稀有人参皂苷在治疗肝癌中的用途的制作方法

1.本发明涉及稀有人参皂苷3β-o-d-吡喃葡糖基-达玛-24-烯-3β,20s-二 醇(3β-o-d-glucopyranosyl-dammar-24-ene-3β,20s-diol，简称为 3β-o-glc-dm)和20s-o-d-吡喃葡糖基-达玛-24-烯-3β,20s-二醇 (20s-o-d-glucopyranosyl-dammar-24-ene-3β,20s-diol，简称为 20s-o-glc-dm)在制备抗肝癌药物中的应用，属于医药技术领域。


背景技术：

2.临床中大部分诊断为肝细胞肝癌(hcc)的患者为晚期疾病，因其早 期症状不明显，多数就诊时已失去手术时机，且hcc恶性程度较高，预 后差，加之缺乏理想的治疗靶点，治疗也较为困难。无论是手术、介入治 疗或是化疗，对肝癌的治疗效果仍不理想，目前肝癌的5年生存率很低。
[0003][0004][0005]
对于局限于肝脏的不可切除性hcc，现有的局部治疗手段很多，除了 射频消融、放射治疗手段外，还有化疗，但是肝癌抵抗大多数化疗药物， 在肝癌中作为全身性化疗最有效的药物是多柔比星(阿霉素)、5-氟尿嘧啶 和顺铂。但即便是这些药物也仅能使一小部分肿瘤缩小，而且抑制作用也 不会持续很久。即使使用药物组合，在大多数情况下，全身性化疗也无法 延长患者生存时间，且目前缺少化疗使总生存期获益的证据。与全身化疗 相比，经导管肝动脉灌注化疗效果更好，且不会增加副作用。最常用的药 物包括5-氟尿嘧啶、顺铂、丝裂霉素c和多柔比星。随着多种靶向药和免 疫治疗药物(2017和2018年，fda分别批准纳武单抗和派姆单抗治疗经 多吉美治疗后耐药的晚期肝癌)获批，其在晚期肝癌的治疗中获得了广泛 应用。2019美国nccn肝癌新版指南中指出，一线系统治疗推荐首选索 拉非尼和仑伐替尼；其它治疗推荐系统全身化疗，化疗方案在讨论中仅提 及folfox4方案。在一线治疗进展后，指南推荐使用的药物为瑞戈非尼、 纳武利尤单抗、卡博替尼、雷莫芦单抗和帕博利珠单抗。另一方面，现代 医学研究证明，人参除了能滋补强身之外，在抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、 调节免疫及增强记忆功能等方面均有显著作用。药理学研究证明，人参的 主要活性成分是人参皂苷(ginsenoside)。人参皂苷属于三萜类化合物，是 人参属植物(如人参、三七或西洋参等)的一类重要次级代谢产物。根据 苷元基本骨架不同，人参皂苷可分为两种类型：一类是达玛烷型四环三萜 类皂苷；另一类是齐墩果烷型五环三萜类皂苷。达玛烷型皂苷在人参皂苷 中占大多数，是其中的主要活性成分。达玛烷型皂苷包括人参二醇型皂苷 和人参三醇型皂苷。迄今为止，从人参属植物中分离得到的达玛烷型皂苷 已达110多种。
[0006]
达玛烷型人参皂苷的抗肿瘤活性的有无和/或高低受到其苷元的羟基 数量以及所连接的糖基位置及数量影响。例如，作为原人参二醇的直接前 体，达玛烯二醇-ii仅在c3和c20位各有一个羟基，比原人参二醇少一个 羟基，比原人参三醇少两个羟基，但达玛烯二醇-ii为苷元的单糖苷可具有 比原人参二醇型和原人参三醇型人参皂苷更强的抗肿瘤活
性。
[0007]
稀有人参皂苷3β-o-glc-dm是达玛烯二醇-ii的的c3位连接一个葡萄 糖基，20s-o-glc-dm是达玛烯二醇-ii的的c20位连接一个葡萄糖基。
[0008]
另外，中国专利cn103849672a中虽然公开了稀有人参皂苷 3β-o-glc-dm和20s-o-glc-dm的结构式及其制备方法，但是关于其在治 疗肝癌方面的活性并未报道。


技术实现要素：

[0009]
本发明解决的技术问题是提供了化合物i和ii及其药学上可接受的盐 在制备抗肝癌药物中的应用。
[0010]
为解决本发明的技术问题，本发明提供了如下技术方案：
[0011]
本发明提供了化合物i及其药学上可接受的盐在制备预防或治疗肝癌 药物中的应用，
[0012][0013]
化合物i的化学名为3β-o-d-吡喃葡糖基-达玛-24-烯-3β,20s-二醇 (3β-o-d-glucopyranosyl-dammar-24-ene-3β,20s-diol，简称为 3β-o-glc-dm)。
[0014]
所述肝癌包括继发性肝癌和/或原发性肝癌。
[0015]
所述肝癌包括肝细胞癌。
[0016]
本发明还提供了化合物ii及其药学上可接受的盐在制备预防或治疗肝 癌药物中的应用，
[0017][0018]
化合物ii的化学名为20s-o-d-吡喃葡糖基-达玛-24-烯-3β,20s-二醇 (20s-o-d-glucopyranosyl-dammar-24-ene-3β,20s-diol，简称为 20s-o-glc-dm)。
[0019]
所述肝癌包括继发性肝癌和/或原发性肝癌。
[0020]
所述肝癌包括肝细胞癌。
[0021]
本发明还提供了一种药物组合物在制备预防和/或治疗肝癌药物中的 应用，所述药物组合物包含化合物i及其药学上可接受的盐，以及至少一 种药学上可接受的载体。
[0022]
所述肝癌包括继发性肝癌和/或原发性肝癌。
[0023]
所述肝癌包括肝细胞癌。
[0024]
所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、滴丸、糊剂、 散剂。
[0025]
本发明技术方案的第一方面还提供了一种药物组合物在制备预防或 治疗肝癌药物中的应用，所述药物组合物包含化合物ii及其药学上可接受 的盐，以及至少一种药学上可接受的载体。
[0026]
所述肝癌包括继发性肝癌和/或原发性肝癌。
[0027]
所述肝癌包括肝细胞癌。
[0028]
所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、滴丸、糊剂、 散剂。
[0029]
本文所述的化合物、组合物和方法可给予至患有或被诊断为患有肝癌 的受试者。本领域技术人员已知用于将本文所述的化合物i或ii给予至受 试者的多种手段。此类方法可以包括但不限于：口服给予、胃肠外给予、 静脉内给予、肌内给予、皮下给予、经真皮给予、气道给予(气溶胶)、 肺部给予、皮肤给予、局部给予、注射给予或瘤内给予。给予可以是局部 的或全身性的。在一些实施方式中，优选的方式是口服给予。
[0030]
在一些实施方案中，化合物i或ii，或其药学上可接受的盐是作为唯 一的活性成分单独给予患者的。
[0031]
在一些实施方式中，在给予化合物i或ii，或其药学上可接受的盐之 前、之后或同时，可以进一步向受试者给予第二试剂和/或治疗，例如作为 组合治疗的一部分。第二试剂和/或治疗可以包括化学治疗剂和/或放射疗 法、和/或外科手术。
[0032]
本文使用的“化学治疗剂”是指降低或减少癌细胞的生长、生存和/ 或转移的物质。化学治疗剂可以包括毒素、小分子和/或多肽。第二试剂和 /或治疗的非限制性实例可包括：射频消融、放射疗法；外科手术；以及化 学治疗剂。
[0033]
所述化学治疗剂选自多吉美、纳武单抗、派姆单抗、索拉非尼、仑伐替 尼、瑞戈非尼、纳武利尤单抗、卡博替尼、雷莫芦单抗、帕博利珠单抗、蒽 环霉素类抗生素、醌类药物、紫杉烷类抗肿瘤药、长春碱类抗肿瘤药、铂 配合物和/或嘧啶拮抗物。
[0034]
在本发明中，蒽环霉素类抗生素包括但不限于多柔比星和羟基多柔比 星；醌类药物包括但不限于丝裂霉素c；紫杉烷类抗肿瘤药包括但不限于 紫杉醇和多西紫杉醇；长春碱类抗肿瘤药包括但不限于长春碱、长春新碱、 长春地辛和长春瑞滨；铂配合物包括但不限于米铂、顺铂、卡铂、奈达铂 和奥沙利铂；嘧啶拮抗物包括但不限于阿糖胞苷、安西他滨、卡培他滨、 吉西他滨、氟尿嘧啶、双呋氟尿嘧啶、去氧氟尿苷、替加氟和卡莫氟。
[0035]
此外，治疗的方法可以进一步包括使用放射物或放射疗法。此外，治 疗的方法可以进一步包括使用外科手术治疗。
[0036]
在某些实施方式中，本文所述的化合物i或ii，或其药学上可接受的 盐的有效剂量可以一次给予患者。在某些实施方式中，化合物i或ii，或 其药学上可接受的盐的有效剂量可以重复给予患者。对于全身给予，可以 给予患者治疗有效量的化合物i或ii，或其药学上可接受的盐，包括为0.1 mg/kg至50mg/kg，例如0.1mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、2.5 mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、 40mg/kg、50mg/kg或更多。
[0037]
在一些实施方式中，在初始治疗方案之后，可以在不太频繁的基础上 给予治疗。例如，在每两周治疗进行三个月后，治疗可每月重复一次至六 个月或一年或更长时间。根据本文所述的方法的治疗可以降低标志物的水 平或病症的症状，例如降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、 至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少
80％、至少 90％或更多。
[0038]
给予化合物i或ii，或其药学上可接受的盐的量可根据疾病的严重程 度、疾病的响应、任何治疗相关的毒性、患者的年龄和健康状态来确定。
[0039]
本文所述的化合物i或ii，或其药学上可接受的盐的剂量可以由临床 医师确定并在必要时进行调整，以适应观察到的治疗效果。至于治疗持续 时间和治疗的频率，一般由熟练的临床医师监测受试者以确定何时治疗或 提供治疗效果，并确定是否增加或减少剂量、增加或降低给予频率、不继 续治疗、恢复治疗或对治疗方案作出其他改变。给药计划可以每周一次至 每天一次变化，这取决于许多临床因素，例如受试者对组分的敏感性。活 性作用的期望的剂量或量可一次给予或分成亚剂量，例如2-4个亚剂量并 在一段时间内(例如，以一天内的适当时间间隔或其他适当的计划)给予。 在一些实施方式中，给予可以是长期的，例如在数周或数月的时间段内每 天一次或多次给药和/或治疗。给药和/或治疗计划的实例是在1周、2周、 3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月或更长的时 间段内，每天给予一次、每天两次、每天三次、每天四次或更多次给予。 组合物可以在一段时间内给予，例如在5分钟、10分钟、15分钟、20分 钟或25分钟内。
[0040]
在本发明的一些实施方案中，提供了一种治疗肝细胞癌的药物组合 物，其包含化合物i或ii，或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可 接受的载体。
[0041]“药学上可接受的载体”是指其用于制备药物组合物，该药物组合物 通常是安全、无毒并且既不在生物学上或其他方面不合乎需要，并且包括 其对于人类药物使用是可接受的。药学上可接受的载体和稀释剂包括盐 水、水性缓冲溶液、溶剂和/或分散媒介物。本领域公知此类载体和稀释剂 的使用。可作为药学上可接受的载体的材料的一些非限制性实例包括： (1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯 淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基 纤维素、微晶纤维素和醋酸纤维素；(4)黄蓍胶粉；(5)麦芽；(6)明胶； (7)润滑剂，例如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石；(8)赋形剂，例 如可可脂和栓蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄 油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、 山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇(peg)；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸 乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻 酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20) ph缓冲溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐；(22)填充剂，例如多 肽和氨基酸；(23)血清成分，例如血清白蛋白、高密度脂蛋白和低密度 脂蛋白；(24)c
2-c
12
醇，例如乙醇；以及(25)用于药物制剂中的其他无 毒相容物质。润湿剂、着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香 剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于制剂中。术语例如“赋形剂”、“载体”、
ꢀ“
药学上可接受的载体”等在本文中可互换使用。
[0042]“药学上可接受的盐”包括但不限于与无机酸或有机酸形成的酸加成盐， 所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，所述有机酸例如乙酸、 三氟乙酸、丙酸、己酸、庚酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、 琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃 酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、对氯苯磺酸、 对甲苯磺酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、 谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸等。
[0043]“治疗有效量”意指化合物被给予人用于治疗疾病时，足以实现对该 疾病的治疗
dm 10.0mg/kg 组、3β-o-glc-dm 15.0mg/kg组、3β-o-glc-dm 20.0mg/kg组、 20s-o-glc-dm 2.5mg/kg组、20s-o-glc-dm 5.0mg/kg组、 20s-o-glc-dm 7.5mg/kg组、20s-o-glc-dm 10.0mg/kg组、 20s-o-glc-dm 15.0mg/kg组、20s-o-glc-dm 20.0mg/kg组，每组7 只动物。溶剂对照组于接种后第一天开始按0.4ml/20g灌胃30％ peg400每日灌胃1次，共灌胃7次；阳性对照5-fu组于接种第一 天开始按照0.2ml/20g腹腔注射给药，每三日给药1次，共给药3 次；阳性药rg3组、3β-o-glc-dm各剂量组和20s-o-glc-dm各剂量 组于接种第一天开始灌胃给药，给药剂量为0.4ml/20g，每日给药1 次，共给药7天。
[0057]
实验结束，颈椎脱位处死动物，称体重，剥取肿瘤组织并称重。 根据重量计算肿瘤抑制率(％)、体重、瘤重用均值
±
标准差(x_
±
sd) 表示，应用spss 20.0软件进行各给药组与阴性对照组之间的检验分 析。多组间均数比较采用单因素方差分析，以p<0.05为差异具有统 计学意义。
[0058][0059]
结果显示(见表1)，3β-o-glc-dm及20s-o-glc-dm对小鼠h22 肝癌具有抑制作用。3β-o-glc-dm在2.5mg/kg剂量下抑制率可达 58.13％，远高于rg3最适浓度下10.0mg/kg的37.41％；20s-o-glc-dm 在高于10.0mg/kg剂量下抑制率为51.06％，也高于rg3。在其它肿 瘤实验中，rg3的剂量高于或低于10.0mg/kg，抑制率均下降。
[0060]
表1 3β-o-glc-dm和20s-o-glc-dm对小鼠h22肝癌的生长抑制作用
[0061][0062]
[0063]
*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与溶剂对照组比较。
[0064]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施 方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进 行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0065]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特 征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不 必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
[0066]
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要 其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。