技术特征：
1.一种离体扩增T细胞的方法，包括使多个T细胞与第一药剂接触，从而产生第一T细胞群，其中所述第一药剂包括与T细胞受体可变β链(TCRβV)区特异性结合的第一域。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述第一药剂进一步包括第二域，所述第二域与在所述多个T细胞的T细胞群的表面上表达的蛋白质结合。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述第一药剂是双特异性抗体分子。
4.如权利要求2或3所述的方法，其中所述第二域与T细胞受体可变β链(TCRβV)区特异性结合。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述第二域和所述第一域与不同的T细胞受体可变β链(TCRβV)区特异性结合。
6.如权利要求4或5所述的方法，其中所述第二域和所述第一域与属于不同亚家族的TCRβV或相同TCRβV亚家族的不同成员特异性结合。
7.如权利要求4-6中任一项所述的方法，其中所述第一域与属于以下亚家族的TCRβV的TCRβV区特异性结合：TCRβV6亚家族、TCRβV10亚家族、TCRβV12亚家族、TCRβV5亚家族、TCRβV7亚家族、TCRβV11亚家族、TCRβV14亚家族、TCRβV16亚家族、TCRβV18亚家族、TCRβV9亚家族、TCRβV13亚家族、TCRβV4亚家族、TCRβV3亚家族、TCRβV2亚家族、TCRβV15亚家族、TCRβV30亚家族、TCRβV19亚家族、TCRβV27亚家族、TCRβV28亚家族、TCRβV24亚家族、TCRβV20亚家族、TCRβV25亚家族或TCRβV29亚家族，并且所述第二域与属于以下亚家族的TCRβV的TCRβV区特异性结合：TCRβV6亚家族、TCRβV10亚家族、TCRβV12亚家族、TCRβV5亚家族、TCRβV7亚家族、TCRβV11亚家族、TCRβV14亚家族、TCRβV16亚家族、TCRβV18亚家族、TCRβV9亚家族、TCRβV13亚家族、TCRβV4亚家族、TCRβV3亚家族、TCRβV2亚家族、TCRβV15亚家族、TCRβV30亚家族、TCRβV19亚家族、TCRβV27亚家族、TCRβV28亚家族、TCRβV24亚家族、TCRβV20亚家族、TCRβV25亚家族或TCRβV29亚家族。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述第一域与属于TCRβV12亚家族的TCRβV的TCRβV区特异性结合。
9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述第二域和所述第一域与属于不同亚家族的TCRβV特异性结合。
10.如权利要求7或8所述的方法，其中所述第二域和所述第一域与相同TCRβV亚家族的不同成员特异性结合。
11.如权利要求2或3所述的方法，其中所述第二域与抗体分子特异性结合。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述抗体分子由所述多个T细胞的T细胞群表达。
13.如权利要求11或12所述的方法，其中所述抗体分子包括可变重链和可变轻链。
14.如权利要求11-13中任一项所述的方法，其中所述抗体分子是scFv或Fab。
15.如权利要求11-14所述的方法，其中所述第二域与所述抗体分子的轻链区特异性结合。
16.如权利要求11-15中任一项所述的方法，其中所述第二域与抗体分子的κ轻链区特异性结合。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述第二域包括蛋白质L。
18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述第一药剂与属于不同亚家族的至少两种TCRβV特异性结合。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述第一药剂与属于不同亚家族的至少三种、四种、五种或六种TCRβV特异性结合。
20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述第一药剂与相同TCRβV亚家族的至少两个不同成员特异性结合。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述第一药剂与相同TCRβV亚家族的至少三个、四个、五个、六个或七个不同成员特异性结合。
22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，进一步包括使所述多个T细胞与第二药剂接触，其中所述第二药剂包括与T细胞受体可变β链(TCRβV)区特异性结合的域，其中所述第一药剂和所述第二药剂与不同的TCRβV区特异性结合。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述第一药剂包括与第一TCRβV的TCRβV区特异性结合的域，并且所述第二药剂包括与第二TCRβV的TCRβV区特异性结合的域，其中所述第一TCRβV和所述第二TCRβV属于不同的TCRβV亚家族或是相同TCRβV亚家族的不同成员。
24.如权利要求22或23所述的方法，其中所述第一域与属于以下亚家族的TCRβV的TCRβV区特异性结合：TCRβV6亚家族、TCRβV10亚家族、TCRβV12亚家族、TCRβV5亚家族、TCRβV7亚家族、TCRβV11亚家族、TCRβV14亚家族、TCRβV16亚家族、TCRβV18亚家族、TCRβV9亚家族、TCRβV13亚家族、TCRβV4亚家族、TCRβV3亚家族、TCRβV2亚家族、TCRβV15亚家族、TCRβV30亚家族、TCRβV19亚家族、TCRβV27亚家族、TCRβV28亚家族、TCRβV24亚家族、TCRβV20亚家族、TCRβV25亚家族或TCRβV29亚家族，并且所述第二域与属于以下亚家族的TCRβV的TCRβV区特异性结合：TCRβV6亚家族、TCRβV10亚家族、TCRβV12亚家族、TCRβV5亚家族、TCRβV7亚家族、TCRβV11亚家族、TCRβV14亚家族、TCRβV16亚家族、TCRβV18亚家族、TCRβV9亚家族、TCRβV13亚家族、TCRβV4亚家族、TCRβV3亚家族、TCRβV2亚家族、TCRβV15亚家族、TCRβV30亚家族、TCRβV19亚家族、TCRβV27亚家族、TCRβV28亚家族、TCRβV24亚家族、TCRβV20亚家族、TCRβV25亚家族或TCRβV29亚家族。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述第一药剂包括与属于TCRβV12亚家族的第一TCRβV的TCRβV区特异性结合的域。
26.如权利要求22-25中任一项所述的方法，其中所述第一药剂和所述第二药剂各自与属于不同亚家族的TCRβV特异性结合。
27.如权利要求22-25中任一项所述的方法，其中所述第一药剂和所述第二药剂各自与相同TCRβV亚家族的不同成员特异性结合。
28.一种离体扩增T细胞的方法，包括使多个T细胞与多种药剂接触，从而产生第一T细胞群，其中所述多种药剂包括至少第一药剂和第二药剂，其中所述多种药剂中的每种药剂包括与不同的T细胞受体可变β链(TCRβV)区特异性结合的域。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述第一药剂或所述第二药剂或两者与属于不同亚家族的至少两种TCRβV特异性结合。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述第一药剂或所述第二药剂或两者与属于不同亚家族的至少三种、四种、五种或六种TCRβV特异性结合。
31.如权利要求28所述的方法，其中所述第一药剂或所述第二药剂或两者与相同TCRβV亚家族的至少两个不同成员特异性结合。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述第一药剂或所述第二药剂或两者与相同TCRβV亚家族的至少三个、四个、五个、六个或七个不同成员特异性结合。
33.如权利要求28-32中任一项所述的方法，其中所述多种药剂包括至少三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或十种药剂，其中所述多种药剂中的每一种药剂包括与不同的T细胞受体可变β链(TCRβV)区特异性结合的域。
34.如权利要求28-33中任一项所述的方法，其中所述多种药剂中的每一种药剂与不同TCRβV特异性结合，其中每种TCRβV属于不同TCRβV亚家族或是相同TCRβV亚家族的不同成员。
35.如权利要求28-34中任一项所述的方法，其中所述多种药剂中的每一种药剂包括与属于以下亚家族的TCRβV的TCRβV区特异性结合的域：TCRβV6亚家族、TCRβV10亚家族、TCRβV12亚家族、TCRβV5亚家族、TCRβV7亚家族、TCRβV11亚家族、TCRβV14亚家族、TCRβV16亚家族、TCRβV18亚家族、TCRβV9亚家族、TCRβV13亚家族、TCRβV4亚家族、TCRβV3亚家族、TCRβV2亚家族、TCRβV15亚家族、TCRβV30亚家族、TCRβV19亚家族、TCRβV27亚家族、TCRβV28亚家族、TCRβV24亚家族、TCRβV20亚家族、CRβV25亚家族或TCRβV29亚家族。
36.如权利要求28-35中任一项所述的方法，其中所述多种药剂中的至少一种药剂包括与属于TCRβV12亚家族的TCRβV的TCRβV区特异性结合的域。
37.如权利要求34所述的方法，其中所述多种药剂中的每种药剂与不同TCRβV特异性结合，其中每种TCRβV属于不同TCRβV亚家族。
38.如权利要求34所述的方法，其中所述多种药剂中的每一种药剂与不同TCRβV特异性结合，其中每种TCRβV是相同TCRβV亚家族的不同成员。
39.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述第一T细胞群表现出以下至少一项(例如，至少2、3、4、5、6、7或8项)：
(i)IL-1β表达的水平较低，
(ii)IL-6表达的水平较低，
(iii)TNFα表达的水平较低，
(iv)TNFγ表达的水平较低，
(v)IL-10表达的水平较低，
(vi)IL-17表达的水平较低，
(vii)IL-2表达的水平较高或者
(viii)IL-15表达的水平较高，
以上是相对于接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂(例如，抗CD3ε抗体)的可比T细胞群。
40.如权利要求39所述的方法，其中表达通过确定从所述T细胞群分泌的蛋白质的水平来测量，如通过本文所述的测定所测量的。
41.如权利要求39或40所述的方法，其中所述IL-1β表达的水平比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂的可比T细胞群所表达的水平低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％，如通过本文所述的测定所测量的。
42.如权利要求39-41中任一项所述的方法，其中所述IL-6表达的水平比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂的可比T细胞群所表达的水平低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％，如通过本文所述的测定所测量的。
43.如权利要求39-42中任一项所述的方法，其中所述IL-10表达的水平比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂的可比T细胞群所表达的水平低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％，如通过本文所述的测定所测量的。
44.如权利要求39-43中任一项所述的方法，其中所述IL-17表达的水平比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂的可比T细胞群所表达的水平低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％，如通过本文所述的测定所测量的。
45.如权利要求39-44中任一项所述的方法，其中所述IFN-γ表达的水平比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂的可比T细胞群所表达的水平低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％，如通过本文所述的测定所测量的。
46.如权利要求39-45中任一项所述的方法，其中所述IFN-α表达的水平比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂的可比T细胞群所表达的水平低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％，如通过本文所述的测定所测量的。
47.如权利要求39-46中任一项所述的方法，其中所述IL-15表达的水平比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂的可比T细胞群所表达的水平高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％，如通过本文所述的测定所测量的。
48.如权利要求39-47中任一项所述的方法，其中所述IL-2表达的水平比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂的可比T细胞群所表达的水平高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％，如通过本文所述的测定所测量的。
49.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述第一T细胞群中的T细胞数目比所述多个T细胞中的T细胞数目高至少约10倍(例如，高至少50、100、500、1000或10000倍)。
50.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述第一T细胞群中表达CD45R、表达CD95并表现出低CCR7表达或不可检测到CCR7表达的T细胞的数目比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂(例如，抗CD3ε抗体)的可比群中表达CD45R、表达CD95并表现出低CCR7表达或不可检测到CCR7表达的T细胞的数目更高。
51.如权利要求50所述的方法，其中所述第一群中表达CD45R、表达CD95并表现出低CCR7表达或不可检测到CCR7表达的T细胞的数目比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂(例如，抗CD3抗体)的可比群中表达CD45R、表达CD95并表现出低CCR7表达或不可检测到CCR7表达的T细胞的数目高至少2、3、4、5、10、15、20、50、100、500或1000倍。
52.如权利要求50或51所述的方法，其中所述CD45R、CD95和CCR7的表达通过确定所述细胞的表面上的蛋白质水平来测量(例如，如通过流式细胞术所测量的)。
53.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述第一群中TEMRA T细胞的数目比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂(例如，抗CD3ε抗体)的可比T细胞群中TEMRA T细胞的数目更高。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述第一群中TEMRA T细胞的数目比接触过包括特异性结合CD3ε的域的药剂(例如，抗CD3ε抗体)的可比T细胞群中TEMRA T细胞的数目高至少2、3、4、5、10、15、20、50、100、500或1000倍。
55.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述接触包括将所述多个T细胞与所述第一药剂一起温育。
56.如任意前述权利要求所述的方法，其中接触包括将所述多个T细胞与所述第一药剂一起温育或培养至少约10分钟、20分钟、30分钟、1小时、6小时、10小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时、5天、7天、10天、14天、15天或30天。
57.如任意前述权利要求所述的方法，其中接触包括将所述多个T细胞与所述第一药剂一起温育或培养至多约10分钟、20分钟、30分钟、1小时、6小时、10小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时、5天、7天、10天、12天、14天、15天、21天、30天、45天或60天。
58.如任意前述权利要求所述的方法，其中接触包括将所述多个T细胞与所述第一药剂一起温育或培养约10-90分钟、10-60分钟、10-30分钟、1-30天、1-21天、1-14天、1-7天、1-5天、1-3天、21-30天、14-30天、7-30天、5-30天或3-30天。
59.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述第一药剂偶联至固体表面(例如，珠粒、细胞培养板)。
60.如权利要求59所述的方法，其中所述偶联实现被所述第一药剂特异性结合的所述多个T细胞表面上的TCR的交联。
61.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述第一药剂包括抗体域。
62.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述第一药剂包括抗独特型抗体域。
63.如权利要求1-62中任一项所述的方法，其中所述第一药剂包括人抗体域或人源化抗体域。
64.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述第一药剂包括包含单链Fv(scFv)或Fab的抗原结合域。
65.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述第一药剂包括：包含两条抗体重链和两条抗体轻链的抗体，所述两条重链中的每一条包括可变区和恒定区，所述两条轻链中的每一条包括可变区和恒定区。
66.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述多个T细胞包括包含外源性核酸的T细胞群。
67.如权利要求66所述的方法，其中所述外源性核酸编码细胞表面受体。
68.如权利要求67所述的方法，其中所述细胞表面受体是嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。
69.如任意前述权利要求所述的方法，进一步包括在使所述多个T细胞与所述第一药剂接触之前，将外源性核酸引入所述多个T细胞的至少一部分T细胞中。
70.如任意前述权利要求所述的方法，进一步包括在使所述多个T细胞与所述第一药剂接触之后，将外源性核酸引入所述多个T细胞的至少一部分T细胞中。
71.如权利要求66-70中任一项所述的方法，其中所述外源性核酸通过转导或转染而引入。
72.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述多个T细胞是人类的。
73.如任意前述权利要求所述的方法，其中所述多个T细胞包括来自人类受试者的T细胞，当取得所述细胞时，所述人类受试者是健康的(例如，受试者未患有或未诊断出预定的疾病或病况，例如，癌症)。
74.如权利要求1-72中任一项所述的方法，其中所述多个T细胞包括来自人类受试者的T细胞，当取得所述细胞时，所述人类受试者已患有或诊断出疾病或病况(例如，诊断出预定的疾病或病况，例如，癌症)。
75.如权利要求74所述的方法，其中所述疾病是癌症。
76.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括施用权利要求1-75中任一项所述的第一细胞群的至少一部分或包括权利要求1-75中任一项所述的第一细胞群的至少一部分的药物组合物。
77.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：从人类受试者取得多个T细胞；通过权利要求1-75中任一项所述的方法扩增来自所述人类受试者的所述多个T细胞的至少一部分，从而产生所述第一T细胞群；向所述人类受试者施用所述第一T细胞群的至少一部分，从而治疗所述受试者的癌症。
78.如权利要求77所述的方法，其中所述多个T细胞表达外源性细胞表面受体。
79.如权利要求78所述的方法，其中所述外源性细胞表面受体是嵌合抗原受体(CAR)或外源性T细胞受体(TCR)。
80.如权利要求77-79中任一项所述的方法，其中所述细胞对被施用所述细胞的受试者而言是自体的或同种异体的。
81.如权利要求77-79中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体癌症或血液学癌症。
82.如权利要求81所述的方法，其中所述癌症是实体癌症。
83.如权利要求82所述的方法，其中所述实体癌症是前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、食道癌、睾丸癌、肝癌、胰腺癌、直肠癌、甲状腺癌、子宫癌、皮肤癌、肌肉癌、软骨癌、骨癌、内皮癌、上皮癌、真皮癌、基底癌、视网膜癌、皮肤癌或脑癌。
84.如权利要求81所述的方法，其中所述癌症是血液学癌症。
85.如权利要求84所述的方法，其中所述血液学癌症是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
86.如权利要求84所述的方法，其中所述血液学癌症是B细胞急性淋巴细胞性白血病(B-ALL)、T细胞急性淋巴细胞性白血病(T-ALL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞幼淋巴细胞白血病、母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞型滤泡性淋巴瘤、大细胞型滤泡性淋巴瘤、恶性淋巴增生性病况、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常、骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、浆细胞样树突细胞肿瘤、华氏巨球蛋白血症或白血病前期。
87.一种预防或减轻人类受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括：从人类受试者取得多个T细胞；通过权利要求1-73中任一项所述的方法扩增来自所述人类受试者的所述多个T细胞的至少一部分，从而产生所述第一T细胞群；向所述人类受试者施用所述第一T细胞群的至少一部分，其中在所述施用后(例如，在24小时、48小时、72小时、4天、5天、6天、7天、14天、21天或30天之内)，所述受试者未显示细胞因子释放综合征的症状，或者相对于被施用通过使所述多个T细胞与结合CD3ε的药剂(例如，抗CD3ε抗体)接触来扩增所述T细胞而产生的可比T细胞群的至少一部分的人类受试者，CRS的至少一种症状的严重性降低。
88.如权利要求87所述的方法，其中所述至少一种症状选自表8、表9或表10中所列的症状。
89.如权利要求88所述的方法，其中所述至少一种症状选自噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)、发热、恶心、呕吐、寒战、低血压、心动过速、心律失常、心肌病、急性心力衰竭、虚弱、头痛、皮疹、呼吸困难、脑病、失语、震颤、共济失调、轻偏瘫、麻痹、辨距障碍、癫痫发作、运动无力、意识丧失、幻觉、脑水肿、肝肿大、低纤维蛋白原血症、肝功能衰竭、腹泻、水肿、僵硬、关节痛、肌痛、急性肾功能衰竭、脾肿大、呼吸衰竭、肺水肿、缺氧、毛细血管渗漏综合征、巨噬细胞活化综合征，或呼吸急促。
90.如权利要求87-89中任一项所述的方法，其中在施用所述第一T细胞群的所述至少一部分的1、2、3、4、5、6、7、10、14、21或30天之内，所述受试者未表现出至少一种CRS症状(例如，如本文所述)。
91.如权利要求87-90中任一项所述的方法，其中所述受试者未表现出至少一种4级或5级CRS症状(例如，如本文所述)。
92.如权利要求87-91中任一项所述的方法，其中所述受试者未表现出任何4级或5级CRS症状(例如，如本文所述)。
93.如权利要求87-92中任一项所述的方法，其中在施用所述第一T细胞群的所述至少一部分后(例如，1小时、6小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、14天、21天、30天)，所述受试者的血清中选自IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10、IFNγ、TNFα、sIL2Rα、sgp130、sIL6R、MCP1、MIP1α、MIP1β和GM-CSF的一种或多种蛋白质的水平处于被施用所述第一T细胞群的所述至少一部分之前(例如，10分钟、30分钟、1小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时)的所述受试者的血清中所述一种或多种蛋白质的水平的±20％、±15％、±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％或±1％之内。
94.如权利要求87-93中任一项所述的方法，进一步包括基于确定以下至少一项来选择受试者进行权利要求1-75中任一项所述的第一T细胞群的施用：
(a)所述受试者发展出CRS的风险，
(b)如果施用了表达包括CD3ζ信号传导域的CAR的细胞，所述受试者发展出CRS的风险，
(c)所述受试者的CRS诊断，或者
(d)所述受试者的与施用表达包括CD3ζ信号传导域的CAR的细胞相关或由其诱导的CRS的诊断。
95.如权利要求94所述的方法，其中如果有以下情形，选择所述受试者进行施用：
(a)所述受试者存在发展出CRS的风险，
(b)如果施用了包括表达CAR CD3ζ信号传导域的CAR的细胞，所述受试者存在发展出CRS的风险，
(c)所述受试者已经诊断出CRS，或者
(d)所述受试者已经诊断出与施用表达包括CD3ζ信号传导域的CAR的细胞相关或由其诱导的CRS。
96.如权利要求87-95中任一项所述的方法，其中所述细胞对被施用所述细胞的受试者而言是自体的或同种异体的。
97.如权利要求87-96中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体癌症或血液学癌症。
98.如权利要求97所述的方法，其中所述癌症是实体癌症。
99.如权利要求98所述的方法，其中所述实体癌症是前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、食道癌、睾丸癌、肝癌、胰腺癌、直肠癌、甲状腺癌、子宫癌、皮肤癌、肌肉癌、软骨癌、骨癌、内皮癌、上皮癌、真皮癌、基底癌、视网膜癌、皮肤癌或脑癌。
100.如权利要求97所述的方法，其中所述癌症是血液学癌症。
101.如权利要求100所述的方法，其中所述血液学癌症是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
102.如权利要求100所述的方法，其中所述血液学癌症是B细胞急性淋巴细胞性白血病(B-ALL)、T细胞急性淋巴细胞性白血病(T-ALL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞幼淋巴细胞白血病、母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞型滤泡性淋巴瘤、大细胞型滤泡性淋巴瘤、恶性淋巴增生性病况、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常、骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、浆细胞样树突细胞肿瘤、华氏巨球蛋白血症或白血病前期。
103.一种编码嵌合抗原受体(CAR)的重组核酸分子，其中所述CAR包括：
(a)抗原结合域，其中所述抗原结合域不含有T细胞受体α(TCRα)可变区或T细胞受体β(TCRβ)可变区；
(b)跨膜域；和
(c)包括TCRβ恒定区胞内域的胞内信号传导域；其中所述胞内信号传导域不含有功能性CD3ζ信号传导域。
104.一种编码嵌合抗原受体(CAR)的重组核酸，其中所述CAR包括：
(a)抗原结合域，其中所述抗原结合域是单链可变片段(scFv)或单域抗体；
(b)跨膜域；和
(c)包括TCRβ胞内域的胞内信号传导域；其中所述胞内信号传导域不含有功能性CD3ζ信号传导域。
105.如权利要求103或104所述的重组核酸，其中所述嵌合抗原受体(CAR)不含有T细胞受体α(TCRα)可变区或T细胞受体β(TCRβ)可变区。
106.如权利要求103-105中任一项所述的重组核酸，其中所述抗原结合域、跨膜域和胞内信号传导域可操作地连接。
107.如权利要求103-106中任一项所述的重组核酸，其中所述CAR进一步包括TCRβ1恒定域或TCRβ2恒定域。
108.如权利要求103-107中任一项所述的重组核酸，其中所述跨膜域包括TCRβ恒定1域或TCRβ恒定2域。
109.如权利要求103-108中任一项所述的重组核酸，其中所述抗原结合域通过接头连接至所述跨膜域。
110.如权利要求103-109中任一项所述的重组核酸，其中所述TCRβ恒定胞内域包括TCRβ恒定1胞内域或TCRβ恒定2胞内域。
111.如权利要求103-110中任一项所述的重组核酸，其中所述胞内信号传导域进一步包括共刺激信号传导域。
112.如权利要求103-111中任一项所述的重组核酸，其中所述抗原结合域是人或人源化的单链可变片段(scFv)或单域抗体(sdAb)。
113.如权利要求103-112中任一项所述的重组核酸，其中所述抗原结合域与肿瘤相关抗原特异性结合。
114.如权利要求103-113中任一项所述的重组核酸，其中所编码的嵌合抗原受体(CAR)在框中表达并作为单条多肽链表达。
115.一种由权利要求103-114中任一项所述的重组核酸编码的多肽。
116.一种包括权利要求103-114中任一项所述的重组核酸分子的载体。
117.一种制备免疫效应细胞群的方法，包括用权利要求116所述的载体转导多个免疫效应细胞。
118.一种免疫效应细胞群，其中所述免疫效应细胞包括权利要求103-114中任一项所述的重组核酸。
119.如权利要求118所述的免疫效应细胞群，其中所述免疫效应细胞通过权利要求117所述的方法制备。
120.如权利要求118或119所述的免疫效应细胞群，其中在所述CAR的所述抗原结合域与细胞所表达的同源抗原结合后，所述免疫效应细胞群的至少一种促炎细胞因子的表达水平相对于可比免疫效应细胞群的所述至少一种促炎细胞因子的表达水平降低，所述可比免疫效应细胞群包含编码包括CD3ζ胞内信号传导域的CAR的核酸。
121.如权利要求118-120中任一项所述的免疫效应细胞群，其中在所述CAR的所述抗原结合域与细胞所表达的同源抗原结合后，所述免疫效应细胞群的至少一种促炎细胞因子的表达水平相对于可比免疫效应细胞群的所述至少一种促炎细胞因子的表达水平降低1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％，所述可比免疫效应细胞群包含编码包括CD3ζ胞内信号传导域的CAR的核酸。
122.如权利要求118-121中任一项所述的免疫效应细胞群，其中在存在抗原呈递细胞群的情况下，所述CAR的所述抗原结合域与细胞所表达的同源抗原结合后，所述抗原呈递细胞群的至少一种促炎细胞因子的表达水平相对于在存在可比免疫效应细胞群的情况下的可比抗原呈递细胞群的所述至少一种促炎细胞因子的表达水平降低，所述可比免疫效应细胞群包含编码包括CD3ζ胞内信号传导域的CAR的核酸。
123.如权利要求118-122中任一项所述的免疫效应细胞群，其中在存在抗原呈递细胞群的情况下，所述CAR的所述抗原结合域与细胞所表达的同源抗原结合后，所述抗原呈递细胞的至少一种促炎细胞因子的表达水平相对于在存在可比免疫效应细胞群的情况下的可比抗原呈递细胞群的所述至少一种促炎细胞因子的表达水平降低1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％，所述可比免疫效应细胞群包含编码包括CD3ζ胞内信号传导域的CAR的核酸。
124.如权利要求118-123中任一项所述的免疫效应细胞群，其中所述至少一种促炎细胞因子选自IFNγ、TNFα、IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10、IL-17、sIL2Rα、sgp130、sIL6R、MCP1、MIP1α、MIP1β和GM-CSF。
125.如权利要求120-121中任一项所述的免疫效应细胞群，其中所述至少一种促炎细胞因子的表达通过确定从所述免疫效应细胞群分泌的所述细胞因子的水平来测量，如通过本文所述的测定所测量的。
126.如权利要求122-123中任一项所述的免疫效应细胞群，其中所述至少一种促炎细胞因子的表达通过确定从所述抗原呈递细胞群分泌的所述细胞因子的水平来测量，如通过本文所述的测定所测量的。
127.如权利要求122、123或126中任一项所述的免疫效应细胞群，其中所述抗原呈递细胞群包括树突细胞、巨噬细胞或单核细胞。
128.一种药物组合物，包括权利要求118-127中任一项所述的免疫效应细胞群的至少一部分。
129.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：向所述受试者施用权利要求118-128中任一项所述的免疫效应细胞群的至少一部分。
130.一种预防或减轻人类受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的严重性的方法，所述方法包括：向所述受试者施用权利要求118-128中任一项所述的免疫效应细胞群的至少一部分。
131.如权利要求130所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
132.如权利要求129-131中任一项所述的方法，其中在施用所述免疫细胞的1、2、3、4、5、6、7、10、14、21或30天之内，所述受试者未表现出至少一种CRS症状(例如，如本文所述)。
133.如权利要求129-132中任一项所述的方法，其中所述受试者未表现出至少一种4级或5级CRS症状(例如，如本文所述)。
134.如权利要求129-133中任一项所述的方法，其中所述受试者未表现出任何4级或5级CRS症状(例如，如本文所述)。
135.如权利要求129-134中任一项所述的方法，其中在施用所述细胞(例如，细胞群，例如，免疫效应细胞群)后(例如，1小时、6小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、14天、21天、30天)，所述受试者的血清中选自IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10、IFNγ、TNFα、sIL2Rα、sgp130、sIL6R、MCP1、MIP1α、MIP1β和GM-CSF的一种或多种蛋白质的水平处于被施用所述免疫细胞之前(例如，10分钟、30分钟、1小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时)的所述受试者的血清中所述一种或多种蛋白质的水平的±20％、±15％、±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％或±1％之内。
136.如权利要求129-135中任一项所述的方法，进一步包括基于确定以下至少一项来选择受试者进行权利要求86-100中任一项所述的免疫细胞的施用：
(a)所述受试者发展出CRS的风险，
(b)如果施用了表达包括CD3ζ信号传导域的CAR的细胞，所述受试者发展出CRS的风险，
(c)所述受试者的CRS诊断，或者
(d)所述受试者的与施用表达包括CD3ζ信号传导域的CAR的细胞相关或由其诱导的CRS的诊断。
137.如权利要求136所述的方法，其中如果有以下情形，选择所述受试者进行施用：
(a)所述受试者存在发展出CRS的风险，
(b)如果施用了包括表达CAR CD3ζ信号传导域的细胞的CAR，所述受试者存在发展出CRS的风险，
(c)所述受试者已经诊断出CRS，或者
(d)所述受试者已经诊断出与施用表达包括CD3ζ信号传导域的CAR的细胞相关或由其诱导的CRS。
138.如权利要求129-137中任一项所述的方法，其中所述细胞对被施用所述细胞的受试者而言是自体的或同种异体的。
139.如权利要求129-138中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体癌症或血液学癌症。
140.如权利要求139所述的方法，其中所述癌症是实体癌症。
141.如权利要求140所述的方法，其中所述实体癌症是前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、食道癌、睾丸癌、肝癌、胰腺癌、直肠癌、甲状腺癌、子宫癌、皮肤癌、肌肉癌、软骨癌、骨癌、内皮癌、上皮癌、真皮癌、基底癌、视网膜癌、皮肤癌或脑癌。
142.如权利要求139所述的方法，其中所述癌症是血液学癌症。
143.如权利要求142所述的方法，其中所述血液学癌症是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
144.如权利要求142所述的方法，其中所述血液学癌症是B细胞急性淋巴细胞性白血病(B-ALL)、T细胞急性淋巴细胞性白血病(T-ALL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞幼淋巴细胞白血病、母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞型滤泡性淋巴瘤、大细胞型滤泡性淋巴瘤、恶性淋巴增生性病况、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常、骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、浆细胞样树突细胞肿瘤、华氏巨球蛋白血症或白血病前期。
145.一种编码外源性T细胞受体(TCR)的重组核酸，其中所述TCR包括：
(a)TCRα链，其包括i)免疫球蛋白可变重域，ii)TCRα跨膜域，和iii)任选包括TCRα胞内域的胞内信号传导域；
(b)TCRβ链，其包括i)免疫球蛋白可变轻域，ii)TCRβ跨膜域，和iii)包括TCRβ胞内域的胞内信号传导域；
其中所述免疫球蛋白可变重域和所述免疫球蛋白可变轻域形成抗原结合域；
其中所述TCR不含有功能性CD3ζ胞内信号传导域；并且
其中所述TCR不包括T细胞受体α(TCRα)可变区或T细胞受体β(TCRβ)可变区。
146.一种编码外源性T细胞受体(TCR)的重组核酸，其中所述TCR包括：
(a)TCRα链，其包括i)免疫球蛋白可变轻域，ii)TCRα跨膜域，和iii)任选包括TCRα胞内域的胞内信号传导域；
(b)TCRβ链，其包括i)免疫球蛋白可变重域，ii)TCRβ跨膜域，和iii)包括TCRβ胞内域的胞内信号传导域；
其中所述免疫球蛋白可变重域和所述免疫球蛋白可变轻域形成抗原结合域；
其中所述TCR不含有功能性CD3ζ胞内信号传导域；并且
其中所述TCR不包括T细胞受体α(TCRα)可变区或T细胞受体β(TCRβ)可变区。
147.如权利要求145或146所述的重组核酸，其中所述TCRα链进一步包括TCRα恒定域。
148.一种编码外源性T细胞受体(TCR)的重组核酸，其中所述TCR包括：
(a)TCRα链，其包括i)抗原结合域(例如，scFv)，ii)TCRα可变域，iii)TCRα恒定域，iv)TCRα跨膜域，和v)任选包括TCRα胞内域的胞内信号传导域；
(b)TCRβ链，其包括i)TCRβ可变域，ii)TCRβ恒定域，iii)TCRβ跨膜域，和iv)包括TCRβ胞内域的胞内信号传导域；并且
其中所述TCR不含有功能性CD3ζ胞内信号传导域。
149.一种编码外源性T细胞受体(TCR)的重组核酸，其中所述TCR包括：
(a)TCRα链，其包括i)TCRα可变域，ii)TCRα恒定域，iii)TCRα跨膜域，和iv)任选包括TCRα胞内域的胞内信号传导域；
(b)TCRβ链，其包括i)抗原结合域(例如，scFv)，ii)TCRβ可变域，iii)TCRβ恒定域，v)TCRβ跨膜域，和v)包括TCRβ胞内域的胞内信号传导域；并且
其中所述TCR不含有功能性CD3ζ胞内信号传导域。
150.一种由权利要求145-149中任一项所述的重组核酸编码的多肽。
151.一种包括权利要求145-149中任一项所述的重组核酸的载体。
152.一种制备免疫效应细胞群的方法，包括用权利要求151所述的载体转导免疫效应细胞群。
153.一种免疫效应细胞群，其中所述免疫效应细胞包括权利要求145-149中任一项所述的重组核酸。
154.如权利要求153所述的免疫效应细胞群，其中所述免疫效应细胞通过权利要求152所述的方法制备。
155.如权利要求153或154所述的免疫效应细胞群，其中在所述TCR的所述抗原结合域与细胞所表达的同源抗原结合后，所述免疫效应细胞群的至少一种促炎细胞因子的表达水平相对于可比免疫效应细胞群的所述至少一种促炎细胞因子的表达水平降低，所述可比免疫效应细胞群包含编码包括CD3ζ胞内信号传导域的TCR的核酸。
156.如权利要求153-155中任一项所述的免疫效应细胞群，其中在所述TCR的所述抗原结合域与细胞所表达的同源抗原结合后，所述免疫效应细胞群的至少一种促炎细胞因子的表达水平相对于可比免疫效应细胞群的所述至少一种促炎细胞因子的表达水平降低1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％，所述可比免疫效应细胞群包含编码包括CD3ζ胞内信号传导域的TCR的核酸。
157.如权利要求153-156中任一项所述的免疫效应细胞群，其中在存在抗原呈递细胞群的情况下，所述TCR的所述抗原结合域与细胞所表达的同源抗原结合后，所述抗原呈递细胞群的至少一种促炎细胞因子的表达水平相对于在存在可比免疫效应细胞群的情况下的可比抗原呈递细胞群的所述至少一种促炎细胞因子的表达水平降低，所述可比免疫效应细胞群包含编码包括CD3ζ胞内信号传导域的TCR的核酸。
158.如权利要求153-157中任一项所述的免疫效应细胞群，其中在存在抗原呈递细胞群的情况下，所述TCR的所述抗原结合域与细胞所表达的同源抗原结合后，所述抗原呈递细胞的至少一种促炎细胞因子的表达水平相对于在存在可比免疫效应细胞群的情况下的可比抗原呈递细胞群的所述至少一种促炎细胞因子的表达水平降低1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％，所述可比免疫效应细胞群包含编码包括CD3ζ胞内信号传导域的TCR的核酸。
159.如权利要求153-158中任一项所述的免疫效应细胞群，其中所述至少一种促炎细胞因子选自IFNγ、TNFα、IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10、IL-17、sIL2Rα、sgp130、sIL6R、MCP1、MIP1α、MIP1β和GM-CSF。
160.如权利要求155-156中任一项所述的免疫效应细胞群，其中所述至少一种促炎细胞因子的表达通过确定从所述免疫效应细胞群分泌的所述细胞因子的水平来测量，如通过本文所述的测定所测量的。
161.如权利要求157-158中任一项所述的免疫效应细胞群，其中所述至少一种促炎细胞因子的表达通过确定从所述抗原呈递细胞群分泌的所述细胞因子的水平来测量，如通过本文所述的测定所测量的。
162.如权利要求157、158或161中任一项所述的免疫效应细胞群，其中所述抗原呈递细胞群包括树突细胞、巨噬细胞或单核细胞。
163.一种药物组合物，包括权利要求153-162中任一项所述的免疫效应细胞群的至少一部分。
164.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：向所述受试者施用权利要求153-163中任一项所述的免疫效应细胞群的至少一部分。
165.一种预防或减轻人类受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的严重性的方法，所述方法包括：向所述受试者施用权利要求153-163中任一项所述的免疫效应细胞群的至少一部分。
166.如权利要求165所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
167.如权利要求164-166中任一项所述的方法，其中在施用所述免疫细胞的1、2、3、4、5、6、7、10、14、21或30天之内，所述受试者未表现出至少一种CRS症状(例如，如本文所述)。
168.如权利要求164-167中任一项所述的方法，其中所述受试者未表现出至少一种4级或5级CRS症状(例如，如本文所述)。
169.如权利要求164-168中任一项所述的方法，其中所述受试者未表现出任何4级或5级CRS症状(例如，如本文所述)。
170.如权利要求164-169中任一项所述的方法，其中在施用所述细胞(例如，细胞群，例如，免疫效应细胞群)后(例如，1小时、6小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、14天、21天、30天)，所述受试者的血清中选自IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10、IFNγ、TNFα、sIL2Rα、sgp130、sIL6R、MCP1、MIP1α、MIP1β和GM-CSF的一种或多种蛋白质的水平处于被施用所述免疫细胞之前(例如，10分钟、30分钟、1小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时)的所述受试者的血清中所述一种或多种蛋白质的水平的±20％、±15％、±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％或±1％之内。
171.如权利要求164-170中任一项所述的方法，进一步包括基于确定以下至少一项来选择受试者进行权利要求86-100中任一项所述的免疫细胞的施用：
(a)所述受试者发展出CRS的风险，
(b)如果施用了表达包括CD3ζ信号传导域的CAR的细胞，所述受试者发展出CRS的风险，
(c)所述受试者的CRS诊断，或者
(d)所述受试者的与施用表达包括CD3ζ信号传导域的CAR的细胞相关或由其诱导的CRS的诊断。
172.如权利要求171所述的方法，其中如果有以下情形，选择所述受试者进行施用：
(a)所述受试者存在发展出CRS的风险，
(b)如果施用了包括表达CAR CD3ζ信号传导域的细胞的CAR，所述受试者存在发展出CRS的风险，
(c)所述受试者已经诊断出CRS，或者
(d)所述受试者已经诊断出与施用表达包括CD3ζ信号传导域的CAR的细胞相关或由其诱导的CRS。
173.如权利要求164-172中任一项所述的方法，其中所述细胞对被施用所述细胞的受试者而言是自体的或同种异体的。
174.如权利要求164-173中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体癌症或血液学癌症。
175.如权利要求174所述的方法，其中所述癌症是实体癌症。
176.如权利要求175所述的方法，其中所述实体癌症是前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、食道癌、睾丸癌、肝癌、胰腺癌、直肠癌、甲状腺癌、子宫癌、皮肤癌、肌肉癌、软骨癌、骨癌、内皮癌、上皮癌、真皮癌、基底癌、视网膜癌、皮肤癌或脑癌。
177.如权利要求174所述的方法，其中所述癌症是血液学癌症。
178.如权利要求177所述的方法，其中所述血液学癌症是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
179.如权利要求177所述的方法，其中所述血液学癌症是B细胞急性淋巴细胞性白血病(B-ALL)、T细胞急性淋巴细胞性白血病(T-ALL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞幼淋巴细胞白血病、母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞型滤泡性淋巴瘤、大细胞型滤泡性淋巴瘤、恶性淋巴增生性病况、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常、骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、浆细胞样树突细胞肿瘤、华氏巨球蛋白血症或白血病前期。
技术总结
本公开内容提供了离体扩增T细胞的方法，包括使T细胞接触与TCR Vβ区结合的抗体分子。在一些实施方案中，T细胞包括编码外源性细胞受体例如嵌合抗原受体(CAR)或外源性T细胞受体(TCR)的一个或多个核酸分子。
技术研发人员：A·洛;史蒂芬·阿尔金斯塔尔;
受保护的技术使用者：马伦戈治疗公司;
技术研发日：2020.01.03
技术公布日：2021.10.22
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