一种对于心脏的医疗应用的药物的制作方法

1.本发明涉及医学领域，具体涉及一种对于心脏的医疗应用的药物。


背景技术：

2.蛋白质是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。蛋白质约占人体全部质量的18％，最重要的还是其与生命现象有关。蛋白质是由氨基酸以“脱水缩合”的方式组成的多肽链经过盘曲折叠形成的具有一定空间结构的物质。在蛋白质的翻译合成之后，，糖基化作为一种主要的蛋白质翻译后修饰形式，某些氨基酸残基还可以被翻译后修饰而发生化学结构的变化，从而对蛋白质的结构和功能进行激活或调控，这种修饰往往是糖基化的过程，遗传信息由dna传递至蛋白质,再经蛋白质翻译后糖基化修饰形成糖蛋白。糖基化作为一种主要的蛋白质翻译后修饰形式，对蛋白质的结构和功能有着重要影响，糖蛋白的糖链在细胞间的识别、黏附、通信联络以及免疫应答等方面均起着重要作用。
3.按照经典的天然药物理论，生物活性物质主要包括肽类、糖类、萜类、生物碱、聚醚类、大环内酯、甾醇等，这种分类方法仅仅是一种简单的分类。肽类、糖类是组成蛋白质的物质，而不仅是蛋白质在新陈代谢中的产物，“萜类、生物碱、聚醚类、大环内酯、甾醇”不是组成蛋白质的物质，而仅仅是蛋白质在新陈代谢中的代谢产物，是生物体储存在特定细胞或细胞部位的物质。
4.天然药物开发的早年的主要的工作放在萜类、生物碱、聚醚类、大环内酯、甾醇等领域。随着，高效液相技术、质谱技术、液质联用技术等的发展，天然药物开发的关注点开始偏向于肽类、糖类。
5.多肽由一种或多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成的化合物，结构处于氨基酸和蛋白质之间。与蛋白质相比，多肽的结构简单，分子量小，更容易通过各种生物膜，在生命活动中发挥着重要作用，例如在分子识别、信号转导、细胞分化及个体发育等起重要作用。多肽在生物机体内的吸收要好于氨基酸，且具有氨基酸不可比拟的生理活性功能。多肽的来源分为合成、天然两种来源。天然多肽来自于：动物、植物、微生物。部分多肽链的末端被糖基化修饰而变成糖肽，但是，糖肽仅占所有肽段的小部分(2－5％)，其质谱响应很容易被高丰度非糖肽抑制，糖肽和多肽的活性并不一致。多糖类物质来保持体内生命活动所需的自由水分，生物中多肽和多糖担任着重要的生理功能，是重要的活性物质。
6.天然多肽具有抗茵、抗病毒、降低血压等活性，mohammad a等从印度尼西亚海绵中得到一种由13个氨基酸残基组成的环状缩醛肽(microspisamid)，该化合物能够抑制由hiv—i感染引起的细胞病变。zhao等从金枪鱼骨架蛋白水解产物中提取得到了一种抗高血压肽(齐鲁渔业，2015年，第32卷，第5期)。长春师范大学支持了豌豆植物多肽pa1b抗虫机制的研究。
7.吉林省中医药科学院支持了人参糖肽降糖、镇痛的研究，湖北中医药大学支持了鳖甲多肽抗肝纤维化的研究，中国科学院海洋研究所支持了海鞘多肽拮抗survivin的分子
机制，北京化工大学支持了基于天然多糖-多肽偶联体构建新型重大疾病治疗体系，北京工商大学支持了米糠多肽介导胆固醇外流的分子机制研究，青岛科技大学支持了文蛤多肽靶向微管蛋白抑制肺癌生长的分子机制研究。南方医科大学支持了花姬蛙皮肤潜在药用多肽的结构与功能研究。华南师范大学支持了美洲大蠊抗病毒多肽研究，昆明医科大学支持了树蛙皮肤中潜在药用多肽和蛋白的结构与功能研究。
8.湖南师范大学提交了zl931047226专利申请，涉及虎纹捕鸟蜘蛛毒素及其制备方法，其化学结构为由33个氨基酸残基以特定的顺序组成的多肽，含有三对链内二硫键。它能不可逆地阻断哺乳动物神经肌肉接头传递，可作为工具试剂应用于神经生物学和药理学研究。
9.湖南师范大学提交了zl00042548，涉及虎纹镇痛肽在制备镇痛药物中的用途。虎纹镇痛肽可作为单一有效活性组份用于制备镇痛药物。由于虎纹镇痛肽是通过与神经突触前膜的n型高阈值钙离子通道的结合，抑制突触前神经递质的释放而阻断痛觉神经信号的传导。
10.韩国科学技术研究院提交了zl9510017701.2，涉及提纯水蛭素的方法，使用金属离子亲合色谱法，以铜离子用作亲合吸附剂并以磷酸盐缓冲剂用作洗脱液。
11.因德纳有限公司提交了zl200380002805.x，涉及β-伴大豆球蛋白的α亚基的制备方法，β-伴大豆球蛋白富集级分在变性缓冲液中重悬，在与锌结合的亚氨基二乙酸琼脂糖基质(sigma)上进行金属亲和层析纯化，得到α亚基。
12.吉林省中医中药研究院提交了zl200610017237.6，涉及采用50％乙醇回流提取人参，80％乙醇沉淀的方法，得到人参糖肽粗品，同时控制其分子量的大致范围，再通过冷藏、脱色及超滤技术，除去杂质，得到精制的人参糖肽。
13.辽宁师范大学提交了zl200810230190.0，涉及林蛙抗癌肽及其制备方法，抗癌肽以林蛙皮为原料，经酸化乙醇提取，离心，上清液冷冻干燥后，柱层析进行纯化，脱盐，冻干凝缩，得到具有抗癌活性的林蛙抗癌肽。
14.中国科学院大连化学物理研究所提交了zl200710012966.7，磷酸肽由于磷酸基团与固定的钛离子之间的强相互作用而保留在固定钛离子亲和色谱材料，从而实现特异性地从复杂的蛋白酶解液中分离和富集磷酸肽。
15.中国科学院大连化学物理研究所提交了zl201610442864.8，涉及将人参磨粉，再经有机溶剂或甲酸提取，提取液经柱分离，洗脱液减压浓缩得到以内源性人参多肽为主要成分的人参提取物。
16.广西大学提交了zl201810125564.6，涉及以鳖甲为原料用水提取获得反应原料液，经酶解处理、微滤及超滤后，以凝胶层析柱和阴离子交换层析柱分离得到抑制肽原料，再对抑制肽原料进行多次色谱法分离纯化，获得血管紧张素转换酶抑制肽。
17.虽然，天然多肽的研究一直是全球药物研究的重点领域，但是，研发过程中遇到的困难是非常显著的，尤其提纯、分离上的技术并不完善，因此，有必要对天然多肽的提取制备工艺进行深入研究。
18.技术方案
19.本发明涉及一种对于心脏的医疗应用的药物；天然原料来自：蜈蚣、水蛭、土鳖虫、美洲大蠊、全蝎、蚯蚓、雪蛤、人参、西洋参、枸杞、灵芝；
20.提取过程包括：按照现有常规技术提取，
21.提取方法包括：水提取、乙醇提取、聚酰胺分离、大孔树脂分离、葡聚糖凝胶分离的任意一种。
22.本发明涉及一种对于心脏的医疗应用的药物，涉及天然肽，其特征在于用于制备：治疗或者预防心肌缺血性疾病药物、治疗或预防心梗药物、治疗或预防冠心病药物。
23.本发明涉及一种对于心脏的医疗应用的药物，涉及天然肽，，其特征在于：从天然原料中分离得到，分离过程包括：
24.第一阶段：天然原料的初步加工；包括如下步骤：干燥、粉碎、去除杂质；
25.第二阶段：富集天然肽；
26.第三阶段：纯化天然肽：制备液相、脱盐，
27.第四阶段：保存，包括如下步骤：冻干。
28.本发明涉及一种对于心脏的医疗应用的药物，涉及天然肽，，其特征在于：剂型包含注射液、冻干粉针、控释注射剂、脂质体注射剂、喷雾剂。
29.本发明涉及一种对于心脏的医疗应用的药物，涉及天然肽，，其特征在于：还可以包括药物载体和/或药用辅料。
30.本发明涉及一种对于心脏的医疗应用的药物，涉及天然肽，，其特征在于：天然肽为lprw肽、lprt肽、lprr肽、lprl肽。
31.实验例1：
32.第一阶段：天然原料的初步加工的优选
33.本发明所述的天然原料的初步加工步骤：干燥、粉碎、去除杂质。
34.本发明所述的天然原料的干燥方式为：真空干燥、自然干燥中的任意一种；
35.本发明所述的天然原料的粉碎方式为：常规粉碎、超微粉碎中的任意一种；
36.本发明所述的天然原料的去除杂质为：乙醇提取、二氧化碳超临界萃取中的任意一种。
37.挑选四种天然原料，去杂质，摊匀，自然干燥12、24小时，粉碎，200过筛，85％乙醇浸泡2次，每次12小时，提取去除脂肪，得到天然原料粉a1、a2、a3、a4；
38.挑选四种天然原料，去杂质，摊匀，真空干燥4、8小时，超微粉碎100μm，微波膨化，85％乙醇浸泡2次，每次12小时，提取去除脂肪，得到天然原料粉b1、b2、b3、b4；
39.挑选四种天然原料，去杂质，摊匀，真空干燥4、8小时，超微粉碎100μm，微波膨化，二氧化碳超临界萃取去除脂肪，二氧化碳超临界萃取的工艺条件是：萃取压力为25mpa，萃取温度为35℃，co2流量20l/h，萃取2h；得到天然原料粉c1、c2、c3、c4；
40.天然原料为：蜈蚣、全蝎、人参、灵芝各20克。测定天然原料粉a组、b组、c组中杂质的含量。对于蜈蚣、全蝎、灵芝、人参采用c组的工艺，杂质收率高。
41.实验例2：富集天然肽
42.第二阶段：富集天然肽：按照1、或、2、或、3次洗脱
43.第1步、取天然原料粉末(c1、c2、c3、c4)，加入壳聚糖，用蒸馏水溶解，混悬液采用聚酰胺进行吸附，用蒸馏水洗脱、用5-15％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，将洗脱液的乙醇调整为2-4％；；
44.第2步、2-4％乙醇洗脱液，用大孔树脂吸附，用蒸馏水洗脱、用5-15％乙醇洗脱，收
集乙醇洗脱液；
45.可以将1、2中的任意进行重复。
46.聚酰胺、大孔吸附树脂为80-200目。
47.大孔吸附树脂为中极性、弱极性或非极性吸附树脂，如d101、hpd100、ab-8、hpd400、hpd600等，
48.收集取得天然原料粉末(c1、c2、c3、c4)中第一阶段第1步、第二阶段第1步的蒸馏水洗脱液，真空干燥、备用。
49.收集取得天然原料粉末(c1、c2、c3、c4)中第二阶段第1步的乙醇洗脱液，真空干燥，得到真空干燥粉末，备用。
50.实验例3：纯化天然肽：制备液相、脱盐
51.制备层析：sephadextmg-50、sephadextmg-75、sephadex lh-20、cm sepharosetm、bestarose ff、bestarose hp、deae bestarose ff 200mm
×
250mm；200mm
×
600mm；200mm
×
400mm；200mm
×
800mm
52.进样样品：真空干燥粉末的去离子水溶解液；
53.流动相：0.01mol/l的氢氧化钠水溶液(a)、
54.0.01mol/l的磷酸二氢钾水溶液(b)，
55.梯度洗脱程序：
56.0-10min，b:5％
57.10-20min，b:5-20％；
58.收集出峰时间；10-19min的部分。
59.收集脱水脱盐的提取物。
60.实验例4：冻干工艺的确定
61.最低溶点的测定
62.仪器：swcⅱ数字贝克曼温度计，凝固点测定仪
63.方法：将脱水脱盐的提取物，置凝固点测定仪内管中，插入测温热电偶，置-25℃冰箱中使冻结。将冻结的样品置凝固点测定仪外管中，测定不同时间下样品温度，绘制样品温度—时间曲线。从曲线上读出最低熔点。
64.冷冻干燥过程按之程度进行：
①
预冻结过程；
②
升华干燥；
③
解析干燥。
65.以外观成型性、复溶性、含水量作考察的指标，优化冷冻干燥的工艺。
具体实施方式
66.实验例1：
67.第一阶段：天然原料的初步加工的优选
68.本发明所述的天然原料的初步加工步骤：干燥、粉碎、去除杂质。
69.本发明所述的天然原料的干燥方式为：真空干燥、自然干燥中的任意一种；
70.本发明所述的天然原料的粉碎方式为：常规粉碎、超微粉碎中的任意一种；
71.本发明所述的天然原料的去除杂质为：水提取、乙醇提取、二氧化碳超临界萃取中的任意一种。
72.挑选四种天然原料，去杂质，摊匀，自然干燥12、24小时，粉碎，200过筛，85％乙醇
浸泡2次，每次12小时，提取去除脂肪，得到天然原料粉a1、a2、a3、a4；
73.挑选四种天然原料，去杂质，摊匀，真空干燥4、8小时，超微粉碎100μm，微波膨化，85％乙醇浸泡2次，每次12小时，提取去除脂肪，得到天然原料粉b1、b2、b3、b4；
74.挑选四种天然原料，去杂质，摊匀，真空干燥4、8小时，超微粉碎100μm，微波膨化，二氧化碳超临界萃取去除脂肪，二氧化碳超临界萃取的工艺条件是：萃取压力为25mpa，萃取温度为35℃，co2流量20l/h，萃取2h；得到天然原料粉c1、c2、c3、c4；
75.天然原料为：蜈蚣、全蝎、人参、灵芝各20克。
76.测定天然原料粉a组、b组、c组中杂质的含量。
77.对于蜈蚣、全蝎、灵芝、人参采用c组的工艺，杂质收率高。
78.实验例2：富集天然肽
79.第二阶段：富集天然肽：按照1、或、2、或、3次洗脱
80.第1步、取天然原料粉末(c1、c2、c3、c4)，加入适量壳聚糖，用蒸馏水溶解，混悬液采用聚酰胺进行吸附，用蒸馏水洗脱、用5-15％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，将洗脱液的乙醇调整为2-4％；；
81.第2步、2-4％乙醇洗脱液，用大孔树脂吸附，用蒸馏水洗脱、用5-15％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
82.可以将1、2中的任意进行重复。
83.聚酰胺、大孔吸附树脂为80-200目。
84.大孔吸附树脂为中极性、弱极性或非极性吸附树脂，如d101、hpd100、ab-8、hpd400、hpd600等，
85.收集取得天然原料粉末(c1、c2、c3、c4)中第一阶段第1步、第二阶段第1步的蒸馏水洗脱液，真空干燥、备用。
86.收集取得天然原料粉末(c1、c2、c3、c4)中第二阶段第1步的乙醇洗脱液，真空干燥，得到真空干燥粉末，备用。
87.实验例3：纯化天然肽：制备液相、脱盐
88.制备层析：sephadextmg-50、sephadextmg-75、sephadex lh-20、cm sepharosetm、bestarose ff、bestarose hp、deae bestarose ff 200mm
×
250mm；200mm
×
600mm；200mm
×
400mm；200mm
×
800mm
89.进样样品：真空干燥粉末的去离子水溶解液；
90.流动相：0.01mol/l的氢氧化钠水溶液(a)、
91.0.01mol/l的磷酸二氢钾水溶液(b)，
92.梯度洗脱程序：
93.0-10min，b:5％
94.10-20min，b:5-20％；
95.流速：5.0-10.0ml/min，
96.检测波长：260nm，
97.进样量：0.5ml，
98.收集脱水脱盐的提取物。
99.收集出峰时间；10-19min的部分。
100.收集脱水脱盐的提取物。
101.实验例4：冻干工艺的确定
102.最低溶点的测定
103.仪器：swcⅱ数字贝克曼温度计，凝固点测定仪
104.方法：将脱水脱盐的提取物，置凝固点测定仪内管中，插入测温热电偶，置-25℃冰箱中使冻结。将冻结的样品置凝固点测定仪外管中，测定不同时间下样品温度，绘制样品温度—时间曲线。从曲线上读出最低熔点。
105.冷冻干燥过程按之程度进行：
①
预冻结过程；
②
升华干燥；
③
解析干燥。
106.以外观成型性、复溶性、含水量作考察的指标，优化冷冻干燥的工艺。
107.相对于现有技术，本发明具有如下优点：本发明提供的天然肽，来源广、纯度高，稳定性好、活性强；
108.本发明的海星、牛蛙皮、蜈蚣、水蛭、土鳖虫、美洲大蠊、全蝎、蚯蚓、雪蛤、人参、西洋参、枸杞、灵芝的来源包括市售、或按照常用技术制备。
109.实施例1：lprw肽之一及其冻干粉的制备
110.蜈蚣原料粉的制备：挑选500克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，超微粉碎100μm，微波膨化，二氧化碳超临界萃取去除脂肪，二氧化碳超临界萃取的工艺条件是：萃取压力为25mpa，萃取温度为35℃，co2流量20l/h，萃取2h；得到蜈蚣原料粉之一；
111.取蜈蚣原料粉之一100克，用蒸馏水溶解，用200目大孔树脂d101吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；真空干燥，得到蜈蚣真空干燥粉末之一，备用。
112.取蜈蚣真空干燥粉末之一3克，加入0.1克壳聚糖，用去离子水溶解，通过制备柱层析来精制，填料是sephadex lh-20；进样样品：真空干燥粉末的去离子水溶解液；流动相：0.01mol/l的氢氧化钠水溶液(a)、0.01mol/l的磷酸二氢钾水溶液(b)；梯度洗脱程序：0-10min，b:5％；10-20min，b:10％；收集出峰时间；10-12min的部分；流速：1.0ml/min，检测波长：260nm,进样量：0.5ml；经过脱水，脱盐，得到蜈蚣精制物之一；
113.蜈蚣精制物之一10.0mg加入5.0mg蛋氨酸，加5.0g乳糖溶解，加入注射用水，加热溶解，稀释至100ml，过滤、滤液超滤，-10℃冷冻5小时，减压干燥3小时，-20℃；升温干燥4小时，温度在-5℃，二次升温干燥4小时，温度在20℃；得到白色粉末lprw肽的冻干粉之一。
114.实施例2：lprw肽之二及其冻干粉的制备
115.蜈蚣原料粉的制备：挑选500克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，超微粉碎100μm，微波膨化，二氧化碳超临界萃取去除脂肪，二氧化碳超临界萃取的工艺条件是：萃取压力为25mpa，萃取温度为35℃，co2流量20l/h，萃取2h；得到蜈蚣原料粉之二；
116.取蜈蚣原料粉之二100克，加入5克壳聚糖，用蒸馏水溶解，混悬液采用200目聚酰胺进行吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，真空干燥，用蒸馏水溶解，用200目大孔树脂d101吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；真空干燥，得到蜈蚣真空干燥粉末之二，备用。
117.取蜈蚣真空干燥粉末3克，加入0.1克壳聚糖，用去离子水溶解，通过制备柱层析来精制，填料是sephadex lh-20；进样样品：真空干燥粉末的去离子水溶解液；流动相：0.01mol/l的氢氧化钠水溶液(a)、0.01mol/l的磷酸二氢钾水溶液(b)；梯度洗脱程序：0-10min，b:5％；10-20min，b:10％；收集出峰时间；10-12min的部分；流速：1.0ml/min，检测波
长：260nm,进样量：0.5ml；经过脱水，脱盐，得到蜈蚣精制物之二；
118.蜈蚣精制物之二10.0mg加入5.0mg蛋氨酸，加5.0g乳糖溶解，加入注射用水，加热溶解，稀释至100ml，过滤、滤液超滤，-10℃冷冻5小时，减压干燥3小时，-20℃；升温干燥4小时，温度在-5℃，二次升温干燥4小时，温度在20℃；得到白色粉末lprw肽的冻干粉之二。
119.实施例3：lprt肽之一及其冻干粉的制备
120.全蝎原料粉的制备：挑选500克全蝎，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，超微粉碎100μm，微波膨化，二氧化碳超临界萃取去除脂肪，二氧化碳超临界萃取的工艺条件是：萃取压力为25mpa，萃取温度为35℃，co2流量20l/h，萃取2h；得到全蝎原料粉之一；
121.取全蝎原料粉之一100克，用蒸馏水溶解，用200目大孔树脂d101吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；真空干燥，得到全蝎真空干燥粉末之一，备用。
122.取全蝎真空干燥粉末之一2克，加入0.1克壳聚糖，用去离子水溶解，通过制备柱层析来精制，填料是sephadex lh-20；进样样品：真空干燥粉末的去离子水溶解液；流动相：0.01mol/l的氢氧化钠水溶液(a)、0.01mol/l的磷酸二氢钾水溶液(b)；梯度洗脱程序：0-10min，b:5％；10-20min，b:10％；收集出峰时间；15-18min的部分；流速：1.0ml/min，检测波长：260nm,进样量：0.5ml；经过脱水，脱盐，得到全蝎精制物之一；
123.全蝎精制物之一10.0mg加入5.0mg蛋氨酸，加5.0g乳糖溶解，加入注射用水，加热溶解，稀释至100ml，过滤、滤液超滤，-10℃冷冻5小时，减压干燥3小时，-20℃；升温干燥4小时，温度在-5℃，二次升温干燥4小时，温度在20℃；得到白色粉末lprt肽的冻干粉之一。
124.实施例4：lprt肽之二及其冻干粉的制备
125.全蝎原料粉之二的制备：挑选500克全蝎，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，超微粉碎100μm，微波膨化，二氧化碳超临界萃取去除脂肪，二氧化碳超临界萃取的工艺条件是：萃取压力为25mpa，萃取温度为35℃，co2流量20l/h，萃取2h；得到全蝎原料粉之二；
126.取全蝎原料粉之二100克，加入5克壳聚糖，用蒸馏水溶解，混悬液采用200目聚酰胺进行吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，真空干燥，用蒸馏水溶解，用200目大孔树脂d101吸附，用蒸馏水洗脱、用10％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；真空干燥，得到全蝎真空干燥粉末之二，备用。
127.取全蝎真空干燥粉末之二2克，加入0.1克壳聚糖，用去离子水溶解，通过制备柱层析来精制，填料是sephadex lh-20；进样样品：真空干燥粉末的去离子水溶解液；流动相：0.01mol/l的氢氧化钠水溶液(a)、0.01mol/l的磷酸二氢钾水溶液(b)；梯度洗脱程序：0-10min，b:5％；10-20min，b:10％；收集出峰时间；15-18min的部分；流速：1.0ml/min，检测波长：260nm,进样量：0.5ml；经过脱水，脱盐，得到全蝎精制物之二；
128.全蝎精制物之二10.0mg加入5.0mg蛋氨酸，加5.0g乳糖溶解，加入注射用水，加热溶解，稀释至100ml，过滤、滤液超滤，-10℃冷冻5小时，减压干燥3小时，-20℃；升温干燥4小时，温度在-5℃，二次升温干燥4小时，温度在20℃；得到白色粉末lprt肽的冻干粉之二。
129.实施例5：稳定性试验
130.取实施例1、2、3、4的产品，根据《中国药典》2010年版二部附录xix c药物稳定性试验指导原则，进行影响因素试验、加速试验和长期试验。考察项目包括：性状、鉴别、含量。
131.实施例1、2、3、4的产品强光照射192小时，试验后含量不变。
132.实施例1、2、3、4的产品在35摄氏度，相对湿度60
±
10％，置于留样室中，分别于6、
12、24、48个月取样测定，试验后含量不变。
133.实施例6：毒性试验
134.实施例1、2、3、4的产品给大鼠静脉给药，用0.9％氯化钠注射液溶解稀释至试验用浓度，实施例1、2、3、4的产品给大鼠肌肉注射给药，用0.9％氯化钠注射液溶解稀释至试验用浓度。实施例1、2、3、4的产品无毒。
135.实施例7：
136.实施例1的产品片剂的制备
137.实施例1的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；硬酸镁2g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂。
138.实施例1的产品胶囊剂的制备
139.实施例1的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；100目筛制粒，80℃干燥，100目筛整粒，填入空胶囊。
140.实施例1的产品喷雾剂的制备
141.实施例1的产品0.5g；加入30％乙醇水溶液，按照常规方法制备喷雾剂。
142.实施例2的产品片剂的制备
143.实施例2的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；硬酸镁2g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂。
144.实施例2的产品胶囊剂的制备
145.实施例2的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；100目筛制粒，80℃干燥，100目筛整粒，填入空胶囊。
146.实施例2的产品喷雾剂的制备
147.实施例2的产品0.5g；加入30％乙醇水溶液，按照常规方法制备喷雾剂。
148.实施例8：
149.实施例3的产品片剂的制备
150.实施例3的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；硬酸镁2g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂。
151.实施例3的产品胶囊剂的制备
152.实施例3的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；100目筛制粒，80℃干燥，100目筛整粒，填入空胶囊。
153.实施例3的产品喷雾剂的制备
154.实施例3的产品0.5g；加入30％乙醇水溶液，按照常规方法制备喷雾剂。
155.实施例4的产品片剂的制备
156.实施例4的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；硬酸镁2g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂。
157.实施例4的产品胶囊剂的制备
158.实施例4的产品0.5g；微晶纤维素10g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素50g；25％淀粉浆100ml；100目筛制粒，80℃干燥，100目筛整粒，填入空胶囊。
159.实施例4的产品喷雾剂的制备
160.实施例4的产品0.5g；加入30％乙醇水溶液，按照常规方法制备喷雾剂。
161.实施例9
162.挑选500克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，然后按照如下任意一种方式制备：粉碎；超微粉碎；用水提取；或，用乙醇提取；得到蜈蚣提取物；该蜈蚣提取物在制备治疗或者预防心肌缺血性疾病药物、治疗或预防心梗药物、治疗或预防冠心病药物上的应用。
163.实施例10
164.挑选500克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，粉碎，用水提取，水提物真空干燥；过大孔树脂柱，用纯净水洗脱，用5％、10％、20％、40％、80％的乙醇洗脱；收集得到5％、10％的乙醇洗脱的蜈蚣提取物；该蜈蚣提取物在制备治疗或者预防心肌缺血性疾病药物、治疗或预防心梗药物、治疗或预防冠心病药物上的应用。
165.2克蜈蚣毒，灭菌，冻干；用于制备治疗或者预防心肌缺血性疾病药物、治疗或预防心梗药物、治疗或预防冠心病药物上的应用。
166.实施例11
167.挑选500克全蝎，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，然后按照如下任意一种方式制备：粉碎；超微粉碎；用水提取；或，用乙醇提取；得到全蝎提取物；该全蝎提取物在制备治疗或者预防心肌缺血性疾病药物、治疗或预防心梗药物、治疗或预防冠心病药物上的应用。
168.2克蝎毒，灭菌，冻干；用于制备治疗或者预防心肌缺血性疾病药物、治疗或预防心梗药物、治疗或预防冠心病药物上的应用。
169.实施例12
170.挑选500克全蝎，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，粉碎，用水提取，水提物真空干燥；过大孔树脂柱，用纯净水洗脱，用5％、10％、20％、40％、80％的乙醇洗脱；收集得到5％-10％的乙醇洗脱的全蝎提取物；该全蝎提取物在制备治疗或者预防心肌缺血性疾病药物、治疗或预防心梗药物、治疗或预防冠心病药物上的应用。
171.实施例13
172.挑选50克全蝎、50克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，然后按照如下任意一种方式制备：粉碎；超微粉碎；用水提取；或，用乙醇提取；得到全蝎蜈蚣提取物；该全蝎蜈蚣提取物在制备治疗或者预防心肌缺血性疾病药物、治疗或预防心梗药物、治疗或预防冠心病药物上的应用。
173.实施例14
174.挑选50克全蝎、50克蜈蚣，去杂质，摊匀，真空干燥4小时，粉碎，用水提取，水提物真空干燥；过大孔树脂柱，用纯净水洗脱，用5％、10％、20％、40％、80％的乙醇洗脱；收集得到5％、10％的乙醇洗脱的全蝎蜈蚣提取物；该全蝎蜈蚣提取物在制备治疗或者预防心肌缺血性疾病药物、治疗或预防心梗药物、治疗或预防冠心病药物上的应用。
175.实施例15
176.选择50只大鼠，盐酸戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉，经口气管插管行小动物呼吸机辅助呼吸，有氧正压通气，潮气量5～6ml，呼吸比1：2，呼吸频率8o次/min。连接标准12导联，记录大鼠心电图。经左前胸廓旁第3，4肋间逐层开胸，暴露心脏，分离心包，在肺动脉圆锥和左心耳交界处用5～0号丝线结扎左冠状动脉前降支近端制成心肌梗死模型，以心电图出现坏死性q波判断为可能心肌梗死，若无病理性q波，则再次结扎，以提高心肌梗死模型成功率，然后逐层缝合心腔，术后常规抗感染治疗
177.在清洁级观察室内适应环境3天后，选取36只，随机等分为7组，每组6只，第一组为空白对照组，第二组为血塞通注射液80mg/kg组，第三组为lprw肽之一的冻干粉20ug/k组，第四组为lprw肽之二的冻干粉20ug/k组，第五组为lprt肽之一的冻干粉20ug/k组，第六组为lprt肽之二的冻干粉20ug/k组，第七组为蝎毒bmk200ug/kg组，1次腹腔注射给药，体积为10ml/kg。于给药后30min，以3％的水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，处死大鼠，取心肌组织，用4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片he染色。
178.胶原蛋白含量(％)
[0179][0180][0181]
常规he染色在光镜下进行病理观察。采用染色法测定非梗死区胶原含量。血塞通注射液、lprw肽之一的冻干粉、lprw肽之二的冻干粉、lprt肽之一的冻干粉、lprt肽之二的冻干粉、蝎毒bmk都降低心肌胶原含量，并能减轻心肌组织的病理损伤。lprt肽之一的冻干粉、lprt肽之二的冻干粉的效果更明显，能减少梗塞面积，能降低左心室肥厚。