一种血肌酐检测试剂球及血肌酐检测芯片的制作方法

1.本发明涉及血清肌酐测定技术领域，尤其是涉及一种血肌酐检测试剂球及血肌酐检测芯片。


背景技术：

2.血肌酐(cr，creatinine)的来源包括从食物中摄取的外源性肌酐和机体内肌肉代谢生成的内源性肌酐两部分。肌酐主要由肌酸通过不可逆的非酶脱水缓慢形成并释放到血液中。肌酐是小分子物质，可通过肾小球滤过，在肾小管内很少吸收。每日体内产生的肌酐，几乎全部随尿排出，一般不受尿量影响。血肌酐的含量与体内肌肉总量关系密切，不易受饮食影向。
3.临床上检测血肌酐的含量是常用的了解肾功能的主要方法之一，衡量肾脏功能的重要指标，血肌酐升高意味着肾功能的损害。目前，血肌酐含量的测定方法主要有jaffe检测法(化学法)、酶学法、毛细管电泳法和高效液相色谱法等。
4.在实现本发明的过程中，发明人发现现有技术中，血肌酐含量的测定结果容易受到血液中其他物质的干扰，此类物质由于具有强还原性或与trinder反应中的色原底物结构类似，会在trinder反应时消耗过氧化氢，影响测定结果。例如，假肌酐和患者服用的部分药物。


技术实现要素：

5.为了提高血肌酐检测试剂的抗干扰能力，本发明实施例提供一种血肌酐检测试剂球和检测芯片，能够通过特定的原料组分消除血液中的其他物质的干扰，提高肌酐检测结果的准确性。
6.为了解决上述技术问题，本发明实施例提供以下技术方案：
7.第一方面，本发明实施例提供一种血肌酐检测试剂球，所述血肌酐检测试剂球包括由第一试剂制得的第一试剂球、由第二试剂制得的第二试剂球和由第三试剂制得的第三试剂球；其中，
8.所述第一试剂包括以下组分：20
‑
100mmol/l的第一缓冲液，5
‑
10g/l的氯化钠，10
‑
50g/l的2，4，6
‑
三溴
‑3‑
羟基苯甲酸，10
‑
50g/l的第一稳定剂，100
‑
500ku/l的肌酸酶，50
‑
200ku/l的肌氨酸氧化酶，50
‑
200ku/l的抗坏血酸氧化酶和100
‑
200g/l的第一赋形剂；
9.所述第二试剂包括以下组分：20
‑
100mmol/l的第二缓冲液，5
‑
10g/l的氯化钠，0.1
‑
10g/l的4
‑
氨基安替吡啉，0.005
‑
1g/l的去胆红素干扰剂，10
‑
50g/l的第二稳定剂，50
‑
200ku/l的过氧化物酶和100
‑
200g/l的第二赋形剂；
10.所述第三试剂包括以下组分：0.8
‑
1.2kg/l的所述第二试剂和200
‑
500ku/l的肌酐酶。
11.可选的，所述第一试剂球、所述第二试剂球和所述第三试剂球为冻干试剂球。
12.可选的，所述第一稳定剂或所述第二稳定剂包括蔗糖、果糖、甘油、牛血清白蛋白
和脂肪醇聚氧乙烯醚中的至少一种。
13.可选的，所述去胆红素干扰剂包括亚铁氰化钾、高铁氰化钾和胆红素氧化酶中的至少一种。
14.可选的，所述第一试剂和所述第二试剂的ph值为7.5
‑
9.0，所述第三试剂的ph值为7.5
‑
8.5。
15.可选的，所述第一试剂还包括第一表面活性剂，和/或，所述第二试剂还包括第二表面活性剂。
16.可选的，当所述第一试剂包括所述第一表面活性剂时，所述第一表面活性剂为非离子表面活性剂；
17.当所述第二试剂包括所述第二表面活性剂时，所述第二表面活性剂为非离子表面活性剂。
18.第二方面，本发明实施例还提供一种血肌酐检测芯片，所述血肌酐检测芯片包括芯片本体和如第一方面所述的血肌酐检测试剂球，其中，所述芯片本体设置有多个比色孔，所述血肌酐检测试剂球收容于所述比色孔。
19.可选的，所述多个比色孔包括第一比色孔和第二比色孔，其中，所述第一比色孔用于收容第一试剂球和所述第二试剂球，所述第二比色孔用于收容所述第一试剂球和第三试剂球。
20.可选的，所述芯片本体用于：
21.通过配合使用的所述第一试剂球和所述第二试剂球测得检测样本的吸光度的第一变化值；
22.通过配合使用的所述第一试剂球和所述第三试剂球测得所述检测样本的吸光度的第二变化值；
23.根据所述第一变化值和所述第二变化值确定所述检测样本中血肌酐的浓度。
24.本发明实施方式的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明实施例提供了血肌酐检测试剂球和包含该血肌酐检测试剂球的血肌酐检测芯片，能够通过抗坏血酸氧化酶消除检测样本中维生素c的干扰，通过去胆红素干扰剂作为氧化剂消除胆红素的干扰；分别通过肌酸酶、肌氨酸氧化酶和过氧化物酶消除检测样本中存在的内源性肌酸、肌氨酸和过氧化物的干扰。本发明提供的血肌酐检测试剂球和检测芯片对血清中原有的干扰物和患者服用的药物类干扰物均具有较强的抗干扰能力，检测结果精度高。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
26.图1是本发明的一个实施例提供血肌酐检测芯片的临床相关性分析图；
27.图2是本发明的一个实施例提供的血肌酐检测芯片的线性范围分析图。
具体实施方式
28.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
29.需要说明的是，如果不冲突，本发明实施例中的各个特征可以相互组合，均在本发明的保护范围之内。另外，虽然在流程图中示出了逻辑顺序，但是在某些情况下，可以以不同于流程图中的顺序执行所示出或描述的步骤。
30.除非另有定义，本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本说明书中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是用于限制本发明。本说明书所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
31.现有的测定方法中，jaffe检测法的原理为肌酐与苦味酸在碱性条件下反应生成红色的反应产物，且该红色的反应产物是肌酐与苦味酸生成的1:1和1:2的络合物。但由于血清中含有假肌酐(肌酐的同系物或衍生物)，例如，胍基乙酸内酰胺、5
‑
甲基胍基乙酸内酰胺以及乙酰乙酸、丙酮酸、胆红素和乙内酰脲等物质，且假肌酐均能和苦味酸发生反应，导致肌酐含量测定结果不准确。
32.毛细管电泳法具有分离效率高、分析速度快、用品用量少及自动化程度高等优点。但是，毛细管内壁有时候会残留少量的蛋白，导致检测结果的重复性较差。
33.高效液相色谱法测试准确度高，且由于样品经过除蛋白处理，同时由于液相色谱柱的高分离性能，使得肌酐测定中的干扰大大减少。该方法的缺点为分析成本高；液相色谱仪价格及日常维护费用贵，且分析时间长。
34.酶学方法特异性高且结果准确，能够消除内源性肌酐的干扰，适用于各种自动分析仪。临床上广泛使用的肌酐检测试剂盒一般采用以trinder反应(偶联终点比色法)为基础的酶偶联法。
35.同时，患者服用的药物会影响检测结果，导致对检测结果的错误解释甚至误诊，从而增加一些不必要的附加检查。所以，解决检测中的药物干扰问题显得尤为重要。临床上常见药物，如：羟苯磺酸钙(用于治疗微血管疾病等)、酚磺乙胺(止血药物)、甲基多巴(抗高血压药物)、左旋多巴(用于治疗帕金森综合征)、多巴胺(神经传导物质)等物质，由于具有强还原性或与trinder反应中的色原底物结构类似，会在trinder反应时消耗过氧化氢，导致待测物的测量值偏低。并且，这些药物结构稳定且不易被破坏或降解，因此，会对基于trinder反应的临床化学检测产生干扰，影响测定结果。
36.基于此，本发明实施例提供一种血肌酐检测试剂球和检测芯片，通过第一试剂球分别与第二试剂球和第三试剂球搭配使用，在第二试剂球中加入过氧化物酶和4
‑
氨基安替吡啉，以及在第三试剂球中加入过氧化物酶和4
‑
氨基安替吡啉和肌酐酶，从而有效消除了多种物质对血肌酐检测结果的干扰。另外，将该试剂球可以置于微流控检测芯片中用于poct分析仪检测，操作简单，无交叉污染，且测定结果更快速、准确。为了便于读者理解本发明，下面结合具体的实施例进行说明。
37.本发明实施例提供一种血肌酐检测试剂球，该血肌酐检测试剂球包括第一试剂球、第二试剂球和第三试剂球，其中，第一试剂球、第二试剂球和第三试剂球分别由第一试
剂、第二试剂和第三试剂经冷冻干燥制备而成。
38.第一试剂包括以下组分：20
‑
100mmol/l的第一缓冲液，5
‑
10g/l的氯化钠，10
‑
50g/l的2，4，6
‑
三溴
‑3‑
羟基苯甲酸(tbhba)，0.1
‑
10g/l的第一表面活性剂，10
‑
50g/l的第一稳定剂，100
‑
500ku/l的肌酸酶，50
‑
200ku/l的肌氨酸氧化酶，50
‑
200ku/l的抗坏血酸氧化酶和100
‑
200g/l的第一赋形剂。第一试剂的ph值为7.5
‑
9.0。
39.在一些实施例中，第一试剂的配置方法如下：在容器(如，烧杯)中加入适量的蒸馏水，称取缓第一冲液加入容器中；待第一缓冲液溶解完全后，依次加入氯化钠、tbhba、第一表面活性剂、第一稳定剂、肌酸酶、肌氨酸氧化酶和抗坏血酸氧化酶；调节溶液中容器的ph值，最后加入第一赋形剂，然后再定容得到第一试剂。
40.第二试剂包括以下组分：20
‑
100mmol/l的第二缓冲液，5
‑
10g/l的氯化钠，0.1
‑
10g/l的4
‑
氨基安替吡啉，0.005
‑
1g/l的去胆红素干扰剂，0.1
‑
10g/l的第二表面活性剂，10
‑
50g/l的第二稳定剂，50
‑
200ku/l的过氧化物酶和100
‑
200g/l的第二赋形剂。第二试剂的ph值为7.5
‑
9.0。
41.在一些实施例中，第二试剂的配置方法如下：在容器中加入适量的蒸馏水，称取第二缓冲液成分并加入容器中，待第二缓冲液溶解完全后依次加入氯化钠、4
‑
氨基安替吡啉、去胆红素干扰剂、第二表面活性剂、第二稳定剂和过氧化物酶，最后加入第二赋形剂，然后定容得到第二试剂。
42.第三试剂的包括以下组分：0.8
‑
1.2kg/l的第二试剂和200
‑
500ku/l的肌酐酶。第三试剂的ph值为7.5
‑
8.5。在第二试剂中加入肌酐酶即可得到第三试剂。为了提高检测结果的精度，第三试剂具体可以包括1kg/l的第二试剂。
43.本发明实施例中，由于第二试剂球中加入了过氧化物酶和4
‑
氨基安替吡啉，且第三试剂球中加入了过氧化物酶、4
‑
氨基安替吡啉和肌酐酶。通过第一试剂球与第二试剂球配合使用，其测得的检测样本吸光度的变化值为第一变化值，第一变化值作为内源性肌酸的本底；第一试剂球与第三试剂球配合使用，其测得的检测样本的吸光度的变化值为第二变化值；第二变化值减去本底即为检测样本中肌酐反应的吸光度变化值，从而部分消除了血肌酐检测过程中多种外界因素对trinder反应检测的干扰。
44.本发明实施例提供的血肌酐检测试剂球的测定原理如下：在碱性条件下，肌酐通过酶作用产生的过氧化氢(h2o2)在4
‑
氨基安替吡啉(4
‑
aap)和过氧化物酶(pod)的存在下，可生成红色醌亚胺化合物，使反应液在某一波长处有一吸收峰，且反应液在该波长处的吸光度值与肌酐浓度在一定范围内成正比。因此，通过吸光度的上升速率即可计算出血液样本中肌酐的浓度。
45.本发明实施例中第一试剂、第二试剂和第三试剂均为碱性。由于血清中大部分蛋白质的等电点在酸性范围内，蛋白质在酸性缓冲液中容易形成沉淀而干扰肌酐的测定。而碱性条件下，能避免由蛋白质沉淀而产生的干扰。
46.缓冲液是指由弱酸及其盐或弱碱及其盐组成的混合溶液，能在一定程度上抵消或减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响，从而保持溶液ph值的相对稳定。本发明实施例中的缓冲液包括第一缓冲液和第二缓冲液，且第一缓冲液和第二缓冲液可以相同也可以不同，第一缓冲液或第二缓冲液为磷酸盐缓冲液、4
‑
(2
‑
羟乙基)
‑1‑
哌嗪乙磺酸(hepes)缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸(taps)缓冲液、3
‑
吗啉丙磺酸(mops)缓冲液、n，n
‑
二羟乙基甘氨
酸(bicine)缓冲液或甘氨酸缓冲液中的一种。
47.本发明实施例中的第一表面活性剂和第二表面活性剂为非离子表面活性剂。第一表面活性剂和第二表面活性剂用于提高氧化物酶的稳定性，两者的种类可以相同也可以不同。非离子型表面活性剂具有相对较低的临界胶束浓度，通常使用较低浓度就可以满足对酶的保护效果。非离子表面活性剂在水溶液中不电离，且其亲水基主要为含氧基团，如，醚基和羟基。相对于离子表面活性剂而言，非离子表面活性剂在溶液中不是离子状态，所以稳定性高，且不易受强电解质及ph值的影响。非离子表面活性剂具体可以是吐温系列活性剂(如，吐温
‑
20和吐温
‑
80)、司班系列活性剂(如，司班20或司班40)或triton系列(如triton x
‑
100或triton x
‑
114)中的一种。
48.本发明实施中的第一稳定剂或第二稳定剂包括蔗糖、果糖、甘油、牛血清白蛋白、脂肪醇和聚氧乙烯醚中的至少一种。
49.胆红素作为还原剂与tinder反应体系中氧化剂h2o2发生反应，使得终产物减少，在试剂中加入去胆红素干扰剂可消除胆红素的干扰。在一些实施例中，去胆红素干扰剂具体可以是亚铁氰化钾、高铁氰化钾或胆红素氧化酶中的至少一种。
50.赋形剂能够赋予冻干试剂球良好的外观，使冻干试剂球疏松多孔，易于复溶。赋形剂主要包括多元醇类、糖类、氨基酸类、无机盐类以及蛋白质和肽类赋形剂。多元醇类赋形剂包括甘油、山梨醇、甘露醇、肌醇、侧金盏花醇、乙二醇和聚乙二醇等。糖类赋形剂包括单糖类赋形剂、二糖类赋形剂和多糖类赋形剂；其中，单糖类赋形剂包括葡萄糖；二糖类赋形剂包括蔗糖、乳糖、麦芽糖和海藻糖等；多糖类赋形剂包括水溶性淀粉、麦芽糊精和葡聚糖等，葡聚糖可以是葡聚糖1万、葡聚糖2万、葡聚糖4万或葡聚糖7万中的一种或多种。氨基酸类赋形剂包括：谷氨酸钠、脯氨酸、赖氨酸和丙氨酸等；无机盐类赋形剂包括：磷酸盐、碳酸钙、硫酸锰、胆酸钠和乙酸钠等；蛋白质和肽类赋形剂包括粘多糖蛋白、酪蛋白或牛血清蛋白等。
51.本发明实施例中的第一赋形剂和第二赋形剂可相同也可以不同。为了使第一试剂球、第二试剂球和第三试剂球具有良好的外观，第一赋形剂或第二赋形剂可以是肌醇、海藻糖、水溶性淀粉和甘露醇中的至少一种。
52.在一些实施例中，试剂球(第二试剂球或第三试剂球)的制备方法包括如下步骤：
53.s11、将第一试剂(第二试剂或第三试剂)的液滴滴在液氮中，使第一试剂(第二试剂或第三试剂)的液滴形成冰球；
54.例如，可以通过点胶机将第一试剂(第二试剂或第三试剂)的液滴滴在液氮中，使液滴在液氮中凝结成冰球。本领域技术人员可以根据实际需要调整滴入液氮中的液滴的大小，并通过控制液滴的大小来调整冰球的体积。可选的，在一些实施例中，冰球的体积为2.5
‑
3.5μl，例如，可以是2.5μl、3μl或3.5μl。
55.s12、将冰球进行冷冻干燥制得冻干试剂球；
56.本实施例中，将冰球置于真空冷冻干燥机进行冷冻干燥形成冻干试剂球，待氮气复压后将冻干试剂球收集并保存在干燥的铝瓶中。
57.冷冻干燥是指分别将含水的第一试剂、第二试剂和第三试剂预先进行降温冻结成固体冰球，在低温减压条件下利用水的升华性能，使冰球低温脱水而达到干燥目的的一种干燥方法。冷冻干燥后，第一试剂、第二试剂或第三试剂中的各原料留在冻结时的冰架中。
因此，冷冻干燥后的冻干试剂球疏松多孔，且其体积与冻干前的冰球基本保持不变。由于冻干试剂球干燥前始终处于冻结状态，同时冰晶均匀分布于血肌酐检测试剂球各化学组份中。升华过程中，各组份不会因脱水而发生浓缩现象。故冷冻干燥后的冻干试剂球呈海绵状疏松多孔，极易溶于水而恢复原状。
58.本发明实施例还提供一种血肌酐检测芯片，该血肌酐检测芯片包括芯片本体和血肌酐检测试剂球。芯片本体上开设有多个比色孔，血肌酐检测试剂球收容于比色孔中。在一些实施例中，多个比色孔包括第一比色孔和第二比色孔，第一比色孔用于收容第一试剂球和第二试剂球，第二比色孔用于收容第一试剂球和第三试剂球。其中，第一试剂球与第二试剂球测得吸光度的第一变化值作为本底，且第一试剂球与第三试剂球测得的吸光度的第二变化值减去本底，即为检测样本中肌酐反应的吸光度变化值。本发明实施例中的检测样本包括血清、血浆或全血。
59.在一些实施例中，血肌酐检测芯片还包括样本孔、稀释液孔、样本槽、稀释液槽、样本定量槽、稀释液定量槽和混合槽。使用该血肌酐检测芯片进行测试时，无需对样本进行离心处理即可进行检测，因此，血清、血浆和全血都可以用于检测。先通过移液器将检测样本从样本孔加入样本槽中，再撕开稀释液槽的封口膜，采用离心的方式使预存的稀释液从稀释槽进入稀释液定量槽，使检测样本从样本槽进入样本定量槽，以及使稀释液定量槽中的稀释液和样本定量槽中的检测样本进入混合槽，以通过稀释液稀释检测样本。再通过离心的方式使混合槽中稀释后的检测样本填充到比色孔中，待稀释后的检测样本与比色孔中的冻干试剂球充分反应后，采用分光光度计测试比色孔中溶液的吸光度。具体的，在上述实例中，稀释液可以是蒸馏水或生理盐水。
60.为本发明实施例提供的一种血肌酐的检测方法，该方法应用上述实施例提供的血肌酐检测试剂球对检测样本中的血肌酐进行检测，该方法包括如下步骤：
61.s11、通过第一试剂球和第二试剂球测得检测样本的吸光度的第一变化值；
62.s12、通过第一试剂球和第三试剂球测得所述检测样本的吸光度的第二变化值；
63.s13、根据所述第一变化值和所述第二变化值确定所述检测样本中肌酐的浓度。
64.通过稀释液将检测样本稀释，将稀释后的检测样本填充到第一比色孔和第二比色孔中；待稀释后的检测样本与第一比色孔中的第一试剂球和第二试剂球充分反应后，采用分光光度计测试第一比色孔中溶液的吸光度第一变化值。待稀释后的检测样本与第二比色孔中的第一试剂球和第三试剂球充分反应后，采用分光光度计测试第二比色孔中溶液的吸光度第二变化值。将第二变化值减去第一变化值即为检测样本中肌酐反应的吸光度变化值，根据该吸光度变化值便可计算出检测样本中肌酐的浓度。
65.为进一步阐述本发明的技术方案，以下提供本发明的血肌酐检测试剂球的若干实施例。
66.实施例1：
67.本实施例血肌酐检测试剂球的原料包括以下组分：
68.第一试剂的各组分如下：20mmol/l的hepes缓冲液，10g/l的氯化钠，40g/l的2，4，6
‑
三溴
‑3‑
羟基苯甲酸，10g/l的吐温
‑
20，30g/l的果糖，500ku/l的肌酸酶，60ku/l的肌氨酸氧化酶，100ku/l的抗坏血酸氧化酶和150g/l的海藻糖；
69.第二试剂的各组分如下：100mmol/l的hepes缓冲液，5g/l的氯化钠，0.2g/l的4
‑
氨
基安替吡啉，1g/l的亚铁氰化钾，0.5g/l的吐温
‑
20，50g/l的牛血清白蛋白，50ku/l的过氧化物酶和200g/l的海藻糖；
70.所述第三试剂：1kg/l的所述第二试剂和200ku/l的肌酐酶。
71.本实施例采用上述血肌酐检测试剂球的制备方法制备冻干试剂球，并且第一试剂球、第二试剂球和第三试剂球的体积为3.5ul左右。
72.本实施例中的血肌酐检测芯片包括芯片本体和本实施例提供的冻干试剂球。采用上述血肌酐检测方法测试检测样本的吸光度值。
73.实施例2：
74.本实施例与实施例1的区别如下：
75.第一试剂的各组分如下：100mmol/l的磷酸盐缓冲液，6g/l的氯化钠，30g/l的2，4，6
‑
三溴
‑3‑
羟基苯甲酸，0.1g/l的triton x
‑
100，40g/l的甘油，100ku/l的肌酸酶，200ku/l的肌氨酸氧化酶，50ku/l的抗坏血酸氧化酶和200g/l的水溶性淀粉；
76.第二试剂的各组分如下：20mmol/l的3
‑
吗啉丙磺酸缓冲液，10g/l的氯化钠，10g/l的4
‑
氨基安替吡啉，0.005g/l的去胆红素干扰剂，10g/l的triton x
‑
100，10g/l的甘油，200ku/l的过氧化物酶和100g/l的水溶性淀粉；
77.第三试剂：1kg/l的所述第二试剂和500ku/l的肌酐酶。
78.第一试剂球、第二试剂球和第三试剂球的体积为2.5ul左右。
79.实施例3
80.本实施例与实施例1的区别如下：
81.第一试剂的各组分如下：80mmol/l的bicine缓冲液，5g/l的氯化钠，10g/l的2，4，6
‑
三溴
‑3‑
羟基苯甲酸，5g/l的司班40，10g/l的聚氧乙烯醚，300ku/l的肌酸酶，100ku/l的肌氨酸氧化酶，200ku/l的抗坏血酸氧化酶和100g/l的肌醇；
82.第二试剂的各组分如下：600mmol/l的taps缓冲液，10g/l的氯化钠，5g/l的4
‑
氨基安替吡啉，0.5g/l的胆红素氧化酶，0.1g/l的吐温
‑
80，30g/l的脂肪醇，100ku/l的过氧化物酶和150g/l的甘露醇；
83.第三试剂：1kg/l的所述第二试剂和350ku/l的肌酐酶。
84.第一试剂球、第二试剂球和第三试剂球的体积为3ul左右。
85.下面结合表格对本发明实施例1所得的血肌酐检测芯片的性能进行说明。需要说明的是，本发明实施例使用便携式生化分析仪测定37℃下，注入检测样本(即，血清样本)的测定芯片吸光度的变化值；并且，使用英国朗道公司提供的校准品进行定标，可计算得到检测样本中血肌酐的浓度。
86.(1)、精密度测试：采用本发明实施例1提供的血肌酐检测芯片测试已知血肌酐浓度为127umol/l的检测样本中的血肌酐浓度20次，并通过以下公式计算测得浓度值的平均值标准差(sd)和变异系数(cv)：
87.[0088][0089][0090]
其中，x
i
为第i次测得浓度值，n为测试次数。
[0091]
得到测试同一检测样本20次获得的测得浓度值的平均值＝129umol/l，标准差sd＝2.331，变异系数cv＝1.81％。通常，若标准差较大，代表大部分测试结果和其平均值之间差异较大；若标准差较小，则代表这些测试结果较接近平均值。
[0092]
(2)、准确度测试：采用本发明实施例1提供的血肌酐检测芯片测试已知血肌酐浓度为404umol/l的检测样本三次，获取测得的血肌酐浓度值，计算出3次测得血肌酐浓度值的平均值为397umol/l，相对偏差为
‑
1.82％。
[0093]
(3)临床相关性分析：
[0094]
采用本发明实施例1提供的血肌酐检测芯片与abaxis试剂盘同时测定多个血肌酐浓度不同的检测样本的血肌酐含量。相应的测得血肌酐浓度值(单位umol/l)如表一所示，表一中，x列数值为abaxis试剂盘测得的血清样品中的血肌酐浓度，y列数值为本发明实施例1提供的血肌酐检测芯片测得的血清样品中的血肌酐浓度。例如，对于1号检测样本，采用为abaxis试剂盘测试的血肌酐的浓度为168umol/l，而采用本发明实施例1提供的血肌酐检测芯片测试的1号血清样本中的血肌酐浓度为155umol/l。
[0095]
根据表一中的数据作图并得到图1，如图1所示，本发明实施例提供的血肌酐检测芯片与abaxis试剂盘的两组测试结果之间的相关方程如下：
[0096]
y＝1.0541x
‑
13.267
[0097]
相关系数r＝0.9947，相关系数越接近1代表两组数据之间的相关性越强。因此，本发明实施例提供的血肌酐检测芯片与abaxis试剂盘的测试结果相关性强。
[0098]
表一：血肌酐检测试剂盒的临床相关系分析表。
[0099]
[0100][0101]
(4)、线性范围测试
[0102]
测试方法如下：用接近线性范围([50，2000]umol/l)上限的高浓度(活性)样本和接近线性范围下限的低浓度(活性)样本，按表二所示，将高浓度检测样本和低浓度检测样本以不同比例混合成9个稀释浓度的检测样本。由于低浓度(活性)样本难以收集，可以以生理盐水代替。
[0103]
表二：
[0104][0105]
[0106]
采用本发明实施例1提供的血肌酐检测芯片分别测试9个检测样本的血肌酐浓度，每个检测样本测试3次，分别求出9个检测样本中血肌酐测得浓度值的平均值(y
i
)。以每个样本稀释后的浓度(x
i
)为自变量，以每个样本的测得浓度值均值(y
i
)为因变量求出线性回归方程。按公式(4)计算线性回归的相关系数r；公式(4)如下：
[0107][0108]
其中，n为测定样品的数量，x
i
为稀释浓度，y
i
为测定结果的平均值。
[0109]
如图2所示，得到的线性回归方程为y＝0.9709x 4.402，相关系数r＝0.9996。
[0110]
通常，当试剂盒检测血肌酐浓度在[50，2000]umol/l区间内的检测样本时，其线性相关系数r≥0.990，则满足要求。故，本发明实施例提供的血肌酐检测试剂球具备线性范围宽的特点。
[0111]
(5)、热稳定性测试
[0112]
在8％空气湿度环境中，将本发明实施例1提供的血肌酐检测试剂球装入芯片本体内形成多个检测芯片，并装入铝箔袋进行密封。
[0113]
将实施例1提供的多个检测芯片在37℃避光环境中贮存0、2、3、4、6和8天后，分别对英国朗道公司提供的两组校准品(样本1和样本2)中的血肌酐浓度进行多次检测，以分析多次检测的结果的平均值和相对偏差(单位为umol/l)，从而分析检测芯片的检测准确度，检测结果请参阅表三和表四。为了确保检测结果的准确度，相对偏差的绝对值应在
±
10.0％以内。
[0114]
表三和表四分别为存储不同时间后的检测芯片对样本1和样本2、中血肌酐浓度检测3次的检测结果，以及计算出的检测结果的平均值和相对偏差，其中，各个表中的靶值为相应地为样本1和样本2中血肌酐的实际浓度。为了确保检测结果的准确度，相对偏差的绝对值应在10.0％以内。从表三和表四中可以看出，本发明实施例提供的检测芯片在37℃环境中储存2、3、4、6或8天后检测结果的相对偏差的绝对值仍在
±
10.0％以内，因此，本实施例提供的检测芯片热稳定性好。
[0115]
表三：热稳定性分析表。
[0116]
样本1123平均值靶值相对偏差0天4214174234204044.06％2天4174084114124041.98％3天4184164134164042.89％4天4144164114144042.39％6天4084064054064040.58％8天399397400399404
‑
1.32％
[0117]
表四：热稳定性分析表。
[0118]
样本2123平均值靶值相对偏差0天1291311331311273.20％2天1261301291281270.92％3天121127124124127
‑
2.36％
4天123125122123127
‑
2.89％6天130121124125127
‑
1.57％8天123126120123127
‑
3.15％
[0119]
(6)、长期稳定性测试
[0120]
将实施例1提供的多个检测芯片在2
‑
8℃避光环境中贮存0、3、6、9、12和15个月后，分别对英国朗道公司提供的两组校准品(样本3和样本4)中的血肌酐浓度进行多次检测，以分析多次检测的结果的平均值和相对偏差(单位为umol/l)，从而分析检测芯片的检测准确度，检测结果请参阅表五和表六。
[0121]
表五：长期稳定性分析表。
[0122]
样本3123平均值靶值相对偏差0月392401398397404
‑
1.69％3月4114083964054040.25％6月391399399396404
‑
1.90％9月400394403399404
‑
1.24％12月401391403398404
‑
1.40％15月363399395386404
‑
4.54％
[0123]
表六：长期稳定性分析表。
[0124]
样本4123平均值靶值相对偏差0月117126130124127
‑
2.10％3月116113128119127
‑
6.30％6月119123120121127
‑
4.99％9月120128116121127
‑
4.46％12月124113112116127
‑
8.40％15月117117126120127
‑
5.51％
[0125]
表五和表六分别为存储不同时间后的检测芯片对样本3和样本4中血肌酐浓度检测3次的检测结果，以及计算出的检测结果的平均值和相对偏差，其中，各个表中的靶值为相应地为样本3和样本4中血肌酐的实际浓度。从表五和表六中可以看出，本发明实施例提供的检测芯片在2
‑
8℃环境中储存3、6、9、12和15个月后，检测结果的相对偏差的绝对值仍在
±
10.0％以内，因此，本实施例提供的检测芯片的长期稳定性好，在2
‑
8℃环境中长期储存后仍能确保其检测结果的准确性。
[0126]
(7)抗干扰能力测试
[0127]
采用本发明实施例提供的血肌酐检测芯片，分别对含有不同干扰物的实际浓度已知的检测样本进行检测，各个检测样本中的血肌酐的实际浓度均为404umol/l。各个检测样本中，干扰物的类型不同。
[0128]
表七为本发明实施例提供的检测芯片对血清中原有物质抗干扰能力分析表。从表七可以看出，当检测样本中含有抗坏血酸、胆红素、血红蛋白或甘油三酯时，本发明实施例提供的血肌酐检测芯片检测出血肌酐的浓度与检测样本中血肌酐的实际浓度之间的偏差均不超过
±
10.0％。
[0129]
表八为本发明实施例提供的检测芯片对患者服用药物的抗干扰能力分析表。从表
八可以看出，当检测样本中含有羟苯磺酸钙、酚磺乙胺、甲基多巴、左旋多巴和多巴胺时，本发明实施例提供的血肌酐检测芯片检测出血肌酐的浓度与检测样本中血肌酐的实际浓度之间的偏差均不超过
±
10.0％。
[0130]
综合表七和表八的实验结果可知，本发明实施例提供的血肌酐检测试剂球和检测芯片对血清中原有的干扰物和患者服用的药物类干扰物均具有较强的抗干扰能力。
[0131]
表七：抗血清中原有物质干扰能力分析表。
[0132][0133]
表八：抗药物干扰能力分析表。
[0134][0135][0136]
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明，它们没有在细节中提供；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。