光学活性氯喹和羟氯喹及其类似物、其制备方法、组合物和用途与流程

1.本发明属于药物化学技术领域，具体涉及光学纯(s)-氯喹及其类似物和(r)-氯喹及其类似物及其手性拆分方法、其药用组合物以及用途。


背景技术：

2.氯喹和羟氯喹是近50年来备受关注的一种抗疟药物。目前，羟氯喹的硫酸盐形式，即硫酸羟氯喹是目前临床治疗风湿性疾病，尤其是系统性红斑狼疮和类风湿关节炎最常用的药物之一。在相关的机制研究实验中表明，羟氯喹具有抗炎和免疫调节的活性。氯喹半衰期超长，连续服用容易出现蓄积毒性，当血浆浓度(谷浓度)大于0.8μg/ml时大部分患者出现毒性。每日≥20mg/kg即可引起心脏毒性甚至死亡。羟基氯喹作为类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等慢性疾病的常用药，长期或高剂量服用容易出现不可逆视网膜损伤。


技术实现要素：

3.为克服上述现有技术的缺陷和不足，本发明人进行了深入研究，意外地发现，(s)-氯喹和羟氯喹及(r)-氯喹和羟氯喹以及其类似物的(s)-构型化合物或(r)-构型化合物在药理活性、毒性等方面均优于外消旋体化合物。鉴于此，本发明通过以下技术方案解决上述技术问题。
4.本发明提供了一种如式ii或式iii所示化合物的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
5.(a)式i所示化合物在溶剂中与手性拆分试剂反应生成盐，过滤，得到化合物(ii)的盐或化合物(iii)的盐；
6.(b)在溶剂中，对步骤(a)中获得的化合物(ii)的盐或化合物(iii)的盐进行重结晶；
7.(c)经步骤(b)重结晶的化合物(ii)的盐或化合物(iii)的盐在溶剂中与碱反应得到化合物(ii)或化合物(iii)；
[0008][0009]
式i，式ii和式iii中，
[0010]
r1为卤素、氨基、氰基、c
1-4
卤代烷基、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、c
3-6
环烷基、或c
1-4
卤代烷氧基；
[0011]
r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基；
[0012]
r3为氢、或、未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基；
[0013]
r
2-1
和r
3-1
独立地选自羟基、卤素、氨基或氰基；
[0014]
r4为氢、未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基或c
3-10
环烷基；
[0015]
r
4-1
为羟基、卤素、氨基或氰基。
[0016]
优选地，所述的制备方法中，步骤(a)中的溶剂选自以下任一混合溶剂：甲醇/乙酸乙酯、乙醇/乙酸乙酯、正丙醇/乙酸乙酯、异丙醇/乙酸乙酯、正丁醇/乙酸乙酯、叔丁醇/乙酸乙酯、四氢呋喃/乙酸乙酯、丙酮/乙酸乙酯、乙腈/乙酸乙酯、甲醇/乙醚、乙醇/乙醚、正丙醇/乙醚、正丁醇/乙醚、或丙酮/乙醚。
[0017]
优选地，所述的制备方法中，步骤(a)中的手性拆分试剂选自以下任意一种：l-苹果酸、d-苹果酸、d-酒石酸、l-酒石酸、d-扁桃酸、l-扁桃酸、(r)-1,1'-联萘酚磷酸酯、(s)-1,1'-联萘酚磷酸酯、d-樟脑-10-磺酸、l-樟脑-10-磺酸、d-( )-樟脑酸、l-(-)-樟脑酸、( )-二乙酰基-l-酒石酸酐、(-)-二乙酰基-l-酒石酸酐、(-)-二对甲苯酰-l-酒石酸、( )-二对甲苯酰-d-酒石酸、( )-二苯甲酰基-d-酒石酸、(-)-二苯甲酰基-l-酒石酸、l-谷氨酸、l-甘氨酸、d-天冬氨酸、l-天冬氨酸、d-焦谷氨酸、l-焦谷氨酸、或d-(-)-奎宁酸。
[0018]
优选地，所述的制备方法中，步骤(a)中的手性拆分试剂与式i所示化合物的比例为3:1～5:1。
[0019]
优选地，所述的制备方法中，步骤(b)中的溶剂选自以下任一混合溶剂：甲醇/乙酸乙酯、乙醇/乙酸乙酯、正丙醇/乙酸乙酯、异丙醇/乙酸乙酯、正丁醇/乙酸乙酯、叔丁醇/乙酸乙酯、四氢呋喃/乙酸乙酯、丙酮/乙酸乙酯、乙腈/乙酸乙酯、甲醇/乙醚、乙醇/乙醚、正丙醇/乙醚、正丁醇/乙醚、或丙酮/乙醚。优选地，所述重结晶可以是进行一次、两次或三次以上。
[0020]
优选地，所述的制备方法中，步骤(c)中的碱为选自甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、丙醇钠、丙醇钾、异丙醇钠、异丙醇钾、正丁醇钾、正丁醇钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钠、三乙胺、或n,n-二异丙基乙胺中的一种或两种以上的组合。
[0021]
优选地，所述的制备方法中，步骤(c)的溶剂为选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、乙腈、1,4-二氧六环或四氢呋喃中的一种或两种以上的混合溶剂。
[0022]
优选地，当r1为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘；
[0023]
优选地，当r1为卤素时，所述的卤素为氟、氯、溴或碘；
[0024]
优选地，当r1为c
1-4
卤代烷基时，所述的c
1-4
卤代烷基为-cf3；
[0025]
优选地，当r1为c
1-4
烷基时，所述的c
1-4
烷基为甲基、乙基、丙基或异丙基；
[0026]
优选地，当r1为c
1-4
烷氧基时，所述的c
1-4
烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基；
[0027]
优选地，当r1为c
3-6
环烷基时，所述的c
3-6
环烷基为环丙基；
[0028]
优选地，当r1为c
1-4
卤代烷氧基时，所述的c
1-4
卤代烷氧基为-ocf3；
[0029]
优选地，当r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
2-1
的个数为一个或多个，
当存在多个r
2-1
时，所述的r
2-1
可相同或不同；
[0030]
优选地，当r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为c
1-4
烷基；
[0031]
优选地，当r3为未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
3-1
的个数为一个或多个，当存在多个r
3-1
时，所述的r
3-1
可相同或不同；
[0032]
优选地，当r3为未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为c
1-4
烷基；
[0033]
优选地，当r4为未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
4-1
的个数为一个或多个，当存在多个r
4-1
时，所述的r
4-1
可相同或不同；
[0034]
优选地，当r4为未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为c
1-4
烷基；
[0035]
优选地，当r4为c
3-10
环烷基时，所述的c
3-10
环烷基为c
3-6
环烷基。
[0036]
进一步优选地，当r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
2-1
的个数为1个、2个或3个；
[0037]
优选地，当r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为甲基、乙基、丙基、丁基或异丙基，优选乙基；
[0038]
优选地，当r2为未取代或r
2-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
2-1
取代的c
1-6
烷基为或、
[0039]
优选地，当r3为未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
3-1
的个数为1个、2个或3个；
[0040]
优选地，当r3为未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为甲基、乙基、丙基、丁基或异丙基，优选乙基；
[0041]
优选地，当r3为未取代或r
3-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
3-1
取代的c
1-6
烷基为或、
[0042]
优选地，当r4为未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
4-1
的个数为1个、2个或3个；
[0043]
优选地，当r4为未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的c
1-6
烷基为甲基、乙基、丙基、丁基或异丙基，优选乙基；
[0044]
优选地，当r4为未取代或r
4-1
取代的c
1-6
烷基时，所述的r
4-1
取代的c
1-6
烷基为或、
[0045]
优选地，当r4为c
3-10
环烷基时，所述的c
3-10
环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
[0046]
优选地，所述如式ii或式iii所示化合物选自以下化合物：
[0047]
或者
[0048]
另一方面，本发明还提供一种如上所述的式ii或式iii所示化合物的制备方法，其中所述式ii或式iii所示化合物不为(r)-氯喹、(s)-氯喹、(r)-羟氯喹和(s)-羟氯喹。
[0049]
本发明还提供一种如上所述的式ii或式iii所示化合物、或其药学上可接受的盐。
[0050]
本发明还提供一种式ii或式iii所示化合物、或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗病毒感染的药物中的用途。
[0051]
进一步，所述的病毒为中东综合征相关冠状病毒(mers-cov)、严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(sars-cov)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠状病毒肺炎(covid-19)、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、艾滋病病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、甲型流感a h5n1病毒、基孔肯雅病、登革热病毒、寨卡病毒、拉沙病毒、刚果出血热病毒、埃博拉病毒、乙型肝炎病毒或单纯性孢疹病毒。
[0052]
本发明还提供一种药物组合物，其包括如式ii所示化合物、其药学上可接受的盐，和药用辅料。
[0053]
进一步地，在所述的药物组合物中，如式ii所示的化合物、或其药学上可接受的盐的用量为治疗有效量。
[0054]
本发明还提供了一种上述药物组合物在制备预防或治疗病毒感染的药物中的用途。
[0055]
进一步地，所述的病毒为中东综合征相关冠状病毒(mers-cov)、严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(sars-cov)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠状病毒肺炎(covid-19)、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、艾滋病病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、甲型流感a h5n1病毒、基孔肯雅病、登革热病毒、寨卡病毒、拉沙病毒、刚果出血热病毒、埃博拉病毒、乙型肝炎病毒或单纯性孢疹病毒。
[0056]
本发明还提供一种药物组合物，其包括如式iii所示的化合物或其药学上可接受的盐，和药用辅料。
[0057]
进一步地，所述的药物组合物中，式iii所示的化合物或其药学上可接受的盐的用量为治疗有效量。
[0058]
本发明还提供了一种上述药物组合物在制备预防或治疗病毒感染的药物中的用途。
[0059]
进一步地，所述的病毒为中东综合征相关冠状病毒(mers-cov)、严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(sars-cov)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠状病毒肺炎(covid-19)、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、艾滋病病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、甲型流感a h5n1病毒、基孔肯雅病、登革热病毒、寨卡病毒、拉沙病毒、刚果出血热病毒、埃博拉病毒、乙型肝炎病毒或单纯性孢疹病毒。
[0060]
所述的药用辅料可为药物生产领域中广泛采用的那些辅料。辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体ph值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂等。
[0061]
本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。
[0062]
本发明所述的药物组合物可以任何形式给药，包括注射(静脉内)、粘膜、口服(固体和液体制剂)、吸入、眼部、直肠、局部或胃肠外(输注、注射、植入、皮下、静脉内、动脉内、肌内)给药。本发明的药物组合物还可以是控释或延迟释放剂型(例如脂质体或微球)。固体口服制剂的实例包括但不限于粉末、胶囊、囊片、软胶囊剂和片剂。口服或粘膜给药的液体制剂实例包括但不限于悬浮液、乳液、酏剂和溶液。局部用制剂的实例包括但不限于乳剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、贴剂、糊剂、泡沫剂、洗剂、滴剂或血清制剂。胃肠外给药的制剂实例包括但不限于注射用溶液、可以溶解或悬浮在药学上可接受载体中的干制剂、注射用悬浮液和注射用乳剂。所述的药物组合物的其它合适制剂的实例包括但不限于滴眼液和其他眼科制剂；气雾剂：如鼻腔喷雾剂或吸入剂；适于胃肠外给药的液体剂型；栓剂以及锭剂。
[0063]
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的游离体形式接触的
方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的游离体形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸(形成碳酸盐或碳酸氢盐)、磷酸((形成磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐)、硫酸(形成硫酸盐或硫酸氢盐)、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；有机酸盐还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的游离体形式。化合物的游离体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。
[0064]
本发明的“药学上可接受的盐”可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
[0065]
本发明的有益效果为：
[0066]
(1)光学活性的氯喹/羟氯喹及其类似物的制备方法操作简便，拆分收率高、产物光学纯度较高，能够实现工业化生产，具有广阔的应用前景。
[0067]
(2)单一构型的氯喹/羟氯喹及其类似物比外消旋体具有更好的抗病毒活性和更小的毒副作用。
具体实施方式
[0068]
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0069]
实施例1：制备(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐
[0070]
将外消旋体羟氯喹(5g，14.88mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将l-苹果酸(6g，44.64mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将l-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-羟氯喹的l-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐析出，抽滤得到(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐粗品(5.2g)。
[0071]
实施例2：(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐重结晶纯化
[0072]
称取(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐粗品(5.2g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.8％ee.的(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐(4.3g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.8％ee.的(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐(3.8g)。
[0073]
实施例3：(r)-羟氯喹的制备
[0074][0075]
将甲醇钠(1g,20.24mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-羟氯喹的l-苹果酸盐(3.8g，5.06mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-羟基氯喹(1.6g)，纯度>99％，手性纯度>99.92％，收率64％。
[0076]
实施例4：制备(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐
[0077]
将外消旋体羟氯喹(5g，14.88mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将d-苹果酸(6g，44.64mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将d-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-羟氯喹的d-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐析出，抽滤得到(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐粗品(4.8g)。
[0078]
实施例5：(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐重结晶纯化
[0079]
称取(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐粗品(4.8g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.3％ee.的(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐(4.3g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为97.4％ee.的(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐(3.6g)。
[0080]
实施例6：(s)-羟氯喹的制备
[0081][0082]
将甲醇钠(1g,19.17mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-羟氯喹的d-苹果酸盐(3.6g，4.79mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-羟基氯喹(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.92％，收率56％。
[0083]
实施例7：制备(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐
[0084]
将外消旋体羟氯喹(5g，14.88mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，40ml)中，将l-扁桃酸(7.9g，42.08mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，20ml)，0℃，将l-扁桃酸的甲醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-羟氯喹的l-扁桃酸盐溶解在甲醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐析出，抽滤得到(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐粗品(5.2g)。
[0085]
实施例8：(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐重结晶纯化
[0086]
称取(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐粗品(5.2g)悬浮于12ml甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3)
中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.3％ee.的(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐(4.5g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-羟氯喹的l-扁桃酸进行一次重结晶得到光学纯度为97.2％ee.的(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐(3.8g)。
[0087]
实施例9：(r)-羟氯喹的制备
[0088]
(r)-羟氯喹的l-扁桃酸盐(3.8g，4.72mmol)溶于30ml甲醇中，置于室温下，将碳酸钾(2.7g,19.83mol)分批加入到上述溶液中，室温下搅拌约30min后，抽滤，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯溶解，加入水5min，然后乙酸乙酯萃取(20ml
×
2)，合并有机相，水洗(10ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，真空干燥，得到(r)-羟基氯喹(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.93％，收率56％。
[0089]
实施例10：制备(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐
[0090]
将外消旋体羟氯喹(5g，14.88mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，40ml)中，将d-扁桃酸(7.9g，42.08mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，20ml)，0℃，将d-扁桃酸的甲醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-羟氯喹的d-扁桃酸盐溶解在甲醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐析出，抽滤得到(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐粗品(5.4g)。
[0091]
实施例11：(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐重结晶纯化
[0092]
称取(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐粗品(5.4g)悬浮于12ml甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.2％ee.的(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐(4.7g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-羟氯喹的d-扁桃酸进行一次重结晶得到光学纯度为98.3％ee.的(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐(4.0g)。
[0093]
实施例12：(s)-羟氯喹的制备
[0094]
(s)-羟氯喹的d-扁桃酸盐(4.0g，4.96mmol)溶于30ml甲醇中，置于室温下，将碳酸钾(3g,22.32mol)分批加入到上述溶液中，室温下搅拌约30min后，抽滤，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯溶解，加入水5min，然后乙酸乙酯萃取(20ml
×
2)，合并有机相，水洗(10ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，真空干燥，得到(s)-羟基氯喹(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.95％，收率56％。
[0095]
实施例13：制备(r)-氯喹的l-苹果酸盐
[0096]
将外消旋体氯喹(5g，15.67mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将l-苹果酸(6.7g，50.16mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将l-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-氯喹的l-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-氯喹的l-苹果酸盐析出，抽滤得到(r)-氯喹的l-苹果酸盐粗品(5.0g)。
[0097]
实施例14：(r)-氯喹的l-苹果酸盐重结晶纯化
[0098]
称取(r)-氯喹的l-苹果酸盐粗品(5.0g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.8％ee.的(r)-氯喹的l-苹果酸盐(4.4g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-氯喹的l-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为
(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐析出，抽滤得到(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐粗品(5.0g)。
[0111]
实施例20：(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐重结晶纯化
[0112]
称取(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐粗品(5.0g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.6％ee.的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐(4.4g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为97.9％ee.的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐(3.9g)。
[0113]
实施例21：(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的制备
[0114][0115]
将甲醇钠(1.3g,23.23mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-苹果酸盐(3.9g，5.53mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(1.3g)，纯度>99％，手性纯度>99.95％，收率52％。
[0116]
实施例22：制备(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐
[0117]
将外消旋体n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(5g，16.39mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将d-苹果酸(7.7g，57.37mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将d-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐析出，抽滤得到(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐粗品(4.7g)。
[0118]
实施例23：(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐重结晶纯化
[0119]
称取(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐粗品(4.7g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.3％ee.的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐(4.3g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的
d-苹果酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为97.4％ee.的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐(3.6g)。
[0120]
实施例24：(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的制备
[0121][0122]
将乙醇钠(1.36g,20.0mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-苹果酸盐(3.6g，5.0mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(1.6g)，纯度>99％，手性纯度>99.90％，收率64％。
[0123]
实施例25：制备(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐
[0124]
将外消旋体n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(5g，14.16mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4，25ml)中，将l-樟脑酸酸(11.6g，58.07mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4，12ml)，0℃，将l-樟脑酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐析出，抽滤得到(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐粗品(5.8g)。
[0125]
实施例26：(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐重结晶纯化
[0126]
称取(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐粗品(5.8g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.6％ee.的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐(5.0g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为97.9％ee.的(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐盐(4.7g)。
[0127]
实施例27：(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的制备
[0128][0129]
将甲醇钠(1.1g,20.71mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min
后，体系变澄清，缓慢加入(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-樟脑酸盐(4.7g，4.93mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(1.3g)，纯度>99％，手性纯度>99.95％，收率52％。
[0130]
实施例28：制备(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐
[0131]
将外消旋体n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(5g，14.16mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4，25ml)中，将d-樟脑酸(11.6g，58.07mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:4，12ml)，0℃，将d-樟脑酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐析出，抽滤得到(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐粗品(4.7g)。
[0132]
实施例29：(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐重结晶纯化
[0133]
称取(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐粗品(4.7g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.3％ee.的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐(4.5g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为97.4％ee.的(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐(3.7g)。
[0134]
实施例30：(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的制备
[0135][0136]
将乙醇钠(1.1g,15.53mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-氟喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的d-樟脑酸盐(3.7g，3.88mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺(1.6g)，纯度>99％，手性纯度>99.93％，收率64％。
[0137]
实施例31：制备(r)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的l-酒石酸盐
[0138]
将外消旋体2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇(5g，13.55mol)溶于乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:4，25ml)中，将l-酒石酸(7.1g，47.42mol)溶于乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:4，12ml)，0℃，将l-酒石酸的乙腈/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上
醇的d-酒石酸盐重结晶纯化
[0147]
称取(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐粗品(4.9g)悬浮于10ml乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:4)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为89.9％ee.的(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐(4.8g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.6％ee.的(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐(4.3g)。
[0148]
实施例36：(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的制备
[0149][0150]
将甲醇钠(1.2g,21.53mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇的d-酒石酸盐(4.3g，5.25mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-2-(乙基(4-((7-(三氟甲基)喹啉-4-基)氨基)戊基)氨基)乙基-1-醇(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.94％，收率56％。
[0151]
实施例37：制备(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺l-酒石酸盐
[0152]
将外消旋体n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺(5g，15.02mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，30ml)中，将l-酒石酸(7.9g，52.55mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:3，15ml)，0℃，将l-酒石酸的甲醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的甲醇/乙酸乙酯溶液中。升温至10℃时，反应1h，待反应完全，大部分(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸的盐溶解在乙腈/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐析出，抽滤得到(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐粗品(5.0g)。
[0153]
实施例38：(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐重结晶纯化
[0154]
称取(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐粗品(5.0g)悬浮于12ml乙腈/乙酸乙酯(v/v＝1:3)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.9％ee.的(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐(4.5g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙
基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.2％ee.的n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐(4.2g)。
[0155]
实施例39：(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的制备
[0156][0157]
将甲醇钠(1.2g,21.99mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-n1,n
1-二乙基-n
4-(7-三氟甲基喹啉-4-基)戊基-1,4-二胺的l-酒石酸盐(4.2g，5.36mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.90％，收率56％。
[0158]
实施例40：制备(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺d-酒石酸盐
[0159]
将外消旋体n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺(5g，15.02mol)溶于四氢呋喃/乙酸乙酯(v/v＝1:1，40ml)中，将d-酒石酸(7.9g，52.55mol)溶于甲醇/乙酸乙酯(v/v＝1:1，10ml)，0℃，将d-酒石酸的甲醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的四氢呋喃/乙酸乙酯溶液中。升温至10℃时，反应1h，待反应完全，大部分(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的d-酒石酸的盐溶解在乙腈/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的d-酒石酸盐析出，抽滤得到(r)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的d-酒石酸盐粗品(4.8g)。
[0160]
实施例41：(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的d-酒石酸盐重结晶纯化
[0161]
称取(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的d-酒石酸盐粗品(4.8g)悬浮于12ml四氢呋喃/乙酸乙酯(v/v＝1:1)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.5％ee.的(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的d-酒石酸盐(4.6g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的d-酒石酸盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.3％ee.的(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的d-酒石酸盐(4.0g)。
[0162]
实施例42：(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的制备
[0163][0164]
将甲醇钠(1.1g,20.95mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺的d-酒石酸盐(4.0g，5.10mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-n
4-(7-氯喹啉-4-基)-n1,n
1-二乙基-n
4-甲基戊基-1,4-二胺(1.2g)，纯度>99％，手性纯度>99.92％，收率48％。
[0165]
实施例43：制备(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐
[0166]
将外消旋体2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(5g，14.33mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将l-苹果酸(5.76g，42.99mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将l-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐析出，抽滤得到(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐粗品(4.8g)。
[0167]
实施例44：(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐重结晶纯化
[0168]
称取(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐粗品(4.8g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.8％ee.的(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐(4.4g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇进行一次重结晶得到光学纯度为97.9％ee.的(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐(3.9g)。
[0169]
实施例45：(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的制备
[0170][0171]
将甲醇钠(1.1g,20.77mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙
基-1-醇的l-苹果酸盐(3.9g，5.19mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.91％，收率56％。
[0172]
实施例46：制备(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐
[0173]
将外消旋体2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(5g，14.33mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将d-苹果酸(5.76g，42.99mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将d-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐析出，抽滤得到(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐粗品(4.6g)。
[0174]
实施例47：(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐重结晶纯化
[0175]
称取(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐粗品(4.6g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为88.3％ee.的(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐(4.2g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇进行一次重结晶得到光学纯度为98.0％ee.的(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐(3.7g)。
[0176]
实施例48：(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的制备
[0177][0178]
将甲醇钠(1.1g,19.70mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐(3.7g，4.93mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(甲基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(1.1g)，纯度>99％，手性纯度>99.93％，收率44％。
[0179]
实施例49：制备(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐
[0180]
将外消旋体2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(5g，13.33mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将l-苹果酸(7.1g，5.33mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将l-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐析出，抽滤得到(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐粗品(5.0g)。
[0181]
实施例50：(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐重结晶纯化
[0182]
称取(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐粗品(5.0g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.3％ee.的(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐(4.6g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的盐进行一次重结晶得到光学纯度为98.9％ee.的(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐(4.0g)。
[0183]
实施例51：(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的制备
[0184][0185]
将甲醇钠(1.1g,20.59mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的l-苹果酸盐(4.0g，5.15mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(1.3g)，纯度>99％，手性纯度>99.90％，收率52％。
[0186]
实施例52：制备(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐
[0187]
将外消旋体2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(5g，13.33mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，30ml)中，将d-苹果酸(7.1g，5.33mol)溶于乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2，15ml)，0℃，将d-苹果酸的乙醇/乙酸乙酯溶液中缓慢滴加至上述外消旋体的乙醇/乙酸乙酯溶液中。升温至5℃时，反应30min，待反应完全，大部分(r)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸的盐溶解在乙醇/乙酸乙酯混合溶液中，而(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙
基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐析出，抽滤得到(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐粗品(5.2g)。
[0188]
实施例53：(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐重结晶纯化
[0189]
称取(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐粗品(5.2g)悬浮于10ml乙醇/乙酸乙酯(v/v＝1:2)中，加热回流至完全溶解，缓慢降温至室温，并保温搅拌1～2h，并继续降温至5～10℃，搅拌30min，抽滤，得到光学纯度为87.3％ee.的(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的盐(4.7g)。然后，按照上述重结晶的方法，将上述得到的(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的盐进行一次重结晶，得到光学纯度为98.9％ee.的(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d-苹果酸盐(4.2g)。
[0190]
实施例54：(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的制备
[0191][0192]
将甲醇钠(1.2g,21.62mol)分批加入到10ml的无水甲醇中，0℃下，搅拌约10min后，体系变澄清，缓慢加入(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇的d苹果酸盐(4.2g，5.40mmol)，室温搅拌30min，减压浓缩除掉甲醇。加入20ml乙酸乙酯，室温搅拌1小时，抽滤除盐，乙酸乙酯母液减压浓缩，得到(s)-2-((4-((7-氯喹啉-4-基)(环丙基)氨基)戊基)(乙基)氨基)乙基-1-醇(1.4g)，纯度>99％，手性纯度>99.91％，收率56％。
[0193]
实施例55：待测化合物细胞毒性以及抗流感病毒药效测试实验
[0194]
待测化合物细胞毒性实验：化合物对vero细胞的细胞毒作用采用mtt方法来检测，mtt法又称mtt比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。mtt(黄色的噻唑兰)可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性mtt还原为难溶于水的蓝紫色的针状formazan结晶并沉积在细胞中，结晶能被二甲基亚砜(dmso)溶解，用酶联免疫检测仪在490nm/570nm波长处检测其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
[0195]
1)将vero细胞接种于在96孔板中，每孔加入100μl细胞悬液；每孔细胞数量约为100000个，在5％co2，37℃孵育培养24h；
[0196]
2)设置药物浓度梯度，每个浓度梯度设置3个复孔，将药物稀释到对应培养基中至所需终浓度，吸出96孔板中原有培养基，加入配好的含所需终浓度药物的培养基100μl，在5％co2，37℃孵育；并同时设置空白组(只含100μl培养基，不含细胞，后续处理与其他各孔相同)与对照组(含有细胞与培养基)；
[0197]
3)药物处理至44小时时每孔加入10μl mtt溶液(5mg/ml)，继续培养4h(药物处理细胞共48小时)；
[0198]
4)吸干净孔内培养液(如细胞出现悬浮，则先2500rpm离心5min再吸出培养基)。每孔加入150μl二甲基亚砜，振荡至结晶物充分溶解。在酶标仪上检测od 490nm处各孔的吸光值；
[0199]
5)计算抑制率：抑制率＝1-(加药组od值-空白组od值)/(对照组od值-空白组od值)＝(对照组od值-加药组od值)/(对照组od值-空白组的od值)；
[0200]
6)采用graphpad软件计算ic
50
值；
[0201]
待测化合物的抗流感活性采用空斑抑制法测定，具体操作步骤：
[0202]
1)将vero细胞接种于96孔板(5
×
105细胞/孔)，在5％co2，37℃孵育培养过夜；
[0203]
2)流感病毒株a/pr/8/34采用无血清培养基稀释到100pfu/ml的病毒液，将病毒液(0.5ml/孔)加入到96孔板中，感染vero细胞1h；
[0204]
3)完成接种和吸附后，弃掉病毒培养液，pbs(ph＝7.2)洗涤细胞1次；
[0205]
3)向96孔板中加入80％琼脂、1％牛血血清蛋白和3μg/ml乙酰基胰蛋白酶以及emem培养基稀释到所需浓度的待测化合物和阳性对照法匹拉韦(设置8个浓度，每个浓度3个复孔)，另外设置病毒对照孔(感染了病毒的细胞，不含待测化合物)和正常细胞孔(正常的细胞，不含待测化合物)。待混合物完全凝结后，上下翻转，培养72h；
[0206]
4)培养完成后，去掉琼脂糖，室温下，细胞层采用70％乙醇固定3min；除掉乙醇，加入1ml结晶紫染色剂，室温下染色5min；除掉结晶紫染色剂，pbs洗涤细胞两次；然后计算空斑数。通过与对病毒对照比较所得的百分率来表示斑抑制率；
[0207]
5)采用graphpad软件计算ec
50
值；
[0208]
6)最终计算化合物的选择指数(si)，si＝ic
50
/ec
50
；
[0209]
具体实验结果如表1所示，实施例化合物对细胞毒性较小，(r)构型的氯喹、羟氯喹及其类似物和(s)构型的氯喹、羟氯喹及其类似物对流感病毒感染抑制活性和选择指数均优于外消旋体氯喹、羟氯喹及其类似物，且具有更好的选择指数；
[0210]
表1细胞毒性、抗流感活性和选择指数
[0211]
[0212][0213]
实施例56：抗新型冠状病毒肺炎(covid-19)活性测试
[0214]
待测化合物的抗新型冠状病毒肺炎活性检测具体操作步骤如下：
[0215]
1)将vero细胞接种于96孔板(5
×
104细胞/孔)，在5％co2，37℃孵育培养过夜；
[0216]
2)新型冠状病毒(moi＝0.05)加入到96孔板中，感染vero细胞2h，弃掉病毒液；
[0217]
3)向96孔板中加入含有培养培养基稀释到所需浓度的待测化合物和阳性对照法匹拉韦(设置8个浓度，每个浓度3个复孔)，另外设置病毒对照孔(感染了病毒的细胞，不含待测待测化合物)和正常细胞孔(正常的细胞，不含待测化合物)；继续培养48h后，收集细胞上清液，采用裂解缓冲液裂解，用于后续的qrt-pcr测定rna拷贝数；
[0218]
4)收集100μl细胞上清液，按照minibest病毒rna/dna提取试剂盒说明书提取病毒rna；rna采用不含rnase的水进行洗脱。反转录采用含有gdna eraser的primescript rt reagent试剂盒进行，qrt-pcr采用stepone plus real-time pcr系统和tb green premix ex taq ii进行。
[0219]
5)采用gdna eraser去掉3μl total rna中的基因组dna，然后在20μl反应液中合成第一链cdna，2μl cdna用作定量pcr的模板；以cdna为模板，spike基因受体结构域采用pcr扩增所用的引物：rbd-f:5
’-
gctccatggcctaatattacaaacttgtgcc3’，rbd-r:5
’-
tgctctagactcaagtgtctgtggatcac-3’，然后克隆到pmt/bip/v5-his载体中，通过测序确认后作为质粒标准品；
[0220]
6)定量pcr的引物为rbd-qf1:5
’-
caatggtttaacaggcacagg-3’，rbd-qr1:5
’-
ctcaagtgtctgtggatcacg-3；反应条件：95℃预变性5min，95℃变性15s，54℃退火15s，72℃延伸30s，反应循环数为40cycles；
[0221]
7)根据标准曲线计算拷贝数，采用graphpad软件计算ec
50
值；
[0222]
8)最终计算化合物的选择指数(si)，si＝ec
50
/ic
50
；
[0223]
具体实验结果如表2所示，(r)构型的氯喹、羟氯喹及其类似物和(s)构型的氯喹、羟氯喹及其类似物对流感病毒感染抑制活性和选择指数优于外消旋体氯喹、羟氯喹及其类似物，且具有更好的选择指数；
[0224]
表2细胞毒性、抗新型冠状病毒肺炎活性和选择指数
[0225]
[0226]
[0227]