一种谷胱甘肽茶多酚组合物及其应用和保健食品的制作方法

1.本发明涉及保健食品技术领域，特别涉及一种谷胱甘肽茶多酚组合物及其应用和保健食品。


背景技术：

2.长期大剂量饮酒可致酒精性肝病，表现为肝脏发生不同程度的脂肪变性、炎症和坏死，继而形成肝纤维化和肝硬化，目前酒精性肝病的治疗国内外尚无确切的药物。
3.谷胱甘肽(gsh)是一种具有重要生理活性的物质，是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸通过肽键缩合而成的三肽化合物，是一种用途广泛的活性多肽。其化学名称为γ-l-谷氨酰-l-半胱氨酰-甘氨酸。还原型谷胱甘肽是人类细胞质中自然合成的一种肽，以肝脏中含量最高。它通过中和氧自由基，减少自由基对生物膜和dna的攻击、抗脂质过氧化损伤及解毒作用发挥其对肝脏的保护作用。还原性谷胱甘肽在维持细胞功能中起重要作用，它是甘油醛酸脱氢酶的辅基，又是乙二醛酶及丙糖脱氢酶的辅酶，参与体内三羧酸循环及糖代谢。能激活多种酶，从而促进糖、脂肪及蛋白质代谢，并能影响细胞的代谢过程。外源性谷胱甘肽可以启动内源性谷胱甘肽的活性，体内还原性谷胱甘肽大量存在于肝细胞中，并可与众多有毒的化学物质及其他代谢产物结合而起解毒作用，有保护肝脏，灭活激素、促进胆酸代谢等功能。gsh是非酶性抗氧化剂，是细胞合成的抗氧化剂，通过其巯基氧化-还原态的转换，作为可逆的供氧体，主要为在细胞内的水相提供氧化保护。
4.研究用白酒灌胃成功制造了大鼠酒精性肝病模型，病理表现主要为肝细胞脂肪变性及炎细胞浸润、小坏死灶及桥接坏死。通过用还原型谷胱甘肽(阿拓莫兰)、多烯磷脂酞胆碱(易善复)、甘利欣的治疗，大鼠血清alt、a st、γ-gt值明显降低(与模型组比较p＜0.05)，肝组织的病理分级明显好转，证实了还原型谷胱甘肽、多烯磷脂酞胆碱、甘利欣确有良好治疗大鼠酒精性肝病的作用。另外通过阿拓莫兰组、易善复组和甘利欣组三组的比较表明，还原型谷胱甘肽在治疗酒精性肝病方面优于多烯磷脂酞胆碱和甘利欣，特别是优于甘利欣。还原型谷胱甘肽作为治疗酒精性肝病的良好药物，值得推广。
5.茶在我国有数千年的饮用历史。唐代的《本草拾遗》中说：“诸药为各病之药，茶为万药之药”。明朝李时珍在《本草纲目》中也记载说：“茶苦而寒，最能降火，火为百病之因，火降则百病清也”。近年来的大量实验研究证实，茶多酚具有抗氧化、消除自由基等生物活性，茶多酚有很强的抗氧化活性，而脂质过氧化在各种肝病的发病机制中起十分重要的作用，因此茶多酚在肝病治疗中的应用越来越受到重视。茶多酚是天然植物茶叶中分离提纯的30多种酚类化合物的复合体，约占茶叶干物质总量的20％-30％。茶多酚类化合物包括黄烷醇、黄烷双醇、类黄酮和酚酸4类物质。其中以儿茶素类为主的黄烷醇类化合物占总量的65％-80％。儿茶素类化合物主要包括表儿茶素(cat.echin，ec)、表没食子儿茶素(epigallochatechin，egc)、表儿茶素没食子酸醅 (epicatechin gallate，ecg)和表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatcehin， egcg)四种物质。
6.国外研究证实，绿茶多酚因其结构中含有多酚类羟基，极易被氧化成醌类而提供
质子h，所以具有很强的抗氧化作用。本研究造模同时用绿茶多酚干预10周后结果显示，小鼠体质量较模型组增加，肝质量指数降低并接近正常组，血清alt和ast水平下降，肝细胞脂肪空泡减少，肿胀和炎症病变改善；肝细胞mda含量和xod活性降低、gsh含量增加，sod、gsh-px和 na -k -atp酶活性升高。表明绿茶多酚对小鼠酒精性肝损伤具有保护作用，对小鼠酒精性肝损伤早期出现的脂肪变性和炎症病理学改变具有一定逆转和抑制其发展的作用，其作用机理与绿茶多酚清除自由基、防止其爆发性增加，抑制脂质过氧化作用、减少肝细胞膜氧化损伤从而稳定细胞膜na -k -atp 酶功能有关。
7.目前还未见将谷胱甘肽与茶多酚配伍用于肝损伤辅助保护的报道。


技术实现要素：

8.有鉴于此，本发明提供了一种谷胱甘肽茶多酚组合物及其应用和保健食品。该组合物是以主要原料谷胱甘肽、茶多酚配伍组成，用于对肝损伤有辅助保护功能，具有协同效应。
9.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
10.本发明提供了一种谷胱甘肽茶多酚组合物，由谷胱甘肽和茶多酚组成，谷胱甘肽与茶多酚的质量比为(25～30)∶(10～15)。
11.作为优选，谷胱甘肽与茶多酚的质量比为28∶13.5。
12.本发明还提供了谷胱甘肽茶多酚组合物在制备对肝损伤有辅助保护功能的保健食品中的应用。
13.在本发明提供的具体实施例中，肝损伤为化学性肝损伤。
14.本发明还提供了一种保健食品，保健食品包括原料和辅料，原料由谷胱甘肽和茶多酚组成，谷胱甘肽与茶多酚的质量比为(25～30)∶(10～15)。
15.作为优选，谷胱甘肽与茶多酚的质量比为28∶13.5。
16.作为优选，保健食品的剂型为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂或口服液。
17.在本发明具体的实施例中，保健食品的剂型为片剂，以重量份计，片剂配方如下：
[0018][0019]
作为优选，以重量份计，片剂配方如下：
[0020][0021][0022]
作为优选，保健食品的制备方法包括如下步骤：
[0023]
将谷胱甘肽、茶多酚、蔗糖、微晶纤维素混合，得到混合粉；
[0024]
混合粉用80％～90％乙醇制软材，制粒，干燥至水分5％以下，整粒；
[0025]
制得的干颗粒加入硬脂酸镁混合，压片，包衣。
[0026]
在本发明具体的实施例中，保健食品的制备方法包括如下步骤：
[0027]
1.粉碎、过筛：蔗糖粉碎过80目筛备用；谷胱甘肽、茶多酚、微晶纤维素、硬脂酸镁分别过80目筛备用；
[0028]
2.混合：将谷胱甘肽、茶多酚、蔗糖、微晶纤维素，三维混合机混合30 分钟，得到混合粉；
[0029]
3.制粒：混合粉用85％乙醇制软材，18目制粒，50℃干燥至水分5％以下， 16目整粒；
[0030]
4.总混：制得的干颗粒加入配方比例的硬脂酸镁，混合15分钟；
[0031]
5.压片：压片，控制片重；
[0032]
6.包衣：取配方比例薄膜包衣剂，用70％乙醇配制成浓度8％的包衣液，将素片投入包衣机中包衣。
[0033]
在本发明具体的实施例中，薄膜包衣剂的配方为：羟丙甲纤维素、聚维酮k30、聚乙二醇6000、滑石粉、二氧化钛、柠檬黄、亮蓝。
[0034]
本发明提供了一种谷胱甘肽茶多酚组合物及其应用和保健食品。该组合物由谷胱甘肽和茶多酚组成，谷胱甘肽与茶多酚的质量比为(25～30)∶ (10～15)。本发明具有如下技术效果：
[0035]
本发明组合物是以主要原料谷胱甘肽、茶多酚配伍组成，在特定配比下具有显著的抑制急性酒精肝损伤后肝组织中tg、mda含量升高的作用，用于对肝损伤有辅助保护功能，且具有协同效应。
[0036]
效果试验中，经口灌胃给予小鼠不同剂量的谷胱甘肽茶多酚片30天后，低、中、高剂量组能抑制急性酒精肝损伤后第16小时肝组织中tg含量的升高；中、高剂量组能抑制急性酒精肝损伤第16小时肝组织中mda含量的升高。肝脏病理检查结果表明：样品各剂量组动物脂滴在肝脏的分布、范围和面积的积分低于乙醇模型对照组。提示该样品对化学性肝损伤有辅助保护功能作用。
具体实施方式
[0037]
本发明公开了一种谷胱甘肽茶多酚组合物及其应用和保健食品，本领域技术人员
可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0038]
还原型谷胱甘肽和茶多酚作为治疗酒精性肝病药物的研究如下：
[0039]
研究采用ghs治疗酒精性肝病，治疗组临床疗效总效率为94.3％，显著高于对照组(p＜0.05)；治疗后，两组alt、ast、ggt、tg水平与治疗前比较均显著下降(p＜0.05)；且治疗组与对照组比较也显著下降(p＜0.05)。说明ghs治疗ald具有改善患者肝功能和降低血脂的作用。分析其原因可能在于：(1)由于ghs参与体内多种生化代谢反应，具有补充内源谷胱甘肽不足、纠正低氧血症、清除自由基、保护肝脏的合成、解毒功能等药理作用，因此具有保护肝细胞、增强肝脏代谢功能、加速肝内脂质的转输、提高肝细胞对脂质的清除能力及对酒精的代谢能力；(2)ghs能降低血脂，促进脂质排泄，减少脂质的吸收，从而达到治疗的目的。
[0040]
由于血中gsh主要源于肝脏等器官，所以血浆gsh水平无疑是间接反映有关器官，如肝、肾内gsh水平的较理想指标。在许多病理情况下如糖尿病、酒精性肝病、肝硬化、外源性毒物致过氧化时，gsh水平下降。酒精性肝病患者肝脏中的gsh含量下降，各种氧化自由基增加，通过脂质过氧化作用，引起肝细胞膜、线粒体膜等损害，并直接使肝细胞巯基酶类活性改变而导致肝细胞变性坏死。gsh具有广泛的抗氧化作用，可与酒精的代谢产物乙醛、氧自由基结合，使其失活，并加速自由基的排泄，抑制或减少肝细胞膜及线粒体膜过氧化脂质体形成，保护肝细胞。大部分药物在肝脏经细胞色素p (cyp)代谢产生亲电子基、自由基等活性代谢产物，通常与gsh结合而解毒，并不产生肝损伤。
[0041]
肝纤维化(hepatic fibrosis)是指肝脏内弥漫性细胞外基质，特别是胶原的过度沉积，它不是一种独立的疾病，多种慢性肝脏疾病均可引起肝纤维化。其病因大致可分为感染性(慢性乙型、丙型和丁型病毒性肝炎，血吸虫病等)，先天性代谢缺陷(肝豆状核变性、血色病、α1-抗胰蛋白酶缺乏症等)及化学代谢缺陷(慢性酒精性肝病、慢性药物性肝病)及自身免疫性肝炎、原发性肝汁性肝硬化和原发性硬化性胆管炎等。而酒精性肝纤维化与一般酒精性肝病一样，其症状无特异性。
[0042]
将96例酒精性肝纤维化患者随机分为对照组和治疗组各48例，对照组采用甘草酸二胺治疗，治疗组采用还原型谷胱甘肽治疗，对两组患者治疗前后肝功能和肝纤维化指标进行比较分析。结果两组患者治疗后tbil、alt和 ast等肝功能指标，以及ln、ha和c-iv等肝纤维化指标均有所下降，且与对照组相比，治疗组各指标均明显降低，差异具有统计学意义(p＜0.05)。结论采用还原型谷胱甘肽对酒精性肝纤维化进行保护，其疗效确切，效果显著，是酒精性肝纤维化患者较为理想的治疗药物之一。其作用机制是结合体内氧自由基，逐步转化为易代谢的酸类物质，并将其迅速排出体外，进而稳定和维护机体氧化、还原系统，并通过转甲醛和丙氨基的反应，有效促使肝细胞的合成和解毒等作用。在治疗酒精性肝纤维化方面，还原型谷胱甘肽通过酒精在肝脏内的毒性代谢产物乙醛和氧自由基等结合，从而严格抵制肝脏组织内氧化物的产生和甘油三酯的大量堆积，有效防止酒精导致的肝脏细胞变性和坏死，以及肝纤维化等功能性损害的发生。
[0043]
有机磷农药经吞服后在肝脏中浓度最高，且易导致全身炎症反应综合征，使机体释放大量炎症递质和氧自由基等，这些物质严重破坏肝细胞膜及细胞器，导致肝功能受损。
gsh可直接通过自身代谢拮抗氧自由基毒性，清除体内的超氧离子及其他自由基，防止肝组织损伤，同时其在体内γ-谷氨酸循环中提供谷氨酰基以维持细胞的正常代谢与细胞膜完整性，并促进胆酸代谢。
[0044]
谷胱甘肽广泛存在于自然界中，动物肝脏、酵母和小麦胚芽中都含有丰富的谷胱肽，其含量高达100～1000mg/100g。人和动物的血液中也含有较多的谷胱甘肽，而植物组织中的谷胱甘肽含量则较低。
[0045]
目前国际上对谷胱甘肽无用量方面的规定。谷胱甘肽上世纪五十年代在日本、美国就已广泛用作膳食补充剂，常用量在400mg/d。我国保健食品技术审评中也尚无相关规定。经资料检索及结合同类产品，本品的谷胱甘肽食用量为每日每人300mg。
[0046]
茶多酚(tp)可以保护和再生vc、ve、谷胱甘肽(gsh)等抗氧化剂，发挥协同增效作用。已有研究结果表明，在tp抗ldl的氧化过程中，可提供电子使α-维生素e部分再生和循环利用，并且可能同时以水溶性和脂溶性两种方式清除自由基，比单一的还原剂更有效地保护α-维生素e。tp具有很强的抗氧化活性，对氧自由基有很强的清除作用，其对自由基的清除率可达 84％。这与tp的结构基础有着密切的关系。tp含有较多的酚羟基，极易被氧化为醌类而提供质子h，将单线态氧1o2还原成活性较低的三线态氧3o2，减少氧自由基产生的可能性。另外，酚羟基能夺取过氧化过程中产生的脂质过氧化自由基，生成活性较低的多酚自由基，打断自由基氧化链反应，有效清除体内的自由基。
[0047]
茶多酚(tp)可以抑制氧化酶和提高抗氧化酶活性体内许多氧化酶如体内外脂氧化酶(lox)、黄嘌呤氧化酶(xod)、环氧酶(cox)、细胞色素p450酶系(cyp450)、髓过氧化物酶(mpo)等都可催化自由基的生成，tp对它们有抑制作用，可预防病理条件下自由基爆发性生成；同时，tp能够激活和提高许多抗氧化酶如sod、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)、过氧化氢酶(cat)等的活性，从而高效清除自由基。
[0048]
茶多酚(tp)可以螯合金属离子金属离子常促进或引起新的脂质过氧化反应，通过螯合金属离子，能更为显著地发挥抗氧化作用。
[0049]
儿茶素类化合物对大鼠肝损伤模型，在改善肝功能的同时，具有抑制肝内胶原纤维增生的作用。饶光宇等实验发现，茶色素能够显著降低由ccl4、硫代乙酰胺、d-氨基半乳糖、醋氨酚、氯化镉、乙醇、乙硫氨酸引起的血清 alt和肝tg升高，明显减轻ccl4引起的肝细胞坏死，并观察到茶多酚能显著抑制肝脏过氧化脂质的形成，认为茶多酚的抗氧化效应是其发挥保肝作用的机制之一。
[0050]
zhong等研究表明，茶多酚能使缺血再灌注损伤的肝脏转氨酶释放减少，几乎完全阻断其病理改变，另外还发现肝脏缺血再灌注后，nf-κb活化， tnf-αmrna及其蛋白表达增加，这些效应均可被茶多酚阻断，提示茶多酚能减少毒性细胞因子的形成，对缺血再灌注损伤的肝脏有保护作用。
[0051]
raederstorff等给喂饲高胆固醇饲料的wistar大鼠同时喂饲egcg，发现其血清总胆固醇(tc)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)水平明显较对照组低，而血清中高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)、甘油三酯水平没有明显变化，并观察到 egcg能明显减少肠道对胆固醇的吸收(因胆固醇分子在消化道的溶解度改变所致)。
[0052]
肖继平等研究绿茶提取物对ccl4所致大鼠肝硬化的影响，结果发现绿茶提取物能使肝脏mda、羟脯氨酸明显降低，组织病理学上使肝坏死和肝纤维化程度减轻，另外tgf-β1
中mrna在肝组织中的表达也降低。认为绿茶提取物的抗纤维化作用与其抗氧化作用导致肝组织tgf-β1中mrna表达降低，从而抑制tgf-β1介导的纤维增生、沉积过程有关。但绿茶提取物并不能完全抑制ccl4介导的肝纤维化，可能ccl4介导的肝纤维化有多种机制，自由基损伤只是其中之一。
[0053]
张幸国等进行了茶多酚抗大鼠纤维化作用的研究，大鼠随机分成5组，对其中4组的每只大鼠酒精灌胃形成酒精性肝纤维化，其中3组大鼠每天分别以不用剂量茶多酚灌胃；另设对照组。在24周时观察分析各组大鼠的肝脏组织病理情况并进行定量分析，同时测定大鼠的血清抗脂质过氧化指标及血清内毒素水平，发现经茶多酚干预的各组酒精灌胃大鼠的肝纤维化程度较单纯酒精组轻；抗脂质过氧化、血清内毒素指标较单纯酒精灌胃组大鼠也均有不同程度改善。
[0054]
王岳飞等观察了小鼠酒醉时的兴奋性、共济失调能力以及其乙醇半数致死量(ld50)；并以食用茶多酚后30min再以酒精灌胃的各项指标进行比较。发现茶多酚能够有效抑制小鼠的兴奋性，降低其共济失调能力，提高其乙醇半数致死量。这表明茶多酚对实验性小鼠有显著的解酒作用。
[0055]
国外研究证实，绿茶多酚因其结构中含有多酚类羟基，极易被氧化成醌类而提供质子h，所以具有很强的抗氧化作用。本研究造模同时用绿茶多酚干预10周后结果显示，小鼠体质量较模型组增加，肝质量指数降低并接近正常组，血清alt和ast水平下降，肝细胞脂肪空泡减少，肿胀和炎症病变改善；肝细胞mda含量和xod活性降低、gsh含量增加，sod、gsh-px和 na -k -atp酶活性升高。表明绿茶多酚对小鼠酒精性肝损伤具有保护作用，对小鼠酒精性肝损伤早期出现的脂肪变性和炎症病理学改变具有一定逆转和抑制其发展的作用，其作用机理与绿茶多酚清除自由基、防止其爆发性增加，抑制脂质过氧化作用、减少肝细胞膜氧化损伤从而稳定细胞膜na -k -atp 酶功能有关。
[0056]
标志性成分的选择及食用安全性：
[0057]
本发明组合物的标志性成分是根据本品所使用原料及原料相关研究文献确定的，本品中各原料均具有对化学性肝损伤有辅助保护功能的文献报道，且通过动物功能试验证实，各原料组方后具有对化学性肝损伤有辅助保护保健功能。本发明选择谷胱甘肽、茶多酚作为标志性成分。
[0058]
标志性成分中谷胱甘肽依据《进口药品注册标准jx20030297》中“有关物质”项下的测定方法；茶多酚依据qb 2154-1995《食品添加剂茶多酚》规定进行检验，用分光光度法测定。三批产品检测结果表明，本产品质量稳定，故这些指标可以作为本品的标志性成分。
[0059]
谷胱甘肽的安全性研究：
[0060]
谷胱甘肽广泛存在于自然界中，动物肝脏、酵母和小麦胚芽中都含有丰富的谷胱肽，其含量高达100～1000mg/100g。人和动物的血液中也含有较多的谷胱甘肽，为内源性三肽，而植物组织中的谷胱甘肽含量则较低。
[0061]
谷胱甘肽为美国fda公布的“公认安全使用物质”(gras)，“gras”的确定是由食品工业界依据相关的法律法规，公开的科学证据或长期使用的历史，以及其在特定使用条件下的安全性得审慎评估做出的决定。在美国fda网站的谷胱甘肽的gras声明中，认为谷胱甘肽在食品、饮料、糕点、糖果产品中，推荐用量为0.004-0.667％。
[0062]
谷胱甘肽上世纪五十年代在日本、美国已广泛用作膳食补充剂，常用量在400mg/
d.研究认为美国人平均摄入量448mg/人/天，或8.4mg/kg体重/天，美国人口中90％的人从食物中摄取谷胱甘肽的量为961mg/人/天或20.1mg/kg 体重/天。而本品的谷胱甘肽食用量为每日每人300mg，故可认为安全无毒。
[0063]
gras声明中，小鼠急性毒性研究表明，半数致死量大于10000mg/kg体重(口服、皮下)，5000mg/kg体重(静脉注射)。对比格犬静脉注射最高剂量300mg/kg体重，尸检，测定器官重量，并进行组织染色，显微检查，与对照组相比无明显差异，作者认为静脉注射300mg/kg体重剂量没有危害作用。发育毒性研究认为1000mg/kg体重(小鼠)，300mg/kg体重(兔子)被认为是无不良危害剂量。
[0064]
茶多酚的安全性研究：
[0065]
急性毒性作用：宋小鸽等对小鼠进行了茶多酚的急性毒性实验，结果发现茶多酚的ld50为2.499g/kg，毒性极低。长期毒性作用：对家犬以大、中、小3个剂量分别连续饲喂茶多酚90d，观察到服药前、服药中和停药后家犬的活动情况、毛发、粪便、心电图、血尿常规、各项生化指标均未见异常，从而提示茶多酚毒性极低，是一种安全的药物。杨解人等做了类似的实验也得出同样的结论，并且认为茶多酚对家犬无毒反应剂量大约为125mg/(kg.d)。宋小鸽等对小鼠进行了茶多酚的长期毒性实验，动物长期服用茶多酚未出现体重、血常规、肝肾功能及脏器组织的毒性变化。据此得出结论：茶多酚属低毒性，对大鼠0.8g/kg
·
d-1
的剂量相当于成人用量的100倍以上，提示临床用药量是安全的。
[0066]
上述研究结果表明，经资料检索及结合同类产品，一般茶多酚的日服用量为0.2～0.6g，本品的茶多酚食用量为每日每人0.15g，故可认为安全无毒。
[0067]
本发明提供的谷胱甘肽茶多酚组合物及其应用和保健食品中所用原料或辅料均可由市场购得。
[0068]
产品配方中各原料的来源及要求
[0069]
1原料
[0070]
1.1谷胱甘肽本品应符合《谷胱甘肽进品药品注册标准jx20030297》的相关规定，生产厂家为协和发酵工业株式会社。
[0071]
1.2茶多酚本品是以茶叶为原料，经提取而制成的以儿茶素为主体的多酚类化合物，应符合qb2154-1995《食品添加剂茶多酚》的要求。生产厂家宁波中药制药有限公司。
[0072]
2辅料
[0073]
2.1微晶纤维素本品应符合《中华人民共和国药典》(2010年版)二部的要求。购自北京凤礼精求商贸有限责任公司。生产厂家为湖州展望药业有限公司。
[0074]
2.2蔗糖本品应符合《中华人民共和国药典》(2010年版)二部的要求，购自北京凤礼精求商贸有限责任公司。生产厂家为湖南九典制药有限公司。
[0075]
2.3硬脂酸镁本品应符合《中华人民共和国药典》(2010年版)二部的要求，购自北京凤礼精求商贸有限责任公司。生产厂家为湖州展望药业有限公司。
[0076]
2.4薄膜包衣剂(绿色)本品应符合津食药监准字f20060004的要求，购自天津爱勒易医药材料有限公司。
[0077]
主要设备：
[0078]
设备名称型号生产厂家水冷式粉碎机wsx-250天津市中药机械厂
三维运动混合机hs-400江阴嘉源药化设备有限公司高效湿法混合制粒机ghl-250中国常州市益民干澡设备有限公司摇摆式颗粒机lyk-160d丹东市制药机械有限公司热风循环烘箱ct-c-1常州市广博干燥设备有限公司全自动高速压片机zpt-23北京翰林航宇科技发展有限公司荸荠式糖衣机by-1000宝鸡制药机械厂电子数粒装瓶机czg80/16a北京翰林航宇科技发展有限公司
[0079]
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0080]
实施例1组合物配方
[0081]
本实施例组合物由谷胱甘肽、茶多酚组成，含量见下表。
[0082]
表1谷胱甘肽茶多酚组合物配比
[0083]
项目指标谷胱甘肽，g/100g28.0茶多酚，g/100g13.5
[0084]
试验例1片剂工艺优选过程
[0085]
1.辅料的选择
[0086]
片剂常用的填充剂有淀粉、糊精、蔗糖、微晶纤维素等，这些辅料既可以作为填充剂，又有一定的崩解作用。本品原料为谷胱甘肽和茶多酚，为提高产品稳定性及掩盖片芯颜色，本品设计包薄膜衣，所以需要片芯有一定的硬度，还要保证崩解合格。故以片芯硬度、脆碎度、崩解时间、压片的难易程度等为指标，分别取400片配方量原料与下表中的辅料配伍，结果见表2、表3：
[0087]
表2辅料的筛选
[0088]
处方12345原料混合粉(g)9090909090淀粉(g)12
--
1212微晶纤维素(g)545454
--
糊精(g)-12-54-蔗糖(g)
--
12-54
[0089]
表3辅料筛选结果
[0090][0091]
结果表明，处方3制粒容易，所得颗粒均匀，压片容易，硬度适中，脆碎度合格，崩解时间合格，且所得片芯光洁美观。故初步确定辅料选用微晶纤维素和蔗糖，微晶纤维素用量为135g/1000片，蔗糖用量为30g/1000片，片重0.39g，每日服用2次，每次1片，蔗糖用量可以做微量调整。
[0092]
2.混合时间考察：
[0093]
待确定了辅料种类和用量后，对物料混合时间进行了考察，取处方比例的谷胱甘肽、茶多酚、微晶纤维素，蔗糖粉，分别混合10、20、30分钟考察物料混合均匀性，分别观察性状，并测定含量较低的茶多酚含量，结果见表4：
[0094]
表4混合时间考察结果
[0095]
混合时间(min)外观茶多酚含量rsd(％)10色泽不均620色泽不均2.130色泽均一1.6
[0096]
由结果看出，混合30分钟后其物料色泽均一，茶多酚含量均匀，表明物料已经混合均匀，故确定混合时间为30分钟。
[0097]
3.润湿剂的选择
[0098]
本品原料为谷胱甘肽和茶多酚，谷胱甘肽纯度较高，水溶性较好；茶多酚属提取物，具有一定的吸湿性，直接用水制粒，物料太粘，无法制粒，故选择不同浓度的乙醇作为湿润剂，以制粒的难易程度筛选润湿剂。具体操作如下：取谷胱甘肽60g、茶多酚30g、微晶纤维素54g、蔗糖粉12g，共3份，混合均匀，分别用不同浓度的乙醇制软材，18目筛制粒，50℃干燥，16目筛整粒，结果见表5：
[0099]
表5润湿剂的选择试验结果
[0100]
干粉量润湿剂用量制粒现象156g75％乙醇25ml粘筛，不易制粒156g85％乙醇30ml易制粒，粒度较好156g90％乙醇40ml能制粒，太散
[0101]
根据以上结果，以85％乙醇为润湿剂颗粒制备容易，粒度较好，故确定用85％乙醇
为润湿剂。
[0102]
4.颗粒干燥时间选择
[0103]
颗粒的含水量对压片有一定的影响，故考察了颗粒干燥时间，结果见表6：
[0104]
表6颗粒干燥时间考察结果
[0105][0106][0107]
结果表明，干燥时间1小时后，压片片面光洁，完整，故确定颗粒干燥时间为1小时，水分控制在5％以下。
[0108]
5.润滑剂用量选择
[0109]
硬脂酸镁是一种优良的压片润滑剂，本品选用硬脂酸镁为润滑剂，通过试验对其用量进行了考察，结果见表7：
[0110]
表7润滑剂用量考察结果
[0111][0112]
结果表明，硬脂酸镁用量为1.17g/1000片时润滑作用较好，如果用量增加，则不易混匀，片面有白点情况，故确定硬脂酸镁用量为1.17g/1000片。
[0113]
6.包衣工艺
[0114]
为了增加片剂的稳定性，掩盖气味，故对素片进行薄膜包衣。直接采用市售胃溶型薄膜包衣剂(绿色)为包衣剂，按使用说明用70％乙醇配制成浓度为8％的溶液，以500片素片包衣，考察包衣粉的用量，结果见表8：
[0115]
表8包衣粉用量考察
[0116]
[0117]
结果试验1、2不能完全掩盖素片，片面不光洁，而试验3包衣片表面光洁，衣层均匀，故确定薄膜包衣剂的投料量为15g/1000片，包衣增重约3％。
[0118]
综上，本品制备工艺确定为：取配方量的谷胱甘肽、茶多酚、蔗糖粉、微晶纤维素，混合30分钟，混合粉用85％乙醇制软材，18目筛制粒，50℃干燥至水分5％以下，16目筛整粒，加入配方比例的硬脂酸镁，混合15分钟，压片，控制片重0.39g。用70％的乙醇制成浓度8％的包衣液，将素片投入包衣机中包衣，包衣增重约3％，装瓶，每瓶60片，即得。
[0119]
本品配方定为：
[0120]
表9配方
[0121]
物料名称投料量(1000片)谷胱甘肽151.2g茶多酚72.9g微晶纤维素135g蔗糖28.83g硬脂酸镁1.17g薄膜包衣剂(绿色)15g
[0122]
本品素片重为0.39g，包衣增重按3％计，包衣片重为0.4g，故本品规格为0.4g/片。
[0123]
按确定工艺条件进行了三批中试验证。验证结果表明，本产品配方工艺稳定可靠，耐用性强，适合产业化生产。
[0124]
实施例2片剂产品配方及制备方法
[0125]
一、片剂配方
[0126]
表10谷胱甘肽茶多酚片配方
[0127][0128][0129]
其中，薄膜包衣剂(绿色)组成：羟丙甲纤维素、聚维酮k30、聚乙二醇6000、滑石粉、二氧化钛、柠檬黄、亮蓝。
[0130]
以上原料共制成1000片，每片0.4g；
[0131]
食用方法及食用量：每日2次，每次1片；
[0132]
保健功能：对化学性肝损伤有辅助保护功能。
[0133]
二、制备方法
[0134]
1.粉碎、过筛：蔗糖粉碎过80目筛备用；谷胱甘肽、茶多酚、微晶纤维素、硬脂酸镁分别过80目筛备用。
[0135]
2.混合：将谷胱甘肽、茶多酚、蔗糖粉、微晶纤维素，三维混合机混合 30分钟，得到混合粉；
[0136]
3.制粒：混合粉用85％乙醇制软材，18目制粒，50℃干燥至水分5％以下， 16目整粒。
[0137]
4.总混：制得的干颗粒加入配方比例的硬脂酸镁，混合15分钟。
[0138]
5.压片：压片，控制片重0.39g。
[0139]
6.包衣：取配方比例薄膜包衣剂(绿色)，用70％乙醇配制成浓度8％的包衣液，将素片投入包衣机中包衣，包衣增重约3％。
[0140]
7.内包装：口服固体药用高密度聚乙烯瓶包装，每瓶60片。
[0141]
8.外包装：贴标签，装盒，装箱；
[0142]
9.检验入库：成品经检验合格后，入库。
[0143]
备注：1～7的生产操作要求洁净度10万级。
[0144]
试验例2效果验证试验
[0145]
1.材料与方法
[0146]
1.1样品：谷胱甘肽茶多酚片经粉碎后供试。
[0147]
1.2实验动物：上海斯莱克实验动物有限责任公司提供的清洁级icr健康雄性小鼠100只，体重18～22g，许可证号：scxk(沪)2007-0005，动物按体重随机分成5组，每组10只。
[0148]
1.3剂量选择：该样品人推荐量为0.8g/d，即0.0133g/kg bw
·
d(成人体重以60kg计)，按人推荐量的5倍、10倍、30倍设三个剂量组，分别为 0.0667g/kgbw、0.133g/kgbw、0.400g/kgbw。低、中、高剂量组分别按3.33、 6.67、20.0mg/ml浓度配制，另设溶剂对照组(蒸馏水)和急性酒精性肝损伤模型对照组。酒精溶剂选用蒸馏水，乙醇浓度为50％。
[0149]
1.4饲养环境：福建省疾控中心spf级动物实验室，许可证号：syxk(闽) 2007-0006。
[0150]
1.5受试物给予途径：动物每日按0.02ml/g体重经口灌胃，连续30天。
[0151]
1.6主要仪器与试剂：722可见分光光度计(毒理018)；日立7060c全自动生化分析仪(毒理072)；bx-51显微镜(毒理055)。生化试剂盒购自南京建成生化试剂有限公司；分析纯乙醇购自上海化学试剂一厂，用蒸馏水制成为50％(v/v)乙醇浓度。
[0152]
1.7实验方法：
[0153]
三个剂量组动物每日经口灌胃给予受试物，溶剂对照组和模型对照组给予蒸馏水，连续30天。动物每周称重两次，以调整受试物剂量，自由饮食饮水。于实验第30天将各组动物称重，模型组及各剂量组动物按0.012ml/gbw一次经口给予50％乙醇染毒，溶剂对照组给予蒸馏水，禁食，各受试组经酒精染毒16小时后，取部分肝组织，匀浆，测定肝组织中tg、gsh、mda含量，同时取肝脏进行组织病理学检查。
[0154]
1.8实验数据统计方法：实验数据以spss软件进行统计，溶剂对照组和急性酒精肝损伤模型对照组比较用t检验；各样品组与急性酒精肝损伤模型对照组比较用单因素方差分析。经方差齐性检验，方差齐的实验数据采用lsd 法进行统计分析，对方差不齐或非正态的买验数据先进行变量转换再进行统计。
[0155]
2.结果
[0156]
2.1该样品对小鼠体重的影响：
[0157]
该样品各组小鼠的初始体重经方差分析，差异无统计学意义(p＞0.05)，即小鼠的初始体重在各组间较为均衡；经口灌胃30天后，该样品各组小鼠的体重增长值经方差分析，差异无统计学意义(p＞0.05)，即该样品对小鼠的体重增长无影响。结果见表11。
[0158]
表11各组小鼠的初始体重、结束体重、增重(g)
[0159][0160]
2.2该样品对肝组织中tg、gsh、mda含量的影响：
[0161]
试验结束时，急性酒精性肝损伤模型对照组小鼠肝组织中的tg、mda含量高于溶荆对照组，gsh含量低于溶剂对照组，经统计分析差异均有统计学意义(p＜0.05)。样品各剂量组肝组织tg值，中、高剂量组肝组织mda值低于模型对照组，差异均有统计学意义(p＜0.05)，结果见表12。
[0162]
表12各组小鼠肝组织的tg、gsh、mda的检测结果
[0163][0164]
注：*与乙醇模型对照组比较，p＜0.05
[0165]
2.3肝脏组织病理学检查结果
[0166]
2.3.1肉眼观察
[0167]
溶剂对照组：肝脏表面平整光滑、色泽亮呈鲜红色、质软。
[0168]
乙醇模型对照组：肝脏表面有颗粒状，色泽变淡呈土黄色，质稍硬。
[0169]
3个产品组：肝脏表面有均匀细颗粒，色泽呈略黄、深褐色或土黄色，质软或稍硬。
[0170]
2.3.2镜检
[0171]
由表13可见，乙醇模型对照组动物脂滴在肝脏分布、范围和面积的积分高于溶剂对照组；样品各个剂量组动物的脂滴在肝脏的分布、范围和面积积分低于乙醇模型对照组，
经统计分析，差异均有统计学意义(p＜0.05)。
[0172]
表13各组小鼠肝脏病理组织学检查结果(积分)
[0173][0174]
注：*与乙醇模型对照组比较，p＜0.05
[0175]
3.小结：
[0176]
经口灌胃给予小鼠不同剂量的谷胱甘肽茶多酚片30天后，低、中、高剂量组能抑制急性酒精肝损伤后第16小时肝组织中tg含量的升高；中、高剂量组能抑制急性酒精肝损伤第16小时肝组织中mda含量的升高。肝脏病理检查结果表明：样品各剂量组动物脂滴在肝脏的分布、范围和面积的积分低于乙醇模型对照组。提示该样品对化学性肝损伤有辅助保护功能作用。
[0177]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。