一种几丁质糖膜眼贴制作工艺的制作方法

1.本发明属于医疗技术领域，具体涉及一种几丁质糖膜眼贴制作工艺。


背景技术：

2.干眼是由泪液的质、量及动力学异常导致的泪膜不稳定或眼表微环境失衡，可伴有眼表炎性反应、组织损伤及神经异常，造成眼部多种不适症状和视功能障碍。在世界范围内发病率大概在5.5％—33.7％左右，其中女性高于男性，老年人高于青年人，亚洲人高于其他人种。仅在美国就有1,600万成年人受到影响。日本发病率为17％，澳大利亚为10.3％，干眼在我国的发病率与亚洲其他国家相类似，较美国及欧洲高，其发病率在21％—30％左右，我国高中阶段21％男生和24％女生出现了ded症状。目前ded其发病率有逐年增高的趋势，为已成为一项重大的公共健康问题。
3.几丁质又称甲壳素，是除纤维素以外的第二大天然多糖。它广泛存在于自然界如虾蟹等甲壳类动物的外壳中，同时也存在于海藻和真菌的细胞壁中，它的结构与纤维素十分相似，可以看成是纤维素的单塘残基中2位上的羟基被乙酰氨基(coch3)所取代的结果，即2
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乙酰氨基β
‑
1.4
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葡聚糖。将几丁质投入到40％naoh于70
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80℃保温10小时以上(脱乙酰基)，取出水洗至中性，即得壳聚糖片状物。自1811年braconnot发现几丁质以来，几丁质/壳聚糖已被证实具有无毒性、无刺激性、无免疫原性、无热源反应、不溶血、无致突变、无致死突变效应及具有抗血栓、耐高温消毒、可生物降解等优点，已广泛应用于化妆品和医药领域，如用于组织工程支架和组织修复的生物材料、伤口敷料、隐形眼镜、人造皮肤、外科缝线、人造血管、人工肾等,特别是在骨关节炎的治疗、皮肤伤口愈合、化妆品和牙科中。用壳聚糖制成的几丁质膜具有可透气、吸水性能,如将此“人造皮肤”贴在烧伤或烫伤的创口上则创口中的溶菌酶即可缓慢地分解此薄膜，最后导致伤口的愈合。从1977年4月11
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13日在美国波士顿召开了首届国际儿丁质/壳聚糖会议以来，大约每隔几年就有一次国际性的几丁质/壳聚糖专题学术讨论会，研究涉及的领域十分广阔。
4.在眼科应用方面，利用几丁质促进组织修复、抑制纤维结缔组织增生、止血和促进血管内皮细胞生长等作用，将其制备角膜接触镜、眼科手术缝合线和结膜缓释药膜等已用于眼科临床。近年出现的眼膜具有使用方便、作用持久、剂型可控等优点，有望成为常用的眼部外用治疗手段之一。水凝胶眼膜，是一种功能性高分子材料，具有舒适感强、隔离细菌、可包含透皮成分、利于药物吸收等优势。因此，需要制作几丁质糖膜眼贴用于治疗干眼症。


技术实现要素：

5.因此，本发明要解决现有技术中治疗干眼症效果差的问题。
6.为此，采用的技术方案是，本发明的一种几丁质糖膜眼贴制作工艺，包括如下步骤：
7.步骤1，将油项原料和水项原料进行配料、搅拌形成水凝胶；
8.步骤2，将水凝胶涂布成型制成成品。
9.优选的，所述步骤1中，将油项原料倒入强力搅拌机进行预搅拌6
‑
10分钟，将水项原料倒入不锈钢水桶中进行充分搅拌溶解，先将水项原料倒入真空搅拌罐，再加入搅拌好的油项原料，盖上罐盖抽真空至
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0.08mpa，开启搅拌8
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10分钟，放气后将料倒入不锈钢桶，再倒入涂布机料斗内，就制作好了水凝胶。
10.优选的，所述油项原料包括：几丁质、甘油、聚丙烯酸钠、甘羟铝、羟基乙酸、赋形剂，各成分对应的比例是5％：25％：5％：0.15％：0.1％：0.1％。
11.优选的，所述水项原料包括：纯净水、酒石酸、玻尿酸、防腐剂，各成分对应的比例是61.1％：0.25％：3％：0.3％。
12.优选的，所述步骤2中，
13.将水刺无纺布和pu膜装上涂布机，牵引到横切刀处；将放料斗内的水凝胶放出；运行涂布机使水凝胶到达胶辊口，然后经胶辊将水刺无纺布、水凝胶料、pu膜三者复合，先经纵压轮纵压，再经横压轮横压成型，送至圆刀纵向分切，继续传送至裁切刀切成成品，直接跌落到下方传送带；用成品板接上传送过来的成品，摆放整齐，不能重叠或对折；成品板放到固化架上，在晾晒间进行固化；固化8小时以上装袋、封口。
14.一种几丁质糖膜有效性的试验方法适用于所述的一种几丁质糖膜眼贴制作工艺，包括如下步骤：
15.步骤1，干眼动物模型建立；
16.步骤2，动物分组，并给动物提供几丁质糖膜；
17.步骤3，对动物进行实验检测。
18.优选的，所述步骤1中，
19.动物双眼滴0.25％氯霉素滴眼液，每次每眼2滴,每日5次，并喂养3天后，随机选取36眼制做干眼模型；0.5％的卡因表面麻醉,，.5％利多卡因1毫升球后麻醉，摘除兔眼泪腺约0.3cm3，harder氏腺约0.6cm3和全部瞬膜后用细棉签蘸50％三氯醋酸涂抹距角膜缘3mm以外球结膜，待球结膜颜色变白时用生理盐水缓慢冲洗，术后点0.25％氯霉素滴眼液预防感染，每次每眼2滴，每天5次，共用3天；术前及术后第10天行泪液分泌实验、角结膜虎红染色检查，选取病变程度一致的动物作为实验动物，滤纸浸湿长度均小于8mm，角结膜上虎红着色点分布密集，结膜囊内有粘液丝；
20.优选的，所述步骤2中，
21.将模型动物随机分组:第一组5只兔，为空白对照组；无药水凝胶眼膜治疗；第二组5只兔为几丁质水凝胶眼膜治疗组；第三组5只兔为阳性药物对照组用泪液滴眼液治疗；每天给各组兔子双眼敷相应浓度几丁质水凝胶眼膜30min，共15天。
22.优选的，所述步骤3中，对动物进行实验检测的方法包括：泪液分泌；虎红角结膜染色；结膜上皮改变及杯状细胞计数；角膜上皮改变；泪腺和harder氏腺病理切片；
23.泪液分泌包括如下步骤；用药3
‑
4小时后，以5x35mm的滤纸一条，在首端5mm处反折，置于下睑中后部1/3交界处,，5分钟后取出纸条，取出2分钟后测滤纸湿长，反复测3次，取平均值记为滤纸湿长，每周观察一次；
24.虎红角结膜染色包括如下步骤；将浓度为1％的虎红l滴滴入结膜囊内，5分钟后在裂隙灯显微镜黄光下计数角结膜着色点数，每周观察1次；
25.结膜上皮改变及杯状细胞计数包括如下步骤；治疗结束后，每只动物每眼均做结
膜上皮病理检查；在表面麻醉下，剪除鼻下方弯隆部全层结膜3x3mm；平置于滤纸上，伊红染色后连同纸板一同放入10％中性福尔马林中固定，脱水后，石蜡包埋，制成4μm厚的组织切片，再用ab
‑
aps染色，在400倍光学显微镜下观察每视野杯状细胞平均计数，he染色观察结膜上皮形态；
26.角膜上皮改变包括如下步骤；治疗结束后，每组随机选取二眼做角膜电镜检查；在表面及球后麻醉下，摘除兔眼眼球，清洗后立即浸入4％多聚甲醛
‑
2.5％戊二醛混合液固定中，l％锇酸再固定，逐级丙酮脱水，环氧树脂包埋,超薄切片，经醋酸铀和枸橼酸铅染色，在透射电子显微镜下观察角膜上皮形态；
27.泪腺和harder氏腺病理切片包括如下步骤；造模时和治疗结束后，每组分别随机选取2眼做泪腺和哈氏腺病理切片；在表面麻醉和球后麻醉下，手术摘除兔眼泪腺和harder氏腺，冲洗后置入1滴福尔马林中固定，脱水后，石蜡包埋，制成4μm厚的组织切片，he染色，在光学显微镜下观察泪腺和哈氏腺形态。
28.本发明技术方案具有以下优点：本发明的一种几丁质糖膜眼贴制作工艺，包括如下步骤：步骤1，将油项原料和水项原料进行配料、搅拌形成水凝胶；步骤2，将水凝胶涂布成型制成成品。通过该工艺制作的几丁质糖膜眼贴对于治疗干眼症有良好的效果，而且制作效率高，制作成本低。
29.本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在所写的说明书以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。
30.下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
31.附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
32.图1是本发明的工艺流程图；
具体实施方式
33.为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
34.本发明提供了一种几丁质糖膜眼贴制作工艺，如图1所示，包括如下步骤：
35.步骤1，将油项原料和水项原料进行配料、搅拌形成水凝胶；
36.步骤2，将水凝胶涂布成型制成成品。
37.所述步骤1中，将油项原料倒入强力搅拌机进行预搅拌6
‑
10分钟，将水项原料倒入不锈钢水桶中进行充分搅拌溶解，先将水项原料倒入真空搅拌罐，再加入搅拌好的油项原料，盖上罐盖抽真空至
‑
0.08mpa，开启搅拌8
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10分钟，放气后将料倒入不锈钢桶，再倒入涂布机料斗内，就制作好了水凝胶。
38.所述油项原料包括：几丁质、甘油、聚丙烯酸钠、甘羟铝、羟基乙酸、赋形剂，各成分对应的比例是5％：25％：5％：0.15％：0.1％：0.1％。
39.所述水项原料包括：纯净水、酒石酸、玻尿酸、防腐剂，各成分对应的比例是61.1％：0.25％：3％：0.3％。
40.所述步骤2中，
41.将水刺无纺布和pu膜装上涂布机，牵引到横切刀处；将放料斗内的水凝胶放出；运行涂布机使水凝胶到达胶辊口，然后经胶辊将水刺无纺布、水凝胶料、pu膜三者复合，先经纵压轮纵压，再经横压轮横压成型，送至圆刀纵向分切，继续传送至裁切刀切成成品，直接跌落到下方传送带；用成品板接上传送过来的成品，摆放整齐，不能重叠或对折；成品板放到固化架上，在晾晒间进行固化；固化8小时以上装袋、封口。
42.上述技术方案的技术效果：通过该工艺制作的几丁质糖膜眼贴对于治疗干眼症有良好的效果，而且制作效率高，制作成本低。
43.一种几丁质糖膜有效性的试验方法适用于所述的一种几丁质糖膜眼贴制作工艺，包括如下步骤：
44.步骤1，干眼动物模型建立；
45.步骤2，动物分组，并给动物提供几丁质糖膜；
46.步骤3，对动物进行实验检测。
47.所述步骤1中，
48.动物双眼滴0.25％氯霉素滴眼液，每次每眼2滴,每日5次，并喂养3天后，随机选取36眼制做干眼模型；0.5％的卡因表面麻醉,，.5％利多卡因1毫升球后麻醉，摘除兔眼泪腺约0.3cm3，harder氏腺约0.6cm3和全部瞬膜后用细棉签蘸50％三氯醋酸涂抹距角膜缘3mm以外球结膜，待球结膜颜色变白时用生理盐水缓慢冲洗，术后点0.25％氯霉素滴眼液预防感染，每次每眼2滴，每天5次，共用3天；术前及术后第10天行泪液分泌实验、角结膜虎红染色检查，选取病变程度一致的动物作为实验动物，滤纸浸湿长度均小于8mm，角结膜上虎红着色点分布密集，结膜囊内有粘液丝；
49.所述步骤2中，
50.将模型动物随机分组:第一组5只兔，为空白对照组；无药水凝胶眼膜治疗；第二组5只兔为几丁质水凝胶眼膜治疗组；第三组5只兔为阳性药物对照组用泪液滴眼液治疗；每天给各组兔子双眼敷相应浓度几丁质水凝胶眼膜30min，共15天。
51.所述步骤3中，对动物进行实验检测的方法包括：泪液分泌；虎红角结膜染色；结膜上皮改变及杯状细胞计数；角膜上皮改变；泪腺和harder氏腺病理切片；
52.泪液分泌包括如下步骤；用药3
‑
4小时后，以5x35mm的滤纸一条，在首端5mm处反折，置于下睑中后部1/3交界处,，5分钟后取出纸条，取出2分钟后测滤纸湿长，反复测3次，取平均值记为滤纸湿长，每周观察一次；
53.虎红角结膜染色包括如下步骤；将浓度为1％的虎红l滴滴入结膜囊内，5分钟后在裂隙灯显微镜黄光下计数角结膜着色点数，每周观察1次；
54.结膜上皮改变及杯状细胞计数包括如下步骤；治疗结束后，每只动物每眼均做结膜上皮病理检查；在表面麻醉下，剪除鼻下方弯隆部全层结膜3x3mm；平置于滤纸上，伊红染色后连同纸板一同放入10％中性福尔马林中固定，脱水后，石蜡包埋，制成4μm厚的组织切片，再用ab
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aps染色，在400倍光学显微镜下观察每视野杯状细胞平均计数，he染色观察结膜上皮形态；
55.角膜上皮改变包括如下步骤；治疗结束后，每组随机选取二眼做角膜电镜检查；在表面及球后麻醉下，摘除兔眼眼球，清洗后立即浸入4％多聚甲醛
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2.5％戊二醛混合液固定中，l％锇酸再固定，逐级丙酮脱水，环氧树脂包埋,超薄切片，经醋酸铀和枸橼酸铅染色，在透射电子显微镜下观察角膜上皮形态；
56.泪腺和harder氏腺病理切片包括如下步骤；造模时和治疗结束后，每组分别随机选取2眼做泪腺和哈氏腺病理切片；在表面麻醉和球后麻醉下，手术摘除兔眼泪腺和harder氏腺，冲洗后置入1滴福尔马林中固定，脱水后，石蜡包埋，制成4μm厚的组织切片，he染色，在光学显微镜下观察泪腺和哈氏腺形态。
57.几丁质水凝胶眼膜初步安全性试验
58.1.实验方法
59.空白对照组：不做干预，采集指标种类及采集时间同低、高浓度组。低、高浓度组：每天给豚鼠双眼膜敷相应浓度干眼中药水凝胶眼膜30min，在用药第1、4、7、11、14d行结膜充血、角膜荧光素染色检查，并用裂隙灯拍照，用药第14d行结膜印迹细胞学检查，经病理染色后用显微镜观察并拍照，进行评级。
60.2.实验指标及相关方法
61.a.结膜充血
62.用药前及用药第1、4、7、11、14d固定豚鼠，在裂隙灯下观察结膜充血程度，并拍照。根据充血范围、血管颜色及形态将结膜充血分为4级。(具体评级标准详见表1)。
63.表1 结膜充血评级标准
[0064][0065]
b.角膜荧光素染色
[0066]
角膜荧光素染色(corneal fluorescein staining，fl)：用药前及用药第1、4、7、11、14d行角膜荧光素染色。固定豚鼠，用荧光素钠染色条染色后1
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3min,在裂隙灯钴蓝光下观察角膜上皮荧光素着染情况。
[0067]
采用的12分法进行评分：角膜分为4个象限，每个象限0
‑
3分，无染色为0分，1
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30个点状着色为1分，＞30个点状着色但染色未融合为2分，3分为出现角膜点状着色融合、丝状物及溃疡等，总共12分，并拍照、记录、评分。(具体评分标准详见表2)。
[0068]
表2 角膜荧光素染色评分标准
[0069][0070][0071]
c.结膜印迹细胞检查
[0072]
结膜印迹细胞学检查(conjunctival impression cytology,cic)：用药前及用药第14d，进行结膜印迹细胞学检查。将孔径为0.22um的纤维素膜裁剪为2x3x4mm的直角梯形，蒸馏水浸泡4
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6小时以消除表面活性，高压灭菌锅里消毒后，放入电热干燥箱里干燥待用。固定实验豚鼠，用滤纸吸取泪液，暴露眼睑上方球结膜穹窿部，将梯形纤维素膜放在穹窿部球结膜处，粗糙面向下接触结膜，光滑面向上，再用圆头玻璃棒垂直接触面按压10s，接触面充分贴合，压力保持恒定，揭下纤维素膜，将其放入4％多聚甲醛组织固定液中固定30min后进行pas染色，固定后蒸馏水水化5min,氧化剂氧化5min,再用蒸馏水冲洗2min，席夫试剂中染色5min，自来水浴5min，苏木精染色2min，蒸馏水水洗3次后，依次放入75％乙醇、95％乙醇、无水乙醇中脱水1min、30s、30s，再置于二甲苯中透明2min后，置于载玻片，取1滴中性树胶，盖上盖玻片，立即置于显微镜(
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400)下观察结膜杯状细胞、结膜上皮细胞的数量、大小、形态，并拍照。按照nelson's的评级方法将结膜杯状细胞评为4级。(具体评级标准详见表3)。
[0073]
表3.结膜印迹细胞学评级标准
[0074][0075]
通过几丁质水凝胶眼膜的有效性和安全性试验方法，为干眼治疗方法提供重要的理论依据，并为临床干眼患者提供可能的治疗方法。
[0076]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。