水解酶抑制剂t-TUCB在阿尔茨海默病中的应用的制作方法

水解酶抑制剂t-tucb在阿尔茨海默病中的应用
技术领域
1.本发明涉及药物学技术领域，具体为水解酶抑制剂t-tucb在阿尔茨海默病中的应用。


背景技术：

2.老年性痴呆（alzheimer’s disease，ad）是一种常见、患病率最高，以及认知障碍（loss of cognitive funtion）为核心症状的慢性、进行性老年疾病，流行病学调查发现，65岁以上人群中，轻度痴呆发生率10%，中、重度痴呆5%；目前，全球痴呆患者约4750万，预计至2050年可能超过1.3亿，其中60-70%是ad患者，每年造成的社会经济负担高达6，000-1000，00亿美元，现阶段，我国老年人口规模位居全球各国首位，约2.2亿，据此估计我国约有ad病人近千万；可见，ad已经成为严重影响我国人口健康和生活质量，阻碍社会经济可持续发展的公共健康问题；ad的病因学复杂、发病机制不清楚，ad的主要神经学病理学特征为老年斑（amyloid plaques）、神经纤维缠结（neuronal tangels），伴有胶质细胞增生、神经元和突触的丢失以及血管病变，虽然病理学特征明确，并且近年来ad生物标记物以及临床影像学研究为早期诊断带来了希望，但目前仍有超过50%的ad患者不能够被明确诊断而得到救助，另外，也没有一种安全有效的药物能够根本逆转ad病理进程；fad批准的5种药物治疗：乙酰胆碱酯酶抑制剂（donepezil，rivastigmine，galantamine and trarine）和nmda受体阻断剂（memantine）等仅能够延缓ad，而不能够逆转或者改善ad的认知障碍，因此，阐明ad的发病机制，寻找安全有效地逆转ad病理进程、改善ad认知功能障碍的药物是当前ad防治研究的关键科学问题；可溶性环氧化物水解酶抑制剂(seh)已被广泛用于治疗许多疾病，包括心血管疾病，中风和炎症，第一代seh抑制剂是有效的竞争性抑制剂，包括查尔酮氧化物和缩水甘油，不幸的是，这些替代底物被谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶快速灭活，使得它们难以用于组织样品中，现代化合物t-tucb表现出良好的口服生物利用度和药代动力学，并且更容易配制。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于提供水解酶抑制剂t-tucb在阿尔茨海默病中的应用，具备使用性能高的优点，解决了可溶性环氧化物水解酶抑制剂(seh)已被广泛用于治疗许多疾病，包括心血管疾病，中风和炎症，第一代seh抑制剂是有效的竞争性抑制剂，包括查尔酮氧化物和缩水甘油，不幸的是，这些替代底物被谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶快速灭活，使得它们难以用于组织样品中的问题。
4.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：水解酶抑制剂t-tucb在阿尔茨海默病中的应用，包括如下步骤：s1、灌胃给予6月龄5xfad小鼠不同剂量的t-tucb(0.5mg/kg，1mg/kg，2mg/mg)，一共给药8周，t-tucb溶解在用生理盐水配制的40%peg-400溶液中；
s2、然后我们将小鼠处死，取出脑袋，冰冻切片，我们用免疫荧光染色（6e10）检测分析给药组小鼠和溶剂组小鼠中海马和运动皮层中aβ的水平，结果分析显示，与溶剂组小鼠相比，给药1mg组2mg组和海马和运动皮层中的斑块面积分数的百分比都有显著性的减少，与溶剂组小鼠相比，0.5mg组有减少趋势，但无统计学意义（统计结果）；s3、然后我们还运用硫黄素s染色检测分析六月龄雄性的给药组小鼠和溶剂组小鼠中小鼠海马和运动皮层中aβ的水平，结果分析显示，与溶剂组小鼠相比，给药1mg组和2mg组，海马和运动皮层的斑块面积数量都有显著性的减少，与溶剂组小鼠相比，0.5mg组有减少趋势，但无统计学意义（统计结果）；s4、为了进一步分析tppu对ad小鼠模型中脑内aβ的影响，我们运用elisa检测六个月龄雄性给药组小鼠和溶剂组小鼠海马中可溶性和不可溶的aβ1-40和aβ1-42的含量。结果分析显示，与溶剂组小鼠相比，给药组海马组织中的可溶性的aβ1-42有显著性的减少，与溶剂组小鼠相比，给药1mg组2mg组海马组织中的可溶性的aβ1-40有显著性的减少，0.5mg组海马组织中可溶性的aβ1-40有减少的趋势但没有统计学的意义，与溶剂组小鼠相比，给药组海马组织中的不可溶性的aβ1-42和aβ1-40有显著性的减少；s5、为了探究t-tucb抑制剂对雌性5xfad的ad模型小鼠脑内aβ的水平的影响，我们同样运用我们用免疫荧光染色（6e10）和硫黄素s染色检测六月龄雌性的两种模型小鼠得海马和运动皮层中aβ的水平，结果分析显示，与溶剂组相比，给药组海马和运动皮层的斑块数量和斑块面积分数的百分比都有显著性的减少，（统计结果），结果提示我们，抑制t-tucb可以减少5xfad小鼠aβ水平；s6、为了进一步探讨seh抑制剂能否改善ad模型小鼠学习记忆和认知能力。我们进行了一系列与学习记忆和认识能力及运动能力相关的行为检测，包括旷场实验（open field），t迷宫实验（t-maze），y迷宫实验（y-maze），morris水迷实验（morris water-maze），四组小鼠的游泳速度没有显著变化，这些结果提示我们，t-tucb能改善ad模型小鼠的病理症状，从而进一步的改善学习记忆和认知能力，但不影响运动能力。
5.优选的，所述步骤六中在旷场实验中，我们比较了wt-vehicle，5xfad-vehicle ，5xfad-1mg三组小鼠30min里小鼠运动的总路程和在中心待的中心时间，结果分析显示，三组小鼠的30min里每5min总路程和中心时间没有显著性变化。
6.优选的，所述步骤六在t-maze实验中，我们检测了wt-vehicle，5xfad-vehicle ，5xfad
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tucb三组小鼠连续五天的正确率，结果分析显示，与5xfad-vehicle组小鼠相比，5xfad-tucb正确率有明显提高。
7.优选的，所述步骤六在y-maze实验中，我们检测了wt-vehicle，5xfad-vehicle ，5xfad-tucb三组小鼠连续五天的交替行为，结果分析显示，与5xfad-vehicle组小鼠相比，5xfadtucbu正确率有明显提高，wt-vehicle和5xfad-tucb三组小鼠的正确率没有显著性差异。
8.优选的，所述步骤六在morris 水迷宫实验中，与5xfad-vehicle相比，5xfad-tucb的潜伏期有显著性的降低，穿越平台的次数和所在目的象限的时间百分比有显著性的提高，wt-vehicle和5xfad-tppu两组小鼠的穿越平台的次数和所在目的象限的时间百分比没有显著性的变化。
9.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
通过采用本发明制备的现代化合物t-tucb，能够表现出良好的口服生物利用度和药代动力学，并且更容易配制，而且可以明显的起到改善ad病理特征作用，从而进一步的改善学习记忆和认知能力，但不影响运动能力，给病患带来了极大的便利。
具体实施方式
10.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
11.本发明提供一种技术方案：水解酶抑制剂t-tucb在阿尔茨海默病中的应用，包括如下步骤：s1、灌胃给予6月龄5xfad小鼠不同剂量的t-tucb(0.5mg/kg，1mg/kg，2mg/mg)，一共给药8周，t-tucb溶解在用生理盐水配制的40%peg-400溶液中；s2、然后我们将小鼠处死，取出脑袋，冰冻切片，我们用免疫荧光染色（6e10）检测分析给药组小鼠和溶剂组小鼠中海马和运动皮层中aβ的水平，结果分析显示，与溶剂组小鼠相比，给药1mg组2mg组和海马和运动皮层中的斑块面积分数的百分比都有显著性的减少，与溶剂组小鼠相比，0.5mg组有减少趋势，但无统计学意义（统计结果）；环氧化物水解酶抑制剂t-tucb化学式和结构式如下：tucb化学式和结构式如下：s3、然后我们还运用硫黄素s染色检测分析六月龄雄性的给药组小鼠和溶剂组小鼠中小鼠海马和运动皮层中aβ的水平，结果分析显示，与溶剂组小鼠相比，给药1mg组和2mg组，海马和运动皮层的斑块面积数量都有显著性的减少，与溶剂组小鼠相比，0.5mg组有减少趋势，但无统计学意义（统计结果）；s4、为了进一步分析tppu对ad小鼠模型中脑内aβ的影响，我们运用elisa检测六个月龄
雄性给药组小鼠和溶剂组小鼠海马中可溶性和不可溶的aβ1-40和aβ1-42的含量。结果分析显示，与溶剂组小鼠相比，给药组海马组织中的可溶性的aβ1-42有显著性的减少，与溶剂组小鼠相比，给药1mg组2mg组海马组织中的可溶性的aβ1-40有显著性的减少，0.5mg组海马组织中可溶性的aβ1-40有减少的趋势但没有统计学的意义，与溶剂组小鼠相比，给药组海马组织中的不可溶性的aβ1-42和aβ1-40有显著性的减少；s5、为了探究t-tucb抑制剂对雌性5xfad的ad模型小鼠脑内aβ的水平的影响，我们同样运用我们用免疫荧光染色（6e10）和硫黄素s染色检测六月龄雌性的两种模型小鼠得海马和运动皮层中aβ的水平，结果分析显示，与溶剂组相比，给药组海马和运动皮层的斑块数量和斑块面积分数的百分比都有显著性的减少，（统计结果），结果提示我们，抑制t-tucb可以减少5xfad小鼠aβ水平；s6、为了进一步探讨seh抑制剂能否改善ad模型小鼠学习记忆和认知能力。我们进行了一系列与学习记忆和认识能力及运动能力相关的行为检测，包括旷场实验（open field），t迷宫实验（t-maze），y迷宫实验（y-maze），morris水迷实验（morris water-maze），在旷场实验中，我们比较了wt-vehicle，5xfad-vehicle ，5xfad-1mg三组小鼠30min里小鼠运动的总路程和在中心待的中心时间，结果分析显示，三组小鼠的30min里每5min总路程和中心时间没有显著性变化，在t-maze实验中，我们检测了wt-vehicle，5xfad-vehicle ，5xfad
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tucb三组小鼠连续五天的正确率，结果分析显示，与5xfad-vehicle组小鼠相比，5xfad-tucb正确率有明显提高，在y-maze实验中，我们检测了wt-vehicle，5xfad-vehicle ，5xfad-tucb三组小鼠连续五天的交替行为，结果分析显示，与5xfad-vehicle组小鼠相比，5xfadtucbu正确率有明显提高，wt-vehicle和5xfad-tucb三组小鼠的正确率没有显著性差异，在morris 水迷宫实验中，与5xfad-vehicle相比，5xfad-tucb的潜伏期有显著性的降低，穿越平台的次数和所在目的象限的时间百分比有显著性的提高，wt-vehicle和5xfad-tppu两组小鼠的穿越平台的次数和所在目的象限的时间百分比没有显著性的变化，四组小鼠的游泳速度没有显著变化，这些结果提示我们，t-tucb能改善ad模型小鼠的病理症状，从而进一步的改善学习记忆和认知能力，但不影响运动能力。
12.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。