用于增加肠道菌群中栖粪杆菌占有率的组合物的制作方法

1.本发明涉及一种用于增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌占有率的组合物。


背景技术：

2.栖粪杆菌属细菌是短链脂肪酸产生菌，主要产生丁酸作为代谢物。丁酸具有诱导调节性t细胞(treg)的能力，已被发现具有抗炎和抗过敏作用。栖粪杆菌属细菌在人类肠道菌群中的占有率高达百分之几，并且表明栖粪杆菌属细菌的减少可能与克罗恩病等有关(非专利文献(npl)1)。
3.传统上已知可可(cacao)有助于增加栖粪杆菌属细菌的占有率。例如，专利文献(ptl)1报道了含有高浓度可可豆来源的消化管调和物质(luminacoid)的加工油脂组合物显著增加了人类肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率。
4.但是，可可中含有可可碱、咖啡因等。由于可可碱和咖啡因具有例如支气管扩张、利尿、兴奋等作用，对这些成分敏感的人、服用茶碱等药物的人以及孕妇等食用可可含量高的食品时应小心。引文列表专利文献
5.专利文献1：wo2018/056284非专利文献
6.npl1：the isme journal，2017年11月，第841
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852页


技术实现要素：

技术问题
7.本发明的一个目的是提供一种用于增加栖粪杆菌属细菌占有率的组合物。解决问题的方案
8.本发明人为解决上述问题进行了深入研究，结果发现，作为中药原料药材的大健中汤(daikenchuto)提取物能够显著增加人类肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率(％)。
9.本发明是基于上述发现进一步研究的结果。本发明提供了下列组合物，用于增加栖粪杆菌属细菌在肠道菌群中的占有率。
10.第1项：一种用于增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌占有率的组合物，该组合物包含大建中汤提取物。第2项：根据第1项的组合物，其中，所述大建中汤提取物的含量为每日摄入量，所述每日摄入量可有效增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率。第3项：根据第1项或第2项的组合物，其中，所述大建中汤提取物的含量为0.1至15g的每日摄入量。第4项：根据第1项或第2项的组合物，其中，所述大健中汤提取物的含量为0.1～3.0g的每日摄入量。
第5项：根据第1至4项中任一项所述的组合物，其中，获得大建中汤提取物所用原料药材的质量比为花椒果实或花椒：人参：干姜为1：0.2～2.0：1.0～3.0。第6项：根据第1至4项中任一项所述的组合物，其中，获得大建中汤提取物所用原料药材的质量比为花椒果实或花椒：人参：干姜为1：0.4～1.4：1.4～2.4。第7项：根据第1至6项中任一项所述的组合物，用于治疗、预防或改善可通过增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率来治疗、预防或改善的疾病或症状。第8项：根据第1至7项中任一项所述的组合物，其为食品。
11.本发明还提供以下内容。第9项：一种增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌占有率的方法，该方法包括将包含大建中汤提取物的组合物给予有需要的哺乳动物。第10项：大建中汤提取物在制备用于增加肠菌群中栖粪杆菌属细菌占有率的组合物中的用途。第11项：根据第9项的方法或根据第10项的用途，其中，所述组合物包含每日摄入量的大建中汤提取物，所述每日摄入量可有效增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率。第12项：根据第9或11项的方法，或根据第10或11项的用途，其中，所述组合物包含每日摄入量为0.1至15g的大建中汤提取物。第13项：根据第9或11项的方法，或根据第10或11项的用途，其中，所述组合物包含每日摄入量为0.1至3.0g的大建中汤提取物。第14项：根据第9项和第11至13项中任一项所述的方法，或根据第10至13项中任一项所述的用途，其中，获得大建中汤提取物所用原料药材的质量比为花椒果实或花椒：人参：干姜为1：0.2～2.0：1.0～3.0。第15项：根据第9项和第11至13项中任一项所述的方法，或根据第10至13项中任一项所述的用途，其中，获得大建中汤提取物所用原料药材的质量比为花椒果实或花椒：人参：干姜为1：0.4～1.4：1.4～2.4。第16项：根据第9项和第11至15项中任一项所述的方法，或根据第10至15项中任一项所述的用途，其中，所述组合物是食品。第17项：根据第9项和第11项至第16项中任一项所述的方法，其是用于治疗、预防或改善可通过增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率来治疗、预防或改善的疾病或症状的方法。第18项：根据第10至16项中任一项所述的用途，其中，所述组合物用于治疗、预防或改善可通过增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率来治疗、预防或改善的疾病或症状。发明的有益效果
12.本发明的组合物能够有效提高栖粪杆菌属细菌在肠道菌群中的占有率。特别地，本发明的组合物能够增加成人体内栖粪杆菌属细菌的占有率，而无需使用可可碱或咖啡因。
13.本发明的组合物增加了栖粪杆菌属细菌在肠道菌群中的占有率，可有助于治疗、预防或改善可通过增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率来治疗、预防或改善的疾病或症状。
附图说明
14.图1是显示各受试者摄入试验食品前后的菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率的图。
具体实施方式
15.下面详细描述本发明。
16.在本说明书中，术语“包含”还包括“基本上由
……
组成”和“由
……
组成”的含义。
17.本发明的组合物用于提高栖粪杆菌属细菌在肠道菌群中的占有率，其特征在于包含大建中汤提取物。
18.栖粪杆菌属细菌是属于梭菌(clostridium)簇iv(柔嫩梭菌(c.leptum)亚群)并且属于栖粪杆菌属的微生物。属于栖粪杆菌属的微生物的实例包括普拉梭菌(faecalibacterium prausnitzii)。
19.肠道微生物群(肠道菌群)是指存在于肠道中的细菌种群，也称为肠道菌群和肠道菌丛。
20.中国宋代的医书《金匮要略》中记载了大建中汤。它被认为具有例如增强肠蠕动、抑制过度肠蠕动、抑制肠梗阻和增加肠血流量的作用以及抗炎作用。大建中汤通常是通过如下获得的：使用由2.0g花椒果实或花椒、3.0g人参和5.0g干姜组成的原料药材混合物的粉末形式提取物，将提取物量的约8倍的粉状糖(胶饴、麦芽糖)混合到其中。大建中汤通常由花椒果实或花椒：人参：干姜：胶饴按2.0：3.0：5.0：20的质量比配制而成。
21.在本说明书中，术语“大建中汤提取物”是指不含有胶饴的原料药材混合物的提取物。然而，本发明的组合物中所含的大建中汤提取物可以是提取物本身的形式，也可以是提取物与胶饴的混合物的形式。
22.本发明的组合物可以仅由大建中汤提取物组成。或者，除了大建中汤提取物之外，本发明的组合物还可包含其他组分。本发明组合物中大建中汤提取物的含量可根据组成、剂型、症状等适当设定。当含有其他成分时，本发明组合物中大建中汤提取物的比例没有特别限制；它通常为例如0.1至99.9质量％，优选1至50质量％，并且更优选4至30质量％。
23.本发明的组合物可以是任何形式，例如凝胶剂、粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、液体、悬浮液或乳液形式。
24.本发明的组合物优选通过口服给药。除了口服给药之外的给药方法也适用。例如，为了有效运输至肠的目的，可将基剂掺入本发明的组合物中。基剂可以是通用胶凝剂。由于需要适当的储存稳定性，因此优选明胶以外的胶凝剂。这种胶凝剂的实例包括卡拉胶、刺槐豆胶、黄原胶、聚丙烯酸和角豆胶。
25.在本发明中，短语“增加栖粪杆菌属细菌在肠道菌群中的占有率”是指：与摄入或施用前相比，摄入或施用例如1％以上、2％以上、3％以上、4％以上、5％以上、6％以上、7％以上、8％以上、9％以上或10％以上的本发明组合物后，栖粪杆菌属细菌在肠道菌群中的占有率增加。
26.本发明的组合物可用于治疗或非治疗应用。此外，本发明的组合物特别适用于包括人在内的哺乳动物(例如，人、猴、小鼠、大鼠、兔、狗、猫、马、牛和猪；优选人)。
27.本发明的组合物可用于治疗、预防或改善可通过增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率而有效治疗、预防或改善的疾病或症状。
28.可以通过增加栖粪杆菌属细菌的占有率来治疗、预防或改善的疾病和症状的实例包括炎性疾病(例如溃疡性结肠炎、克罗恩病和其他炎性肠病)、过敏性疾病(例如，食物过敏、花粉热、哮喘、过敏性鼻炎、药物过敏、特应性皮炎和螨虫过敏)，以及被认为是由生态失调引起的疾病(例如，克罗恩病、炎症性肠病、肠易激综合征、小肠细菌过度生长(sibo)、伪膜性肠炎(艰难梭菌结肠炎)、结直肠癌、抗菌素引起的腹泻、肝脏疾病如酒精性脂肪性肝炎(ash)和非酒精性脂肪性肝炎(nash)、2型糖尿病、肥胖症、过敏性疾病、精神障碍如自闭症、多发性硬化症)。
29.本发明的组合物可用作食品、药品、准药品(quasi
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drug)、饲料等。本发明的组合物还包括食品、药品、准药品、饲料等添加剂的含义。
30.在本说明书中，术语“食品”还包括以健康、保健、促进健康等为目的的食品和饮料的含义(例如，保健食品、功能性食品、膳食补充剂、补充剂、特定保健用途食品、具有营养功能的食品或具有功能性声明的食品)、婴儿食品、孕妇和哺乳期妇女食品、病人食品等。
31.虽然大建中汤提取物可以直接用在食品中，但也可以根据需要添加其他成分。
32.食品包括动物(包括人类)可以食用的任何食品和饮料。食品的种类没有特别限制。例子包括乳制品；发酵食品(例如酸奶和奶酪)；饮料(软饮料如咖啡、果汁和茶饮料；碳酸饮料；乳饮料；乳酸菌饮料；含乳酸菌饮料；酸奶饮料；以及酒类如日本酒、果酒和洋酒)；涂抹酱(例如蛋奶羹)；糊剂(例如，水果糊剂)；西式糖果(例如甜甜圈、馅饼、奶油泡芙、口香糖、糖果、果冻、饼干、蛋糕、巧克力和布丁)；日本甜点(例如，大福、麻糬、馒头(manju)、长崎蛋糕、蜜豆冰(anmitsu)和羊羹)；冷冻甜点(例如冰淇淋、冰棒和冰糕)；食品(例如咖喱、牛丼饭、稀饭、味噌汤、汤、肉酱、意大利面、泡菜和果酱)；和调味料(例如，调味品、增味剂、米饭调味料和汤料)。
33.食品的制造方法也没有特别限定，可以适当采用公知的方法。
34.使用食品作为补充剂时的剂量单位形式没有特别限制，并且可以适当地选择。例子包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、液体剂、喷雾剂和凝胶剂。
35.食品的摄入量可以根据摄入食品的人的体重、年龄、性别、症状等各种条件适当设定。大建中汤提取物的每日摄入量例如在后文陈述。
36.为了制备药品和准药品，可以直接使用大建中汤提取物。或者，大建中汤提取物可以与药物可接受的无毒载体、稀释剂或赋形剂一起使用以获得药用制剂，其为例如片剂形式(例如，未包衣片剂、糖衣片剂、薄膜包衣片剂、泡沫片、咀嚼片和锭剂)、胶囊剂、丸剂、粉剂(喷雾剂)、细颗粒剂、颗粒剂、液体剂、混悬剂、乳剂、果冻剂、糖浆剂和糊剂。药物可接受的无毒载体的实例包括粘合剂、添加剂、调味剂、缓冲剂、增稠剂、着色剂、稳定剂、乳化剂、分散剂、悬浮剂和防腐剂。
37.药物和准药物的给药方法没有特别限制。实例包括口服给药、直肠给药、肠内给药、口腔给药、动脉内给药、静脉内给药和经皮给药。
38.药物和准药物的给药量可以根据患者的体重、年龄、性别、症状等各种条件适当确定。例如，大建中汤提取物的每日给药量将在后面说明。
39.几种大建中汤提取物已经作为药品上市。然而，从可获得性的角度来看，本发明的组合物优选用作食品。
40.食品、药品、准药品等可贴标签说明，例如，该产品用于增加栖粪杆菌属细菌在肠
道菌群中的占有率，或用于扩大产生丁酸的细菌在肠道菌群中的占有率。
41.本发明的组合物也可以与其他组合物组合使用。例如，组合使用本发明的组合物与预期表现出增加栖粪杆菌属细菌占有率效果的材料和组合物可以进一步提高栖粪杆菌属细菌在肠道菌群中的占有率的增加效果。
42.在本发明的组合物中，大建中汤提取物的剂量必须适量，因为过高的剂量会导致腹泻，而过低的剂量则达不到预期的效果。大健中汤提取物的日剂量(每日摄入量)优选为0.1～15g的提取物，所述提取物是0.5～6g的花椒果实或花椒、0.5～6g的人参和1～12g的干姜(原料药材)的提取物；更优选0.5～6g的提取物，所述提取物是0.5～2g的花椒、0.5～2g的人参和1～4g的干姜的提取物；还更优选1～2g的提取物，所述提取物是1～1.5g的花椒、1～1.5g的人参和1.5～2.5g的干姜的提取物。剂量不限于每日一次，也可以分为多次日剂量。
43.用于获得本发明组合物中所含的大健中汤提取物的原料药材的质量比优选为花椒果实或花椒：人参：干姜为1：0.2～2.0：1.0～3.0，进一步优选为1：0.4～1.4：1.4～2.4，更进一步优选为1：0.6～1.2：1.6～2.2。
44.下述实施例的结果证实了本发明的组合物可以连续服用7天，并证实了7天后栖粪杆菌属的占有率增加。因此，本发明的组合物优选连续摄入1周以上，更优选2周以上，进一步优选3周以上。
45.大健中汤促进肠道蠕动，这会导致胃部有隆隆声或摄入后有气体通过。因此，摄入优选在睡前进行。如下所述的实施例所示，睡前摄入显示出实际效果。
46.本发明的组合物可包含每日摄入量的大建中汤提取物，所述每日摄入量可有效增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率。在这种情况下，可以包装本发明的组合物以提供每日有效摄入量。包装形式可以是单包装也可以是多包装，只要能提供每日有效摄入量即可。当每日有效摄入量被分成多个包装时，可以将包含每日有效摄入量的多个包装作为一组使用。例如，大健中汤提取物的每日有效摄入量比如为0.1～15g，优选为0.1～3.0g，更优选为0.5～2.0g。
47.包装形式没有特别限制，只要可以包含预定量的提取物即可。例子包括袋子、包装纸、纸容器、软包、罐头、瓶子和胶囊。
48.本发明的组合物能够有效提高栖粪杆菌属细菌在肠道菌群中的占有率。特别地，本发明的组合物能够在短时间内增加人体内栖粪杆菌属细菌的占有率，而无需使用可可碱或咖啡因。此外，本发明的组合物增加了栖粪杆菌属细菌在肠道菌群中的占有率，可有助于治疗、预防可通过增加肠道菌群中栖粪杆菌属细菌的占有率来治疗、预防或改善的疾病或症状。实施例
49.下面参考实施例更详细地描述本发明。然而，本发明不限于这些实施例等。
50.人体研究组合物的制备使用市售的花椒、亚洲人参和干姜以1：1：2的质量比通过已知方法提取大建中汤提取物。然后，将得到的提取物1.25g、糖浆2.6g、乙醇0.085g、纯净水0.565g混合，得到组合物4.5g(每日摄入量)。
51.人体研究筛选出5名20岁以上60岁以下的健康受试者，在第1天至第7天睡前服用该组合物。服用该组合物的同时可以服用水或热水。在摄入组合物的前一天(第0天)和摄入7天后的第二天早上(第8天)测量菌群中的占有率。
52.测试期间的生活方式指示受试者在测试期间照常生活，并遵守以下限制。
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不要大幅度改变饮食习惯(食物的数量和内容)，不要过分严格的限制饮食和暴饮暴食，这会大大偏离日常生活。
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避免大幅度改变通常的饮酒量；但是，一般情况下，饮酒不受限制。
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在摄入完成一周后粪便收集之前，尽可能避免对生活进行任何重大改变。
53.菌群测量方法纯化粪便中的dna，放大16s rrna v1
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v2区域以使用miseq下一代测序仪(illumina)进行序列分析。质量过滤后，从每个样本中随机选择10,000个读数，以97％的同源性聚类，并分类为操作分类单元(otus)。从全长16s基因数据库中整理形成的otu的代表性序列，以识别物种并分析其组成。qiime流水线用于从聚类到细菌菌群组成分析的过程，而greengenes用于全长16s基因数据库。
54.参考资料：qiime：nat methods，2010年5月；第7期第5卷：第335
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336页，doi：10.1038/nmeth.f.303，电子版：2010年4月11日。greengenes：applied and environmental microbiology，2006年7月，第72卷，第7期，第5069
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5072页，doi：10.1128/aem.03006
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55.结果结果如表1和图1所示。在受试者的肠道菌群中(属类水平)，与摄入前(第0天)相比，在摄入后(第8天)的测试食物摄取组中的5名受试者中有4名的栖粪杆菌属细菌的占有率增加了2％以上，肠道菌群中的细菌总数计为100％(表1，图1)。
56.表1