用于基因组应用和治疗应用的核酸分子的克隆复制和扩增的系统和方法与流程

技术特征：
1.一种复制或扩增至少一个核酸分子的方法，所述方法包括：(a)使多个发夹结构连接到至少一个双链核酸分子的每一个末端以形成至少一个哑铃状模板，其中所述双链核酸分子从样品中分离具有大于5千碱基的最小长度；(b)使所述至少一个哑铃状模板在复制方法中与至少一种基本上互补的引物接触，或者在扩增方法中与至少两种基本上互补的引物接触；其中所述至少一种基本上互补的引物与至少一种基质连接；和(c)在与所述至少一种基本上互补的引物接触的所述至少一个哑铃状模板上进行滚环复制以形成至少一个复制的或扩增的哑铃状模板。2.如权利要求1所述的方法，其中所述双链核酸分子具有大于10千碱基的长度。3.如权利要求1所述的方法，其中所述双链核酸分子具有至少20千碱基的长度。4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中：在连接步骤之前，所述方法还包括将所述至少一个核酸分子片段化以形成至少一个片段化的核酸分子，所述至少一个片段化的核酸分子具有大于5千碱基、大于10千碱基或至少20千碱基的最小长度。5.如权利要求1至3中任一项所述的扩增方法，其中：在接触步骤之前，所述方法还包括通过用核酸外切酶处理任何未连接的发夹结构和任何未连接的核酸分子来纯化所述至少一个哑铃状模板。6.一种检测至少一个复制的或扩增的哑铃状模板的方法，所述方法包括：(a)将至少一个核酸分子片段化以形成至少一个片段化的核酸分子，所述至少一个片段化的核酸分子具有大于5千碱基、大于10千碱基或至少20千碱基的最小长度；(b)根据权利要求1所述的复制方法复制或扩增所述片段化的核酸分子；以及(c)检测所述至少一个复制的或扩增的哑铃状模板，其中所述检测包括涉及克隆复制的模板的下一代测序(或ngs)方法。7.如权利要求6所述的方法，其中所述检测所述至少一个复制的或扩增的哑铃状模板的步骤包括使所述至少一个复制的或扩增的哑铃状模板与dna探针接触。8.如权利要求6所述的方法，其中：在接触步骤之前，所述方法还包括通过用核酸外切酶处理任何未连接的发夹结构和任何未连接的片段化核酸分子来纯化所述至少一个哑铃状模板。

技术总结
本申请涉及用于基因组应用和治疗应用的核酸分子的克隆复制和扩增的系统和方法。具体提供了复制或扩增至少一个核酸分子的方法，包括：(a)使多个发夹结构连接到至少一个双链核酸分子的每一个末端以形成至少一个哑铃状模板，其中该双链核酸分子从样品中分离具有大于5千碱基的最小长度；(b)使该至少一个哑铃状模板在复制方法中与至少一种基本上互补的引物接触，或者在扩增方法中与至少两种基本上互补的引物接触；其中该至少一种基本上互补的引物与至少一种基质连接；和(c)在与该至少一种基本上互补的引物接触的该至少一个哑铃状模板上进行滚环复制以形成至少一个复制的或扩增的哑铃状模板。本申请还涉及检测至少一个复制的或扩增的哑铃状模板的方法。的或扩增的哑铃状模板的方法。的或扩增的哑铃状模板的方法。


技术研发人员：M
受保护的技术使用者：雷德沃特生物科学公司
技术研发日：2015.04.11
技术公布日：2021/10/23