水解酶抑制剂t-TUCB在阿尔茨海默病中的应用的制作方法

技术特征：
1.水解酶抑制剂t-tucb在阿尔茨海默病中的应用，其特征在于：包括如下步骤：s1、灌胃给予6月龄5xfad小鼠不同剂量的t-tucb(0.5mg/kg，1mg/kg，2mg/mg)，一共给药8周，t-tucb溶解在用生理盐水配制的40%peg-400溶液中；s2、然后我们将小鼠处死，取出脑袋，冰冻切片，我们用免疫荧光染色（6e10）检测分析给药组小鼠和溶剂组小鼠中海马和运动皮层中aβ的水平，结果分析显示，与溶剂组小鼠相比，给药1mg组2mg组和海马和运动皮层中的斑块面积分数的百分比都有显著性的减少，与溶剂组小鼠相比，0.5mg组有减少趋势，但无统计学意义（统计结果）；s3、然后我们还运用硫黄素s染色检测分析六月龄雄性的给药组小鼠和溶剂组小鼠中小鼠海马和运动皮层中aβ的水平，结果分析显示，与溶剂组小鼠相比，给药1mg组和2mg组，海马和运动皮层的斑块面积数量都有显著性的减少，与溶剂组小鼠相比，0.5mg组有减少趋势，但无统计学意义（统计结果）；s4、为了进一步分析tppu对ad小鼠模型中脑内aβ的影响，我们运用elisa检测六个月龄雄性给药组小鼠和溶剂组小鼠海马中可溶性和不可溶的aβ1-40和aβ1-42的含量，结果分析显示，与溶剂组小鼠相比，给药组海马组织中的可溶性的aβ1-42有显著性的减少，与溶剂组小鼠相比，给药1mg组2mg组海马组织中的可溶性的aβ1-40有显著性的减少，0.5mg组海马组织中可溶性的aβ1-40有减少的趋势但没有统计学的意义，与溶剂组小鼠相比，给药组海马组织中的不可溶性的aβ1-42和aβ1-40有显著性的减少；s5、为了探究t-tucb抑制剂对雌性5xfad的ad模型小鼠脑内aβ的水平的影响，我们同样运用我们用免疫荧光染色（6e10）和硫黄素s染色检测六月龄雌性的两种模型小鼠得海马和运动皮层中aβ的水平，结果分析显示，与溶剂组相比，给药组海马和运动皮层的斑块数量和斑块面积分数的百分比都有显著性的减少，（统计结果），结果提示我们，抑制t-tucb可以减少5xfad小鼠aβ水平；s6、为了进一步探讨seh抑制剂能否改善ad模型小鼠学习记忆和认知能力，我们进行了一系列与学习记忆和认识能力及运动能力相关的行为检测，包括旷场实验（open field），t迷宫实验（t-maze），y迷宫实验（y-maze），morris水迷实验（morris water-maze），四组小鼠的游泳速度没有显著变化，这些结果提示我们，t-tucb能改善ad模型小鼠的病理症状，从而进一步的改善学习记忆和认知能力，但不影响运动能力。2.根据权利要求1所述的水解酶抑制剂t-tucb在阿尔茨海默病中的应用，其特征在于：所述步骤六中在旷场实验中，我们比较了wt-vehicle，5xfad-vehicle ，5xfad-1mg三组小鼠30min里小鼠运动的总路程和在中心待的中心时间，结果分析显示，三组小鼠的30min里每5min总路程和中心时间没有显著性变化。3.根据权利要求1所述的水解酶抑制剂t-tucb在阿尔茨海默病中的应用，其特征在于：所述步骤六在t-maze实验中，我们检测了wt-vehicle，5xfad-vehicle ，5xfad
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tucb三组小鼠连续五天的正确率，结果分析显示，与5xfad-vehicle组小鼠相比，5xfad-tucb正确率有明显提高。4.根据权利要求1所述的水解酶抑制剂t-tucb在阿尔茨海默病中的应用，其特征在于：所述步骤六在y-maze实验中，我们检测了wt-vehicle，5xfad-vehicle ，5xfad-tucb三组小鼠连续五天的交替行为，结果分析显示，与5xfad-vehicle组小鼠相比，5xfadtucbu正确率有明显提高，wt-vehicle和5xfad-tucb三组小鼠的正确率没有显著性差异。
5.根据权利要求1所述的水解酶抑制剂t-tucb在阿尔茨海默病中的应用，其特征在于：所述步骤六在morris 水迷宫实验中，与5xfad-vehicle相比，5xfad-tucb的潜伏期有显著性的降低，穿越平台的次数和所在目的象限的时间百分比有显著性的提高，wt-vehicle和5xfad-tppu两组小鼠的穿越平台的次数和所在目的象限的时间百分比没有显著性的变化。

技术总结
本发明公开了水解酶抑制剂t


技术研发人员：肖晓丹 高峰 王帅 关燕菲 陈庆状
受保护的技术使用者：广州市中西医结合医院
技术研发日：2020.08.12
技术公布日：2021/10/18