富含沙棘籽原花青素的能够预防酒精性肠道损伤的沙棘茶的制作方法

1.本发明涉及食品技术领域。更具体地说，本发明涉及一种富含沙棘籽原花青素的能够预防酒精性肠道损伤的沙棘茶。


背景技术：

2.随着社会经济的发展，酒精性饮料的人均消费量逐年增长，而肠道是人体抵御外来污染物的第一道屏障，肠道的完整性对人体健康至关重要。饮酒会损害肠道上皮细胞，破坏肠道屏障，使肠道通透性增加，带来严重的肠道功能紊乱症。沙棘又名黑刺或酸刺，为胡颓子科酸刺属的灌木、小乔木或乔木，广泛分布于中国、俄罗斯、印度和蒙古等国。我国是世界上最大的沙棘分布国，面积约占世界的93％以上。沙棘既是我国重要的生态保护和经济作物，又是重要的药食两用植物。鉴于沙棘重要的药用价值，我国卫生部早于1977年就将其正式列入《中国药典》。沙棘叶片、果实、茎和种子中均含有丰富的维生素、多糖、氨基酸等营养成分以及黄酮类、原花青素、多酚等功能物质。沙棘原花青素已被证实可有效预防心血管系统疾病、胃溃疡、肝损伤等，具有维持人体健康的作用。但是，迄今为止，尚未见关于沙棘籽原花青素对酒精性肠道损伤具有预防作用的报道。
3.目前沙棘的加工主要集中在果油、籽油的提取和果汁的加工方面。而沙棘叶片作为产量要远远大于沙棘果的重要副产物并没有得到有效利用，造成资源浪费。目前关于沙棘叶片的应用主要是采摘沙棘叶片进行烘干炒制成叶茶，由于沙棘叶片多酚含量较高，沙棘叶茶经浸泡后饮用口感干涩、并且口味单一，不受消费者欢迎。另外一些应用就是沙棘叶片经溶剂提取后和其它物质混合调配成茶饮料，但是在此过程中要维持茶饮料的外观及延长其贮存期，往往需要添加较多的化学添加剂，容易破坏沙棘叶本身的营养成分。另外，沙棘籽中含有丰富的生物活性物质，目前国内外对沙棘籽的利用主要集中在沙棘籽油的提取，而提取籽油后的沙棘籽渣大部分都被废弃。


技术实现要素：

4.本发明的一个目的是提供一种富含沙棘籽原花青素的能够预防酒精性肠道损伤的沙棘茶，保留沙棘叶特殊茶风味的同时，赋予了该沙棘茶显著的肠道保护作用。
5.为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，根据本发明的一个方面，本发明提供了富含沙棘籽原花青素的能够预防酒精性肠道损伤的沙棘茶，其按重量份计主要包括如下组分：沙棘叶片200～400份，沙棘籽原花青素1～2份。
6.优选的是，按重量份计还包括如下组分：低聚麦芽糖100～300份，橘子果粉100～200份，芒果丁100～200份。
7.本发明还提供了富含沙棘籽原花青素的能够预防酒精性肠道损伤的沙棘茶的制备方法，主要包括以下步骤：
8.步骤一、取采摘的新鲜沙棘叶，筛除杂质，清洗，自然晾干，置于烘箱中烘干，烘干后在炒茶装置中翻炒，制得沙棘叶片，室温冷却晾干备用；
9.步骤二、取榨油后的沙棘籽渣，经干燥、粉碎，过筛，以体积分数60％的乙醇进行提取，蒸馏回收乙醇，经大孔树脂纯化后进行冷冻干燥，制得沙棘籽原花青素；
10.步骤三、按重量份计取所述沙棘叶片200～400份，沙棘籽原花青素1～2份，低聚麦芽糖100～300份，橘子果粉100～200份，芒果丁100～200份，混合均匀，制成沙棘茶。
11.优选的是，所述步骤一中烘干的温度为100～120℃。
12.优选的是，所述步骤一中翻炒的温度为180～200℃。
13.优选的是，所述步骤二中过筛采用40目筛。
14.优选的是，所述步骤三中大孔树脂为d3520大孔树脂。
15.优选的是，所述步骤三中制得的沙棘茶，其各组分每份为0.005g，放入玉米纤维袋中制得沙棘叶袋泡茶，每袋沙棘叶袋泡茶用125～500ml的温水浸泡后服用，所述温水的温度为50℃。
16.本发明的发明目的还在于提供一种用途，即所述沙棘茶在制备用于预防酒精性肠道损伤的保健品中的应用。
17.本发明至少包括以下有益效果：
18.第一、本发明的制备方法简单，无需添加化学添加剂，形成了具有特殊功效的口感舒适的沙棘茶，适用于工业化生产，有助于对沙棘加工废弃物的合理利用；
19.第二、本发明将沙棘籽原花青素和沙棘叶片混合，在保留沙棘叶特殊茶风味的同时，赋予了该沙棘茶显著的肠道保护作用，并且通过添加橘子果粉和芒果干调节沙棘茶口感，降低其苦涩味，使沙棘茶口感更加舒适；
20.第三、本发明沙棘茶中富含的沙棘籽原花青素可以通过对pkc、mapk、mlck
‑
mlc和rho/rock信号通路发挥调控作用，保护肠道上皮细胞紧密连接相关蛋白的合成，维持肠黏膜屏障的功能，从而对酒精导致的肠道损伤发挥保护作用，可在饮酒前浸泡后服用本发明所述沙棘茶，预防酒精性肠道损伤。
21.本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
22.图1为不同浓度的沙棘籽原花青素的细胞毒作用示意图；
23.图2为沙棘籽原花青素对酒精性肠道损伤的预防效果示意图；
24.图3为沙棘茶对酒精性肠道损伤的预防效果示意图。
具体实施方式
25.下面结合实例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
26.应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
27.需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
28.<实例1>
29.步骤一、取采摘的新鲜沙棘叶，筛除杂质，清洗，自然晾干，置于烘箱中于100℃下烘干，烘干后在炒茶装置中翻炒，翻炒温度为190℃，制得沙棘叶片，室温冷却晾干备用；
30.步骤二、取榨油后的沙棘籽渣，经干燥、粉碎，过40目筛，以体积分数60％的乙醇进行提取，蒸馏回收乙醇，经d3520大孔树脂纯化后进行冷冻干燥，制得沙棘籽原花青素；
31.步骤三、取所述沙棘叶片200份，沙棘籽原花青素1份，其中每份表示0.005g，混合均匀，制成沙棘茶。
32.<实例2>
33.步骤一、取采摘的新鲜沙棘叶，筛除杂质，清洗，自然晾干，置于烘箱中于100℃下烘干，烘干后在炒茶装置中翻炒，翻炒温度为190℃，制得沙棘叶片，室温冷却晾干备用；
34.步骤二、取榨油后的沙棘籽渣，经干燥、粉碎，过40目筛，以体积分数60％的乙醇进行提取，蒸馏回收乙醇，经d3520大孔树脂纯化后进行冷冻干燥，制得沙棘籽原花青素；
35.步骤三、取所述沙棘叶片200份，沙棘籽原花青素1份，低聚麦芽糖100份，橘子果粉100份，芒果丁100份，其中每份表示0.005g，混合均匀，放入6*8cm的玉米纤维袋中，制成沙棘叶袋泡茶。
36.<实例3>
37.步骤一、取采摘的新鲜沙棘叶，筛除杂质，清洗，自然晾干，置于烘箱中于110℃下烘干，烘干后在炒茶装置中翻炒，翻炒温度为180℃，制得沙棘叶片，室温冷却晾干备用；
38.步骤二、取榨油后的沙棘籽渣，经干燥、粉碎，过40目筛，以体积分数60％的乙醇进行提取，蒸馏回收乙醇，经d3520大孔树脂纯化后进行冷冻干燥，制得沙棘籽原花青素；
39.步骤三、取所述沙棘叶片400份，沙棘籽原花青素2份，低聚麦芽糖300份，橘子果粉200份，芒果丁200份，其中每份表示0.005g，混合均匀，放入6*8cm的玉米纤维袋中，制成沙棘叶袋泡茶。
40.<实例4>
41.步骤一、取采摘的新鲜沙棘叶，筛除杂质，清洗，自然晾干，置于烘箱中于120℃下烘干，烘干后在炒茶装置中翻炒，翻炒温度为200℃，制得沙棘叶片，室温冷却晾干备用；
42.步骤二、取榨油后的沙棘籽渣，经干燥、粉碎，过40目筛，以体积分数60％的乙醇进行提取，蒸馏回收乙醇，经d3520大孔树脂纯化后进行冷冻干燥，制得沙棘籽原花青素；
43.步骤三、取所述沙棘叶片300份，沙棘籽原花青素2份，低聚麦芽糖200份，橘子果粉200份，芒果丁200份，其中每份表示0.005g，混合均匀，放入6*8cm的玉米纤维袋中，制成沙棘叶袋泡茶。
44.<实例5>
45.步骤一、取采摘的新鲜沙棘叶，筛除杂质，清洗，自然晾干，置于烘箱中于110℃下烘干，烘干后在炒茶装置中翻炒，翻炒温度为190℃，制得沙棘叶片，室温冷却晾干备用；
46.步骤二、取榨油后的沙棘籽渣，经干燥、粉碎，过40目筛，以体积分数60％的乙醇进行提取，蒸馏回收乙醇，经d3520大孔树脂纯化后进行冷冻干燥，制得沙棘籽原花青素；
47.步骤三、取所述沙棘叶片400份，沙棘籽原花青素2份，低聚麦芽糖300份，橘子果粉200份，芒果丁200份，其中每份表示0.005g，混合均匀，放入6*8cm的玉米纤维袋中，制成沙棘叶袋泡茶。
48.<对比例1>
49.步骤一、取采摘的新鲜沙棘叶，筛除杂质，清洗，自然晾干，置于烘箱中于110℃下烘干，烘干后在炒茶装置中翻炒，翻炒温度为190℃，制得沙棘叶片，室温冷却晾干备用；
50.步骤二、取所述沙棘叶片200份，低聚麦芽糖100份，橘子果粉100份，芒果丁100份，其中每份表示0.005g，混合均匀，放入6*8cm的玉米纤维袋中，制成沙棘叶袋泡茶。
51.<沙棘籽原花青素纯度测试>
52.取实例1～5的步骤二中制得沙棘籽原花青素，利用铁盐催化法在546nm处检测其吸光度值，测试结果如下表所示：
53.表1
[0054][0055]
各实施例制得的沙棘籽原花青素的纯度均达到80％以上，结果显示沙棘籽渣是很好的原花青素来源，且采用本发明的制备方法，以沙棘籽渣为原料提取的沙棘籽原花青素纯度高。
[0056]
<沙棘籽原花青素对酒精性肠道损伤的预防功效测试>
[0057]
caco
‑
2细胞构建肠道细胞模型，酒精构建肠道受损模型，测试实例1中制得沙棘籽原花青素对酒精所致肠道损伤的预防功效。具体过程如下：
[0058]
1.通过cck8法考察沙棘籽原花青素对caco
‑
2细胞的细胞毒作用，将状态良好的细胞消化，吹打均匀，调节密度1x105/ml，加入到96孔板中，每孔加100μl细胞悬液，37℃，5％co2培养箱中预培养24h，弃去培养液，每孔加入含2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml沙棘籽原花青素的细胞培养液，以不加沙棘籽原花青素的孔为对照组，处理24h后，每孔加入10μl cck8溶液，培养箱内孵育4小时，在450nm下用酶标仪测定各孔吸光度值。图1结果显示，当沙棘籽原花青素用量小于40μg/ml时没有细胞毒作用，因此原花青素的用量要低于40μg/ml。
[0059]
2.将状态良好的细胞消化，吹打均匀，调节密度1x105/ml，吸取0.4ml细胞悬液接种于transwell小室，置于24孔板中，外孔加0.6ml培养液。caco
‑
2细胞接种一周后每天换液，内孔0.4ml外孔0.6ml。caco
‑
2细胞培养21天后，测试各孔电阻值(teer值)，teer值若大于500ω
·
cm2说明细胞单层膜具有良好的紧密性和完整性。接着首先弃去transwell小室内外培养液，然后在两侧均加入含原花青素或酒精的新鲜培养液，实验分为：正常对照组，7.5％酒精处理组，10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml原花青素处理组，7.5％酒精处理组 10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml原花青素(该组先加不同浓度沙棘籽原花青素处理1小时后再加7.5％酒精)，各组处理24小时后，测定caco
‑
2单层细胞的电阻值。图2结果显示，7.5％的酒精处理使caco
‑
2单层细胞的电阻值发生了显著下降，说明酒精会导致肠道受损，而10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml沙棘籽原花青素缓解了酒精导致的caco
‑
2单层细胞电阻值的降低，结果表明10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的沙棘籽原花青素对酒精导致的肠道细胞损伤均有预防效果。
[0060]
<沙棘茶对酒精性肠道损伤的预防功效测试>
[0061]
取实例2制得的沙棘叶袋泡茶分别用50ml，25ml和12.5ml的约50℃左右的灭菌蒸馏水浸泡，冷却后取茶水，分别冷冻浓缩至5ml，2.5ml和1.25ml，经无菌过滤后分别与99倍
体积的细胞培养液混合，使培养液中沙棘籽原花青素的浓度分别为10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml，制备得到含有不同浓度沙棘籽原花青素的袋泡茶细胞培养液。
[0062]
另取对比例1制得的不含沙棘籽原花青素的沙棘叶袋泡茶，用25ml的约50℃左右的灭菌蒸馏水浸泡，冷却后取茶水，冷冻浓缩至2.5ml，经无菌过滤后与99倍体积的细胞培养液混合，制备得到不含沙棘籽原花青素的袋泡茶细胞培养液。
[0063]
将含有不同浓度沙棘籽原花青素的袋泡茶细胞培养液，以及不含沙棘籽原花青素的袋泡茶细胞培养液分别处理构建好的caco
‑
2单层细胞，1小时后，用7.5％的酒精处理caco
‑
2单层细胞，以7.5％的酒精单独处理组作为肠道损伤模型组，以不做任何处理的caco
‑
2单层细胞为对照组。处理24小时候，检测各组caco
‑
2单层细胞的电阻值。图3结果显示，7.5％的酒精处理使caco
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2单层细胞的电阻值发生了显著下降，说明酒精会导致肠道受损，而含20μg/ml和40μg/ml沙棘籽原花青素的袋泡茶细胞培养液预处理有效缓解了酒精导致的caco
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2单层细胞电阻值的降低，结果表明当袋泡茶细胞培养液中沙棘籽原花青素的浓度大于20μg/ml时对酒精导致的caco
‑
2单层细胞肠道模型的损伤具有显著预防效果。
[0064]
因此为实现最佳功能，充分发挥沙棘籽原花青素的肠道保护功效，含有每份沙棘籽原花青素(0.005g)的沙棘袋泡茶需用125～250ml 50℃左右的温水浸泡后服用，并且最好在饮酒前浸泡后服用。经此配方泡制的袋泡茶，汤色均匀，清澈透亮，呈暗黄色，香气协调且具有沙棘叶片的特征香气，口感协调，酸甜适口，无明显涩味。
[0065]
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
[0066]
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实例。