血管生成素的止痒用途的制作方法

1.本发明涉及化妆品领域，具体地，本发明涉及血管生成素的止痒用途以及含有血管生成素的止痒产品。


背景技术：

2.皮肤在正常情况下，由于角质层的吸水作用和屏障功能，再加上汗腺及皮脂腺分泌的脂类物质的覆盖作用，水分不易流失，角质层可以保持一定的含水量，增加和保持角质层的水分，可以使皮肤保持柔软、保持弹力。引起角质层缺水而导致皮肤干燥的原因主要有两个：一是气候干燥，相对湿度低；二是皮肤正常的吸水作用和屏障功能受到损害。
3.饮食、环境等因素，会导致皮肤瘙痒，尤其是某些具有敏感性肌肤的个体更易发生皮肤瘙痒。在现代社会中，一些使用化妆品的人，常因使用化妆品而诱发皮肤刺激、炎症、过敏和瘙痒。
4.目前对瘙痒的治疗或缓解，主要包括：作为内服剂的抗组胺剂、抗过敏剂等，以及作为外用剂的抗组胺剂、肾上腺皮质类固醇剂、非类固醇类消炎剂等。然而，使用内服剂时，临床效果需要一定时间以及对中枢神经系统的副作用(喜睡、倦怠感)、对消化系统的危害等问题可能出现。另一方面，使用外用剂时，止痒效果不充分，特别是长期使用类固醇剂，则存在肾上腺功能下降、类固醇痤疮等副作用。
5.因此，本领域迫切需要开发使用安全、副作用小、快速有效的止痒产品。


技术实现要素：

6.本发明目的就是提供了一种使用安全、副作用小、快速有效的止痒产品及其在止痒方面的应用。本发明的止痒产品含有血管生成素作为止痒成分。
7.本发明提供一种血管生成素的用途，用于制备止痒产品。
8.在另一优选例中，所述的止痒产品为化妆品组合物。
9.在另一优选例中，所述的止痒产品还用于选自下组的一种或多种用途：抗皱、淡斑、美白。
10.在另一优选例中，所述血管生成素的有效浓度为总重量的0.000001％至0.1％。
11.在另一优选例中，所述血管生成素的有效浓度为总重量的0.000001％至0.001％。
12.在另一优选例中，所述血管生成素的有效浓度为总重量的0.000001％至0.00001％。
13.在另一优选例中，所述的止痒产品用于抑制或缓解皮肤瘙痒。
14.在另一优选例中，所述的瘙痒包括由选自下组的因素所引发的皮肤瘙痒：过敏性皮肤瘙痒、普通型皮肤瘙痒、湿疹性瘙痒、或其组合。
15.在另一优选例中，所述普通型皮肤瘙痒包括皮肤干燥引起的瘙痒。
16.在另一优选例中，所述的瘙痒症包括全身性瘙痒症和局限性瘙痒症。
17.在另一优选例中，所述的皮肤瘙痒发生在选自下组的部位：面部、颈部、背部、胸
部、腹部、四肢、腰部、或其组合。
18.在另一优选例中，所述的皮肤瘙痒是过敏性皮肤瘙痒。
19.在另一优选例中，所述的皮肤瘙痒是不伴随有炎症和/或红肿的过敏性皮肤瘙痒。
20.在另一优选例中，所述的皮肤瘙痒是伴随有炎症和/或红肿的过敏性皮肤瘙痒。
21.在另一优选例中，所述的皮肤瘙痒是伴随有炎症和/或红肿的、且发生于面部、或颈部的过敏性皮肤瘙痒。
22.在另一优选例中，所述的皮肤瘙痒是太阳光或紫外光(uv)照射导致的皮肤瘙痒。
23.在另一优选例中，所述的止痒产品适用于皮肤敏感人群。
24.在另一优选例中，所述皮肤敏感是指皮肤表面干燥、发红、起斑点、红肿、脱皮或生暗疮。
25.在另一优选例中，所述的血管生成素为人血管生成素。
26.在另一优选例中，所述人血管生成素为重组人血管生成素。
27.在另一优选例中，所述重组人血管生成素n-末端为甲硫氨酸，其序列如seqid no：2所示。
28.在另一优选例中，所述的血管生成素是通过以下步骤制备的：
29.(a)在适合表达血管生成素的条件下培养宿主细胞，从而表达出血管生成素，其中所述的宿主细胞含有表达血管生成素的载体，所述的载体含有编码血管生成素的dna序列；和(b)分离纯化出步骤(a)中所表达的血管生成素。
30.在另一优选例中，所述止痒产品为液态组合物、膏状组合物、凝胶状组合物、或喷雾剂。
31.在另一优选例中，所述的止痒产品选自下组：乳霜、乳液、乳膏、防晒霜、面膜、爽肤水、眼霜、按摩霜、护手霜。
32.在另一优选例中，所述的止痒产品的配方制剂为乳霜或面膜。
33.在另一优选例中，所述的止痒产品(或止痒组合物)不含有对皮肤的刺激性组分。
34.在另一优选例中，所述的刺激性组分选自下组：酒精、激素、果酸、苯氧乙醇、重金属。
35.在另一优选例中，所述的止痒产品还含有选自下组的物质：紫外光吸收剂、紫外光散射剂、调色剂、或其混合物。
36.在另一优选例中，所述的止痒产品含有选自下组的额外成分：水、甘油、酵母提取物、北美金缕梅(hamamelis virginiana)提取物、黄瓜(cucumis sativus)果提取物、母菊(chamomilla recutita)花提取物、墨角藻(fucus vesiculosus)提取物、芍药(paeonia albiflora)根提取物、透明质酸钠、黄原胶。
37.在另一优选例中，所述的止痒产品被直接涂于皮肤的瘙痒部位或其周围。
38.应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
39.图1为腰背部不明原因的顽固性瘙痒的患者甲施涂包含重组ang护肤霜前、连续施
涂一周后与连续施涂2周后的效果图。
40.图2为面部红肿瘙痒的患者乙施涂包含重组ang护肤霜前与连续施涂3天后的效果图。
具体实施方式
41.本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现血管生成素具有止痒功能，当将有效量的血管生成素施用于皮肤的瘙痒部位或其周围时，不仅可以有效地止痒，而且起效快，且几乎无任何副作用。实验表明，血管生成素不仅可抑制、缓解和消除皮肤瘙痒，还可有效改善瘙痒部位或周围的皮肤红肿、炎症等症状。在此基础上，完成了本发明。
42.具体地，本发明的止痒产品不仅可以抑制、缓解和消除普通型皮肤瘙痒，还可有效抑制多种原因或不同原因导致的皮肤瘙痒，包括过敏性皮肤瘙痒(如化妆品过敏性皮肤瘙痒)、太阳光或紫外光过度照射导致的皮肤瘙痒。此外，本发明的止痒产品在有效治疗和缓解皮肤瘙痒的同时，还能有效改善皮肤老化及色素沉着等皮肤问题。
43.血管生成素
44.如本文所用，“血管生成素”、“多肽ang蛋白”和“ang”可互换使用，指来自哺乳动物的血管生成素，包括野生型和突变型的血管生成素。优选的血管生成素是人血管生成素。所述的术语包括重组或非重组生产的人血管生成素，优选通过重组方法制备的ang。
45.在本发明中，止痒的活性成分为血管生成素，优选人血管生成素，更优选地为重组生产的人血管生成素。
46.人血管生成素(angiogenin)是一个由123个氨基酸组成的蛋白质，重组人血管生成素n-末端多一个甲硫氨酸，由124个氨基酸组成，其氨基酸序列为seq id no:2:
47.mqdnsrythfltqhydakpqgrddrycesimrrrgltspckdintfihgnkrsikaicenkngnphrenlriskssfqvttcklhggspwppcqyratagfrnvvvacenglpvhldqsifrrp。
48.人血管生成素是一种分泌型、水溶性蛋白，等电点大于10。血管生成素存在于正常人的血液中，其含量一般为250-360ng/ml。
49.血管生成素的主要生理功能是在特定的条件下刺激血管的生成，维持体内血管的正常功能。由于体内的各种器官和组织的新陈代谢都需要血液循环来输送氧气和养料，排除废气和废料，所以血管生成素对维持体内各种组织和器官的正常生理功能有着重要的作用。
50.除了刺激血管生成的主要作用外，血管生成素能抑制皮肤表面的促黑细胞(melanocyte)分泌黑色素从而有抗皱增白的作用。同时，血管生成素能促使促黑细胞、成纤维细胞(fibroblasts)、角化细胞(keratinocytes)及表皮细胞(epithelial cells)分泌胶原蛋白(collagen)和弹性蛋白(elastin)从而有防止皮肤老化和增加皮肤弹性的作用。
51.血管生成素除了存在于正常人的血液中，还存在于牛奶中。人血管生成素可以从人血浆中分离，也可以从人肿瘤细胞培养上清液中分离。牛血管生成素可以从牛奶中分离。人血管生成素还可以由基因工程的方法制备。基因工程方法制备的人血管生成素和人体内自然产生的血管生成素相比，理化性质和生物活力完全相同。
52.血管生成素的制备
53.本发明中，血管生成素优选地是通过重组方法制备。一种优选的方法包括以下步
骤：
54.(a)在适合表达血管生成素的条件下培养宿主细胞，从而表达出血管生成素，其中所述的宿主细胞含有表达血管生成素的载体，所述的载体含有seq id no：1所示的编码血管生成素的dna序列，seq id no:1:atgcaggataactccaggtacacacacttcctgacccagcactatgatgccaaaccacagggccgggatgacagatactgtgaaagcatcatgaggagacggggcctgacctcaccctgcaaagacatcaacacatttattcatggcaacaagcgcagcatcaaggccatctgtgaaaacaagaatggaaaccctcacagagaaaacctaagaataagcaagtcttctttccaggtcaccacttgcaagctacatggaggttccccctggcctccatgccagtaccgagccacagcggggttcagaaacgttgttgttgcttgtgaaaatggcttacctgtccacttggatcagtcaattttccgtcgtccg。
55.(b)分离纯化出步骤(a)中所表达的血管生成素。
56.在一优选方案中，所用的编码血管生成素的dna分子是根据选用的宿主细胞的密码子偏爱性进行改造过的。一种具体的编码序列如seq id no：1所示。
57.止痒产品
58.本发明的止痒产品的有效成分是血管生成素，优选人血管生成素，更优选地为重组生产的人血管生成素。通常，在本发明的止痒产品中，血管生成素的有效浓度为总重量的0.000001％至0.1％或更高。当然，血管生成素的浓度也可高于0.1％，因为这仍具有止痒效果。从生产成本考虑，优选的血管生成素的有效浓度为总重量的0.000001％至0.001％，更佳地0.000001％至0.0001％，最佳地为0.000001％至0.00001％。
59.用于本发明的血管生成素可以是天然或重组形式的，优选重组形式的。用于本发明的血管生成素宜是纯化的，例如纯度大于80％，较佳地大于90％，更佳地大于95％，最佳地大于99％的血管生成素。
60.在本发明的止痒产品中，除了含有血管生成素作为主要有效成分外，还可以含有本领域已知的其他成分，例如熊果素(albutin)、曲酸、氢化酪蛋白、牛血管生成素、或其混合物。
61.此外，本发明的止痒产品还可包括本领域通常使用的添加剂，如芳香剂、香精油、稳定剂、保湿剂、维生素、必需脂肪酸、亲脂性防晒剂、脂溶性聚合物等。当然本领域技术人员应仔细选择任选的添加剂化合物和/或它们的量，使本发明血管生成素的优点特性不受或基本不受这些添加剂的损害。
62.本发明的止痒产品可以被制成本领域常见的各种配方制剂形式，例如乳霜、乳液、乳膏、洗面奶、防晒霜、面膜、爽肤水、眼霜、按摩霜、护手霜或其他用于脸部、颈部、手部和身体的化妆品。
63.本发明的止痒产品，在使用时直接涂或敷于皮肤即可。
64.本发明的主要优点：
65.1、血管生成素能够非常快速地抑制、缓解和消除皮肤瘙痒，且没有副作用；
66.2、血管生成素不仅可以抑制、缓解和消除普通型皮肤瘙痒，还可有效抑制多种原因或不同原因导致的皮肤瘙痒，包括过敏性皮肤瘙痒或太阳光或紫外光过度照射导致的皮肤瘙痒；
67.3、本发明的止痒产品不仅具有止痒功能，还具有抗皱淡斑的功效，尤其适于肌肤敏感人群。
68.下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
69.实施例1ang的快速止痒作用
70.实验对象：20名具有轻度瘙痒或中度瘙痒(无红肿)的志愿者，男性12名，女性8名，年龄从40岁到60岁，随机分为2组，实验组和对照组中男女数量相同。
71.20名志愿者分别具有过敏、干燥、不明原因引起的皮肤瘙痒症，皮肤瘙痒的部位包括：面部、颈部、背部、腰部、腿部、手臂。在分组时对瘙痒症的原因未进行区分。
72.所有志愿者无其他全身疾病且近一个月内未服用抗生素及免疫抑制剂。
73.在选择志愿者时，依据志愿者候选对象的主观判断的四级瘙痒的程度(无瘙痒、轻度瘙痒、中度瘙痒、和重度瘙痒)，对各志愿者候选对象的皮肤瘙痒程度进行区分，选择皮肤瘙痒程度轻度瘙痒和中度瘙痒的共20名志愿者候选者作为本实施例的测试对象。
74.测试对象在实验开始前一周内未使用外用类固醇，实验期间限制了外用类固醇的使用，也不得使用其他止痒物质。
75.对于测试组，将含重组人血管生成素的护肤霜(重组人血管生成素为总重量的0.00001％)施涂于皮肤的瘙痒部位或其周围一次。
76.对于对照组，将不含重组人血管生成素且其余成分相同的护肤霜施涂于皮肤的瘙痒部位或其周围一次。
77.在施涂前5分钟，由各志愿者对皮肤瘙痒按表1进行瘙痒程度进行评分，仍处于轻度瘙痒或中度瘙痒则纳入统计。
78.在施涂之后30分钟，由各志愿者再次对皮肤瘙痒按表2进行评分。
79.表1瘙痒程度划分表
80.瘙痒程度标准无瘙痒主观感觉无任何皮肤瘙痒轻度瘙痒主观感觉有轻微的皮肤瘙痒中度瘙痒主观感觉有皮肤瘙痒，并且该皮肤瘙痒是可以承受的重度瘙痒主观感觉有皮肤瘙痒，并且该皮肤瘙痒是难以承受的
81.表2瘙痒改善程度评分表
[0082][0083][0084]
统计结果如下表3：
[0085]
表3
[0086]
对照组测试组4分
×
0(人)4分
×
5(人)3分
×
0(人)3分
×
2(人)2分
×
3(人)2分
×
2(人)1分
×
7(人)1分
×
1(人)总分＝13分总分＝31分
[0087]
测试结果表明，与对照组相比，在施用了ang的测试组中，ang能够快速地、显著抑制和缓解皮肤瘙痒，在70％的测试对象中降为无瘙痒。
[0088]
实施例2ang对伴有红肿的瘙痒具有显著的止痒作用
[0089]
实验对象：10名伴有红肿的瘙痒的志愿者，男性2名，女性8名，年龄从20岁到45岁，随机分为2组，实验组和对照组中男女数量相同。
[0090]
10名志愿者红肿的部位均包括：面部或颈部。
[0091]
所有志愿者无其他全身疾病且近一个月内未服用抗生素及免疫抑制剂。
[0092]
在选择志愿者时，依据志愿者候选对象的主观判断的四级瘙痒的程度(无瘙痒、轻度瘙痒、中度瘙痒、和重度瘙痒)，对各志愿者候选对象的皮肤瘙痒程度进行区分。同时依据志愿者候选对象的面部或颈部红肿面积分为四级(无红肿、轻度红肿、中度红肿、重度红肿)，选择皮肤瘙痒程度轻度瘙痒和中度瘙痒且皮肤红肿程度为轻度红肿和中度红肿的共10名志愿者候选对象作为测试对象。
[0093]
测试对象在实验开始前一周内未使用外用类固醇，实验期间限制了外用类固醇的使用，也不得使用其他止痒物质。
[0094]
对于测试组，将含重组人血管生成素的护肤品(护肤霜，含重组人血管生成素为总重量的0.00005％)施涂于皮肤的红肿部位或其周围每天两次，早晚各一次，总计3天。
[0095]
对于对照组，将不含重组人血管生成素且其余成分相同的护肤品施涂于皮肤的伴红肿的瘙痒部位或其周围每天两次，早晚各一次，总计3天。
[0096]
在施涂前，由各志愿者对皮肤瘙痒按表1(实施例1)进行瘙痒程度进行评分，仍处于轻度瘙痒或中度瘙痒则纳入统计。同时，由各志愿者对皮肤红肿按表4进行红肿程度进行评分，仍处于轻度红肿或中度红肿则纳入统计。
[0097]
在施涂3天后，由各志愿者再次对皮肤红肿和皮肤瘙痒按表5进行评分。
[0098]
表4红肿程度划分表
[0099][0100]
表5红肿和瘙痒改善程度评分表
[0101][0102]
统计结果如下表6：
[0103]
表6
[0104][0105][0106]
测试结果表明，对于伴有红肿的皮肤瘙痒，与对照组相比，在施用了ang的测试组中，ang不仅能够显著抑制和缓解皮肤瘙痒，而且可以显著消除瘙痒部位或周围的皮肤红肿，80％的测试对象(4/5)的皮肤瘙痒效果明显。
[0107]
实施例3ang对太阳光或紫外光(uv)照射导致的皮肤瘙痒的止痒作用
[0108]
实验对象：按照皮肤瘙痒按表1进行瘙痒程度进行评分，纳入处于中度瘙痒的4名经太阳光(海边)照射1小时导致的皮肤瘙痒的志愿者，男性2名，女性2名，随机分为2组，实
验组和对照组中男女数量相同。
[0109]
皮肤瘙痒的部位包括：面部、颈部和背部。
[0110]
所有志愿者无其他全身疾病且近一个月内未服用抗生素及免疫抑制剂。
[0111]
测试对象在实验开始前一周内未使用外用类固醇，实验期间限制了外用类固醇的使用，也不得使用其他止痒物质。
[0112]
对于测试组，将含重组人血管生成素的护肤霜(重组人血管生成素为总重量的0.00001％)施涂于面部，颈部和背部每天2次，共计2天。
[0113]
对于对照组，将不含重组人血管生成素且其他成分相同的护肤霜施涂于皮肤的瘙痒面部，颈部和背部每天2次，共计2天。
[0114]
在施涂2天后，由各志愿者再次对皮肤瘙痒按表2进行评分。
[0115]
统计结果如下表7：
[0116]
表7
[0117]
对照组测试组4分
×
0(人)4分
×
1(人)3分
×
0(人)3分
×
1(人)2分
×
1(人)2分
×
0(人)1分
×
1(人)1分
×
0(人)总分＝3分总分＝7分
[0118]
测试结果表明，对于太阳光或紫外光(uv)照射导致的皮肤瘙痒，与对照组相比，在施用了ang的测试组中，ang能够显著抑制和缓解太阳光或uv过度照射导致的皮肤瘙痒。
[0119]
实施例4包含血管生成素的止痒产品(ang护肤霜)
[0120]
本实施例中，ang护肤霜的配方中的止痒成分为ang多肽(重组的人血管生成素)，其含量为护肤霜总重量的0.00001％。该ang护肤霜其他成分包括：聚丙烯酰基二甲基牛磺酸、氢化聚癸烯和十三烷醇聚醚、橄榄油鲸蜡醇酯和山梨坦橄榄油酸酯、甘油硬脂酸酯/硬脂酸聚乙二醇酯、鲸蜡硬脂醇、辛酸/癸酸甘油三酯、异十六烷、α-乙酸维生素e、丙二醇、羟丙酮、苯氧乙醇/乙基己基甘油、氯苯甘醚/1,3丁二醇、角叉藻提取物，苯氧乙醇、糖基海藻糖以及水(适量)。
[0121]
实施例5包含血管生成素的止痒产品(生物纤维ang面膜)
[0122]
在本实施例中，制备一生物纤维ang面膜(包括面膜贴和精华液)，其中，精华液中止痒成分为ang多肽(重组的人血管生成素)，其含量为护肤霜总重量的0.00001％。该生物纤维ang面膜精华液中其他成分包括：水(适量)、丁二醇、甘油、丙二醇、酵母提取物、甜菜碱、北美金缕梅(hamamelis virginiana)提取物、黄瓜(cucumis sativus)果提取物、母菊(chamomilla recutita)花提取物、墨角藻(fucus vesiculosus)提取物、β-葡聚糖、海藻糖、双丙甘醇、对羟基苯乙酮、透明质酸钠、小核菌(sclerotium rolfssii)胶、黄原胶、辛甘醇、甘草酸二钾、edta二钠。
[0123]
本发明的止痒产品，按照本领域常规条件制备得到。
[0124]
实施例6ang对某不明原因患者瘙痒的止痒作用(病例一)
[0125]
患者：甲某(女)，55岁
[0126]
症状：腰背部不明原因的顽固性瘙痒
[0127]
止痒处理：将ang护肤霜(实施例4)施涂于瘙痒部位，并观察效果
[0128]
取适量ang护肤霜，轻轻施涂在腰背部瘙痒部位以及周围，10分钟后，痒感消失。第2天，痒感复现，但比第一次施涂包含ang护肤霜之前的痒感减轻，继续施涂ang护肤霜，10分钟后，痒感消失。连续施涂1周，每天1-2次，患者基本痊愈；连续施涂2周，痊愈。
[0129]
该病例施涂包含重组ang护肤霜前后的瘙痒部位的对比结果如图1所示。
[0130]
实施例6ang对面部红肿瘙痒患者的止痒作用(病例二)
[0131]
患者：乙某(女)，35岁
[0132]
症状：脸部红肿瘙痒
[0133]
止痒处理：将ang护肤霜(实施例4)施涂于瘙痒部位，并观察效果。
[0134]
取适量ang护肤霜，轻轻施涂在在脸部红肿部位及周围，每天早晚各一次，连续施涂3天，患者基本痊愈，其施涂包含重组ang护肤霜前后红肿瘙痒部位的对比结果如图2所示。
[0135]
在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。