一种腊肠果提取物的制备方法和应用与流程

1.本技术属于化妆品技术领域，尤其涉及一种腊肠果提取物的制备方法和应用。


背景技术：

2.腊肠果，是豆科决明属植物腊肠树(cassia fistula l.)的果实。腊肠树原产印度，是印度南部喀拉拉邦的“省花”，是当地新年vishu典礼用的花卉，它在我国云南、广东、广西亦有分布。腊肠果主要含有总黄酮类、蒽醌类、甾体类、生物碱和挥发油类等成分，具有清热、治疗湿热便秘、四肢肿胀的效果，在治疗肝病尤其是黄疸型肝炎方面有特别好的疗效。在印度，腊肠果主要用于皮肤病、保肝、抗结核以及治疗糖尿病，此外也被用于治疗咳嗽、皮肤瘙痒等疾病。目前市场上的腊肠果产品是以晒干的果实切片，食用方法为泡水饮用，有通便润肠的效果。由于腊肠果提取繁琐、有效成分无法充分利用，导致腊肠果提取物的功效有限，未见有将腊肠果作为单独的有效成分应用于化妆品领域。


技术实现要素：

3.有鉴于此，本技术提供了一种腊肠果提取物的制备方法和应用，本技术的制备方法得到的腊肠果提取物含有较高的总黄酮和多酚成分，具有强抗氧化性，且制备方法简单、绿色、高效。
4.本技术的具体技术方案如下：
5.本技术第一方面提供一种腊肠果提取物的制备方法，包括如下步骤：
6.将腊肠果粉碎与溶剂混合得到混合物，所述混合物通过微射流提取器提取，得到所述腊肠果提取物。
7.本技术中，通过微射流提取器提取能够有效将腊肠果原料中的细胞破碎并使有效成分溶出，无需添加化学试剂或采用复杂的工艺流程，可以保留中药成分中的有效成分，同时还避免有害成分残留，制得的腊肠果提取物中总黄酮及多酚的含量高、刺激性小，具有很高的应用价值。
8.优选的，所述溶剂为水和/或低级醇；
9.所述溶剂与所述腊肠果的质量比为(10～25)：1。
10.优选的，所述微射流提取器包括外壳、转轴以及微射流提取单元；
11.所述转轴由中心贯穿所述外壳，所述转轴上设有导向叶片，在所述转轴的带动下使物料离心搅拌并向下料位挤压；
12.所述微射流提取单元位于所述下料位；
13.所述微射流提取单元嵌设于所述外壳的内壁，从加料位到下料位依次包括紧密连接的导向环、环形碰撞槽以及微孔过滤器；
14.所述环形碰撞槽的内壁设有齿形突刺；
15.所述微孔过滤器设有沿着下料方向径向分布的微孔通道，所述微孔过滤器与所述外壳的内壁围成微射流提取腔。
16.本技术中，腊肠果原料在转轴的离心搅拌作用下通过导向叶片引流向微射流提取单元挤压，物料依次经过导向环以及环形碰撞槽内齿形突刺的挤压、碰撞，使腊肠果中的中药成分在强大冲击力的引导下发生多次无规则碰撞，形成涡流混合的效果，同时在碰撞过程中产生加速度，向微孔通道挤压并甩出，促使腊肠果中总黄酮和多酚有效成分溶出、提高提取效率。
17.优选的，所述微孔的孔径为100～1000μm。
18.优选的，所述转轴的转速为500～1000rmp，所述外壳内的温度为10～50℃，所述提取的时间为30～60min，所述提取的加料速度为10～30l/min。
19.优选的，所述提取得到的提取液还进行分离、纯化和浓缩；
20.所述分离为离心分离，所述离心分离的转速为2000～8000rpm；
21.所述纯化为陶瓷膜纯化，所述陶瓷膜的孔径为500～800nm；
22.所述浓缩为减压浓缩，所述减压浓缩的压力为0.085～0.098mpa。
23.优选的，所述腊肠果提取物中总黄酮含量为2.8～5mg/ml,多酚含量为1.9～3mg/ml。
24.本技术第二方面提供所述制备方法制得的腊肠果提取物在制备抗衰老化妆品中的应用。
25.本技术第三方面提供一种化妆品，包括所述制备方法制得的腊肠果提取物；
26.所述化妆品的剂型为面霜、精华液、乳液或面膜液。
27.优选的，所述腊肠果提取物在所述抗衰老化妆品中的质量百分比为1～50％。
28.综上所述，本技术提供了一种腊肠果提取物的制备方法和应用。将腊肠果粉碎与溶剂混合得到混合物，所述混合物通过微射流提取器提取，得到所述腊肠果提取物。通过微射流提取器提取能够有效将腊肠果原料中的细胞破碎并使有效成分溶出，无需添加化学试剂或采用复杂的工艺流程，可以保留中药成分中的有效成分，同时还避免有害成分残留，制得的腊肠果提取物中总黄酮及多酚的含量高，具有强抗氧化性、抗衰、促胶原蛋白增加、修复损伤的功效，温和无刺激。本技术的腊肠果提取物可作为单独有效成分应用于抗衰老化妆品中，具有很好的开发价值。
附图说明
29.为了更清楚地说明本技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
30.图1为本技术实施例所使用的微射流提取器的结构示意图；
31.图2为本技术实施例所使用的微射流提取器中微射流提取单元的结构示意图；
32.图3为本技术测试例3中实验前后样品对鱼胚尾鳍损伤修复的影响(72h)(a.空白对照；b.0.125％实验组；c.0.25％实验组；d.0.5％实验组)；
33.图4为本技术测试例4中实验前后胚胎死亡或凝结情况示意图(a.空白对照组b.实施例1实验组)；
34.图5为本技术测试例5中紧致护肤霜对皮肤胶原蛋白含量的影响结果图(白色部分
为胶原蛋白)；
35.图示说明：1、外壳；11、进料口；12、出料口；2、转轴；21、导向叶片；3、微射流提取单元；31、导向环；32、环形碰撞槽；33、微孔过滤器；34、微孔通道；4、微射流提取腔。
具体实施方式
36.为使得本技术的目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，下面所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而非全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本技术保护的范围。
37.本技术实施例中所使用的微射流提取器的结构示意图如图1所示，本技术实施例所使用的微射流提取器中微射流提取单元的结构示意图如图2所示。
38.微射流提取器包括外壳1、转轴2以及微射流提取单元3；转轴2由中心贯穿外壳1，转轴2上设有导向叶片21，在转轴2的带动下使物料离心搅拌并向下料位挤压；微射流提取单元3位于下料位；微射流提取单元3嵌设于外壳1的内壁，从加料位到下料位依次包括紧密连接的导向环31、环形碰撞槽32以及微孔过滤器33；环形碰撞槽32的内壁设有齿形突刺；微孔过滤器33设有沿着下料方向径向分布的微孔通道34，微孔过滤器33与外壳1的内壁围成微射流提取腔4。
39.物料由进料口11投入，转轴2可由电机牵引旋转，使导向叶片21带动物料发生离心搅拌并向微射流提取单元3挤压。导向环31的内径由上料位至下料位逐渐变小，将物料引流至环形碰撞槽32内。环形碰撞槽32内设有齿形突刺，使物料发生多次无规则碰撞，紧接着在微孔通道34的挤压过程中，促进物料中细胞破碎、有效成分溶出，最后通过出料口12收集提取液。
40.采用本技术的微射流提取器能够有效将腊肠果原料中的细胞破碎并使有效成分溶出，可以保留中药成分中的有效成分，同时还避免有害成分残留，制得的腊肠果提取物中总黄酮和多分的含量高、刺激性小，无需添加化学试剂或采用复杂的工艺流程。
41.实施例1
42.(1)将10kg腊肠果粉碎成40目的药材粉后向其加入重量250kg的纯化水，搅拌均匀得到混合物；
43.(2)混合物置于微射流提取器中，在温度为10℃、进料速度为20l/min、转速为500rpm的条件下离心搅拌30min，其中，微射流提取器中的微孔孔径为200μm；
44.(3)将提取液通过离心机进行固液分离，转速为8000rpm，收集分离液，并将分离液用孔径为500nm陶瓷膜分离进行纯化，收集滤液，再在0.090mpa条件下减压浓缩，使腊肠果原料与浓缩液的质量比为1：3，即得产物。
45.实施例2
46.(1)将10kg腊肠果粉碎成40目的药材粉后向其加入重量250kg的丁二醇(50wt％)，搅拌均匀得到混合物；
47.(2)混合物置于微射流提取器中，在温度为25℃、进料速度为30l/min、转速为800rpm的条件下离心搅拌60min，其中，微射流提取器中的微孔孔径为500μm；
48.(3)将提取液通过离心机进行固液分离，转速为8000rpm，收集分离液，并将分离液
用孔径为800nm陶瓷膜分离进行纯化，收集滤液，再在0.085mpa条件下减压浓缩，使腊肠果原料与浓缩液的质量比为1：2.5，即得产物。
49.实施例3
50.(1)将10kg腊肠果粉碎成40目的药材粉后向其加入重量250kg的甘油(30wt％)，搅拌均匀得到混合物；
51.(2)混合物置于微射流提取器中，在温度为40℃、进料速度为25l/min、转速为1000rpm的条件下离心搅拌50min，其中，微射流提取器中的微孔孔径为800μm；
52.(3)将提取液通过离心机进行固液分离，转速为8000rpm，收集分离液，并将分离液用孔径为800nm陶瓷膜分离进行纯化，收集滤液，再在0.098mpa条件下减压浓缩，使腊肠果原料与浓缩液的质量比为1：3，即得产物。
53.实施例4
54.(1)将10kg腊肠果粉碎成40目的药材粉后向其加入重量250kg的丙二醇(50wt％)，搅拌均匀得到混合物；
55.(2)混合物置于微射流提取器中，在温度为10℃、进料速度为30l/min、转速为900rpm的条件下离心搅拌40min，其中，微射流提取器中的微孔孔径为1000μm；
56.(3)将提取液通过离心机进行固液分离，转速为8000rpm，收集分离液，并将分离液用孔径为800nm陶瓷膜分离进行纯化，收集滤液，再在0.095mpa条件下减压浓缩，使腊肠果原料与浓缩液的质量比为1：3，即得产物。
57.实施例5
58.(1)将10kg腊肠果粉碎成40目的药材粉后向其加入重量250kg的丁二醇(20wt％)、丙二醇(30wt％)的混合溶剂搅拌均匀得到混合物；
59.(2)混合物置于微射流提取器中，在温度为50℃、进料速度为20l/min、转速为600rpm的条件下离心搅拌60min，其中，微射流提取器中的微孔孔径为100μm；
60.(3)将提取液通过离心机进行固液分离，转速为8000rpm，收集分离液，并将分离液用孔径为500nm陶瓷膜分离进行纯化，收集滤液，再在0.085mpa条件下减压浓缩，使腊肠果原料与浓缩液的质量比为1：3，即得产物。
61.对比例1
62.制备方法同实施例4，区别仅在于步骤(2)中设置温度为100℃条件下进行提取制备。
63.对比例2
64.制备方法同实施例4，区别仅在于步骤(2)中微射流提取器中的微孔孔径为20μm进行提取。
65.对比例3
66.制备方法同实施例5，区别仅在于步骤(2)中将混合物置于超声提取器中，在20khz、温度50℃下提取60min。
67.测试例1(总黄酮及多酚含量测定)
68.(1)总黄酮含量测定
69.a.仪器：分光光度计：波长范围200nm
‑
1000nm，分析天平：分度值0.0001g，容量瓶：25ml、50ml，移液枪：100ul、1ml、5ml。
70.试剂：本方法用水为蒸馏水或纯度相当的水，除特殊规定外，所用试剂为分析纯。芦丁标准溶液：精密称取芦丁对照品10mg，加无水甲醇适量溶解、定容至50ml，即得0.2mg/ml芦丁标准溶液。5％亚硝酸钠：准确称取5g亚硝酸钠，加水溶解，定容至100ml。10％硝酸铝：准确称取10g硝酸铝，加水溶解，定容至100ml。1％氢氧化钠：准确称取1g氢氧化钠，加水溶解，定容至100ml。
71.b.分析步骤：
72.标准曲线的绘制：分别精密吸取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置于25ml容量瓶中，各加水至6.0ml，摇匀。然后加5％亚硝酸钠1ml，摇匀，放置6min。再加10％硝酸铝1ml，摇匀，放置6min。加1％氢氧化钠10ml，加水定容至刻度，摇匀，放置15min。用分光光度计，于510nm波长处测定吸光值。以芦丁浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线回归方程。
73.样品的测定：取实施例1～5和对比例1～3制得产物过滤、抽滤至澄明；稀释或浓缩至适宜浓度。精密吸取样品适量(v1)，置于25ml(v2)容量瓶中，自加水至6ml起测定样品的吸光值，再由标准曲线回归方程计算总黄酮含量。
74.计算方法：样品中总黄酮含量以芦丁计，按式(1)进行计算：
75.x＝(c
×
v2)/v1
┄┄┄
式(1)
76.式中：x为样品中总黄酮含量，mg/ml；c为从标曲上查得样品测定液中总黄酮的浓度，mg/ml；v1为样品取样体积，ml；v2为样品定容体积，ml。
77.(2)多酚含量测定
78.a.仪器：分析天平：分度值0.0001g，水浴锅：70℃
±
1℃，离心机：转速3500r/min，紫外分光光度计。
79.试剂：本方法用水均为纯化水，除特殊规定外，所用试剂为分析纯(ar)。70％甲醇溶液：量取70ml无水甲醇和30ml水混合，摇匀，备用。10％福林酚(folin
‑
ciocalteu)试剂：将20ml福林酚(folin
‑
ciocalteu)试剂加入200ml容量瓶中，用水定容并摇匀。7.5％na2co3溶液：称取37.50g na2co3，加适量水溶解，转移至500ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀(室温下可保存1个月)。没食子酸储备液(1000μg/ml)：称取0.110g没食子酸，于100ml容量瓶中溶解并定容至刻度，摇匀。没食子酸标准液：用移液管分别移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml的没食子酸储备溶液于100ml容量瓶中，分别用水定容至刻度，摇匀(其浓度分别为10，20，30，40，50μg/ml)。
80.母液：分别精密称取0.2g均匀磨碎的试样(实施例1～5和对比例1～3制得产物)于10ml离心管中，加入在70℃中预热过的70％甲醇溶液5ml，用玻璃棒充分搅拌均匀湿润，立即移入70℃水浴中，浸提10min(每隔5min搅拌一次)。浸提后冷却至室温，转入离心机在3500r/min转速下离心10min，将上清液转移至10ml容量瓶。残渣再用5ml的70％甲醇溶液提取一次，重复上述操作。合并提取液定容至10ml，摇匀，过0.45μm膜，待用(母液在4℃下最多可保存24h)。
81.测试液：取上述母液1.0ml于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待测。
82.b.分析步骤：
83.测定：用移液管分别移取没食子酸标准液、水以及测试液各1.0ml于10ml试管中，在每个试管中分别加入5.0ml10％福林酚(folin
‑
ciocalteu)试剂，摇匀，反应8min，加入
4.0ml7.5％na2co3溶液，加水定容至刻度(v)，摇匀。室温下放置60min。在765nm波长条件下用分光光度计测定其对应吸光度。以各没食子酸工作液的浓度为横坐标，各工作液的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
84.计算方法：样品中茶多酚含量按式(2)计算：
85.c＝n
×
v
×
d
┄┄┄
式(2)
86.式中：c：样品的茶多酚含量，mg/ml；n：从标曲上算得样品测定液中茶多酚的浓度，mg/ml；v：样品的定容体积，ml；d：样品的稀释倍数。
87.实施例1～5及对比例1～3制得产物中总黄酮及多酚含量的测定结果如表1所示。结果表明，本技术实施例的制备方法获得的腊肠果提取物中总黄酮含量为2.8～5mg/ml,多酚含量为1.9～3mg/ml。
88.表1实施例1～5和对比例1～3制得产物中总黄酮及多酚含量
[0089][0090][0091]
测试例2(抗氧化能力
‑
abts自由基清除实验)
[0092]
(1)用浓度为2.45mmol/l过硫酸钾溶解abts，配成7mmol/l的abts溶液，在室温、避光条件下静置12h，用磷酸盐缓冲液(ph＝7.2)稀释，使其吸光度在734nm波长处达到0.700
±
0.020，得到abts工作液；
[0093]
(2)取实施例1～5和对比例1～3制得产物加磷酸盐缓冲液分别配制浓度为1mg/ml、2mg/ml和5mg/ml的待测溶液，并以同样方法配制5mg/ml维生素c对照液；
[0094]
(3)分别取4ml的abts工作液与1ml待测溶液混合10s，在25℃避光静置6min，在734nm处测定吸光值，以4mlpbs和1ml待测样品的混合物作为参比，记a
样品
；取4ml的abts工作液与1mlpbs混合10s，在25℃避光静置6min，在734nm处测定吸光值，以pbs作为参比，记a0；待测样品对abts自由基的抑制率＝(a0‑
a
样品
)/a0×
100％。
[0095]
实施例1～5及对比例1～3制得产物对abts自由基抑制效果见表2所示。
[0096]
表2实施例1～5和对比例1～3制得产物对abts自由基抑制效果
[0097][0098][0099]
表2表明，实施例1～5提取方法制得的腊肠果提取物对于abts自由基的清除率与维生素c相当，呈现很强的抗氧化性，从而具有一定抗衰老效果。
[0100]
测试例3(组织修复活性)
[0101]
(1)测试系统
[0102]
本测试例所使用的斑马鱼为ab系斑马鱼，由广东药科大学引入，本实验室扩繁。测试主要设备和试剂如下：z
‑
a
‑
d5五层单排独立养殖单元(上海海圣生物实验设备有限公司)，sz780连续变倍体式显微镜(重庆奥特光学仪器有限公司)，zxsd
‑
a1090生化培养箱(上海智城分析仪器制造有限公司)，sqp万分之一电子秤(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)，三卡因(麦克林)。
[0103]
(2)测试方法
[0104]
a.取实施例3制得产物以斑马鱼系统养殖水为溶剂配置质量百分比分别为0.125％、0.25％和0.5％的样品溶液；
[0105]
b.挑选发育健康的斑马鱼幼鱼置于6孔细胞培养板中，切去斑马鱼尾鳍，置于体视显微镜下拍照记录，转移至96孔细胞培养板，分别加入200μl样品溶液，置于培养箱中继续孵育72h，置于体视显微镜下对斑马鱼拍照记录，并计算尾鳍的生长长度。实验设置空白对照组(斑马鱼系统养殖水)，每个浓度组20条；
[0106]
c.采用spss 19.0软件统计处理数据，实验数据均用x
±
sem数据表示，用单因素方差分析。各浓度组与空白对照组两两比较：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
[0107]
实施例3制得产物对鱼胚尾鳍损伤修复的影响见下表3所示，实验前后样品对鱼胚尾鳍损伤修复的影响(72h)如图3所示。
[0108]
表3实施例3制得产物对鱼胚尾鳍损伤修复的影响
[0109][0110]
表2和图3表明，与空白对照组相比，斑马鱼幼鱼切除尾鳍后经浓度为0.125％、0.25％和0.50％的受试样品处理后有促进尾鳍生长的作用，并当受试样品浓度为0.5％时，有显著性差异(*p<0.05)。另外，其他实施例制得产物具有相似的效果。
[0111]
测试例4(刺激性)
[0112]
取正常发育至24hpf(受精后天数，days post fertilization)的ab系斑马鱼胚胎置于24孔板中，每孔20枚胚胎，分别加入实施例1～5制得产物1ml，并以斑马鱼系统养殖水为空白对照，以5.0mg/ml十二烷基硫酸钠(sds)为阳性对照，实验共设置三组平行组，在28.5℃恒温培养箱孵育6h。观察、计算胚胎死亡或凝结的个数，实施例1～5制得产物在斑马鱼鱼胚安全性测试结果和评价标准见下表4和表5所示，实验前后胚胎死亡或凝结情况示意图见图4。
[0113]
表4实施例1～5制得产物在斑马鱼鱼胚安全性测试结果
[0114]
[0115][0116]
表5实施例1～5制得产物在斑马鱼鱼胚安全性测试评分标准
[0117][0118]
表4、表5和图4表明，实施例1～5制得产物在斑马鱼鱼胚安全性评价中均表现为无刺激性，与空白对照组无显著差异。
[0119]
实施例6
[0120]
本实施例提供一种紧致护肤霜，以重量百分比计，其配方如表6所示，制备方法如下：
[0121]
(1)将a相中的各原料加入油相锅中，水浴加热到85℃，搅拌至完全均匀；
[0122]
(2)将b相中的各原料加入水相锅中，加热到85℃，搅拌至完全均匀；
[0123]
(3)将a相加入b相，高速均质至两相完全乳化，降温至45℃，再将c相各原料加入，均质5min即得。
[0124]
表6紧致护肤霜配方
[0125]
[0126][0127]
测试例5(胶原蛋白补充能力)
[0128]
每日固定时间定量涂抹实施例6制得的紧致护肤霜于手背皮肤，使用skin analysis machine(型号：cbs
‑
805)仪器检测受试部位的胶原蛋白含量并记录，挑选四个具有代表性的时间点测试，使用产品前后对皮肤胶原蛋白含量的影响结果图见图5所示，图中白色部分为胶原蛋白。
[0129]
图5表明，测试前受试区域皮肤胶原蛋白稀疏缺乏，而涂抹样品一周后检测受试区域皮肤，可以发现胶原蛋白束开始形成并互相连结；涂抹样品二周后，胶原蛋白的密度显著增多，而到了三周后受试区域胶原蛋白的含量已经趋于稳定，且互相紧密连结，说明本技术的腊肠果紧致膏霜可以增加皮肤的胶原蛋白含量，从而使皮肤紧致。原因可能是腊肠果提
取物中丰富的总黄酮、多酚和氨基酸为胶原蛋白提供了大量基础小分子单位，促进胶原纤维的共价交联，达到补充皮肤胶原蛋白含量的效果。
[0130]
以上所述，以上实施例仅用以说明本技术的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本技术进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本技术各实施例技术方案的精神和范围。