如苄芬宁，氯苯磺酸噻苯氧铵和甲氧乙吡啶；花青染料，包括吡维氯铵、扑蛲灵和碘二噻宁；异硫氰酸酯，包括对双异硫氰基苯、舒拉明钠、酞乙炔酯，和各种天然产物，包括但不限于潮霉素b、α
‑
山道年和红藻氨酸。
[0102]
在其他实施方案中，本发明的组合物可以包括其他抗吸虫剂。适合的抗吸虫剂包
括但不限于米列西类(micacils)，例如米列西d(miracil d)和mirasan；吡喹酮、氯硝西泮及其3
‑
甲基衍生物、吡噻硫酮、胺甲硫蒽酮、海蒽酮、羟氨喹、硝硫氰胺、尼立达唑、硝碘芬腈、本领域已知的各种双酚化合物，包括六氯酚、硫双二氯酚、硫双二氯酚亚砜和联硝氯酚；各种水杨苯胺化合物，包括三溴沙仑、羟氯柳胺、氯碘柳胺、雷复尼特、溴替尼特、溴沙尼特和氯生太；三氯苯达唑、地芬尼太、氯舒隆、海妥林和依米丁。
[0103]
抗绦虫(anticestodal)化合物也可有利地用于本发明的组合物中，包括但不限于各种盐形式的槟榔碱、丁奈脒、氯硝柳胺、硝硫氰酯、巴龙霉素和巴龙霉素ii。
[0104]
在其它实施方案中，本发明的组合物可以包括有效对抗节肢动物寄生物的其它活性剂。适宜的活性剂包括，但不限于溴烯杀、氯丹、ddt、硫丹、林丹、甲氧氯、毒杀芬、溴硫磷、乙基溴硫磷、三硫磷、毒虫畏、毒死蜱、丁烯磷、赛灭磷、二嗪农、dichlorenthion、diemthoate、敌噁磷、乙硫磷、伐灭磷、杀螟松、倍硫磷、福司吡酯、碘硫磷、马拉硫磷、二溴磷、伏杀硫磷、亚胺硫磷、辛硫磷、烯虫磷、皮蝇磷、司替罗磷、丙烯菊酯、三氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰戊菊酯、氯菊酯、苯氧司林、除虫菊酯、苄呋菊酯、苯甲酸苄酯、二硫化碳、克罗米通、除虫脲、二苯胺、双硫仑、异冰片基氰硫基乙酸酯、烯虫酯、舒非仑(monosulfiram)、pirenonylbutoxide、鱼藤酮、乙酸三苯基锡、氢氧化三苯基锡、避蚊胺、邻苯二甲酸二甲酯和化合物1,5a,6,9,9a,9b
‑
六氢
‑
4a(4h)
‑
二苯并呋喃甲醛(mgk
‑
11)、2
‑
(2
‑
乙基己基)
‑
3a,4,7,7a
‑
四氢
‑
4,7
‑
桥亚甲基
‑
1h
‑
异吲哚
‑
1,3(2h)二酮(mgk
‑
264)、二丙基
‑
2,5
‑
吡啶二羧酸酯(mgk
‑
326)和2
‑
(辛硫基)乙醇(mgk
‑
874)。
[0105]
可以与本发明的化合物组合以形成组合物的抗寄生物剂可以是生物学上活性的肽或蛋白质，包括但不限于缩酚肽，其通过刺激属于分泌素(sectretin)受体家族的突触前受体作用于神经肌肉接点引起寄生物的麻痹和死亡。在缩酚肽的一个实施方案中，所述缩酚肽是emodepside(参见willson等人,parasitology,.2003年1月,126(pt 1):79
‑
86)。
[0106]
可以与本发明的化合物组合以形成组合物的杀虫剂可以为取代的吡啶基甲基衍生物化合物，诸如吡虫啉。这类药剂如上所述，例如，在美国专利号4,742,060或ep 0 892 060中。决定哪种单独的化合物可用于本发明的制剂中以治疗昆虫的特定感染完全在从业者的技能水平范围内。
[0107]
在某些实施方案中，可以与本发明的组合物组合的杀虫剂是缩氨基脲，诸如氰氟虫腙(metaflumizone)。
[0108]
在另一个实施方案中，本发明的组合物可以有利地包括一种或多种本领域已知的异噁唑啉化合物。这些活性剂描述于wo 2007/079162、wo 2007/075459和us 2009/0133319、wo 2007/070606和us 2009/0143410、wo 2009/003075、wo 2009/002809、wo 2009/024541、wo 2005/085216和us 2007/0066617和wo 2008/122375中，所有这些文献均通过引用整体并入本文。
[0109]
在本发明的另一个实施方案中，可以将多节孢酸(nodulisporic acid)及其衍生物(一类已知的杀螨剂、抗蠕虫剂、抗寄生物剂和杀虫剂)添加到本发明的组合物中。这些化合物被用于治疗或预防人类和动物的感染，并且被描述在例如美国专利号5,399,582、5,962,499、6,221,894和6,399,786中，所有这些专利均通过引用整体并入本文。所述组合物可以包括本领域已知的多节孢酸衍生物中的一种或多种，包括所有立体异构体，诸如在上文引用的文献中描述的那些。
[0110]
在另一个实施方案中，可以将氨基乙腈类(aad)化合物的抗蠕虫化合物诸如莫奈太尔(monepantel)(zolvix)等添加到本发明的组合物中。这些化合物被描述于下列文献中，例如：wo 2004/024704；sager等人,veterinary parasitology,2009,159,49
‑
54；kaminsky等人,nature第452卷,2008年3月13日,176
‑
181。本发明的组合物还可以包括芳基并唑(aryloazol)
‑2‑
基氰乙基氨基化合物，诸如在soll等人在us 2008/0312272中描述的那些，其整体并入本文，以及这些化合物的硫代酰胺衍生物，如2009年10月20日提交的美国专利申请号12/582,486中所述，其通过引用并入本文。
[0111]
本发明的组合物还可以与对郝喹酰胺(paraherquamide)化合物和这些化合物的衍生物组合，包括德奎太尔(derquantel)(参见ostlind等人,research in veterinary science,1990,48,260
‑
61；和ostlind等人,medical and veterinary entomology,1997,11,407
‑
408)。对郝喹酰胺家族的化合物是已知类别的化合物，其包括对某些寄生物具有活性的螺二氧杂环庚二烯吲哚(spirodioxepino indole)母核(参见tet.lett.1981,22,135；j.antibiotics 1990,43,1380，和j.antibiotics 1991,44,492)。此外，结构相关的麦可弗汀(marcfortine)家族化合物，诸如麦可弗汀a
‑
c也是已知的并且可以与本发明的制剂组合(参见j.chem.soc.
–
chem.comm.1980,601和tet.lett.1981,22,1977)。例如，在wo 91/09961、wo 92/22555、wo 97/03988、wo 01/076370、wo 09/004432、美国专利5,703,078和美国专利5,750,695中(其通过引用整体并入本文)可以找到另外涉及的对郝喹酰胺衍生物。
[0112]
剂型可以含有约0.5mg
‑
约5g的活性剂的组合，典型地表示为每体积的量(w/v)。在剂型的一个实施方案中，活性剂的量以约1mg
‑
约500mg的活性剂的量存在，典型地为约25mg、约50mg、约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约800mg或约1000mg。在一个实例中，活性剂的量的体积可以为1ml。
[0113]
本发明的组合物以杀寄生物有效量施用，其适合于将所述考虑中的寄生物防治到期望的程度，如下所述。在本发明的每个方面，可以应用本发明的化合物和组合物对抗单一害虫或其组合。
[0114]
本发明的组合物可以连续施用，用于治疗或预防寄生物感染或侵袭。按照这种方式，本发明的组合物向有此需要的动物递送有效量的活性化合物以防治目标寄生物。所谓“有效量”是指足以根除或减少感染动物的寄生物数量的本发明组合物的量。在一些实施方案中，有效量的活性剂对目标寄生物达到至少70％的功效。在其他实施方案中，有效量的活性剂对目标害虫达到至少80％或至少90％的功效。在其他实施方案中，有效量的活性剂对目标寄生物达到至少95％、至少98％或100％的功效。
[0115]
一般而言，指定为单剂量或在分开剂量中的约0.001
‑
约100mg/kg体重的剂量持续1
‑
5天的时期将是令人满意的，但是，当然也可能存在指出更高或更低的剂量范围的情况，且这种情况在本发明的范围内。确定用于特定宿主和寄生物的具体给药方案完全在从业者的常规技能范围内。
[0116]
可以提供更高的量以在动物体内或体表非常延长的释放。在另一个治疗实施方案中，用于体型小的动物的活性剂的量大于约0.01mg/kg，且在用于治疗体型小的动物的另一个实施方案中，活性剂的量在约0.01
‑
约20mg/kg的动物重量。
[0117]
可以使用本身已知的任何方式来应用根据本发明的溶液，例如使用涂抹枪(applicator gun)或计量瓶、移液管、注射器和其他单剂量和多
‑
剂量容器。
[0118]
在本发明的另一个方面，提供了用于治疗或预防动物寄生物侵袭的试剂盒，其包含至少一种异噁唑啉活性剂以及药学上可接受的载体和可注射应用组合物的调配(dispensing)装置。调配装置可以为单剂量和多
‑
剂量容器，其包括在药学上可接受的载体或稀释剂中的每种活性剂的有效剂量。
[0119]
本发明的一个重要方面在于提供一种包含本发明的可注射组合物的多用途容器，从该容器中可以施用可注射制剂的准确的单剂量等分试样。该制剂必须在反复暴露于外部环境(尤其是氧气和水)的情况下保持稳定。该实施方案对于需要不频繁地诸如每3
‑
6个月一次等向动物施用的本发明的极长效制剂可能特别有用。一些溶剂诸如醚(包括dmi等)会产生过氧化物，然后产生酮和醛，这些酮和醛可以进一步降解为酸。酸的存在可能有助于酸水解
‑
敏感性分子(包括异噁唑啉活性剂)的降解。因此，制剂稳定性对于多
‑
剂量容器应用尤其重要，其中该制剂在多轮打开和关闭期间可能暴露于氧气和水。重要的是，发现使用某些抗氧化剂诸如bht和bha有效地抑制活性剂在醚溶剂中的降解。
[0120]
由于已经详细描述了本发明的各种实施方案，因此，应当理解，由以上段落定义的本发明不限于上述描述中阐述的特定细节，因为在不脱离本发明的精神或范围的情况下，其许多明显的改变是可能的。
[0121]
制剂
[0122]
表1a(图4中所示的组合物的温度依赖性粘度曲线)
[0123][0124]
表1b(图5中所示的组合物的温度依赖性粘度曲线)
[0125][0126]
[0127]1使用具有s31主轴(spindle)的lv
‑
dv e brookfield粘度计进行粘度分析，速度为100rpm。
[0128]230/70:30％w/v pc，然后甘油缩甲醛qs至100％(密度计算为1.3079g/ml)。其他制剂使用pc溶剂共混物，如用至qs的甘油缩甲醛所述。
[0129]
表1c：研究1
‑
5中测试的调查研究性(investigational)可注射制剂
[0130][0131][0132]
值得注意地，上述表1a中列出的在碳酸丙烯酯中和在碳酸丙烯酯/丙二醇(80/20)中30％(w/v)氯舒隆的制剂显示出良好的温度
‑
粘度曲线(参见图4)，这也与实验室模拟可接受的注射力相关。
[0133]
实验方法和结果
[0134]
研究编号1.
[0135]
在甘油缩甲醛/丙二醇中10和30％(w/v)氯舒隆的调查研究
[0136]
通过对家牛皮下注射施用4、6或8mg/kg体重的作为10％w/v氯舒隆或30％w/v氯舒
隆后对氯舒隆的抗肝吸虫功效和氯舒隆的血浆水平进行评价。总体研究设计符合兽医学产品注册技术要求协调国际合作
‑
vich(international cooperation on harmonisation of technical requirements for registration of veterinary medicinal products
‑
vich)(抗蠕虫剂功效指南的国际协调(international harmonisation of anthelmintic efficacy guidelines)),“efficacy of anthelmintics:general requirements”gl7和“efficacy of anthelmintics:specific recommendations for bovine”vich gl12(vercruysse等人,2001)；和“world association for the advancement of veterinary parasitology(w.a.a.v.p.)用于评价抗蠕虫剂在反刍动物(牛，绵羊，山羊)中的功效的指南第二版”(wood等人,1995)。
[0137]
本研究是一项阴性(未治疗)对照、盲法临床功效和药代动力学研究，使用基于如表2中所示的治疗前体重的随机区组设计。
[0138]
表2.
[0139][0140][0141]
trt.＝治疗
[0142]
sc＝皮下
[0143]
bwt＝体重
[0144]
实验单位为个体家牛，基于个体对其研究变量进行鉴定、处理和评估。
[0145]
将本研究操作计划中的关键步骤组织在表3中。对于所有动物，第0天无需为相同的日历日，而是对于区组中所有动物的相同日历日。
[0146]
表3.
[0147][0148][0149]
表4.测试动物特征
[0150][0151]
动物饲养时无肝片形吸虫。在本研究中不包括通过检查在接种前至少7天采集的粪便样本测试出片形吸虫卵呈阳性的动物。根据研究者的意见，在接种前40天内已经用氯舒隆治疗过的动物虚弱、患有疾病或损伤、暴躁或在其它方面不适合纳入本研究的动物被
排除本研究之外。任何被排除的动物均接受了适当的护理。
[0152]
分配后，根据研究者的意见，移除任何患有疾病或损伤或变得虚弱、暴躁或在其它方面不适合留在本研究中的动物。
[0153]
片形吸虫感染通过口服施用感染性幼虫阶段(后囊蚴)诱导。后囊蚴从同一批中被等分并在同一天施用。设计接种计划，使得肝片形吸虫预计在第0、14和28天(＝治疗)时未成熟。一系列400
–
500只感染性l3幼虫产生了中等水平的感染，且总体上符合国际兽医学产品注册技术要求协调合作组织”(vich)gl7(食品和药物监督管理局(food and drug administration)(fda))指南90)，抗蠕虫剂的功效：一般要求，以及vich gl12(fda指南95)，抗蠕虫剂的功效：对于牛的具体建议(vercruysse等人,vet.parasitol.96(2001)171
‑
193)。记录给出的后囊蚴的实际数量。
[0154]
参与功效数据采集的人员不知晓治疗。直到完成所有区组的所有寄生物计数后才公布治疗分配。以非系统性方式向进行寄生物计数的人员提供样本。在发生不良事件或人为反应(human reaction)的情况下，如果认为有必要，允许公布盲代码(blinding code)。
[0155]
为分配目的和剂量计算，在同一天(第
‑2±
1天)对家牛称重一次(组2和组3)。记录体重，并在动物称重前后验证秤。对于组4至组8的给药，根据操作计划在治疗前的天对相应动物称重。如果不是精确的0.2ml增量，则计算出的剂量至多可达下一个0.2ml增量。使用适当刻度的一次性注射器通过皮下注射施用治疗。
[0156]
从颈静脉采集用于氯舒隆分析的血浆分析全血样本。在第
‑2±
1天治疗之前，将样本收集在～7.5ml锂肝素化管(lithium heparinized tube)中用于血浆制备。此后，根据操作计划(表3)采集血样。记录采血时间，并在样本采集、储存和处理过程中注意避免样本交叉污染。从每个样本中回收血浆，等分(两等分试样)并冷冻储存(在
‑
20℃或低于
‑
20℃)，直至需要进行测定为止。冷冻管标有研究编号、样本类型、日期、研究日/采样时间和动物id。
[0157]
使用目前的高效液相色谱
‑
质谱(lc
‑
ms)方法，将一份血浆等分试样用于分析氯舒隆浓度。
[0158]
将肝片形吸虫计数转化为(计数 1)的自然对数，用于计算每个治疗组的几何平均值。每个治疗组的功效通过将百分比功效计算为100[(c
‑
t)/c]来确定，其中c为未治疗的对照中的几何平均值，t为治疗动物中的几何平均值。
[0159]
对血浆样本检测氯舒隆。包括在本研究的生物分析时期中支持该方法适当性能的数据。
[0160]
如果测定了动物的可量化血浆浓度，则如下所述进行药代动力学分析。当适当时，在每个采样时间测定动物的氯舒隆血浆浓度。通过对数线性梯形法测定动物的从0时到最后一个可量化时间点的血浆浓度对时间曲线下的面积(auc0‑
t
最后
)，然后通过处理求平均值。与曲线末端对数线性部分相关的一级速率常数λ
z
经由对数血浆浓度对时间曲线的线性回归来估计。使用ln(2)/λ
z
计算终末血浆半衰期。动物的c
max
和t
max
被视为观察到的峰值浓度和达到该观察值的时间。测定动物的半衰期(t
1/2
)、c
max
和t
max
，然后通过处理求平均值。平均浓度
‑
时间曲线将通过对所有治疗的动物在每个采样时间点的浓度求平均值来获得。
[0161]
在研究结论时，从受试者的肝和胆囊中获取虫计数。将研究1的结果总结在表5中。
[0162]
表5.
[0163]
[0164]
[0165][0166]
gm＝几何平均寄生物计数
[0167]
eff＝功效(％)＝100x(gm对照，组1
–
gm治疗组/gm对照，组1)
[0168]
如表5中所示，作为30％w/v溶液以6mg/kg体重和8mg/kg体重给家牛皮下施用氯舒隆对早期未成熟(4周和6周龄)肝片形吸虫的功效相似(>98
‑
100％)。
[0169]
研究编号2.
[0170]
在甘油缩甲醛/丙二醇中30％(w/v)氯舒隆的调查研究
[0171]
当对用实验感染肝吸虫(肝片形吸虫)的家牛皮下施用作为30％(w/v)氯舒隆制剂时，评价了氯舒隆的治疗功效和药代动力学参数。本研究与研究编号1的不同之处在于没有施用10％(w/v)氯舒隆，并且仅使用未成熟(4周龄)肝片形吸虫。
[0172]
本研究是使用基于治疗前体重的随机区组设计进行的阴性(未治疗)对照、盲法临床功效和药代动力学研究。研究设计如表6中所示。
[0173]
表6.
[0174][0175]
trt.＝治疗
[0176]
sc＝肩前皮下
[0177]
no.＝数量
[0178]
bwt＝体重
[0179]
将研究操作计划中的关键步骤组织在表7中。对于所有动物，第0天不需要为相同日历日，而是对于区组中的所有动物的相同日历日。
[0180]
表7.
[0181][0182][0183]
动物特征以及排除和移除标准与研究编号1中相同。在生物体、寄生物施用、盲法、寄生物计数和数据分析方面的研究模型也与研究编号1中相同。
[0184]
在研究结论时，从受试者的肝、胆囊和肝管远端50cm的小肠中获取虫计数。将研究2的结果总结在表8中。
[0185]
表8.
[0186]
[0187][0188]
gm＝几何平均寄生物计数
[0189]
eff＝功效(％)＝100x(gm对照，组1
–
gm治疗组/gm对照，组1)
[0190]
寄生物计数表明对4周龄未成熟肝片形吸虫的功效为99.6％(组2)、99.9％(组3)和92.9％(组3)。所有动物均全身暴露于氯舒隆。最大血浆浓度为3140
±
530(组4)、4430
±
988(组3)和5740
±
1160ng/ml(组2)，并且(18只动物中有12只)在12小时内达到。
[0191]
研究编号3
[0192]
在甘油缩甲醛/丙二醇中30％(w/v)氯舒隆的调查研究
[0193]
评价了以3、6或12mg/kg体重对未成熟(3周和4周龄)肝片形吸虫皮下施用作为30％氯舒隆w/v溶液的氯舒隆的治疗功效和血浆水平。本研究是使用基于治疗前体重的随机区组设计进行的阴性(未治疗)对照、盲法临床功效和药代动力学研究。研究设计如表9中所示。
[0194]
表9.
[0195][0196]1trt.＝治疗2no.＝数量3bwt＝体重4sc＝肩前皮下注射
[0197]
动物特征及排除和移除标准与研究编号1中相同。在生物体、寄生物施用、盲法、寄生物计数和数据分析方面的研究模型与研究编号1中相同。
[0198]
在研究结论时，从受试者的肝和胆囊中获取虫计数。将研究3的结果总结在表10中(“gm”和“eff”注释与研究1，表5中的相同)。
[0199]
表10:个体和组平均肝片形吸虫计数和％功效
[0200][0201]
基于未治疗的对照(组1)和氯舒隆30％w/v溶液
‑
治疗动物(组2
‑
5)的几何平均肝片形吸虫计数，组2、3、4和5的功效百分比分别为95.8％、71.4％、96.8％和99.7％，且组2、3、4和5的动物具有的肝片形吸虫显著地少于未治疗的对照(组1)(对于α＝0.10时的所有比较，p<0.01)。除氯舒隆30％w/v以外的所有剂量在3mg/kg体重对3周和4周龄的肝片形吸虫均高度有效(>95％)。所有动物都很好地接受了治疗，且除在组2
‑
5动物中观察到的注射部位暂时肿胀外，在本研究期间没有发生与治疗相关的健康问题或不良经历。
[0202]
组2
‑
5样本中的血浆浓度在一天之内增加到最大浓度，然后双指数式衰减。到最大
浓度的时间对于组2为0.333
‑
0.5天，对于组3为0.165
‑
0.5天，对于组4为0.5
‑
1天，且对于组5为0.333
‑
0.5天。对于组2、3、4和5，最大浓度(cmax)平均分别为6,640、4,860、7,320和15,700ng/ml。对于组2、3、4和5，从时间0到最后一个采样时间(auc最后)的曲线下面积平均分别为12,200、6,870、13,100和27,000天*ng/ml。平均半衰期为4.48
‑
5.62天。
[0203]
研究编号4
[0204]
不同的30％氯舒隆制剂的调查研究
[0205]
当通过对家牛皮下注射施用以6mg/kg体重作为不同30％(w/v)氯舒隆制剂时氯舒隆的功效和血浆水平。本研究是使用基于治疗前体重的随机区组设计进行的阴性(未治疗)对照、盲法临床功效和药代动力学研究。研究设计如表11中所示。
[0206]
表11
[0207][0208][0209]1trt.＝治疗；2sc＝肩前皮下；3no.＝编号；4bwt＝体重
[0210]
动物特征以及在生物体、寄生物施用、盲法、寄生物计数和数据分析方面的研究模型与研究编号1相同。
[0211]
在研究结论时，从受试者的肝、胆囊和肝管远端50cm的小肠中获取蠕虫计数。将研究4的结果总结在表12和13中。
[0212]
表12.个体肝片形吸虫计数
[0213]
[0214][0215]
表13.对照组相比于每个治疗组的肝片形吸虫计数的分析结果总结
[0216]
[0217][0218]
组11＝未治疗的对照组(n＝8/组)。组2＝在pc中氯舒隆30％w/v(n＝8/组)。组3＝在pc/bht中氯舒隆30％w/v(n＝8/组)。组4＝在pg/gf中氯舒隆30％w/v(n＝7/组)。组5＝氯舒隆30％w/v溶液(n＝8/组)。2gm＝几何平均值。3功效百分比＝[(c
‑
t)/c]x100，其中t和c分别为每个治疗组和对照组的几何平均值。4p
‑
值＝来自对每个治疗组和对照组的log
‑
计数的方差分析的双侧概率值。
[0219]
如上所示，氯舒隆30％w/v的所有剂量以6mg/kg体重对4周龄的肝片形吸虫均高度有效(≥96％)。
[0220]
研究编号5
[0221]
在碳酸丙烯酯中30％(w/v)氯舒隆的调查研究
[0222]
当氯舒隆作为30％w/w氯舒隆制剂以3、6和12mg/kg体重通过皮下注射给家牛施用(第0天1次或第7天1次)时的功效和血浆水平。
[0223]
表14:总个体肝片形吸虫计数和％功效
[0224]
[0225]
[0226][0227]1gm＝几何平均寄生物计数
[0228]2eff＝功效(％)＝100x(gm对照，组1
–
gm治疗组/gm对照，组1)
[0229]
本研究的组平均氯舒隆血浆水平(以ng/ml计)如图6中所示。