一种用解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物保鲜血橙的方法与流程

一种用解淀粉芽孢杆菌m73发酵产物保鲜血橙的方法
技术领域
1.本发明涉及果蔬保鲜领域，具体涉及一种用解淀粉芽孢杆菌m73发酵产物保鲜血橙的方法。


背景技术：

2.血橙富含多酚、类黄酮、抗坏血酸等抗氧化活性物质，营养价值丰富，深受消费者喜爱。血橙是典型的因花色苷着色的品种，花色苷的含量决定血橙果肉颜色，是血橙商业价值的重要评价指标。花色苷是一类广泛的存在于植物中的色素，属于类黄酮化合物。花色苷不仅赋予植物鲜艳的颜色以利于授粉和种子传播、抵抗植物虫害以及预防植物的紫外线照射损伤，而且对于人类具有许多生理保健功能，如清除体内自由基、抗肿瘤、抗癌、抗炎、抑制脂质过氧化和血小板凝集、保护肝脏、预防糖尿病、减肥、保护视力等。血橙着色需要较大的昼夜温差，热带和亚热带气候地区生长的血橙着色普遍不深，且颜色分布不均匀，严重影响其商业价值。采取有效的处理措施保持水果采后良好品质极为重要。
3.我国柑橘以鲜销为主，在旺季时需大量贮藏，而采摘后的柑橘果实在贮藏过程中易腐烂变质，造成巨大的经济损失。柑橘采后病害分为侵染性病害和非侵染性病害，非侵染性病害是指由恶劣的物理、化学等非生物环境因素直接或间接引起的植物病害,又称生理性病害，包括水肿病，褐斑病，枯水病，油斑病等等。侵染性病害是由微生物（大多为致病性真菌）侵染而引起的病害，主要包括有意大利青霉和指状青霉引起的青绿霉病；由白地霉引起的酸腐病，由黑色地腐病菌引起的黑色蒂腐病，由柑橘囊孢壳菌引起的褐色蒂腐病，由柑橘球座菌引起的黑斑病，由寄生疫霉引起的褐腐病，由柑橘链格孢引起的黑腐病以及由胶孢炭疽菌炭疽病等。在柑橘采后各种病害中，以青绿霉病尤为严重，该病害在贮藏期间造成的损失一般为10%左右，高的超过30%，给生产和经营者带来很大损失。
4.商业上血橙常采用冷藏保鲜，但青霉菌在低温条件下仍可生长，因此找到一种可以抑制低温条件下血橙霉变的保鲜方法极其重要。解淀粉芽孢杆菌可作为一种生物保鲜方法用于水果的采后保鲜，已有研究表明，解淀粉芽孢杆菌可以有效延缓香蕉的成熟和变质；延长荔枝、龙眼的保质期并增强其抗病性。本实验室经诱变选育得到高效生防解淀粉芽孢杆菌m73，对多种植物病原真菌（如赤霉菌、灰霉菌）抑菌效果更强，该菌株在实验室中抑制灰霉菌基本达到化学农药腐霉利水平。已鉴定出其主要抑菌物质为脂肽类。
5.我们的前期研究发现解淀粉芽孢杆菌m73可防治龙眼青霉霉变。因此针对青霉菌的微生物保鲜剂——解淀粉芽孢杆菌m73可以用于冷藏条件下血橙保鲜。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种能够在冷藏条件下降低血橙腐烂率、保持果实外观品质并延长血橙保鲜期、操作简单、绿色安全、低廉的用解淀粉芽胞杆菌m73发酵产物保鲜血橙的方法。
7.本发明的用解淀粉芽孢杆菌m73发酵产物保鲜血橙的方法，其特征在于，包括以下
步骤：(a)选择晴天采收，外观着色一致，大小均一，无病虫害、无机械损伤的血橙果实。
8.(b)将血橙果实置于保鲜液中浸泡5 s后取出，晾干果实表面的保鲜液，经包装后进行贮藏；所述的保鲜液为发酵48 h后的解淀粉芽胞杆菌m73发酵产物。
9.所述的包装是将晾干后的果实用0.01
‑
0.03 mm的聚乙烯薄膜袋套袋包装(主要是防止失水)。
10.所述的贮藏为冷库（4℃）贮藏。
11.按照本发明的方法对冷藏条件下血橙进行保鲜，保鲜后的血橙在贮藏过程中不易腐烂，经保鲜后的血橙可降低腐烂率，减缓贮藏过程中vc、可滴定酸、可溶性固形物的损失，同时促进了血橙花色苷的积累，延长血橙保鲜期。因此，本发明可大大提高血橙的经济价值。本发明的方法还可以用于龙眼的保鲜。
附图说明
12.图1为实施例1的解淀粉芽孢杆菌m73发酵产物对血橙果实腐烂率的影响；图2为实施例1的解淀粉芽孢杆菌m73发酵产物对血橙果实vc含量的影响；图3为实施例1的解淀粉芽孢杆菌m73发酵产物对血橙果实可溶性固形物含量的影响；图4为实施例1的解淀粉芽孢杆菌m73发酵产物对血橙果实可滴定酸含量的影响；图5为实施例1的解淀粉芽孢杆菌m73发酵产物对血橙果汁总花色苷含量的影响。
具体实施方式
13.以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
14.实施例1：1.材料血橙(citrus sinensis l. osbeck)采自四川省资中县，品种为“2号”。
15.保鲜液为解淀粉芽孢杆菌m73发酵产物，其制备方法包括以下步骤：步骤一：将培养好的种子液按体积比1%的比例接种到发酵培养基中，200 r/min摇床，30℃培养48 h得到。
16.步骤二：将步骤一的发酵液于5000 r/min离心5 min。
17.其中：步骤一中，所述种子液通过下述方法获得：先将解淀粉芽孢杆菌菌株m73划线转接到pda平板中，置于培养箱28
‑
37℃恒温培养24
‑
48小时；再将获得的解淀粉芽孢杆菌菌株m73 的菌苔接种到pda 液体培养基中，28
‑
37℃摇床振荡培养24
‑
48小时得到种子液；步骤一中，所述发酵培养基包含以下组分：l
‑
谷氨酸钠5 g，mgso4.7h2o 0.5 g，葡萄糖 20 g，feso
4 0.15 mg，氯化钾 0.5 g，k2hpo
4 1.0 g，mnso4•
h2o 5.0 mg，cuso4•
5h20 0.16 mg，蒸馏水1000 ml，ph 7.2，115℃下高压灭菌15 min。
18.2.处理方式晴天新鲜采收血橙，挑选外观着色一致，大小均一，无病虫害、无机械损伤的血橙为实验材料。先用清水将果实表面洗净后，取出晾干，然后分别用保鲜液（解淀粉芽胞杆菌m73发酵产物）和对照液（清水）浸泡5 s后取出，晾干，再分别用0.015 mm厚的聚乙烯薄膜袋
包装，4个果/袋，4℃贮藏。
19.3.腐烂率果实腐烂率：以果面出现直径 ≥ 0.50 cm的病班或腐烂的果实记为腐烂果。入贮后，按间隔日数定期统计腐烂果个数，腐烂率为腐烂果个数占总果数的百分数，计算公式为：果实腐烂率（%）=腐烂果个数/贮藏总果数
×
100%。
20.4.可溶性固形物从每个处理中随机抽取4个果实，将果实榨汁，通过纱布过滤称取果汁进行可溶性固形物、可滴定酸、vc含量及总花色苷含量的测定。
21.采用阿贝折光仪测定。
22.5.可滴定酸、vc使用雷根生物试剂盒测定。
23.6.总花色苷血橙榨汁后，10000 r/min离心10 min，取 2 ml 上清液，分别加入 ph1.0氯化钾/盐酸缓冲液和 ph 4.5 乙酸钠/盐酸缓冲液稀释，充分混匀，于510 nm处测定吸光度。计算公式如下。
24.c(mg
·
l
‑1)=(a
ph 1.0
‑ꢀ
a
ph 4.5
)
ꢀ×ꢀ
484.82
ꢀ×ꢀ
df
ꢀ×ꢀ
1000/24 825式中，484.82 为矢车菊素
‑3‑
葡萄糖苷的分子量，24 825 为摩尔吸光系数，df是稀释度。
25.7.实验结果及分析实验结果如图1、图2、图3、图4、图5所示，从图1所示，解淀粉芽胞杆菌m73发酵产物对降低冷藏条件下血橙腐烂率有显著效果，在贮藏后90天时处理组腐烂率为对照组的一半，延长保鲜期约30%。如图2、图3、图4所示，解淀粉芽胞杆菌m73发酵产物可降低贮藏期内血橙可溶性固形物、可滴定酸、vc含量的损失，在贮藏后30天，其可溶性固形物、可滴定酸、vc含量与第0天相比无显著性差异，保鲜效果很好。如图5所示，解淀粉芽胞杆菌m73发酵产物可促进贮藏期内血橙花色苷的积累，在贮后第30 d时，花色苷含量是同天对照组的2.49倍，在较短时间内增加了血橙的花色苷含量，有效改善血橙的贮藏品质。