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一种快速鉴定毛黄堇药材的Dual-SNP-TaqMan荧光探针的制作方法

2021-10-23 00:36:00 来源:中国专利 TAG:药材 探针 鉴定 快速 荧光

技术特征:
1.一种快速鉴定毛黄堇药材的新型荧光探针,其特征在于,所述新型荧光探针为dual-snp-taqman荧光探针,所述荧光探针使用的上引物的核酸序列如seq id no:1所示,下引物的核酸序列如seq id no:2所示,探针的核酸序列如seq id no:3所示。2.根据权利要求1所述的新型荧光探针,其特征在于,所述dual-snp-taqman荧光探针的上引物根据毛黄堇药材的第一个特异性snp位点设计,所述第一个特异性snp位点为毛黄堇药材its序列525位c-t的变异。3.根据权利要求1所述的新型荧光探针,其特征在于,所述dual-snp-taqman荧光探针的taqman探针根据毛黄堇药材的第二个特异性snp位点设计,所述第二个特异性snp位点为毛黄堇药材its序列555位的a-g变异。4.制备权利要求1-3任一项所述的快速鉴定毛黄堇药材的新型荧光探针的方法,其特征在于,所述方法为以下步骤:1)提取dna;2)pcr扩增its序列并测序分析特异性snp变异位点;3)根据变异位点设计新型荧光探针的上下引物和探针。5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤2)使用的pcr扩增的上引物的核酸序列如seq id no:4所示,下引物的核酸序列如seq id no:5所示。6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤2)分析变异位点采用hmmer模型,去除保守的5.8s rrna序列。7.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,第一个特异性snp变异位点为毛黄堇药材its序列525位c-t的变异,第二个特异性snp位点为毛黄堇药材its序列555位的a-g变异。8.一种快速鉴定毛黄堇药材的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒含有权利要求1-3任一项所述的快速鉴定毛黄堇药材的新型荧光探针和毛黄堇药材阳性对照品。9.使用权利要求8的快速鉴定毛黄堇药材的检测试剂盒快速鉴定毛黄堇药材的方法,其特征在于,以待检测品dna为模板,采用qrt-pcr检测。10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述qrt-pcr的反应条件为95℃ 5min;[40cycles:95℃ 30s,60℃ 50s,72℃ 15s];72℃ 5min。

技术总结
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种快速鉴定毛黄堇药材的新型荧光探针及其制备和快速鉴定毛黄堇药材的方法。所述新型荧光探针为扩增阻滞-Taqman双重特异位点荧光探针,所述荧光探针使用的上引物的核酸序列如SEQ ID NO:1所示,下引物的核酸序列如SEQ ID NO:2所示,探针的核酸序列如SEQ ID NO:3所示。新型荧光探针采用了扩增阻滞和Taqman的结合技术,可同时对2个位点进行检测,更多的避免试验中出现假阳性,以保证检测的准确性;所提供的快速鉴定毛黄堇药材的检测试剂盒可稳定有效准确的鉴定出毛黄堇药材,从而有利于毛黄堇药材质量控制,以保障用药安全、有效。有效。有效。


技术研发人员:任风鸣 卓维
受保护的技术使用者:重庆市药物种植研究所
技术研发日:2020.04.20
技术公布日:2021/10/22
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