一类β-卡波林的3位衍生物及其制备方法和用途与流程

一类
β
‑
卡波林的3位衍生物及其制备方法和用途
技术领域
1.本发明属于天然药物及药物化学领域，涉及一类β
‑
卡波林的3位拼合氮芥衍生物及应用，具体涉及一系列具有抗肿瘤活性的β
‑
卡波林3位拼合氮芥衍生物的制备方法及其在抗肿瘤方面的用途。


背景技术：

2.β
‑
卡波林生物碱(β
‑
carboline)是由吲哚环和吡啶环骈合而成，具有多样的药理活性，包括抗痉挛、抗焦虑、抗抑郁、抗惊厥、镇静、止痛、抗疟疾、抗寄生虫等，尤其具有较好的抗肿瘤活性。尽管β
‑
卡波林生物碱具有开发为肿瘤化疗药物的潜力，但其依然存在问题，因此很多研究者对β
‑
卡波林生物碱进行结构修饰。目的是获得活性更强、毒性更低、选择性更好的抗肿瘤候选化合物。
3.氮芥类药物，是一种广谱抗肿瘤的化疗药。其作用机制是在体内能形成缺电子的高度活泼中间体或其他具有活泼的亲电性基团的化合物，进而与生物大分子发生共价不可逆结合，使dna分子丧失活性或发生断裂。而大剂量氮芥的使用会引起严重的副作用以及药物耐药性，限制其在临床上的进一步应用。因此，对氮芥类药物进行化学修饰，改善其疗效有着很重要的价值。


技术实现要素：

4.本发明要解决的技术问题是寻找抗肿瘤活性好的β
‑
卡波林3位拼合氮芥衍生物及其药学上可接受的盐，并进一步提供一种药物组合物。
5.为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
6.一种β
‑
卡波林3位拼合氮芥衍生物及其药学上可接受的盐，具有如下i的结构通式：
[0007][0008]
其中，r1为氢，或含有1
‑
4个碳原子的烷基，或含有4
‑
12个碳原子的芳基或取代芳基、杂环芳基或取代杂环芳基，所述杂环芳基的芳杂环中包含1
‑
3个n、o或s的杂原子，所述取代芳基或取代杂环芳基中的取代基为卤素或含有1
‑
3个碳原子的烷氧基；n为1
‑
8的整数。
[0009]
优选地，r1为氢，或含有1
‑
3个碳原子的烷基，或含有4
‑
10个碳原子的芳基或取代芳基、杂环芳基或取代杂环芳基，所述杂环芳基的芳杂环中包含1
‑
2个n、o或s的杂原子，所述取代芳基或取代杂环芳基中的取代基为卤素或含有1
‑
3个碳原子的烷氧基；n为1
‑
6的整
数。
[0010]
更优选地，r1为氢，或含有1
‑
2个碳原子的烷基，或含有4
‑
8个碳原子的芳基或取代芳基、杂环芳基或取代杂环芳基，所述杂环芳基的芳杂环中包含1
‑
2个n、o或s的杂原子，所述取代芳基或取代杂环芳基中的取代基为卤素或含有1
‑
2个碳原子的烷氧基；n为1
‑
4的整数。
[0011]
进一步地，本发明优选如下衍生物及其药学上可接受的盐结构式如a～f所示：
[0012]
本发明的衍生物可用下列方法制备得到，包括如下步骤：
[0013][0014]
(1)化合物l
‑
色氨酸1在naoh溶液中与37％的甲醛溶液37℃反应，得中间体2a；或l
‑
色氨酸1在1,2
‑
二氯乙烷中与乙醛或对甲氧基苯甲醛、三氟乙酸110℃反应得到中间体2b、或2c；然后将中间体2a
‑
c溶解于甲醇中，在冰浴条件下滴加socl2，回流反应得到中间体3a
‑
c；再将3a
‑
c溶于n,n
‑
二甲基甲酰胺中，与高锰酸钾室温反应得到中间体4a
‑
c；最后4a
‑
c溶解于四氢呋喃中，在氢化铝锂条件下进行还原得到化合物5a
‑
c；
[0015]
(2)美法仑6在甲醇溶剂中，氯化亚砜存在下得到中间体7；中间体7在二氯甲烷中，在4
‑
二甲氨基吡啶存在下，与琥珀酸酐反应得到化合物8a；或中间体7在二氯甲烷中，在4
‑
二甲氨基吡啶存在下，与丁二酸酐反应得到化合物8b；
[0016]
(3)将化合物5a
‑
c溶于无水二氯甲烷，依次加入edci、dmap，与化合物8a
‑
b室温反应得到目标化合物9a
‑
c和10a
‑
c。
[0017]
一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效量的所述的通式i所示的β
‑
卡波林3位拼合氮芥衍生物及其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
[0018]
上述通式i所示的β
‑
卡波林3位拼合氮芥衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。
[0019]
进一步地，所述的肿瘤为乳腺癌肿瘤、胃癌肿瘤或肝癌肿瘤。
[0020]
上述药物组合物在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。
[0021]
进一步地，所述的肿瘤为乳腺癌肿瘤、胃癌肿瘤或肝癌肿瘤。
[0022]
本发明以β
‑
卡波林为先导化合物，设计并合成了一类β
‑
卡波林3位拼合氮芥衍生物，并测试了合成衍生物在抗肿瘤方面的生物活性。
[0023]
药理试验证明，本发明的β
‑
卡波林3位拼合氮芥衍生物具有很好的抗肿瘤细胞增殖作用，可以用于进一步制备抗肿瘤药物。
具体实施方式
[0024]
下述非限定性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0025]
本发明实施例的衍生物合成路线如下：
[0026][0027]
实施例1
[0028][0029]
(1)将5g化合物l
‑
色氨酸1(24.51mmol)溶解于60ml 0.4n的naoh溶液中，然后加入3ml 37％甲醛溶液(36.97mmol)，37℃反应三天。tlc监测，反应基本完全，冷却，然后加入冰乙酸，有沉淀生成，抽滤，烘干，得中间体2a(r1＝
‑
h)4.64g。将4.64g中间体2a(21.48mmol)溶解于50ml无水甲醇中，在冰浴条件下滴加3.68ml socl2(50.67mmol)，然后65℃回流反应6h。tlc监测，反应完全，冷却，将反应液浓缩，然后加入50ml饱和的碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取3次，饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得中间体3a3.5 g。将3.5g中间体3a(15.22mmol)溶解于65ml dmf中，在冰浴条件下加入7g高锰酸钾(44.3mmol)，反应1h后转移至室温反应14h。tlc监测，反应完全，抽滤，将滤液旋干，用乙酸乙酯萃取3次，饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得中间体4a 2.6g，硅胶柱色谱分离(dcm：meoh＝40：1)，得纯中间体4a 2.0g。将55mg中间体4a(0.24mmol)溶解于5ml四氢呋喃中，并在冰浴条件下加入38mglialh4(1.00mmol)。随后，将其转移至室温并反应6小时。反应完成后，加入38μl水和76μl 2n naoh溶液淬灭反应，减压过滤，滤渣用二氯甲烷洗涤，真空浓缩得到化合物5a。
[0030]
(2)将301.3mg美法仑6(0.99mmol)溶解于10ml甲醇中，加入287μl socl2(3.96mmol)，然后65℃回流反应6h。反应完全后，将反应液旋干，得中间体7 448.2mg。将448.2mg中间体7(1.41mmol)、482.2mg琥珀酸酐(4.23mmol)、172.3mg 4
‑
二甲氨基吡啶(1.41mmol)溶于15ml二氯甲烷中，室温下搅拌18h。反应完全，用二氯甲烷萃取3次，饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得粗化合物。硅胶柱色谱(dcm:meoh＝80：1)分离得到化合物8a(n＝2)。
[0031]
(3)将42.4mg化合物5a(0.21mmol)溶解在5ml无水二氯甲烷中，加入133.6mgedci(0.70mmol)、7.5mgdmap(0.06mmol)、131.6mg化合物8a(0.22mmol)并在室温下反应12h。反应完成后，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取3次，饱和食盐水洗1次，无水na2so4干燥，浓缩得粗品。硅胶柱色谱(dcm:meoh＝60：1)分离得到目标化合物9a。黄色油状，产率6％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.00(s,1h),8.17(d,j＝7.92hz,1h),8.10(s,1h),7.60(m,1h),7.57(m,1h),7.33(m,1h),6.95(d,j＝8.68hz,2h),6.56(d,j＝8.76hz,2h),6.22(d,j＝7.72hz,1h),5.46(s,2h),4.82(m,1h),3.71(s,3h),3.67(m,4h),3.59(m,4h),3.00(m,1h),2.97(m,1h),2.82(m,1h),2.75(m,1h),2.58(m,2h)；
13
c nmr(150mhz,cdcl3)δ:172.75,172.25,171.20,145.26,143.99,141.25,135.43,132.85,130.66(
×
2),130.12,129.10,124.70,122.11,121.34,120.51,114.29,112.15(
×
2),111.97,67.57,53.56(
×
2),53.51,52.43,40.57(
×
2),36.80,31.01,29.66；hr
‑
ms(esi)m/z calcd for c
30
h
32
cl2n4o5[m h]

599.1828,found599.1823。
[0032]
实施例2
[0033][0034]
实施例1步骤(1)中合成2a的步骤替换成：将5g化合物l
‑
色氨酸1(24.51mmol)溶解于80ml 1,2
‑
二氯乙烷中，然后加入1.52ml乙醛(26.96mmol)、3.64ml三氟乙酸(49.02mmol)，110℃回流反应30min。tlc监测，反应基本完全，冷却，然后加入饱和的碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤反应液1次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得中间体2b(r1＝
‑
ch3)。
[0035]
其余步骤参照实施例1的合成方法制备得化合物9b，橘黄色固体，产率13％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.40(s,1h),8.11(d,j＝7.80hz,1h),7.89(s,1h),7.54(m,2h),7.29(m,1h),6.94(d,j＝8.72hz,2h),6.55(d,j＝8.76hz,2h),6.10(d,j＝7.76hz,1h),5.38(s,2h),4.82(m,1h),3.71(s,3h),3.67(m,4h),3.59(m,4h),2.99(m,2h),2.82(s,3h),2.76(m,2h),2.55(m,2h)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:172.81,172.19,171.08,145.25,144.15,141.58,140.53,134.13,130.69(
×
2),129.10,128.58,124.62,122.13,122.10,120.47,112.37,112.12(
×
2),111.77,68.21,53.57(
×
2),53.43,52.45,40.55(
×
2),36.81,31.04,29.66,20.36；hr
‑
ms(esi)m/z calcd for c
31
h
34
cl2n4o5[m h]

613.1985,found 613.1978。
[0036]
实施例3
[0037][0038]
实施例1步骤(1)中合成2a的步骤替换成：将5g化合物l
‑
色氨酸1(24.51mmol)溶解于80ml 1,2
‑
二氯乙烷中，然后加入3.27ml对甲氧基苯甲醛(26.96mmol)、3.64ml三氟乙酸(49.02mmol)，110℃回流反应30min。tlc监测，反应基本完全，冷却，然后加入饱和的碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤反应液1次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得中间体2c(r1＝p
‑
ch3oph
‑
)。
[0039]
其余步骤参照实施例1的合成方法制备得化合物9c，黄白色固体，产率8％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.69(s,1h),8.15(d,j＝7.92hz,1h),7.97(s,1h),7.87(d,j＝8.76hz,2h),7.53(m,1h),7.48(d,j＝8.08hz,1h),7.29(m,1h),7.06(d,j＝8.76hz,2h),6.92(d,j＝8.68hz,2h),6.53(d,j＝8.76hz,2h),6.10(d,j＝7.76hz,1h),5.46(s,2h),4.80(m,1h),
3.86(s,3h),3.70(s,3h),3.62(m,4h),3.56(m,4h),2.97(m,2h),2.78(m,2h),2.55(m,2h)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:172.81,172.16,171.05,160.28,145.21,145.03,142.45,140.84,132.90,130.82,130.63(
×
2),130.50,129.61(
×
2),128.58,124.63,124.59,122.01,120.37,114.67(
×
2),112.30,112.08(
×
2),111.74,68.27,55.53,53.50(
×
2),53.41,52.39,40.53(
×
2),36.77,30.99,29.62；hr
‑
ms(esi)m/z calcd for c
37
h
38
cl2n4o6[m h]

705.2247,found 705.2247。
[0040]
实施例4
[0041][0042][0043]
实施例1步骤(2)中合成8a的步骤替换成：将448.2mg中间体7(1.41mmol)、423.3mg丁二酸酐(4.23mmol)、172.3mg 4
‑
二甲氨基吡啶(1.41mmol)溶于15ml二氯甲烷中，室温下搅拌18h。反应完全，用二氯甲烷萃取3次，饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得粗化合物。硅胶柱色谱(dcm:meoh＝60：1)分离得到化合物8b(n＝3)。
[0044]
其余步骤参照实施例1的合成方法制备得化合物10a，橘黄色固体，产率14％。1h nmr(600mhz,cdcl3)δ:9.15(s,1h),8.84(s,1h),8.12(d,j＝7.92hz,1h),8.02(s,1h),7.55(t,j＝7.62hz,1h),7.52(d,j＝8.04hz,1h),7.29(m,1h),6.95(d,j＝8.58hz,2h),6.54(m,3h),5.42(d,j＝12.36hz,1h),5.38(d,j＝12.36hz,1h),4.84(m,1h),3.71(s,3h),3.64(t,j＝7.2hz,4h),3.56(t,j＝7.2hz,4h),3.05(m,1h),2.95(m,1h),2.41(m,2h),2.25(t,j＝7.32hz,2h),1.96(m,2h)；
13
c nmr(150mhz,cdcl3)δ:173.20,172.48,172.24,145.23,144.37,141.16,135.57,133.29,130.57(
×
2),129.81,128.94,124.89,122.01,121.35,120.39,114.22,112.17(
×
2),111.92,67.52,53.53(
×
2),53.40,52.41,40.57(
×
2),36.82,35.17,33.15,21.13；hr
‑
ms(esi)m/z calcd for c
31
h
34
cl2n4o5[m h]

613.1985,found 613.1979。
[0045]
实施例5
[0046]
[0047]
实施例1步骤(1)中合成2a的步骤替换成：将5g化合物l
‑
色氨酸1(24.51mmol)溶解于80ml 1,2
‑
二氯乙烷中，然后加入1.52ml乙醛(26.96mmol)、3.64ml三氟乙酸(49.02mmol)，110℃回流反应30min。tlc监测，反应基本完全，冷却，然后加入饱和的碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤反应液1次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得中间体2b(r1＝
‑
ch3)。
[0048]
实施例1步骤(2)中合成8a的步骤替换成：将448.2mg中间体7(1.41mmol)、423.3mg丁二酸酐(4.23mmol)、172.3mg 4
‑
二甲氨基吡啶(1.41mmol)溶于15ml二氯甲烷中，室温下搅拌18h。反应完全，用二氯甲烷萃取3次，饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得粗化合物。硅胶柱色谱(dcm:meoh＝60：1)分离得到化合物8b(n＝3)。
[0049]
其余步骤参照实施例1的合成方法制备得化合物10b，黄色油状，产率46％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.35(s,1h),8.06(d,j＝7.88hz,1h),7.85(s,1h),7.49(m,2h),7.25(m,1h),6.93(d,j＝8.68hz,2h),6.53(d,j＝8.76hz,2h),6.27(d,j＝7.84hz,1h),5.35(s,2h),4.81(m,1h),3.69(s,3h),3.62(m,4h),3.55(m,4h),3.03(m,1h),2.93(m,1h),2.76(s,3h),2.43(m,1h),2.36(m,1h),2.25(t,j＝7.28hz,2h),1.94(m,2h)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:173.14,172.31,172.13,145.26,143.81,141.83,140.82,134.31,130.50(
×
2),128.94,128.47,124.74,121.92,121.88,120.22,112.39,112.19(
×
2),111.86,67.85,53.49(
×
2),53.39,52.34,40.54(
×
2),36.85,35.23,33.21,20.98,20.13；hr
‑
ms(esi)m/z calcd for c
32
h
36
cl2n4o5[m h]

627.2141,found 627.2142。
[0050]
实施例6
[0051][0052]
实施例1步骤(1)中合成2a的步骤替换成：将5g化合物l
‑
色氨酸1(24.51mmol)溶解于80ml 1,2
‑
二氯乙烷中，然后加入3.27ml对甲氧基苯甲醛(26.96mmol)、3.64ml三氟乙酸(49.02mmol)，110℃回流反应30min。tlc监测，反应基本完全，冷却，然后加入饱和的碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤反应液1次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得中间体2c(r1＝p
‑
ch3oph
‑
)。
[0053]
实施例1步骤(2)中合成8a的步骤替换成：将448.2mg中间体7(1.41mmol)、423.3mg丁二酸酐(4.23mmol)、172.3mg 4
‑
二甲氨基吡啶(1.41mmol)溶于15ml二氯甲烷中，室温下搅拌18h。反应完全，用二氯甲烷萃取3次，饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得粗化合物。硅胶柱色谱(dcm:meoh＝60：1)分离得到化合物8b(n＝3)。
[0054]
其余步骤参照实施例1的合成方法制备得化合物10c，橘色油状，产率41％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.09(s,1h),8.12(d,j＝7.88hz,1h),7.94(s,1h),7.83(m,2h),7.51(m,
2h),7.28(m,1h),6.96(d,j＝8.72hz,2h),6.91(d,j＝8.68hz,2h),6.53(d,j＝8.76hz,2h),6.09(d,j＝7.80hz,1h),5.44(s,2h),5.26(m,1h),3.78(s,3h),3.68(s,3h),3.62(m,4h),3.54(m,4h),2.98(m,1h),2.88(m,1h),2.43(m,2h),2.25(m,2h),1.96(m,2h)；
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ:173.10,172.25,171.95,160.27,145.21,144.61,142.37,141.11,132.89,130.55,130.49(
×
2),130.26,129.67(
×
2),128.67,124.71,121.86,121.79,120.36,114.51(
×
2),112.48,112.13(
×
2),111.94,67.74,55.41,53.46(
×
2),53.28,52.31,40.52(
×
2),36.78,35.24,33.24,20.89；hr
‑
ms(esi)m/z calcd for c
38
h
40
cl2n4o6[m h]

719.2403,found 719.2406。
[0055]
下面是本发明部分化合物的药理实验结果：
[0056]
实验设备与试剂
[0057]
仪器超净工作台(苏净集团安泰公司)
[0058]
恒温培养箱(thermo electron corporation)
[0059]
酶标仪(bio
‑
rad公司)
[0060]
倒置生物显微镜(重庆光学仪器厂)
[0061]
试剂细胞培养基rpmi
‑
1640、dmem(高糖)(gibco公司)
[0062]
胎牛血清(杭州四季清有限公司)
[0063]
cck
‑
8(biosharp公司产品)
[0064]
dmso(sigma公司)
[0065]
细胞株人乳腺癌细胞mcf
‑
7、人乳腺癌细胞mda
‑
mb
‑
231、人肝癌细胞hepg2、人胃癌细胞mgc
‑
803
[0066]
实验方法
[0067]
细胞抑制活性实验方法
[0068]
细胞在37℃、5％co2饱和湿度的培养箱中常规培养。培养液为含10％热灭活胎牛血清，青霉素100u/ml和链霉素100u/ml的高糖dmem细胞培养基。48h更换培养液，细胞贴壁后，用0.25％胰蛋白酶消化传代。实验用细胞均处于对数生长期，cck
‑
8法表明细胞活力>95％。
[0069]
取处于对数生长期状态良好的细胞一瓶，加入消化液(0.125％胰蛋白酶 0.01％edta)消化，计数2～4
×
104cell/ml，制成细胞悬液接种于96孔板上，100μl/孔，置恒温co2培养箱中培养24小时。换液，加入受试药物，100μl/孔，培养72小时。将cck
‑
8加入96孔板中，50μl/孔，培养箱中孵育4小时。吸去上清液，加dmso，200μl/孔，平板摇床上震荡10分钟。受试物考察0.001至100μm以十倍浓度递增的6个浓度，用酶联免疫监测仪在波长为450nm处测定每孔的吸光度，分别计算各浓度下的细胞抑制率。
[0070]
抑制率计算方法：
[0071][0072]
药敏孔相对od值＝药敏孔绝对od值﹣空白对照孔绝对od值
[0073]
实验结果
[0074]
表1实施例对2种人乳腺癌、1种人肝癌和1种人胃癌细胞株细胞株抗增殖活性的
ic
50
值(μm)
[0075][0076]
药理试验证明，本发明的目标衍生物具有一定的抗乳腺癌和肝癌细胞增殖活性，可以用于进一步制备抗肿瘤药物。