一种提高细胞扩增倍数的NK细胞体外培养方法与流程

技术特征：
1.一种提高细胞扩增倍数的nk细胞体外培养方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）分离pbmc细胞；（2）取分离的pbmc细胞悬液，在d0天转移至包被有cd16抗体的培养瓶中，加入培养基，在37℃、5%二氧化碳培养条件下进行细胞激活培养，激活培养3d；（3）在d3天将细胞转移至新的培养瓶中，加入培养基，补液维持细胞密度为1
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1.5
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106个/ml，培养4d，在d7天将热灭活自体血浆比例降为1%，继续培养10d，在d17天离心收获细胞；在d0天添加50
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150μg/ml的右旋糖酐，右旋糖酐的平均分子量为mw=20000；从d3天开始，补液添加浓度为50
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200μg/ml的右旋糖酐，右旋糖酐的平均分子量为mw=9000。2.根据权利要求1所述的一种提高细胞扩增倍数的nk细胞体外培养方法，其特征在于：在d0天添加100μg/ml的右旋糖酐。3.根据权利要求1所述的一种提高细胞扩增倍数的nk细胞体外培养方法，其特征在于：从d3天开始，补液添加浓度为100μg/ml的右旋糖酐。4.根据权利要求1所述的一种提高细胞扩增倍数的nk细胞体外培养方法，其特征在于：所述培养基为含有il
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2、il
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15、il
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12、il
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21、热灭活自体血浆的nk培养基。5.根据权利要求4所述的一种提高细胞扩增倍数的nk细胞体外培养方法，其特征在于：所述il
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2的终浓度为1000iu/ml，il
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15的终浓度为50ng/ml，il
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12的终浓度为10ng/ml，il
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21的终浓度为10ng/ml，热灭活自体血浆的添加比例为10%。6.根据权利要求4所述的一种提高细胞扩增倍数的nk细胞体外培养方法，其特征在于：所述nk培养基为scgm nk培养基、康宁nk培养基、xvivo15培养基中的任意一种。7.根据权利要求1所述的一种提高细胞扩增倍数的nk细胞体外培养方法，其特征在于：步骤（2）中，培养瓶中细胞密度为2
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106个/ml。8.根据权利要求1所述的一种提高细胞扩增倍数的nk细胞体外培养方法，其特征在于：步骤（1）中，采用密度离心法从人全血中新鲜分离pbmc细胞。

技术总结
本发明公开了一种提高细胞扩增倍数的NK细胞体外培养方法，右旋糖酐具有激活自然杀伤细胞、巨噬细胞、促进免疫细胞扩增等作用，近年来被用作健康营养补充剂、功能口服液等产品的原料。不同分子量的右旋糖酐对免疫细胞生长的辅助作用也不同，低分子右旋糖酐可提高培养基渗透压以模拟血浆作用以辅助激活NK细胞，小分子右旋糖酐可通过提高细胞内游离钙离子与cAMP含量以及减少细胞聚团促进NK细胞扩增。本发明创造性地引入了右旋糖酐，并公开了一种右旋糖酐的添加方法，并限定了右旋糖酐的用量，在NK细胞体外培养过程中可将细胞扩增倍数提高60%以上，将NK细胞比例提高10%以上，具有较高的实用性。高的实用性。高的实用性。


技术研发人员：马士棋 陈旭 陈刚
受保护的技术使用者：依科赛生物科技（太仓）有限公司
技术研发日：2021.09.07
技术公布日：2021/10/11