一种使用环介导等温扩增技术鉴定幽门螺杆菌的方法及试剂盒与流程

技术特征：
1.一种检测幽门螺杆菌的方法，其特征在于，使用环介导等温扩增方法。2.如权利要求1所述，其特征在于，检测引物包括：urea
‑
f3:5
’‑
ctgtcaaagtctaagcatct
‑3’
；urea
‑
b3:5
’‑
actcgtaaccgtgcatac
‑3’
；urea
‑
fip:5
’‑
gccgttagcgtgaaagttaaaaaaagaaatggaagtgtgagc
‑3’
；urea
‑
bip:5
’‑
gccttcgttgatagtgatgtctcctattgaggccaatggta
‑3’
；urea
‑
lf：5
’‑
acagaccggttcaaatcg
‑3’
；urea
‑
lb:5
’‑
aagaacaactcaccaggaac
‑3’
。3.如权利要求2所述引物组在基于环介导等温扩增法检测幽门螺杆菌的应用。4.如权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：lamp体系为100μm的外引物f3和b3各0.15μl；100μm的内引物fip和bip各0.2μl；100μm的环引物lf和lb各0.35μl；反应缓冲液12.5μl；bst dna酶1.5μl；模板dna 2μl；荧光染料1μl，加去离子水补足至25μl。5.如权利要求1所述检测方法，其特征在于，lamp反应条件为62℃反应60min，然后85℃下灭活5min。6.如权利要求1所述检测方法，其特征在于，通过肉眼观察颜色变化或者荧光确定是否感染幽门螺杆菌。7.一种检测幽门螺杆菌毒力基因类型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：权利要求2中所述引物组、反应缓冲液、bst dna酶、荧光染料、去离子水。8.如权利要求7中所述试剂盒，其特征在于，缓冲液包含以下组分：终浓度为40mm tris
‑
hcl(ph 8.8)；终浓度为20mm的kcl；终浓度为20mm的mgso4；终浓度为20mm的(nh4)2so4；0.2％的tween 20；终浓度为1.6m的betaine；终浓度为3.2mm的dntps。9.如权利要求7中所述试剂盒，其特征在于，用肉眼判读颜色结果具体为：若反应产物为橙色透明液体，则表明未感染幽门螺杆菌；若反应产物为绿色浑浊的液体，则认为感染了幽门螺杆菌。用荧光判读颜色结果具体为：在365nm紫外光的照射下，发出亮绿色的荧光为阳性，无荧光产生的则为阴性。10.权利要求7
‑
9任一项所述试剂盒，均应用于检测幽门螺杆菌。

技术总结
本发明创造提供了一种使用环介导等温扩增技术检测幽门螺杆菌感染的方法和试剂盒。所用引物进行了特异性和灵敏性实验，结果表明该引物特异性良好，灵敏性高，本研究用探针法Q


技术研发人员：郗日沫 王倍 孟萌 佟悦 甘奇
受保护的技术使用者：南开大学
技术研发日：2021.08.02
技术公布日：2021/10/28