含益生菌或包含含有欧米茄-3的益生菌的用于改善认知功能及记忆力的食品或药学组合物的制作方法

1.本发明涉及一种包含益生菌或欧米茄-3的用于改善认知功能及记忆力的组合物， 更详细地，涉及一种包含两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)bgn4 (kccm12754p)菌株以及长双歧杆菌(bifidobacterium longum)bori(kccm-10492) 菌株的用于改善认知功能及记忆力的食品组合物或药学组合物。


背景技术：

2.从人生早期开始，经过儿童及青少年时期直至成为成年人，在每个人生过渡期都 会出现各种健康问题。在每个人生过渡期威胁健康的健康危险因子都不同，通过诊断、 治疗相应的危险因子来预防疾病，对于维持健康的生活是必不可少的。
3.另一方面，老年期与年轻的成年人不同，大部分同时具有由老化引起的多种疾病， 并且通常以非特异性方式进展。同时，老年期出现的身体、精神上的健康威胁不仅是 个人问题，而且是可能导致整个社会变化和危机的问题，如医疗保健、政治、经济等， 因此需要对老年性疾病和抗老化进行深研究。
4.尤其，韩国预测，到2019年，65岁以上人口将达到总人口的约15％，正快速进 入老龄化，到2030年老年人口将增长至24.3％，到2060年增长至40％。随之，尽 管医疗费用及健康保险等财政负担正在增加，但是为快速人口老龄化做准备的老化科 学及老年性疾病的研发却非常不足。因此，为了应对老龄化社会中预期的广泛问题， 对于用于预防及治疗包括老年性疾病在内的老化的系统性生物学机制研究的重要性 正在崛起。
5.但是，到目前为止，有关欧米茄-3脂肪酸和益生菌的摄入对改善包括肠道内菌群 以及肠道免疫系统在内的肠道功能产生的影响以及对其相关的研究仍微乎其微，尤 其，有关在作为老龄化时代的主要角色的老年人口中欧米茄-3脂肪酸和益生菌对记忆 力改善以及认知功能改善产生的影响的研究非常不足。
6.现有技术文献
7.专利文献
8.韩国专利授权公报第101950969号(授权日：2019年02月15日)记载了包含 利用乳酸菌发酵的鹿藿发酵物的用于保护脑神经细胞以及改善记忆力的组合物。
9.韩国专利授权公报第101010914号(授权日：2011年01月26日)涉及从鲽鱼 酱分离的植物乳杆菌(lactobacillus plantarum nuc-lg42)，该菌株具有减轻体重、 改善脑功能等生理活性功能。更详细地，记载了具有体重、脂肪增加量、血液和肝中 脂质及肉碱变化、瘦素和胰岛素含量变化、肝组织的信使核糖核酸(mrna)变化、 记忆力增强等多种生理活性功能的乳酸菌。
10.韩国专利授权公报第101851196号(授权日：2018年04月25日)记载了从泡 菜中分离、安全性高、具有记忆力改善活性、紧密连接蛋白(tight junctionprotein) 表达诱导活性、脂多糖类(lipopolysaccharide，lps)生成抑制活性或β-葡糖醛酸糖 苷酶(β
glucuronidase)抑制活性等多种生理活性的新型乳酸菌。


技术实现要素：

11.在本发明中，通过向具有优秀的认知功能及记忆力改善功效的益生菌中添加欧米 茄-3，并将其开发为食品组合物、用于预防或治疗的药学组合物来提供。
12.本发明提供包含两歧双歧杆菌bgn4(kccm12754p)菌株以及长双歧杆菌bori (kccm-10492)菌株的用于改善认知功能及记忆力的食品组合物。
13.用于改善认知功能及记忆力的食品组合物的特征在于，优选地，本发明的上述食 品组合物包含欧米茄-3。
14.本发明提供包含两歧双歧杆菌bgn4(kccm12754p)菌株以及长双歧杆菌bori (kccm-10492)菌株的用于预防或治疗认知功能及记忆力下降的药学组合物。
15.用于预防或治疗认知功能及记忆力下降的药学组合物的特征在于，优选地，本发 明的上述药学组合物包含欧米茄-3。
16.两歧双歧杆菌bgn4(kccm12754p)或长双歧杆菌bori(kccm-10492)益 生菌包含欧米茄-3，并具有优秀的认知功能及记忆力改善效果，因此可以用作食品、 保健食品、医药品。
附图说明
17.图1为示出本发明的实验设计的图。
18.图2为本发明的实验流程图。
19.图3为示出cd4

t细胞的对照组的变化的曲线图。
20.图4为示出cd8

t细胞的对照组的变化的曲线图。
21.图5为示出本发明的不同期间的b细胞变化的曲线图。
22.图6为根据本发明的参加人员的自我评估的生活质量分数曲线图。
23.图7为示出根据基线在第4周以及第12周时压力分数差的曲线图。
24.图8为示出根据基线在第12周时认知功能得分变化的曲线图。
25.图9为示出根据基线的血液中脑源性神经营养因子(bdnf)变化曲线图。
具体实施方式
26.在人的肠道中，接近人的总细胞数的10倍的10
13
～10
14
个细菌、霉菌等多种微 生物群集生活。这些肠内微生物被称为肠道菌群(gut microbiota)，它们与人体相互 作用而共生。健康人的肠道内微生物在作为对病原性微生物的首要防御系统的肠道粘 膜组织中以保持平衡(balance)的方式生活并具有防御免疫系统。从肠道功能方面来 说，保持肠道的稳态和运动功能，影响肠道粘膜的保持以及对病原菌的抵抗及保护作 用，尤其，肠道粘膜是人体最重要的免疫相关器官，因此肠内微生物的变化对人体的 全身免疫功能产生重要影响，保持着肠道生态系统(gut ecosystem)。
27.肠道内菌群的组成和多样性随生命周期而变化，从出生伊始肠道内微生物就已群 落化，到2～3岁左右时具有类似于成年人肠道内微生物组成及多样性肠道菌群。而 且，从二十多岁到六十多岁，肠道内微生物组成一旦完成就不会发生明显变化，由于 饮食及环境
药，包括口服、经皮、皮下、静脉或肌肉。上述的“有效量”是指当向患者给药时具 有预防或治疗效果的量。本发明的组合物的给药剂量可根据给药途径、给要对象、年 龄、性别、体重、个体差异以及疾病状态来适当选择。
38.以下，通过下述实施例以及实验例更详细地说明本发明的内容。但是，本发明的 发明要求保护范围并不限定于下述实施例以及实验例，且包括等同于其的技术思想的 变形。
39.将事先进行体检最终入选的共102名65岁以上的老年人对象分配到安慰剂对照 组、实验组1和实验组2，向安慰剂对照组(placebo)提供安慰剂，向实验组1(益 生菌组，益生菌)和实验组2(益生菌 欧米茄-3脂肪酸组，益生菌 ω-3fa)分 别提供益生菌产品和益生菌 欧米茄-3脂肪酸的混合产品共12周。在12周的实验期 间共收集4次(第0周、第4周、第8周、第12周)血液、小便、大便样品。图1 为示出本发明的实验设计的图。
40.1)研究对象
41.(1)研究参与人员的招募方法
42.研究的所有过程均得到了首尔大学及盆唐济生医院研究伦理委员会的审查和批 准(irb no.1801/002-015；imcn18-01)。研究参与人员的招募文件发表在首尔市 冠岳区冠岳老人福祉中心以及京畿道城南市盆唐区盆唐济生医院。招募文件包括研究 内容和研究期间以及有关对参与实验研究的补偿的简要概述。对希望参与研究的65 岁以上的健康老年男性和女性进行了充分的口头解释，并根据自愿参与意向获取同意 书。此时，潜在的研究参与人员仅限于可以自己决定的人。
43.(2)研究参与人员的选择及组分配
44.限于获得同意书的志愿者，通过事前体检调查问卷和面谈调查来选择符合实验参 与条件的对象。研究参与人员的选择条件如下。
45.选择65周岁以上的健康男女，并排除在过去三个月内持续服用以下医药品的人 (抗生素、抗炎剂、胃肠疾病药物、抗凝剂)、在过去三个月内持续摄入乳酸菌及欧 米茄-3脂肪酸补充剂的人、有食品过敏(豆类过敏)的人。将最终选择的研究参与人 员通过双盲法随机分配到对照组或实验组。在随机分配比率中，每组中的性别比率为 男：女为1：1。除了制造商之外的所有研究人员和研究参与人员直到研究结束为止 一直采用保持盲法的方法，在结果分析结束后，盲选的解除限于包括研究人员在内的 研究参与人员中的希望者。
46.2)实验产品
47.(1)产品详细信息
48.表1
49.产品详细信息
[0050][0051]
服用方法如下，即，对照组、实验组1和实验组2以每天两次(在早餐、晚餐进 餐后30分钟以内)分别摄入2个胶囊的对照食品、益生菌产品、益生菌 欧米茄-3 脂肪酸混合产品，共12周。本发明的研究对于实验产品的供给，由制造商负责对研 究参与人员进行编码及产品管理，对照药物和实验产品的产品包装、性状相同，因此 除了制造商以外无人能区分为何种产品。至于提供产品的方法，在第0周、第4周、 第8周的寻访日分别提供1个月的服用量。提供的实验产品冷藏存储，提供有效期至 少为一年以上的产品。
[0052]
尤其，在实验期间，研究参与人员被禁止摄入除执行机构提供的益生菌产品以外 的其他种类的乳酸菌(酸奶、生菌剂)。并且，教育研究参与人员，可以服用为治疗 研究过程中发生的疾病(感冒、皮肤疾病等炎症疾病)的医药品(抗生素、消炎镇痛 剂、类固醇制剂)，但必须告知研究人员。
[0053]
3)试样的收集及分析
[0054]
(1)身体测量
[0055]
在第0周和第12周使用人体测量仪测量体重和身高，计算出体重指数(body massindex，bmi)。
[0056]
(2)血液、小便、大便的收集及分析
[0057]
①
血液为在空腹状态下采集17ml的血液，采血是在位于首尔市冠岳区的首尔w 内科医院以及盆唐济生医院中由在医生的管理、监督下培训的临床病理师使用一次性 灭菌器具进行。在研究对象表示不适或表达拒绝意愿的情况下，采取措施可以终止参 与研究。将血液以3000rpm离心20分钟，分离血清和血浆。
[0058]
②
小便是在空腹状态下以采集分析所需的最小量的小便，使用灭菌的小便采集桶 根据研究人员的说明，研究参与人员自己采集。
[0059]
血液和小便试样使用液氮快速冷冻后，保持冷冻状态，运输到首尔大学食品营养 学科营养生理学研究室后，存储在-80℃的超低温冰箱中，直到用于分析。
[0060]
③
大便采集分析所需的最小量粪便，大便使用灭菌的采便试剂盒根据研究人员的 说明，研究参与人员自己采集。检查寻访日一天前或当天上午收集粪便。用于粪便代 谢物
分析的粪便在室温下存储并运送，用于肠道内菌群分析的粪便盛装于装有脱氧核 糖核酸(dna)保存液的专用容器并存储在室温下，并送到首尔大学食品营养学科 营养生理学研究室后，存储在-80℃的超低温冰箱中，直到用于分析。
[0061]
(3)血液指标分析
[0062]
血中免疫细胞资料收集通过使用人t细胞(human t cell)、b细胞(b cell)、单 核细胞(monocyte)、树突状细胞(dendritic cell)、自然杀伤细胞(nk cell)的抗体 来进行荧光激活细胞分选术(fluorescence-activated cell sorting，facs)资料分析。
[0063]
作为一种分析方法，使用ficoll-hystopaque(美国西格玛诊断(sigma diagnostics) 公司)在全血(whole blood)中分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells， pbmc)。将荧光激活细胞分选术缓冲液(1
×
磷酸缓冲盐溶液(phosphate-bufferedsaline，pbs)、0.1％的小牛血清(bovine calf serum)、0.05％的叠氮化钠(sodium azide)) 与单一抗体混合后，使分离的外周血单核细胞反应。用于分析的抗体如下：使用人t 细胞(cd4、cd8、ccr7、cd45ra)、b细胞(cd19)、mye/dc(cd11c、hla-dr、 cd14、cd16)、自然杀伤细胞(cd3、cd56)，使用磷酸缓冲盐溶液清洗后使用流式 细胞仪(facscalibur)(美国bd生物科学公司)和flowjo软件(tree star公司，美 国)来进行之后的分析。
[0064]
(4)生活质量分析
[0065]
为了确认过去一个月的肠道健康变化是否改善了生活质量，利用评价整个生活质 量的生活质量(quality of life，qol)评估表来测量生活质量的变化。以7分制共测 量5个问题。分数为1分(完全不)、2分(不)、3分(有些不)、4分(适中)、5 分(有些是)、6分(是)、7分(完全是)。生活质量评价分数越高，判定为生活质量 越高。
[0066]
(5)压力分析
[0067]
社会心里压力影响自主神经系统及肠道神经系统，调节胃肠道的免疫力和运动及 痛症的知觉。因此，已知压力是通过参与消化酶的分泌或肠道运动、胃肠道血流、粘 膜通透性等来引起炎症性肠疾病或过敏性肠综合征的病因，或者是加剧疾病预后的因 素。在本研究中，为了评价对改善肠道健康的同时缓解压力产生的影响，利用压力评 价表来测量压力分数的变化。以5分制共测量20个问题。分数为1分(完全不是)、 2分(有些是)、3分(差不多是)、4分(相当是)、(非常是)。压力评价分数越高， 判定为精神压力越大。
[0068]
(6)认知功能改善分析
[0069]
在本研究中，试图确认益生菌的摄入是否对由老化引起的认知功能下降具有积极 影响。为了测定认知功能，利用用作系统性地诊断、评价痴呆患者的标准工具的韩文 版阿尔茨海默病联合注册表(the korean version of consortium to establish a registryfor alzheimer's disease，cerad-k)测量记忆力、注意集中力、结构行动能力等多种 认知领域。韩文版阿尔茨海默病联合注册表测验由“言语流畅性测验”、“波士顿命名 测验”、“词表记忆测验”、“结构行动测验”、“词表回忆测验”、“词表再认测验”、“结 构回忆测验”、“连线a与b”的测验组成，在研究第0周、第4周、第12周进行认 知功能测验。
[0070]
(7)统计分析
[0071]
利用柯尔莫可洛夫-斯米洛夫检验(kolmogorov-smirnov test)对所有变量进行正 态性检验。在研究开始的时间点(基线(baseline)，第0周)利用克鲁斯卡尔-沃利斯 检
验(kruskal-wallis test)、卡方检验(chi-squared test)或者费希尔精确检(fisher
’ꢀ
s exact test)来分析对于人口社会学特性以及临床指标的组间的比较检验。有关干预 效果的统计分析以如下方式进行。对于具有正态分布的变量，利用配对t检验(pairedt-test)来比较组内服用前和服用后的变化，利用方差分析(analysis of variance， anova)来检验对照组和实验组的变化差异是否显著。对于具有非正态分布的变量， 通过威尔科克森符号秩检验(wilcoxon signed-rank test)和弗里德曼检验(friedmantest)来检验组内服用前后的差异是否具有统计学意义。通过克鲁斯卡尔-沃利斯检验 来掌握对照组和实验组之间的指标变化的差异是否显著。所有统计分析均使用 sas9.4(sas institute公司，美国)进行。
[0072]
实验例1：人口社会学特性
[0073]
在本发明中，从首尔地区和盆唐地区招募65周岁以上的健康老年人，通过事前 的预筛测验选择适当的研究参与人员。从2018年5月到8月在首尔地区，从2018 年6月到2019年3月在盆唐地区，共进行共12周的干预研究。在首尔和盆唐地区共 登记161名，根据研究参与人员的选定及排除条件(排除过去三个月内持续服用抗生 素、抗炎剂、胃肠疾病药物、抗凝剂的人、过去三个月内持续摄入乳酸菌及欧米茄-3 脂肪酸补充剂的人、有食品过敏(豆类过敏)的人)，共选择102人进行干预研究。
[0074]
利用随机双盲分配法将最终选定的研究参与人员分配到安慰剂对照组 (placebo)、益生菌组(probiotics)或益生菌 欧米茄-3脂肪酸组(probiotics ω-3 fa)，每个组分配33～35名受试人员(图2)。
[0075]
图2为本发明的研究流程图。
[0076]
研究开始后，因服用限制药物、撤回参与意向、头痛、腹泻等理由出现中途淘汰 人员，如表2所示。中途淘汰率在安慰剂对照组为21％，在益生菌组为23％，在益 生菌 欧米茄-3脂肪酸组为26％，在所有对象中平均22％的对象中途淘汰。已知， 在以成年人为对象的临床研究中，平均中途淘汰率为20％，考虑到本研究的对象为70多岁～80多岁的老年人，研究期间为12周的较长的研究期间，本研究中对象的依 从性高，因此可以评价研究进行得很好。
[0077]
表2
[0078]
中途淘汰人员说明表
[0079][0080]
表2中n是指参加人员的人数。
[0081]
在安慰剂对照组、益生菌组、益生菌 欧米茄-3脂肪酸组中，共完成12周的研 究的研究参与人员人数分别为26人、27人、25人，这些人的人口社会学特性如表3 所示。在安慰剂对照组、益生菌组、益生菌 欧米茄-3脂肪酸组中，各个组的平均年 龄为72岁、71.11岁、71.6岁，组间在统计学上没有差异。各个组的性别比例在统计 学上没有差异，在安慰剂对照组、益生菌组、益生菌 欧米茄-3脂肪酸组中，体重指 数(bmi)分别为24.72kg/m2、23.19kg/m2、24.16kg/m2，组间没有显著差异。在教育 水平、结婚与否、同居形态中也没有组间差异，在吸烟和饮酒、身体活动量等健康行 为中也没有出现组间显著差异。在各个组中对总体健康状态的主观性认识也在统计学 上没有差异。在安慰剂对照组、益生菌组、益生菌 欧米茄-3脂肪酸组中，各个组的 通过饮食摄入调差计算的摄入热量分别为1589.99kcal/d、1517.22kcal/d、 1651.53kcal/d，这表明组间在统计学上没有显著差异。因此，确认成功地实现了随机 的分配。
[0082]
表3
[0083]
参加人员的一般特征
[0084]
[0085][0086]
在上述表3中，数值以平均值(标准差)或n(％)来表示。基于克鲁斯卡尔
-ꢀ
沃利斯检验，具有基于卡方检验或者费希尔精确检的统计学显著性。
[0087]
实施例1：通过摄入益生菌或者欧米茄-3的有无老化相关指数变化的实验
[0088]
考虑到本发明的对象人员的年龄，通过实验来确认老化相关的指标是否因摄取益 生菌或欧米茄-3脂肪酸的补充摄取而发生变化。随着老化(ageing)的进行，血液中t细胞亚群(subpopulation)中的原始t细胞(naive t cell)减少，记忆t细胞(memoryt cell)增加。
[0089]
因此，补充摄入益生菌或欧米茄-3脂肪酸后，确认了t细胞亚群的组成。当观 察血液中cd4

t细胞的原始cd4t细胞和cd4效应记忆t细胞(cd4 effector memoryt cell，cd4 t
em cell)的比例(％)时，在安慰剂对照组、益生菌组、益生菌 欧米 茄-3脂肪酸组的所有组中，未观察到其随时间显著变化。但是，如图3所示，在安慰 剂对照组和益生菌组中cd4中央
记忆t细胞(cd4 central memory t cell，cd4 t
cm cell)和效应记忆ra-cd4 t细胞(effector memory ra-cd4 t cell，cd4 t
emra cell) 的比例(％)没有随时间显著变化，与此相反，可以在与第0周对比的第12周，仅 在益生菌 欧米茄-3脂肪酸组中，与研究第0周相比，在第12周分别可观察到3.19％、
ꢀ-
1.66％的显著变化(#p<0.05，图3)。
[0090]
图3为示出cd4

t细胞的对照组的变化的曲线图。在安慰剂对照组中，与第0 周相比，血液中cd8

t细胞中的原始cd8t细胞在第4周显著减少了-2.01％，而在 第12周恢复到第0周的水平。与此相反，在益生菌组中，与第0周相比，在研究第 12周具有增加2.18％的倾向。而益生菌 欧米茄-3脂肪酸组没有随时间显著变化(表 4、表5、表6)。
[0091]
在安慰剂对照组中，与第0周相比，cd8中央记忆t细胞在研究第8周显著增 加了0.35％，在益生菌组中，与研究第0周相比，在第8周具有增加0.35％，在第 12周增加0.16％的倾向。与此相反，当与安慰剂对照组比较时，其变化比例大，在 益生菌 欧米茄-3脂肪酸组中，研究第8周比第0周显著增加0.62％(表4、表5、 表6)。
[0092]
另一方面，在安慰剂对照组和益生菌组中，cd8效应记忆t细胞和ra-cd8效 应记忆t细胞的比例(％)没有随时间显著变化，但是，仅在益生菌 欧米茄-3脂 肪酸组中，在研究第8周比第0周分别有9.18％、-10.6％的显著变化(#p<0.05，图 4)。图4为示出cd8 t细胞的对照组的变化的曲线图。
[0093]
在图3、图4中，在组比较分析中基于威尔克森符号秩检验的学显著性、基于安 慰剂对照组的基准与基线各时间点的比较分析出，对于益生菌组*p<0.05； 以及对于益生菌 欧米茄-3脂肪酸组#p<0.05；当在各时间点组间具有显著性差异时， 基于克鲁斯卡尔-沃利斯检验，统计学显著性为p<0.05。
[0094]
表4
[0095]
血液的淋巴细胞在研究期间的变化(安慰剂)
[0096]
[0097][0098]
表5
[0099]
血液的淋巴细胞在研究期间的变化(益生菌)
[0100]
[0101][0102]
表6
[0103]
血液的淋巴细胞在研究期间的变化(益生菌 欧米茄-3脂肪酸)
[0104]
[0105][0106]
在表6中，数值以平均值(标准误)来表示。#p值用于“组内比较分析(within-groupcomparison analysis)”，基于费里德曼检验；*p<0.05为“费里德曼检验的事后分析 (post-hoc analysis of friedman test)”，基于威尔克森符号秩检验；值用于“组间各 时间点比较分析(comparison analysis between groups at each time point)”，基于克鲁斯 卡尔-沃利斯检验。
[0107]
另一方面，血中b细胞的数量随着老化的进行而减少。当确认存在于血中的外 周血单核细胞中b细胞的比例(％)时，在安慰剂对照组中，与第0周相比，在研 究第12周显出0.10％的微乎其微的变化，而仅在益生菌组中，与第0周相比，在第8周和第12周分别统计学上显著增加3.13％、3.39％(*p<0.05，图5)。当与安慰剂 对照组比较时，在益生菌 欧米茄-3脂肪酸组中，在第12周其变化量大于第0周， 具有增加约0.67％的倾向。
[0108]
图5为示出本发明的不同期间的b细胞变化的曲线图。在图5中，基于以威尔 克森符号秩检验的统计有显著性、基于安慰剂对照组的基准与基线各时间点的比较分 析为基础，相对于益生菌组*p<0.05以及益生菌 欧米茄-3脂肪酸组#p<0.05； 当在各时间点组间具有显著性差异时，基于克鲁斯卡尔-沃利斯检验的统计学显著性 为p<0.05。
[0109]
从以上的结果可以确认使用益生菌 欧米茄-3脂肪酸组进行处理可以抑制老化。
[0110]
实施例2：精神健康指标
[0111]
1)生活质量
[0112]
在本研究中，为了确认过去一个月肠道健康的变化是否改善了生活质量，利用生 活质量(quality of life，qol)评价表来测量生活质量的变化。以7分制共测量5个 问题，分数越高，判定为生活质量越高。
[0113]
当比较研究第0周、第4周、第12周的生活质量分数时，在安慰剂对照组中， 与第0周相比，在研究第4周、第12周分别减小-1.5分、-1.31分，与此相反，益生 菌组的变化为-0.41分、0.15分(图6、表7)。在益生菌 欧米茄-3脂肪酸组中，与 第0周相比，第4周、第12周稍微提高了0.16分、1.12分，但在统计学上均不显著。
[0114]
图6为根据本发明的参与人员自我评价的生活质量分数曲线图。克鲁斯卡尔-沃 利斯检验用于组间比较分析，并判断基于威尔克森符号秩检验的统计学显著性。
[0115]
表7
[0116]
根据参与人员自身评价的生活质量分数
[0117][0118]
在表7中，数值以平均值(标准差)来表示。*p值用于“组间比较分析”，基于 克鲁斯卡尔-沃利斯检验。组内比较分析基于威尔克森符号秩检验来进行。
[0119]
2)压力
[0120]
在本研究中，为了确认益生菌及欧米茄-3脂肪酸的摄入对改善肠健康以及缓解压 力产生的影响，利用压力评价表来确认压力分数的变化。对总共20个在日常生活中 可能经历的与压力有关的问题以5分制进行测量，分数越高，判定压力越大。
[0121]
当比较研究第0周、第4周、第12周的压力分数时，在安慰剂对照组中，与第 0周相比，在研究第4周、第12周分别增加0.62分、1.38分，与此相反，在益生菌 组中，观察到-2.41分、-2.85的变化(图7、表8)。在益生菌 欧米茄-3脂肪酸组中， 与第0周相比，在第4周、第12周的分数变化为-2.44分、-0.64分，压力分数具有 减小的倾向。
[0122]
图7为示出根据基线的第4周以及第12周的压力分数差的曲线图。克鲁斯卡尔
-ꢀ
沃利斯检验用于组间比较分析，并判断基于威尔克森符号秩检验为基础的统计学显著 性。
[0123]
表8
[0124]
根据参与人员自身评价的压力分数
[0125][0126]
在表8中，数值以平均值(标准差)来表示。*p值用于“组间比较分析(comparisonanalysis between groups)”，基于克鲁斯卡尔-沃利斯检验。组内比较分析基于威尔克森 符号秩检验来进行。
[0127]
3)认知功能
[0128]
在研究第12周测量的各种认知领域中，利用“连线测验a与b”的分数计算的 心理弹性分数，摄入益生菌的组比安慰剂对照组显著性减少了-0.65分，因此，确认 注意集中力及结构行动能力(图8)得到改善。图8为示出根据基线的第12周的认 知功能分数变化的曲线图。在第12周观察到认知功能分数的变化。分数减少表明注 意力和结构行动能力提高。数据以平均数(标准误)来表示。通过曼-惠特尼u检验 (mann-whitney u test)显示出基于组间比较分析的统计学显著性。
[0129]
为了确认对根据益生菌摄入的认知功能改善效果的分子生物学机制，利用酶联免 疫吸附测定(elisa)在血液中测定在脑中作为调节认知功能的信号的长时程增强 (long-term potentiation，ltp)信号中起到重要作用的蛋白质的脑源性神经营养因子 (brain-derived neurotrophic factor，bdnf)的水平。当比较研究第0周和研究第12 周测定的血中脑源性神经营养因子的水平时，确认摄入益生菌的组比安慰剂对照组显 著增加了3.68ng/ml(图9)。
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图9为根据基线的血液中脑源性神经营养因子变化曲线图。图示了第12周血中 脑源性神经营养因子水平的变化。数据以平均数(标准误)来表示。通过分析混合模 型方差分析的时间x处理计算，示出统计学显著性。
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以上的结果表明，本发明的摄入12周的包含两歧双歧杆菌bgn4 (kccm12754p)菌株及长双歧杆菌bori(kccm-10492)菌株的益生菌和欧米茄
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3会引起b细胞组成的积极变化。
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尤其，老化相关cd8效应记忆t细胞和ra-cd8效应记忆t细胞的比例(％) 发生了显著变化，因此，认为本发明具有延迟老化相关免疫功能下降的积极效果。
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并且，可以确认，通过摄入产品来提高生活质量并减轻压力、增加认知功能，从 而可以提高幸福度。
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[保藏号]
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受托机构名称：韩国微生物保藏中心(国外)
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保藏号：kccm12754p
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保藏日期：20200624
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地址：韩国首尔
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分类命名：两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)
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受托机构名称：韩国微生物保藏中心(国外)