负载miR-375及PTX的四向接头RNA纳米药物及其制备方法和应用与流程

技术特征：
1.一种负载mir
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375及ptx的四向接头rna纳米药物，其特征是：该纳米药物以四向接头rna纳米4wj为核心，负载了具有显著食管鳞癌细胞抑制作用的mir
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375及ptx。2.根据权利要求1所述的一种负载mir
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375及ptx的四向接头rna纳米药物，其特征是：以该rna纳米药物为核心，制备靶向修饰的其它纳米药物体系。3.根据权利要求1所述的一种负载mir
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375及ptx的四向接头rna纳米药物，其特征是：以该rna纳米药物为核心，制备负载其它治疗性制剂的纳米药物体系。4.一种负载mir
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375及ptx的四向接头rna纳米药物的制备方法，其特征是该制备方法包括以下步骤：(1)rna寡核苷酸合成：合成寡核苷酸rg、rg、rc、ru、2’f rc2’f ru磷酰胺单体、2’o
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propargyl rc以及ru磷酰胺单体，将其通过脱盐柱进行脱盐处理后通过凝胶电泳进行分析纯化；(2)ptx
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叠氮化合物合成：ptx、6
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叠氮己酸，n、n
′‑
二环己基碳二亚胺和4
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(二甲氨基)吡啶以1:2:2:1摩尔比浓度加入10ml二氯甲烷中；混合溶液室温搅拌过夜16h，通过过滤和旋转蒸发得到粗产品；粗产品通过硅胶柱层析，由己烷：乙酸乙酯(5：5)洗脱液下来并随后旋转蒸发得最终ptx
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叠氮化合物产品；(3)rna寡核苷酸
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ptx复合物合成：rna寡核苷酸
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6炔烃(2mm)与ptx
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n3(50mm)按体积比(5:2)充分混合在二甲亚砜/叔丁醇(体积比3:1)中，然后加入硫酸铜/三[(1
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苄基
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1h
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1,2,3
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三唑
‑4‑
基)甲基]胺(tbta)和抗坏血酸钠(rna：ptx：cu 摩尔浓度比为1:15:20)，混合溶液在4℃下振荡16h；反应结束后，往混合溶液中加入1/10体积的0.3m的醋酸钠和2.5倍体积的无水乙醇沉淀rna寡核苷酸；rna寡核苷酸
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紫杉醇复合物纯度通过16％(w/v)8m尿素聚丙烯酰胺凝胶(page)；凝胶电泳使用tbe缓冲液(89mm三碱基硼酸盐，2mm edta)；(4)rna纳米药物的组装：4wja:5
′
^
‑
uua gg^u aaa g^cc acc ugc agg ugc uac^cga ug^u aau u^ca a
‑3′
；4wjb:5'^
‑
uug aa^u uac a^uc ggu agc acg ggc ugu g^cg agg^cug aa^c ag
‑
3'；4wjb
‑
mir375:5'^
‑
uug aa^u uac a^uc ggu agc acg ggc ugu g^cg agg^cug aa^cag gcg acg agc ccc ucg cac aaa cc
‑
3'；4wjc:5
′
^
‑
cug uu^c agc c^uc gca cag cca gca^cgc ac^c uga a^ua ggu
‑3’
；4wjd:5’^
‑
ccu au^u cag g^ug cgu gcu ggg cug cag g^ug gcu u^ua cc^u aa
‑3′
mir375:5'
‑
uuu guu cgu ucg gcu cgc gug a
‑
3'^代表连接紫杉醇得位置；小写字母代表2’f修饰得碱基单体；将上述寡核苷酸链以相同摩尔浓度在tes缓冲液中混合(50mm tris ph＝8.0，50mm nacl，1mm edta)，在90℃下变性10min，并逐渐冷却至4℃；纳米颗粒组装效率和纯度通过12％(w/v)的非变性凝胶电泳验证；凝胶电泳环境使用1
ⅹ
tbe缓冲液(89mm tris碱、200mm硼酸和2mm edta)。5.一种负载mir
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375及ptx的四向接头rna纳米药物的应用，其特征是：该rna纳米药物应用于食管鳞癌治疗中。

技术总结
本发明公开了负载miR


技术研发人员：高勇 王其龙 张莉 罗超 李想
受保护的技术使用者：王其龙
技术研发日：2021.04.09
技术公布日：2021/10/14