一种二乙二醇丁醚溶石剂的制作方法

1.本发明涉及一种用于溶解胆结石的新型溶石剂，具体涉及一种二乙二醇丁醚溶石剂。


背景技术：

2.胆结石也叫胆石症在我国胆道疾病中居首位，是我国胆道疾病治疗的重点，其治疗手段包括手术及各种溶石碎石方法。主要有口服溶石、体外震波碎石和直接接触溶石。其中，直接接触溶石法具有损伤小、痛苦小、疗效确切等优点，尤其适用于不能耐受麻醉、手术及拒绝手术的患者。
3.1981年walker首先应用乙醚直接灌注胆囊溶解胆结石，但由于乙醚沸点低于体温，进入人体后蒸发而产生高压，使病人产生剧烈腹痛而未被广泛接受，随后的几十年，人们先后用氯仿等多种溶剂进行溶石，但因多种不良反应或效果不佳而未被推广，近年来由于影像技术在医学领域内的飞跃发展，使得胆囊和胆管经皮置管更加可行，胆结石的定性、定位更加准确，为注入药物溶石提供了必要的前提条件，因而自70年代后期以来，许多国家先后对注入药物溶石进行了大量的实验和临床研究以寻求理想的胆石溶剂。
4.其中，单辛脂被发现是一种很好的胆固醇溶解剂，并被研制成商品制剂capmul-8210。单辛脂进入肠道后被代谢为甘油和辛酸，辛酸在肝脏内进行分解代谢，进入人体后主要的副作用为局部刺激，引起胆囊、胆管基胃黏膜的炎症或溃烂。但这种溶石剂对于钙化后胆色素型胆结石难以溶解。
5.目前，甲基叔丁醚(mtbe)是迄今为止研究最多的胆结石溶解剂，在溶石效果和操作上都体现了优异性。甲基叔丁醚有特殊气味，易挥发，沸点为55℃，胆固醇在mtbe中的溶解度为20g/100ml，但mtbe溶解胆固醇型胆结石是单辛脂的50倍。在体外能够在60～100分钟内完全溶解胆固醇含量在40％～94％的人体胆结石，也可用于含少量胆色素的混合型胆结石，但对胆色素型胆结石的溶解效果较差，并且mtbe与血液不溶，因而胆囊内残留胆汁时，溶石剂不能与胆结石充分接触，影响溶石效果。另外，mtbe在治疗使用过程中溶解医用乳胶管，导致在使用过程中多种医用胶管都不能使用，并且mtbe对人体的毒副作用大。我国胆石症中胆色素型胆结石较多，其组成较为复杂，现有溶石剂中毒副作用小的溶石剂对其溶解效果相对较差。
6.基于上述问题，临床中需要一种安全副作用小的溶石剂，能够缩短溶石时间，降低副作用，以减轻治疗过程中病人痛苦。


技术实现要素：

7.为了解决上述问题，本发明人进行了锐意研究，发现以二乙二醇丁醚为溶石剂，取得了非常好的溶石效果，不但能够溶解胆固醇型胆结石，还能够溶解胆色素型胆结石和混合型胆结石，从而完成了本发明。
8.本发明的目的在于提供一种胆结石溶石剂，所述溶石剂包含二乙二醇丁醚。
9.所述溶石剂可以用来溶解胆固醇型胆结石、胆色素型胆结石和混合型胆结石。
10.本发明另一目的在于所述溶石剂在制备治疗胆结石的药物中的用途。
11.所述的溶石剂的给药方式，包括经皮经肝胆道置管或经内镜下逆行胆囊插管等途径，将溶石剂灌注进入胆囊，使其直接和胆石接触。
12.本发明中的溶石剂具有以下有益效果：
13.(1)本发明中以二乙二醇丁醚作为溶石剂，通过与水配合使用，不但得到较低浓度的二乙二醇丁醚溶石剂，减少人体副作用，同时还提高了溶石剂的溶石能力。
14.(2)本发明中的溶石剂可以溶解胆固醇型胆结石、胆色素型胆结石和混合型胆结石，可以用于临床胆结石疾病的非手术治疗方法。
15.(3)本发明中的溶石剂毒性低，易溶于水，便于清洗，在残留胆汁的情况下仍可以很好的进行溶石，不受胆囊等环境的影响。
附图说明
16.图1示出本发明溶石剂给药方式的示意图；
17.图2示出本发明溶石剂1-3溶解胆色素型胆结石效果图；
18.图3示出本发明溶石剂1-5溶解混合型胆结石效果图。
具体实施方式
19.下面通过具体实施方式对本发明进行详细说明，本发明的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚、明确。
20.所述溶石剂包含二乙二醇丁醚，还包含水。实验中发现，二乙二醇丁醚具有很好的溶石效果，不但可以溶解胆固醇型和混合型胆结石，还可溶解胆色素型胆结石。并且本发明中，二乙二醇丁醚与水配合使用，能够降低溶石剂浓度，减少对人体损伤，并且能够使溶石剂在有胆汁残留的情况下，仍然可以较好的与胆结石进行接触溶石。另外，溶石结束后，可以通过使用水性溶剂，如生理盐水，将残留的溶石剂清洗出来，减少溶石剂的残留。另外，二乙二醇丁醚毒性较低，ld50大鼠口服4500mg/kg(数据来源：欧洲化学品管理局ecb)，ld50兔子皮肤4120mg/kg(数据来源：wiley-interscience,wiley&sons,inc.hoboken,nj.2004.,p.1269)。
21.本发明中，通过大量实验发现，随着溶石剂中二乙二醇丁醚含量的增加，对胆结石的溶解速率起初逐渐增大，慢慢达到一个最高值，然后再增大二乙二醇丁醚的浓度溶石速率变化不明显。
22.以二乙二醇丁醚与水的混合溶液作为溶石剂时，当相对于1ml的二乙二醇丁醚，加水量由10ml变化到0.1ml时，溶解一定量胆固醇型胆结石的时间先是缩短，当二乙二醇丁醚与水的体积比为3:4时达到最短溶解时间，二乙二醇丁醚浓度继续增大，溶石时间先是恒定不变，而后略有增加。说明二乙二醇丁醚可在较低浓度下即可达到最佳溶石效果，不但降低二乙二醇丁醚的使用量，还能够减少二乙二醇丁醚对人体的副作用，减轻病人痛苦。
23.另外，在实验中还发现，如果所溶解的胆固醇型胆结石量增加，溶解时间会增长，在使用低浓度二乙二醇丁醚的溶石剂时(例如，二乙二醇丁醚与水的体积比为1:10)，还需增加溶石剂用量，说明固定浓度的二乙二醇丁醚溶石剂对胆固醇型胆结石的溶解量有一定
的限值。需要通过调整二乙二醇丁醚的浓度来协调溶石剂对胆固醇型胆结石的作用时间和用量，以达到溶石效果相对好、副作用相对低的使用状态。
24.在溶解胆固醇型胆结石方面，所述二乙二醇丁醚溶石剂中二乙二醇丁醚与水的体积比为1:(0.1～10)，优选为1:(0.3～5)，更优选为1:(1～2)，如1:1.3。
25.在本发明中的一种优选方式中，在溶石剂中加入甲基叔丁醚，可加速胆固醇型胆结石的溶解，所述甲基叔丁醚在溶石剂中的质量溶度为0.1％～5％，优选为0.5％～3％，更优选为0.8％～1.2％。
26.目前，对溶石剂的研究主要集中在溶解胆固醇型胆结石的溶石剂，对胆色素型胆结石和混合型胆结石溶解效果均不理想。
27.值得注意的是，二乙二醇丁醚溶石剂对胆色素型胆结石也具有很好的溶石效果。在对固定质量的胆色素型胆结石进行溶解时，通过大量实验，我们发现了与溶解胆固醇型胆结石类似的规律，当二乙二醇丁醚与水的体积比为3:4时，所用的溶石时间最短，溶解时间要长于对胆固醇型胆结石的溶解时间，说明胆色素型胆结石更难溶，在进行实际的溶石治疗过程中难度更大。
28.另外，所述二乙二醇丁醚溶石剂还可以对混合型胆结石进行溶解。在使用不同浓度的二乙二醇丁醚溶石剂对混合型胆结石进行溶解时，我们发现溶解时间在二乙二醇丁醚与水的体积比为3:4与1:1之间存在突变过程，二乙二醇丁醚的体积浓度稍有增加，溶石时间可以缩短近一半。在实际应用过程中，可以利用此浓度的突变过程大幅缩短溶石时间。
29.在溶解胆色素型和混合型胆结石方面，所述二乙二醇丁醚溶石剂中二乙二醇丁醚与水的体积比为1:(0.1～5)，优选为1:(0.5～3)，更优选为1:(1～1.5)，如1:1.3。当溶石剂中二乙二醇丁醚含量太低时，即使增长溶解时间和溶石剂使用量也无法对胆色素型胆结石进行很好的溶解。
30.在本发明的一种优选方式中，所述溶石剂还包含表面活性剂、蛋白溶解剂或络合剂。
31.在溶石剂中添加表面活性剂不但可以增溶，还具有乳化、润湿、去污、杀菌等作用。所述表面活性剂选自新洁尔灭、卵磷脂、聚乙二醇、聚山梨醇酯、泊洛沙姆，优选选自卵磷脂、聚乙二醇、聚山梨醇酯、泊洛沙姆，更优选为卵磷脂或泊洛沙姆。
32.卵磷脂可以调节血清脂质水平，能够降低胆固醇水平，保护肝脏，加强免疫力以及抗脂肪肝的活力。将卵磷脂加入到溶石剂中，可以提供一定的肝脏保护能力，降低溶石剂对肝脏的损伤。
33.泊洛沙姆是聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段共聚物，其中聚氧乙烯链具有相对亲水性，聚氧丙烯链具有相对亲油性。本发明中加入泊洛沙姆，一方面可以使其与水形成均一稳定的溶石剂，另一方面由于加入泊洛沙姆可以减少多烷烃醇丁醚的使用量，减少溶石剂对人体的副作用。
34.目前，胆固醇型胆结石中，70％以上为胆固醇，还会含有少量胆红素、胆酸、磷脂、蛋白、游离脂肪酸以及钙盐、镁盐等；混合型胆结石中，30％～70％为胆固醇，还含有胆色素和钙盐等；胆色素型胆结石的主要成分有游离胆色素、胆色素多聚体、各种钙盐和黏液糖蛋白、钙盐、细菌、虫卵、细胞等。因此，为了促进胆结石的溶石效果，本发明中，优选加入蛋白溶解剂。
35.所述蛋白溶解剂选自盐酸胍、尿素、硫脲、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(chaps)、二硫苏糖醇(dtt)，优选为盐酸胍、尿素或chaps，更优选为盐酸胍、尿素的一种或两种。
[0036]
盐酸胍和尿素对疏水氨基酸残基有增溶作用，盐酸胍和尿素的高浓度(4～8mol/l)水溶液能够使氢键断裂，使蛋白质分子内部的疏水残基伸展，进而使溶解性增加。
[0037]
在室温下，3～4mol/l盐酸胍可使球状蛋白质从天然状态转变至中间变性状态，通常增加变性剂浓度可提高变性程度，约6mol/l盐酸胍可以使蛋白质完全转变为变性状态。由于盐酸胍具有离子特性，在8mol/l盐酸胍溶液中，它们一般以无规卷曲构象的状态存在。
[0038]
尿素溶解能力较盐酸胍慢而弱，蛋白溶解度为70％～90％，尿素在作用时间较长或温度较高时会裂解形成氰酸盐，对重组蛋白质的氨基进行共价修饰，但其具有不电离、中性、成本低等优点。
[0039]
盐酸胍溶解能力和变性能力比尿素要强，不会造成重组蛋白质的共价修饰，但成本高、在酸性条件下易产生沉淀；尿素溶解蛋白能力相对较弱，但具有不电离、呈中性、成本低、蛋白质复性后不会造成大量蛋白质沉淀等优点。在实际应用中，根据溶石剂使用环境进行选择使用。
[0040]
所述溶石剂中盐酸胍的浓度为0.1～8mol/l，优选为1～7mol/l，更优选为2～6mol/l。
[0041]
所述溶石剂中尿素的浓度为0.1～8mol/l，优选为1～7mol/l，更优选为2～6mol/l。
[0042]
所述络合剂选自乙二醇二乙醚二胺四乙酸(egta)、乙二胺四乙酸(edta)、乙二胺四乙酸二钠(edta-2na)或氨基三乙酸(nta)，优选为乙二醇二乙醚二胺四乙酸(egta)、乙二胺四乙酸二钠(edta-2na)或乙二胺四乙酸(edta)，更优选为乙二胺四乙酸二钠(edta-2na)。
[0043]
edta、edta-2na和egta是胆色素型胆结石的良好溶剂，因其色素型胆结石中胆色素和钙含量很高，能有效地溶解其中的钙质，可以在镁离子存在下与钙离子络合。在溶石剂中加入钙离子络合剂，可以破解胆结石，尤其是胆色素型胆结石，使其中的钙离子从胆结石中溶解出来，进而层层破坏胆结石表面，实现逐步溶解。
[0044]
另外，在增溶剂的作用下，可使极性弱的溶石剂和极性强的edta-2na分子间具有相互增溶的作用，发挥各组分间的协同作用。所述络合剂的浓度为0.005～0.1g/ml，优选为0.008～0.08g/ml，更优选为0.01～0.05g/ml。
[0045]
所述的溶石剂的给药方式，包括经皮经肝胆道置管或经内镜下逆行胆囊插管等途径，将溶石剂灌注进入胆囊，使其直接和胆石接触进行胆结石溶解，置管或插管示意图如图1所示。
[0046]
本发明中的溶石剂在溶胀医用乳胶管的实验中发现，所述溶石剂对医用乳胶管的溶胀率非常低，并且通过测试，溶石剂中没有乳胶管成分，说明本发明中的溶石剂不会将乳胶管中的成分溶解出来，进而对人体造成伤害。
[0047]
本发明中的溶石剂不但能够溶解胆固醇型胆结石，还可以很好的溶解胆色素型和混合型胆结石，溶石剂为水体系，便于清洗，不受胆汁残留的影响，二乙二醇丁醚使用浓度低，溶石效果好。
[0048]
实施例
[0049]
实施例1
[0050]
将1ml、5ml、7.5ml二乙二醇丁基醚分别加入到10ml的去离子水中，磁力搅拌约2min，搅拌速度为100r/min，形成均一、稳定的溶石剂1-1、溶石剂1-2、溶石剂1-3。
[0051]
分别称三颗约0.1g的胆固醇型胆结石(胆结石来源于病人，女，44岁)放至上述混合溶液中，在超声波清洗机(超声波功率240w)破碎溶解胆结石。
[0052]
30min时，溶石剂1-3中胆结石完全溶解，溶石剂由原来的无色透明溶液变为淡黄色透明溶液；50min时，溶石剂1-2中胆结石完全溶解，溶石剂由原来的无色透明溶液变为淡黄色悬浊液；70min时，溶石剂1-1中胆结石完全溶解中胆结石完全溶解，溶石剂由原来的无色透明溶液变为淡黄色、泛白悬浊液。静置后，使用针头直径为0.7毫米的注射器，将烧杯中的溶石剂吸出，溶石剂1-3对应烧杯无杂质残留。溶石剂1-1和溶石剂1-2对应烧杯残留有少量粉状细小颗粒。
[0053]
在临床使用中，由于溶石后残留的粉状颗粒非常细小，可以在溶石结束后进行清洗，将残留的粉状颗粒和溶石剂清洗出去。
[0054]
实施例2
[0055]
将1ml去离子水、10ml去离子水分别加入到10ml二乙二醇丁基醚中进行混合，磁力搅拌约2min，搅拌速度为100r/min，形成均一稳定的溶石剂1-4、溶石剂1-5。
[0056]
分别称两颗约0.1g的胆固醇型胆结石(胆结石来源于病人，女，44岁)放至上述溶液中，然后在超声波清洗机(超声波功率240w)中破碎溶解胆结石。
[0057]
30min时，溶石剂1-4中胆结石完全溶解；40min时，溶石剂1-5中胆结石完全溶解，溶石剂颜色由无色澄清为黄色澄清，说明胆固醇型胆结石完全溶液于溶石剂中，整块胆结石先是在溶解和超声的作用下破碎成小颗粒，然后逐渐溶解消失。静置后，使用针头直径为0.7毫米的注射器，将烧杯中的溶石剂吸出，杯底均无残留物。
[0058]
实施例3
[0059]
称两颗约0.1g的黑色胆色素型胆结石(胆结石来源于病人，男，67岁，胆囊结石)分别置于溶石剂1-3和溶石剂1-5中，向其中加入胆结石。用超声波清洗机(超声波功率240w)破碎溶解胆结石。
[0060]
230min时，溶石剂1-3中胆色素型胆结石完全溶解；310min时，溶石剂1-5中胆结石完全溶解。上述两种溶石剂溶石过程中溶石剂由无色透明溶液红褐色透明溶液，整块胆结石先是在溶解和超声的作用下破碎成小颗粒，然后逐渐溶解消失。溶石剂1-3溶解胆色素型胆结石的过程效果如图2所示。静置后，使用针头直径为0.7毫米10ml的注射器，将烧杯中的溶石剂吸出，杯底无杂质。
[0061]
实施例4
[0062]
称两颗约0.15g的完整的褐色混合型胆结石(胆结石来源于病人，女，33岁)分别置于溶石剂1-3和溶石剂1-5中。用超声波清洗机(超声波功率240w)破碎溶解胆结石。
[0063]
60min时，溶石剂1-5中胆结石完全溶解；100min时，溶石剂1-3中胆结石完全溶解。静置后，使用针头直径为0.7毫米的注射器，将烧杯中的溶石剂吸出，无杂质残留。溶解过程中，溶石剂由无色透明溶液变为红褐色透明溶液，整块胆结石先是在溶解和超声的作用下破碎成小颗粒，然后逐渐溶解消失。溶石剂1-5溶解褐色混合型胆结石的过程及效果如图3
所示。
[0064]
实施例5
[0065]
溶石剂对胆结石溶解手术中所使用的乳胶管的溶胀作用。不同的溶剂导致乳胶管的溶胀程度不同，严重的溶胀显现会给胆结石溶解手术带来很大的负面影响。
[0066]
研究以下四种溶石剂对乳胶管的溶胀程度的影响：
[0067]
溶石剂1-3：二乙二醇丁基醚:水＝7.5ml:10ml；
[0068]
溶石剂1-5：二乙二醇丁基醚:水＝10ml:10ml
[0069]
取等长两段乳胶管，完全浸泡在上述两种溶石剂中24小时后，比较乳胶管浸泡前后的质量、体积、长度的变化。取等长三段乳胶管，采用去离子水作为阴性对照组，采用传统溶石剂乙酸异戊酯和甲基叔丁基醚作为阳性对照组。
[0070]
浸泡前，称取乳胶管质量，并用钢板尺测量乳胶管长度。量筒中加入定量去离子水，在将乳胶管放入量筒中浸没，读取前后差值计为乳胶管体积。
[0071]
将乳胶管在室温下自然干燥1小时后，置于上述溶石剂中，并将对比乳胶管置于足量的去离子水、乙酸异戊酯和甲基叔丁基醚中浸泡24h。浸泡结束后，在室温下自然干燥1小时后，以上述同样的方法测量乳胶管的质量、长度和体积，结果如表1所示。
[0072]
表1乳胶管浸泡前后变化比值
[0073][0074]
从乳胶管浸泡前后数据变化可以看出，现有的溶石剂乙酸异戊酯和甲基叔丁基醚会明显造成乳胶管的溶胀，而本发明中提供的溶石剂对乳胶管的溶胀明显降低。
[0075]
以上结合具体实施方式和/或范例性实例以及附图对本发明进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本发明的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本发明的范围内。本发明的保护范围以所附权利要求为准。