一种捕获cfDNA5hmC片段的检测方法与流程

技术特征：
1.一种捕获cfdna5hmc片段的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：预先准备需要使用的试剂，置于冰上，建立体系，温度时间为37℃、2h；步骤二：加入2.5μldbco
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peg4
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biotin,37℃，孵育2h；步骤三：再使用microbio
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spin30column(bio
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rad)纯化；步骤四：取5μlci磁珠，吹打均匀后置于磁力架上，待澄清后吸走上清液，加50μl的2*buffer1在旋转架上孵育3min后，置于磁力架上待澄清后吸走上清液，再加50μl的2*buffer1吹打均匀重悬磁珠；步骤五：将均匀的重悬磁珠加到已定容至50μl的1.5ml管中，在旋转架上孵育30min；步骤六：分别用100μl的buffer1(1x)，buffer2(1x),buffer3，andbuffer4洗脱，每种buffer洗两次，每次洗时置于旋转架上5min。2.根据权利要求1所述的一种捕获cfdna5hmc片段的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，建立体系选择试剂10*buffer、60μmudp
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n3
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gle、12.5ubgt、dna和水的混合物，所述试剂的质量分别为2.5μl、0.5μl、1.25μl和21μl。3.根据权利要求1所述的一种捕获cfdna5hmc片段的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，试剂准备包括以下步骤：s1：ampurexpbead应提前在室温放置30min，充分混匀成磁珠悬浮液；s2：取出新的1.5m低吸附离心管中，连接接头后的样本依次转入已标记的管，并加入80μl(0.8倍样本体积)ampurexpbead，吹打混匀，室温放置5min后；s3：将珠子放在磁石座上(放置于磁力架时不要将管子放的太低)，待液体完全澄清之后，用量程大于溶液总体积的大小枪尖组合吸走上清液；s4：加200μl的80％乙醇到每个管中，等待30秒后，用量程大于溶液总体积的大小枪尖组合吸走上清液；s5：重复第13步，用乙醇共洗两次，吸出多余的80％乙醇；s6：室温放置5min，使管中残留的乙醇完全挥发(磁珠表面不反光，表面无裂纹或微有裂纹)；s7：加入11μlnuclease
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freewater(以dna输入10ng为例，洗脱后浓度约为1ng/ul)，吹打混匀，室温放置1min；s8：瞬时离心后，将ep管放在磁力架上，至溶液变澄清；吸取上清到一个新的1.5ml低吸附管中进行后续操作；s9：取其中一半进行5hmc，剩余产物保存在
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80℃。4.根据权利要求1所述的一种捕获cfdna5hmc片段的检测方法，其特征在于，所述步骤三中，使用microbio
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spin30column(bio
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rad)纯化的方法包括以下步骤：步骤一：摇匀试剂后除气泡，打开下部封口，放入专用的2ml收集管中，放置2min，让液体流穿，将2ml管中的液体倒掉；步骤二：1000g，离心2min；步骤三：将柱子移到专用的1.5mlep收集管中，1000g离心4min，定容至50μl。5.根据权利要求1所述的一种捕获cfdna5hmc片段的检测方法，其特征在于，所述步骤四中，磁珠(ampurexp磁珠、t1磁珠)瞬时离心操作时为避免磁珠沉降，选用型号scilogex的d1008的掌式离心机。
6.根据权利要求1所述的一种捕获cfdna5hmc片段的检测方法，其特征在于，所述步骤六中，旋转之后先瞬离一下避免损失盖上液体。

技术总结
本发明公开了一种捕获cfDNA5hmC片段的检测方法，包括以下步骤：步骤一：预先准备需要使用的试剂，置于冰上，建立体系，温度时间为37℃、2h；步骤二：加入2.5μlDBCO


技术研发人员：钟晟 胡新蕾 严晓芹 闫子玥
受保护的技术使用者：深圳泰莱生物科技有限公司
技术研发日：2021.07.26
技术公布日：2021/10/23