从桑葚中连续提取分离多种天然活性成分的方法
1.技术领域
2.本发明涉及桑葚天然活性成分的提取分离方法，尤其涉及从桑葚中连续提取分离多种天然活性成分的方法。
背景技术：
3.桑葚，又名桑枣、桑果、桑仁、葚子等，为多年生木本植物桑树所结的聚合型多肉浆果，呈圆柱形，长1
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2cm，直径0.5
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0.8cm，每年约4
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6月份果实成熟。成熟的桑葚果实圆润，酸甜适口，以个大、肉厚、色紫红、糖分足者为佳。桑葚汁浓似蜜，甜酸清香，营养成分丰富，已被国家卫生部列为“既是食品又是药品”的“药食同源”农产品之一，与沙棘、悬钩子等同被誉为“第三代水果”。
4.花青素又称花色素，是植物花和果实中的一种主要呈色物质，被誉为继水、蛋白质、脂肪、糖类、维生素和矿物质之后的人体第7大必需营养素，因而成为天然色素中最有发展前景的一类色素。桑葚花青素以其提取率高、结构较稳定等特点，已经列为卫生部公告许可使用的食品添加剂品种，在食品和保健品领域都有广泛应用。桑葚花青素主要包括：矢车菊素
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o
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葡萄糖苷、矢车菊素
‑3‑
o
‑
芸香糖苷、天竺葵素
‑3‑
o
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葡萄糖苷、天竺葵素
‑3‑
o
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芸香糖苷等。
5.另外，桑葚中含有没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、丁香酸、肉桂酸、阿魏酸、香草酸和香豆酸等多酚类物质， 这些化合物具有抗动脉硬化、降低胆固醇、抗氧化和抗辐射等作用。
6.桑葚还含有多种氨基酸，其中苏氨酸、赖氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、色氨酸、异亮氨酸等6种氨基酸是人体必须的氨基酸，桑葚总氨基酸的含量比葡萄、香蕉、梨和桔果高6
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8倍。桑葚含有vb1、vb2、vb3、vb5、vb6、vc、ve等多种维生素，其中以vc含量最高。除多糖以外，桑葚中的糖类成分还包括果糖、葡萄糖和蔗糖，易被人体吸收。
7.我国是世界上种桑养蚕最早的国家，桑树的栽培已有四千多年的历史，桑树种类、品种以及桑葚的产量均位居世界首位。我国桑葚资源丰富，从桑葚中提取花青素的方法也有许多。但是，花青素只是桑葚中诸多有经济价值的活性成分之一，如果只对桑葚中的花青素提取、分离，而把其他成分当成废渣、废料而丢弃，无疑是对资源巨大的浪费，这样不但会增加环境的污染，生产加工的成本也将居高不下。因此，桑葚资源的综合利用应早日解决。
8.cn102212053a公开了一种桑椹花青素的提取方法，该方法以桑椹为原料，经超声把纤维素酶和果胶酶酶解，盐酸去氧水溶液75℃提取，聚合硫酸铁絮凝，过滤，大孔树脂吸附，洗脱液纳滤膜过滤等步骤，得到产品纯度最高为32%的花青素产品。该方法中，超声对该条件下桑椹的酶解是否有促进作用有待商榷，提取温度过高将导致花青素降解，聚合硫酸铁絮凝的过程同样有可能使部分花青素沉淀，因此，该方法获得桑椹花青素的得率偏低。
9.cn102659743a公开了一种桑葚中花色苷的提取精制方法，该方法以桑葚鲜果为原料，经酸水或酸性醇水溶液保温萃取，过滤，减压浓缩，大孔吸附树脂吸附，含水醇溶液解
析，浓缩，喷雾干燥等步骤，得到花色苷和原花青素混合物。该方法采取喷雾干燥的方式，由于温度过高，可能导致花青素降解。
10.cn104961783a公开了一种有效提取花青素和花色苷的方法，该方法以越橘、黑加仑、蓝莓、桑葚和黑米为原料，经乙醇溶液搅拌浸提，减压浓缩，大孔吸附树脂精制，乙醇洗脱，浓缩，喷雾干燥等步骤，得到含花青素和花色苷的提取物。该方法采取喷雾干燥的方式，由于温度过高，可能导致花青素降解。
11.cn105524035a公开了一种桑葚花青素的制造方法，该方法以桑葚为原料，经含有天然抗氧化剂的碱性水溶液提取，酸化，絮凝，阳离子交换树脂吸附，酸性溶液洗脱，减压浓缩，喷雾干燥等步骤，得到桑葚花青素产品。花青素在碱性环境中极不稳定，絮凝和喷雾干燥都可能导致花青素降解。
12.cn105949164a公开了一种桑葚花青素的提取方法，该方法以新鲜桑葚为原料，经打浆，盐酸酸化乙醇搅拌浸提，离心，浓缩，乙酸乙酯萃取、大孔树脂吸附柱层析，乙醇洗脱，减压浓缩等步骤得到桑葚花青素。该方法过多的使用易燃易爆的有机溶剂，不适合工业化生产。
13.cn106954773a公开了一种桑葚果汁综合利用的加工方法，该方法以新鲜桑葚果为原料，经拣选，清洗，压榨，粗滤，杀菌，酶解，离心，超滤，预浓缩，树脂吸附，水洗，花色苷洗脱，真空浓缩，冷冻干燥，发酵等步骤，得到花青素及浓缩发酵脱色桑葚果汁。该方法花青素提取率低。
14.上述方法都还有一个共同的缺陷，即只能够获得桑葚中的花青素或花青素类的活性成分，对桑葚中的其它天然活性成分并没有加以提取利用，没有实现自然资源的综合充分利用。
技术实现要素：
15.本发明要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种产品收率高、活性成分含量高，工艺简单，能连续提取多种天然活性成分的从桑葚中连续提取分离多种天然活性成分的方法。
16.本发明解决其技术问题采用的技术方案是，一种从桑葚中连续提取分离多种天然活性成分的方法，包括以下步骤：（1）原料破碎、冷水浸提：将桑葚原料用破碎机破碎，加入含有花青素保护剂的冷水，搅拌浸提，过滤，收集滤液；，得冷水浸提液；（2）离心：将步骤（1）所得的冷水浸提液离心，收集离心液；（3）大孔吸附树脂吸附：将步骤（2）所得的离心液通过大孔吸附树脂柱，收集大孔吸附树脂柱上柱的流出液待用；上柱毕，用纯水将大孔吸附树脂柱洗至微酸性；（4）花青素的分离：将步骤（3）中洗至微酸性的大孔吸附树脂柱用低度乙醇洗脱，得低度乙醇洗脱液；将低度乙醇洗脱液减压浓缩，微波干燥，得花青素产品；（5）多酚的分离：将步骤（4）中的大孔吸附树脂柱再用高度乙醇洗脱，得高度乙醇洗脱液；将高度乙醇洗脱液减压浓缩，微波干燥，得多酚产品；（6）脱盐、脱色：将步骤（3）中所得的大孔吸附树脂柱上柱的流出液通过串联的阳离子交换树脂柱
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阴离子交换树脂柱，收集阳离子交换树脂柱
‑
阴离子交换树脂柱上柱流出
液；将阳离子交换树脂柱
‑
阴离子交换树脂柱上柱流出液减压浓缩，得桑葚脱色浓缩果汁产品；（7）总氨基酸的分离：将步骤（6）中上柱后的阳离子交换树脂柱再用稀氨水洗脱，收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩，微波干燥，得总氨基酸产品。
17.进一步，步骤（1）中，所述冷水的温度为0～15℃；所述花青素保护剂为亚硫酸氢盐，花青素保护剂在冷水中的浓度为0.05%～0.5%。
18.进一步，所述亚硫酸氢盐为亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钾、亚硫酸氢钙或亚硫酸氢铵。
19.使用花青素保护剂的目的是，防止花青素在提取、离心、上柱过程中被氧化降解。若保护剂的浓度过低（用量过少），将无法达到防止花青素氧化降解的目的；若保护剂的浓度过高（用量过多），将造成物料的浪费，并增加后续脱盐步骤的负担。
20.进一步，步骤（1）中，所述搅拌浸提进行2次，第一次所用的冷水的量为桑葚原料重量的8～10倍，第二次为5～8倍，搅拌提取的时间，第一次为2～4小时，第二次为1～3小时；将2次浸提过滤所得滤液合并。
21.采用冷水搅拌提取的目的是，防止因提取温度过高而造成各种活性成分降解。浸提两次的目的是，确保桑葚中的各种水溶性活性成分被彻底浸出。
22.进一步，步骤（2）中，所述离心为沉降式离心，分离因数为2000～5000。
23.离心的目的是，除去冷水浸提液中的细小原料颗粒、泥沙、植物纤维等水不溶物，使料液澄清。若离心机的分离因数过小，都将导致固液分离不充分，造成大孔树脂柱上柱原料液浑浊，不利于吸附和解吸；若离心机的分离因数过大，将提高设备的参数要求，增加设备投入的成本。
24.进一步，步骤（3）中，所述大孔吸附树脂的型号为dm21、dm21d、dm28、lk2mg、dm
‑
8或ab
‑
8；大孔吸附树脂柱的高径比为1～5:1；树脂的用量为桑葚原料重量的0.5～3.0倍（l/kg）；上柱的流速为0.5～2.0bv/h。
25.使用大孔吸附树脂柱的目的是，将离心液中的桑葚花青素和桑葚多酚吸附、富集在大孔吸附树脂之上。若大孔吸附树脂用量过少、上柱的流速过快或高径比过小，桑葚花青素和桑葚多酚都将无法充分吸附；若大孔吸附树脂用量过多、上柱的流速过慢或高径比过大，都将延长生产的周期并增加生产的成本。
26.进一步，步骤（3）中，所述纯水的量为3～4 bv，水洗的流速为1～2 bv/h。
27.水洗的目的是，将树脂柱中无法吸附的盐、糖类等杂质除去。
28.进一步，步骤（4）中，所述低度乙醇的体积浓度为30%～40%；低度乙醇的用量为2～3 bv；低度乙醇洗脱的流速为1～2 bv/h。
29.低度乙醇洗脱的目的是，将吸附于大孔吸附树脂上的桑葚花青素洗脱。若低度乙醇的体积浓度过低、用量过少或洗脱的流速过快，都将导致花青素无法洗脱完全，造成花青素的收率偏低；若低度乙醇的体积浓度过高，用量过多或洗脱的流速过慢，都有可能将部分桑葚多酚洗脱，不但会造成花青素产品的纯度（含量）偏低，还会造成桑葚多酚的收率偏低。
30.进一步，步骤（5）中，所述高度乙醇的体积浓度为55%～70%，高度乙醇的用量为2～3 bv，高度乙醇洗脱的流速为1～2bv/h。
31.高度乙醇洗脱的目的是，将吸附于大孔吸附树脂上的桑葚多酚洗脱。若高度乙醇的体积浓度过低、用量过少或洗脱的流速过快，都将导致多酚无法洗脱完全，造成多酚的收
率偏低；若高度乙醇的体积浓度过高、用量过多或洗脱的流速过慢，都将造成能源和物料的浪费。
32.进一步，步骤（4）、步骤（5）和步骤（7）中，所述减压浓缩的温度均为55～60℃，真空度均为
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0.08～
‑
0.09 mpa，浓缩至固形物含量均为15%～25%；所述微波干燥的温度均为50～60℃，真空度均为
‑
0.08～
‑
0.09 mpa，微波频率均为2450~2550mhz。
33.进一步，步骤（6）中，所述阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，阳离子交换树脂的型号为001
×
7、001
×
8、001
×
12或001
×
16。
34.进一步，步骤（6）中，所述阳离子交换树脂柱的高径比为3～6:1，物料通过阳离子交换树脂柱的流速为1～2 bv/小时；所述阳离子交换树脂的树脂用量为桑葚原料重量的0.1～0.5倍（l/kg）。
35.使用阳离子交换树脂柱的目的是，脱盐并吸附大孔吸附树脂柱上柱流出液中的氨基酸。若阳离子交换树脂的用量过少、阳离子交换树脂柱的高径比过小或物料通过阳离子交换树脂柱的流速过快，都将无法充分的达到上述目的。若阳离子交换树脂的用量过多、阳离子交换树脂柱的高径比过大或物料通过阳离子交换树脂柱的流速过慢，都将造成能源或物料的浪费。
36.进一步，步骤（6）中，所述阴离子交换树脂为大孔型强碱性阴离子交换树脂；阳离子交换树脂的型号优选为d941、d945、d285或330。
37.进一步，步骤（6）中，所述阴离子交换树脂柱的高径比为3～6:1；物料通过阴离子交换树脂柱的流速为1～2 bv/小时；所述阴离子交换树脂的树脂用量为桑葚原料重量的0.1～0.5倍（l/kg）。
38.使用阴离子交换树脂柱的目的是脱色和除杂，以提高桑葚脱色浓缩果汁的纯度。若阴离子交换树脂的用量过少、阴离子交换树脂柱的高径比过小或物料通过阴离子交换树脂柱的流速过快，都将无法充分达到上述目的。若阴离子交换树脂的用量过多、阴离子交换树脂柱的高径比过大或物料通过阴离子交换树脂柱的流速过慢，都将造成能源或物料的浪费。
39.进一步，步骤（6）中，所述减压浓缩的温度为60～70℃，真空度为
‑
0.08～
‑
0.09 mpa，浓缩至糖度为55～65 brix；所述稀氨水的浓度为0.5～1.0mol/l，稀氨水的用量为3～5 bv，稀氨水洗脱的流速为1～2 bv/h。
40.使用稀氨水洗脱的目的是，将吸附在阳离子交换树脂上的桑葚氨基酸洗脱。若稀氨水的的浓度过低、用量过少或洗脱的流速过快，都将导致氨基酸无法洗脱完全，造成氨基酸的收率偏低；若稀氨水的浓度过高、用量过多或洗脱的流速过慢，都将造成能源和物料的浪费。
41.本发明中，1bv=1个柱体积。
42.本发明方法的原理：使用含有花青素保护剂的低温冷水提取，既可以将桑葚原料中的水溶性成分充分浸出，又可以确保提取出的天然活性成分性质稳定、不被氧化降解。通过大孔吸附树脂的选择性富集，这些水溶性成分中的桑葚花青素和桑葚多酚被吸附于其中，再根据桑葚花青素和桑葚多酚极性大小的不同，用梯度洗脱的方式，将两者先后从大孔吸附树脂柱中洗脱，从而实现两者的分离。而其它水溶性成分，包括氨基酸、多糖、蔗糖、果糖、葡萄糖、维生素、无机盐等，则不会被大孔吸附树脂吸附，存在于大孔吸附树脂柱上柱流
出液中。大孔吸附树脂柱上柱流出液经阳
‑
阴离子交换树脂柱脱盐、脱色，可以得到一种重要的副产物——桑葚脱色浓缩果汁。氨基酸将被阳离子交换树脂富集，经氨水洗脱、浓缩、干燥，得到桑葚氨基酸产品。
43.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：（1）本发明所得桑葚花青素产品的花青素含量高达65.49%，收率高达95.27%；桑葚多酚产品的多酚含量高达85.72%，收率高达93.48%；桑葚氨基酸产品的氨基酸含量高达71.43%，收率高达91.39%。
44.（2）本发明可同时提取桑葚中三种天然活性成分，实现了桑葚资源充分综合利用，工艺简单，可操作性强，对设备要求低，生产成本低，安全、绿色、环保，适宜于工业化生产。
45.（3）本发明将生产实际中、通常作为废液的大孔吸附树脂柱上柱流出液进行综合处理，不仅获得了富含多糖、蔗糖、果糖、葡萄糖和维生素的桑葚脱色浓缩果汁，极大的提高了产品的附加值，还减少了环境污染，提高了资源利用率。
具体实施方式
46.下面结合实施例对本发明作进一步说明。
47.本发明实施例所使用的桑葚原料购于四川，其中，花青素、多酚和氨基酸的质量百分比含量分别为1.83%、5.30%和0.67%；本发明实施例所使用的大孔吸附树脂和离子交换树脂均购于艾美科健（中国）生物医药有限公司；本发明实施例所使用的原料或化学试剂，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
48.本发明实施例中，采用高效液相色谱（hplc）外标法测定桑葚花青素（含：矢车菊素
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o
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葡萄糖苷、矢车菊素
‑3‑
o
‑
芸香糖苷、天竺葵素
‑3‑
o
‑
葡萄糖苷、天竺葵素
‑3‑
o
‑
芸香糖苷）的含量，采用酒石酸亚铁比色法测定桑葚多酚的含量，采用茚三酮显色法测定桑葚氨基酸（总）的含量。
49.实施例1本实施例包括以下步骤：（1）原料破碎、冷水浸提：取干燥的桑葚原料100kg，用破碎机破碎至粒径为1～2mm，加入1000l温度为8℃冷水（含亚硫酸氢钠，质量浓度为0.3%），搅拌浸提4小时，粗过滤，收集滤渣和滤液；将滤渣用600l相同的冷水再次搅拌浸提2小时，粗过滤，收集滤液；然后合并上述两次滤液，得冷水浸提液；（2）离心：将步骤（1）所得的冷水浸提液用分离因数为3200的沉降式离心机离心，收集离心液；（3）大孔吸附树脂吸附：将步骤（2）所得的离心液通过大孔吸附树脂柱（大孔吸附树脂的型号为dm21，大孔吸附树脂柱的高径比为4:1，大孔吸附树脂的用量为150l，上柱的流速为1.5bv/h），收集大孔吸附树脂柱上柱流出液待用；上柱毕，用3 bv纯水以1.5 bv/h的流速，将大孔吸附树脂柱洗至微酸性；（4）花青素的分离：将步骤（3）中洗至微酸性的大孔吸附树脂柱用3 bv、体积浓度为32%的低度乙醇洗脱，洗脱的流速为2 bv/h，将低度乙醇洗脱液在温度为60℃、真空度为
‑
0.08 mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为20%，再将浓缩液在温度为60℃、真空度为
‑
0.08 mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚花青素产品2.70kg；
（5）多酚的分离：将步骤（4）中洗脱后的大孔吸附树脂柱再用2.5 bv、体积浓度为70%的高度乙醇洗脱，洗脱的流速为1 bv/h，将高度乙醇洗脱液在温度为60℃、真空度为
‑
0.08 mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为22%，再将浓缩液在温度为60℃、真空度为
‑
0.08 mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚多酚产品5.73kg；（6）脱盐、脱色：将步骤（3）中的大孔吸附树脂柱上柱流出液通过串联的阳
‑
阴离子交换树脂柱（阳离子交换树脂的型号为001
×
16，阳离子交换树脂的用量为20l，阳离子交换树脂柱的高径比为4:1，物料通过阳离子交换树脂柱的流速为1 bv/小时；阴离子交换树脂的型号为d941，阴离子交换树脂的用量为20l，阴离子交换树脂柱的高径比为4:1，物料通过阴离子交换树脂柱的流速为1 bv/小时），收集阳
‑
阴离子交换树脂柱上柱流出液，在温度为70℃、真空度为
‑
0.08 mpa条件下减压浓缩至糖度为65 brix，得桑葚脱色浓缩果汁产品30.77kg；（7）总氨基酸的分离：将步骤（6）中的洗脱过的阳离子交换树脂柱再次用4 bv、浓度为0.7mol/l的稀氨水洗脱，洗脱的流速为1.5 bv/h，将稀氨水洗脱液减压浓缩，微波干燥，得桑葚总氨基酸产品0.85kg。
50.经高效液相色谱（hplc）外标法测定，本实施例所得桑葚花青素产品的花青素含量为64.57%，桑葚花青素的收率为95.27%；经酒石酸亚铁比色法测定，本实施例所得桑葚多酚产品的多酚含量为82.27%，桑葚多酚的收率为88.94%；经茚三酮显色法测定，本实施例所得桑葚氨基酸产品的氨基酸含量为71.43%，桑葚总氨基酸的收率为90.62%。
51.实施例2本实施例包括以下步骤：（1）原料破碎、冷水浸提：取干燥的桑葚原料100kg，用破碎机破碎至粒径为1～2mm，加入800l温度为5℃冷水（含亚硫酸氢钾，浓度为0.1%），搅拌浸提3.5小时，粗过滤，收集滤渣和滤液；将滤渣用700l相同的冷水再次搅拌浸提3小时，粗过滤，收集滤液；然后合并上述两次滤液，得冷水浸提液；（2）离心：将步骤（1）所得的冷水浸提液用分离因数为4000的沉降式离心机离心，收集离心液；（3）大孔吸附树脂吸附：将步骤（2）所得的离心液通过大孔吸附树脂柱（大孔吸附树脂的型号为dm21d，大孔吸附树脂柱的高径比为3.5:1，大孔吸附树脂的用量为200l，上柱的流速为2.0bv/h），收集大孔吸附树脂柱上柱流出液待用；上柱毕，用3.5 bv纯水以1.5 bv/h的流速，将大孔吸附树脂柱洗至微酸性；（4）花青素的分离：将步骤（3）中洗至微酸性的大孔吸附树脂柱用2.5 bv、体积浓度为35%的低度乙醇洗脱，洗脱的流速为1.5 bv/h，将低度乙醇洗脱液在温度为56℃、真空度为
‑
0.09mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为18%，再将浓缩液在温度为56℃、真空度为
‑
0.09mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚花青素产品2.69kg；（5）多酚的分离：将步骤（4）中洗脱后的大孔吸附树脂柱再用3 bv、体积浓度为65%的高度乙醇洗脱，洗脱的流速为1.5 bv/h，将高度乙醇洗脱液在温度为58℃、真空度为
‑
0.09 mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为20%，再将浓缩液在温度为58℃、真空度为
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0.09mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚多酚产品5.78kg；（6）脱盐、脱色：将步骤（3）中的大孔吸附树脂柱上柱流出液通过串联的阳
‑
阴离子
交换树脂柱（阳离子交换树脂的型号为001
×
12，阳离子交换树脂的用量为30l，阳离子交换树脂柱的高径比为5:1，物料通过阳离子交换树脂柱的流速为1.5 bv/小时；阴离子交换树脂的型号为d945，阴离子交换树脂的用量为30l，阴离子交换树脂柱的高径比为5:1，物料通过阴离子交换树脂柱的流速为1.5 bv/小时），收集阳
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阴离子交换树脂柱上柱流出液，在温度为68℃、真空度为
‑
0.08 mpa条件下减压浓缩至糖度为60 brix，得桑葚脱色浓缩果汁产品32.67kg；（7）总氨基酸的分离：将步骤（6）中的洗脱过的阳离子交换树脂柱再次用5 bv、浓度为0.6mol/l的稀氨水洗脱，洗脱的流速为2 bv/h，将稀氨水洗脱液减压浓缩，微波干燥，得桑葚总氨基酸产品0.88kg。
52.经高效液相色谱（hplc）外标法测定，本实施例所得桑葚花青素产品的花青素含量为63.19%，桑葚花青素的收率为92.89%；经酒石酸亚铁比色法测定，本实施例所得桑葚多酚产品的多酚含量为85.72%，桑葚多酚的收率为93.48%；经茚三酮显色法测定，本实施例所得桑葚氨基酸产品的氨基酸含量为69.58%，桑葚总氨基酸的收率为91.39%。
53.实施例3本实施例包括以下步骤：（1）原料破碎、冷水浸提：取干燥的桑葚原料100kg，用破碎机破碎至粒径为1～2mm，加入900l温度为10℃冷水（含亚硫酸氢钙，浓度为0.05%），搅拌浸提3小时，粗过滤，收集滤渣和滤液；将滤渣用800l相同的冷水再次搅拌浸提2.5小时，粗过滤，收集滤液；然后合并上述两次滤液，得冷水浸提液；（2）离心：将步骤（1）所得的冷水浸提液用分离因数为3500的沉降式离心机离心，收集离心液；（3）大孔吸附树脂吸附：将步骤（2）所得的离心液通过大孔吸附树脂柱（大孔吸附树脂的型号为lk2mg，大孔吸附树脂柱的高径比为5:1，大孔吸附树脂的用量为180l，上柱的流速为1.0bv/h），收集大孔吸附树脂柱上柱流出液待用；上柱毕，用4 bv纯水以2bv/h的流速，将大孔吸附树脂柱洗至微酸性；（4）花青素的分离：将步骤（3）中洗至微酸性的大孔吸附树脂柱用3bv、体积浓度为30%的低度乙醇洗脱，洗脱的流速为1bv/h，将低度乙醇洗脱液在温度为58℃、真空度为
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0.08mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为23%，再将浓缩液在温度为58℃、真空度为
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0.08mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚花青素产品2.63kg；（5）多酚的分离：将步骤（4）中洗脱后的大孔吸附树脂柱再用3 bv、体积浓度为60%的高度乙醇洗脱，洗脱的流速为1.5 bv/h，将高度乙醇洗脱液在温度为60℃、真空度为
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0.08 mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为18%，再将浓缩液在温度为60℃、真空度为
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0.08mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚多酚产品5.46kg；（6）脱盐、脱色：将步骤（3）中的大孔吸附树脂柱上柱流出液通过串联的阳
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阴离子交换树脂柱（阳离子交换树脂的型号为001
×
7，阳离子交换树脂的用量为25l，阳离子交换树脂柱的高径比为6:1，物料通过阳离子交换树脂柱的流速为2bv/小时；阴离子交换树脂的型号为d285，阴离子交换树脂的用量为25l，阴离子交换树脂柱的高径比为6:1，物料通过阴离子交换树脂柱的流速为2bv/小时），收集阳
‑
阴离子交换树脂柱上柱流出液，在温度为65℃、真空度为
‑
0.09 mpa条件下减压浓缩至糖度为63 brix，得桑葚脱色浓缩果汁产品
31.43kg；（7）总氨基酸的分离：将步骤（6）中的洗脱过的阳离子交换树脂柱再次用4.5bv、浓度为0.9mol/l的稀氨水洗脱，洗脱的流速为1bv/h，将稀氨水洗脱液减压浓缩，微波干燥，得桑葚总氨基酸产品0.89kg。
54.经高效液相色谱（hplc）外标法测定，本实施例所得桑葚花青素产品的花青素含量为65.49%，桑葚花青素的收率为94.12%；经酒石酸亚铁比色法测定，本实施例所得桑葚多酚产品的多酚含量为83.50%，桑葚多酚的收率为86.02%；经茚三酮显色法测定，本实施例所得桑葚氨基酸产品的氨基酸含量为68.74%，桑葚总氨基酸的收率为91.31%。
55.对比例1对比例1与实施例1相比，区别仅在于步骤（1）中使用的冷水中不加入亚硫酸氢钠，其他原料和提取条件与实施例1均相同。
56.经高效液相色谱（hplc）外标法测定，所得桑葚花青素产品的花青素含量为59.31%，桑葚花青素的收率为85.76%；经酒石酸亚铁比色法测定，本实施例所得桑葚多酚产品的多酚含量为81.37%，桑葚多酚的收率为87.56%；经茚三酮显色法测定，本实施例所得桑葚氨基酸产品的氨基酸含量为69.83%，桑葚总氨基酸的收率为89.74%。
57.对比例2对比例2与实施例1相比，区别仅在于步骤（1）中使用的冷水中亚硫酸氢钠的浓度为0.02%，其他原料和提取条件与实施例1均相同。
58.经高效液相色谱（hplc）外标法测定，所得桑葚花青素产品的花青素含量为60.18%，桑葚花青素的收率为86.82%；经酒石酸亚铁比色法测定，本实施例所得桑葚多酚产品的多酚含量为84.37%，桑葚多酚的收率为91.65%；经茚三酮显色法测定，本实施例所得桑葚氨基酸产品的氨基酸含量为68.68%，桑葚总氨基酸的收率为90.52%。
59.上述实施例是针对本发明其中之部分可行实施例的具体说明，这些实施例并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应属于本发明专利申请的请求保护的范围内。
1.技术领域
2.本发明涉及桑葚天然活性成分的提取分离方法，尤其涉及从桑葚中连续提取分离多种天然活性成分的方法。
背景技术：
3.桑葚，又名桑枣、桑果、桑仁、葚子等，为多年生木本植物桑树所结的聚合型多肉浆果，呈圆柱形，长1
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2cm，直径0.5
‑
0.8cm，每年约4
‑
6月份果实成熟。成熟的桑葚果实圆润，酸甜适口，以个大、肉厚、色紫红、糖分足者为佳。桑葚汁浓似蜜，甜酸清香，营养成分丰富，已被国家卫生部列为“既是食品又是药品”的“药食同源”农产品之一，与沙棘、悬钩子等同被誉为“第三代水果”。
4.花青素又称花色素，是植物花和果实中的一种主要呈色物质，被誉为继水、蛋白质、脂肪、糖类、维生素和矿物质之后的人体第7大必需营养素，因而成为天然色素中最有发展前景的一类色素。桑葚花青素以其提取率高、结构较稳定等特点，已经列为卫生部公告许可使用的食品添加剂品种，在食品和保健品领域都有广泛应用。桑葚花青素主要包括：矢车菊素
‑3‑
o
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葡萄糖苷、矢车菊素
‑3‑
o
‑
芸香糖苷、天竺葵素
‑3‑
o
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葡萄糖苷、天竺葵素
‑3‑
o
‑
芸香糖苷等。
5.另外，桑葚中含有没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、丁香酸、肉桂酸、阿魏酸、香草酸和香豆酸等多酚类物质， 这些化合物具有抗动脉硬化、降低胆固醇、抗氧化和抗辐射等作用。
6.桑葚还含有多种氨基酸，其中苏氨酸、赖氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、色氨酸、异亮氨酸等6种氨基酸是人体必须的氨基酸，桑葚总氨基酸的含量比葡萄、香蕉、梨和桔果高6
‑
8倍。桑葚含有vb1、vb2、vb3、vb5、vb6、vc、ve等多种维生素，其中以vc含量最高。除多糖以外，桑葚中的糖类成分还包括果糖、葡萄糖和蔗糖，易被人体吸收。
7.我国是世界上种桑养蚕最早的国家，桑树的栽培已有四千多年的历史，桑树种类、品种以及桑葚的产量均位居世界首位。我国桑葚资源丰富，从桑葚中提取花青素的方法也有许多。但是，花青素只是桑葚中诸多有经济价值的活性成分之一，如果只对桑葚中的花青素提取、分离，而把其他成分当成废渣、废料而丢弃，无疑是对资源巨大的浪费，这样不但会增加环境的污染，生产加工的成本也将居高不下。因此，桑葚资源的综合利用应早日解决。
8.cn102212053a公开了一种桑椹花青素的提取方法，该方法以桑椹为原料，经超声把纤维素酶和果胶酶酶解，盐酸去氧水溶液75℃提取，聚合硫酸铁絮凝，过滤，大孔树脂吸附，洗脱液纳滤膜过滤等步骤，得到产品纯度最高为32%的花青素产品。该方法中，超声对该条件下桑椹的酶解是否有促进作用有待商榷，提取温度过高将导致花青素降解，聚合硫酸铁絮凝的过程同样有可能使部分花青素沉淀，因此，该方法获得桑椹花青素的得率偏低。
9.cn102659743a公开了一种桑葚中花色苷的提取精制方法，该方法以桑葚鲜果为原料，经酸水或酸性醇水溶液保温萃取，过滤，减压浓缩，大孔吸附树脂吸附，含水醇溶液解
析，浓缩，喷雾干燥等步骤，得到花色苷和原花青素混合物。该方法采取喷雾干燥的方式，由于温度过高，可能导致花青素降解。
10.cn104961783a公开了一种有效提取花青素和花色苷的方法，该方法以越橘、黑加仑、蓝莓、桑葚和黑米为原料，经乙醇溶液搅拌浸提，减压浓缩，大孔吸附树脂精制，乙醇洗脱，浓缩，喷雾干燥等步骤，得到含花青素和花色苷的提取物。该方法采取喷雾干燥的方式，由于温度过高，可能导致花青素降解。
11.cn105524035a公开了一种桑葚花青素的制造方法，该方法以桑葚为原料，经含有天然抗氧化剂的碱性水溶液提取，酸化，絮凝，阳离子交换树脂吸附，酸性溶液洗脱，减压浓缩，喷雾干燥等步骤，得到桑葚花青素产品。花青素在碱性环境中极不稳定，絮凝和喷雾干燥都可能导致花青素降解。
12.cn105949164a公开了一种桑葚花青素的提取方法，该方法以新鲜桑葚为原料，经打浆，盐酸酸化乙醇搅拌浸提，离心，浓缩，乙酸乙酯萃取、大孔树脂吸附柱层析，乙醇洗脱，减压浓缩等步骤得到桑葚花青素。该方法过多的使用易燃易爆的有机溶剂，不适合工业化生产。
13.cn106954773a公开了一种桑葚果汁综合利用的加工方法，该方法以新鲜桑葚果为原料，经拣选，清洗，压榨，粗滤，杀菌，酶解，离心，超滤，预浓缩，树脂吸附，水洗，花色苷洗脱，真空浓缩，冷冻干燥，发酵等步骤，得到花青素及浓缩发酵脱色桑葚果汁。该方法花青素提取率低。
14.上述方法都还有一个共同的缺陷，即只能够获得桑葚中的花青素或花青素类的活性成分，对桑葚中的其它天然活性成分并没有加以提取利用，没有实现自然资源的综合充分利用。
技术实现要素：
15.本发明要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种产品收率高、活性成分含量高，工艺简单，能连续提取多种天然活性成分的从桑葚中连续提取分离多种天然活性成分的方法。
16.本发明解决其技术问题采用的技术方案是，一种从桑葚中连续提取分离多种天然活性成分的方法，包括以下步骤：（1）原料破碎、冷水浸提：将桑葚原料用破碎机破碎，加入含有花青素保护剂的冷水，搅拌浸提，过滤，收集滤液；，得冷水浸提液；（2）离心：将步骤（1）所得的冷水浸提液离心，收集离心液；（3）大孔吸附树脂吸附：将步骤（2）所得的离心液通过大孔吸附树脂柱，收集大孔吸附树脂柱上柱的流出液待用；上柱毕，用纯水将大孔吸附树脂柱洗至微酸性；（4）花青素的分离：将步骤（3）中洗至微酸性的大孔吸附树脂柱用低度乙醇洗脱，得低度乙醇洗脱液；将低度乙醇洗脱液减压浓缩，微波干燥，得花青素产品；（5）多酚的分离：将步骤（4）中的大孔吸附树脂柱再用高度乙醇洗脱，得高度乙醇洗脱液；将高度乙醇洗脱液减压浓缩，微波干燥，得多酚产品；（6）脱盐、脱色：将步骤（3）中所得的大孔吸附树脂柱上柱的流出液通过串联的阳离子交换树脂柱
‑
阴离子交换树脂柱，收集阳离子交换树脂柱
‑
阴离子交换树脂柱上柱流出
液；将阳离子交换树脂柱
‑
阴离子交换树脂柱上柱流出液减压浓缩，得桑葚脱色浓缩果汁产品；（7）总氨基酸的分离：将步骤（6）中上柱后的阳离子交换树脂柱再用稀氨水洗脱，收集洗脱液；将洗脱液减压浓缩，微波干燥，得总氨基酸产品。
17.进一步，步骤（1）中，所述冷水的温度为0～15℃；所述花青素保护剂为亚硫酸氢盐，花青素保护剂在冷水中的浓度为0.05%～0.5%。
18.进一步，所述亚硫酸氢盐为亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钾、亚硫酸氢钙或亚硫酸氢铵。
19.使用花青素保护剂的目的是，防止花青素在提取、离心、上柱过程中被氧化降解。若保护剂的浓度过低（用量过少），将无法达到防止花青素氧化降解的目的；若保护剂的浓度过高（用量过多），将造成物料的浪费，并增加后续脱盐步骤的负担。
20.进一步，步骤（1）中，所述搅拌浸提进行2次，第一次所用的冷水的量为桑葚原料重量的8～10倍，第二次为5～8倍，搅拌提取的时间，第一次为2～4小时，第二次为1～3小时；将2次浸提过滤所得滤液合并。
21.采用冷水搅拌提取的目的是，防止因提取温度过高而造成各种活性成分降解。浸提两次的目的是，确保桑葚中的各种水溶性活性成分被彻底浸出。
22.进一步，步骤（2）中，所述离心为沉降式离心，分离因数为2000～5000。
23.离心的目的是，除去冷水浸提液中的细小原料颗粒、泥沙、植物纤维等水不溶物，使料液澄清。若离心机的分离因数过小，都将导致固液分离不充分，造成大孔树脂柱上柱原料液浑浊，不利于吸附和解吸；若离心机的分离因数过大，将提高设备的参数要求，增加设备投入的成本。
24.进一步，步骤（3）中，所述大孔吸附树脂的型号为dm21、dm21d、dm28、lk2mg、dm
‑
8或ab
‑
8；大孔吸附树脂柱的高径比为1～5:1；树脂的用量为桑葚原料重量的0.5～3.0倍（l/kg）；上柱的流速为0.5～2.0bv/h。
25.使用大孔吸附树脂柱的目的是，将离心液中的桑葚花青素和桑葚多酚吸附、富集在大孔吸附树脂之上。若大孔吸附树脂用量过少、上柱的流速过快或高径比过小，桑葚花青素和桑葚多酚都将无法充分吸附；若大孔吸附树脂用量过多、上柱的流速过慢或高径比过大，都将延长生产的周期并增加生产的成本。
26.进一步，步骤（3）中，所述纯水的量为3～4 bv，水洗的流速为1～2 bv/h。
27.水洗的目的是，将树脂柱中无法吸附的盐、糖类等杂质除去。
28.进一步，步骤（4）中，所述低度乙醇的体积浓度为30%～40%；低度乙醇的用量为2～3 bv；低度乙醇洗脱的流速为1～2 bv/h。
29.低度乙醇洗脱的目的是，将吸附于大孔吸附树脂上的桑葚花青素洗脱。若低度乙醇的体积浓度过低、用量过少或洗脱的流速过快，都将导致花青素无法洗脱完全，造成花青素的收率偏低；若低度乙醇的体积浓度过高，用量过多或洗脱的流速过慢，都有可能将部分桑葚多酚洗脱，不但会造成花青素产品的纯度（含量）偏低，还会造成桑葚多酚的收率偏低。
30.进一步，步骤（5）中，所述高度乙醇的体积浓度为55%～70%，高度乙醇的用量为2～3 bv，高度乙醇洗脱的流速为1～2bv/h。
31.高度乙醇洗脱的目的是，将吸附于大孔吸附树脂上的桑葚多酚洗脱。若高度乙醇的体积浓度过低、用量过少或洗脱的流速过快，都将导致多酚无法洗脱完全，造成多酚的收
率偏低；若高度乙醇的体积浓度过高、用量过多或洗脱的流速过慢，都将造成能源和物料的浪费。
32.进一步，步骤（4）、步骤（5）和步骤（7）中，所述减压浓缩的温度均为55～60℃，真空度均为
‑
0.08～
‑
0.09 mpa，浓缩至固形物含量均为15%～25%；所述微波干燥的温度均为50～60℃，真空度均为
‑
0.08～
‑
0.09 mpa，微波频率均为2450~2550mhz。
33.进一步，步骤（6）中，所述阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，阳离子交换树脂的型号为001
×
7、001
×
8、001
×
12或001
×
16。
34.进一步，步骤（6）中，所述阳离子交换树脂柱的高径比为3～6:1，物料通过阳离子交换树脂柱的流速为1～2 bv/小时；所述阳离子交换树脂的树脂用量为桑葚原料重量的0.1～0.5倍（l/kg）。
35.使用阳离子交换树脂柱的目的是，脱盐并吸附大孔吸附树脂柱上柱流出液中的氨基酸。若阳离子交换树脂的用量过少、阳离子交换树脂柱的高径比过小或物料通过阳离子交换树脂柱的流速过快，都将无法充分的达到上述目的。若阳离子交换树脂的用量过多、阳离子交换树脂柱的高径比过大或物料通过阳离子交换树脂柱的流速过慢，都将造成能源或物料的浪费。
36.进一步，步骤（6）中，所述阴离子交换树脂为大孔型强碱性阴离子交换树脂；阳离子交换树脂的型号优选为d941、d945、d285或330。
37.进一步，步骤（6）中，所述阴离子交换树脂柱的高径比为3～6:1；物料通过阴离子交换树脂柱的流速为1～2 bv/小时；所述阴离子交换树脂的树脂用量为桑葚原料重量的0.1～0.5倍（l/kg）。
38.使用阴离子交换树脂柱的目的是脱色和除杂，以提高桑葚脱色浓缩果汁的纯度。若阴离子交换树脂的用量过少、阴离子交换树脂柱的高径比过小或物料通过阴离子交换树脂柱的流速过快，都将无法充分达到上述目的。若阴离子交换树脂的用量过多、阴离子交换树脂柱的高径比过大或物料通过阴离子交换树脂柱的流速过慢，都将造成能源或物料的浪费。
39.进一步，步骤（6）中，所述减压浓缩的温度为60～70℃，真空度为
‑
0.08～
‑
0.09 mpa，浓缩至糖度为55～65 brix；所述稀氨水的浓度为0.5～1.0mol/l，稀氨水的用量为3～5 bv，稀氨水洗脱的流速为1～2 bv/h。
40.使用稀氨水洗脱的目的是，将吸附在阳离子交换树脂上的桑葚氨基酸洗脱。若稀氨水的的浓度过低、用量过少或洗脱的流速过快，都将导致氨基酸无法洗脱完全，造成氨基酸的收率偏低；若稀氨水的浓度过高、用量过多或洗脱的流速过慢，都将造成能源和物料的浪费。
41.本发明中，1bv=1个柱体积。
42.本发明方法的原理：使用含有花青素保护剂的低温冷水提取，既可以将桑葚原料中的水溶性成分充分浸出，又可以确保提取出的天然活性成分性质稳定、不被氧化降解。通过大孔吸附树脂的选择性富集，这些水溶性成分中的桑葚花青素和桑葚多酚被吸附于其中，再根据桑葚花青素和桑葚多酚极性大小的不同，用梯度洗脱的方式，将两者先后从大孔吸附树脂柱中洗脱，从而实现两者的分离。而其它水溶性成分，包括氨基酸、多糖、蔗糖、果糖、葡萄糖、维生素、无机盐等，则不会被大孔吸附树脂吸附，存在于大孔吸附树脂柱上柱流
出液中。大孔吸附树脂柱上柱流出液经阳
‑
阴离子交换树脂柱脱盐、脱色，可以得到一种重要的副产物——桑葚脱色浓缩果汁。氨基酸将被阳离子交换树脂富集，经氨水洗脱、浓缩、干燥，得到桑葚氨基酸产品。
43.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：（1）本发明所得桑葚花青素产品的花青素含量高达65.49%，收率高达95.27%；桑葚多酚产品的多酚含量高达85.72%，收率高达93.48%；桑葚氨基酸产品的氨基酸含量高达71.43%，收率高达91.39%。
44.（2）本发明可同时提取桑葚中三种天然活性成分，实现了桑葚资源充分综合利用，工艺简单，可操作性强，对设备要求低，生产成本低，安全、绿色、环保，适宜于工业化生产。
45.（3）本发明将生产实际中、通常作为废液的大孔吸附树脂柱上柱流出液进行综合处理，不仅获得了富含多糖、蔗糖、果糖、葡萄糖和维生素的桑葚脱色浓缩果汁，极大的提高了产品的附加值，还减少了环境污染，提高了资源利用率。
具体实施方式
46.下面结合实施例对本发明作进一步说明。
47.本发明实施例所使用的桑葚原料购于四川，其中，花青素、多酚和氨基酸的质量百分比含量分别为1.83%、5.30%和0.67%；本发明实施例所使用的大孔吸附树脂和离子交换树脂均购于艾美科健（中国）生物医药有限公司；本发明实施例所使用的原料或化学试剂，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
48.本发明实施例中，采用高效液相色谱（hplc）外标法测定桑葚花青素（含：矢车菊素
‑3‑
o
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葡萄糖苷、矢车菊素
‑3‑
o
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芸香糖苷、天竺葵素
‑3‑
o
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葡萄糖苷、天竺葵素
‑3‑
o
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芸香糖苷）的含量，采用酒石酸亚铁比色法测定桑葚多酚的含量，采用茚三酮显色法测定桑葚氨基酸（总）的含量。
49.实施例1本实施例包括以下步骤：（1）原料破碎、冷水浸提：取干燥的桑葚原料100kg，用破碎机破碎至粒径为1～2mm，加入1000l温度为8℃冷水（含亚硫酸氢钠，质量浓度为0.3%），搅拌浸提4小时，粗过滤，收集滤渣和滤液；将滤渣用600l相同的冷水再次搅拌浸提2小时，粗过滤，收集滤液；然后合并上述两次滤液，得冷水浸提液；（2）离心：将步骤（1）所得的冷水浸提液用分离因数为3200的沉降式离心机离心，收集离心液；（3）大孔吸附树脂吸附：将步骤（2）所得的离心液通过大孔吸附树脂柱（大孔吸附树脂的型号为dm21，大孔吸附树脂柱的高径比为4:1，大孔吸附树脂的用量为150l，上柱的流速为1.5bv/h），收集大孔吸附树脂柱上柱流出液待用；上柱毕，用3 bv纯水以1.5 bv/h的流速，将大孔吸附树脂柱洗至微酸性；（4）花青素的分离：将步骤（3）中洗至微酸性的大孔吸附树脂柱用3 bv、体积浓度为32%的低度乙醇洗脱，洗脱的流速为2 bv/h，将低度乙醇洗脱液在温度为60℃、真空度为
‑
0.08 mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为20%，再将浓缩液在温度为60℃、真空度为
‑
0.08 mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚花青素产品2.70kg；
（5）多酚的分离：将步骤（4）中洗脱后的大孔吸附树脂柱再用2.5 bv、体积浓度为70%的高度乙醇洗脱，洗脱的流速为1 bv/h，将高度乙醇洗脱液在温度为60℃、真空度为
‑
0.08 mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为22%，再将浓缩液在温度为60℃、真空度为
‑
0.08 mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚多酚产品5.73kg；（6）脱盐、脱色：将步骤（3）中的大孔吸附树脂柱上柱流出液通过串联的阳
‑
阴离子交换树脂柱（阳离子交换树脂的型号为001
×
16，阳离子交换树脂的用量为20l，阳离子交换树脂柱的高径比为4:1，物料通过阳离子交换树脂柱的流速为1 bv/小时；阴离子交换树脂的型号为d941，阴离子交换树脂的用量为20l，阴离子交换树脂柱的高径比为4:1，物料通过阴离子交换树脂柱的流速为1 bv/小时），收集阳
‑
阴离子交换树脂柱上柱流出液，在温度为70℃、真空度为
‑
0.08 mpa条件下减压浓缩至糖度为65 brix，得桑葚脱色浓缩果汁产品30.77kg；（7）总氨基酸的分离：将步骤（6）中的洗脱过的阳离子交换树脂柱再次用4 bv、浓度为0.7mol/l的稀氨水洗脱，洗脱的流速为1.5 bv/h，将稀氨水洗脱液减压浓缩，微波干燥，得桑葚总氨基酸产品0.85kg。
50.经高效液相色谱（hplc）外标法测定，本实施例所得桑葚花青素产品的花青素含量为64.57%，桑葚花青素的收率为95.27%；经酒石酸亚铁比色法测定，本实施例所得桑葚多酚产品的多酚含量为82.27%，桑葚多酚的收率为88.94%；经茚三酮显色法测定，本实施例所得桑葚氨基酸产品的氨基酸含量为71.43%，桑葚总氨基酸的收率为90.62%。
51.实施例2本实施例包括以下步骤：（1）原料破碎、冷水浸提：取干燥的桑葚原料100kg，用破碎机破碎至粒径为1～2mm，加入800l温度为5℃冷水（含亚硫酸氢钾，浓度为0.1%），搅拌浸提3.5小时，粗过滤，收集滤渣和滤液；将滤渣用700l相同的冷水再次搅拌浸提3小时，粗过滤，收集滤液；然后合并上述两次滤液，得冷水浸提液；（2）离心：将步骤（1）所得的冷水浸提液用分离因数为4000的沉降式离心机离心，收集离心液；（3）大孔吸附树脂吸附：将步骤（2）所得的离心液通过大孔吸附树脂柱（大孔吸附树脂的型号为dm21d，大孔吸附树脂柱的高径比为3.5:1，大孔吸附树脂的用量为200l，上柱的流速为2.0bv/h），收集大孔吸附树脂柱上柱流出液待用；上柱毕，用3.5 bv纯水以1.5 bv/h的流速，将大孔吸附树脂柱洗至微酸性；（4）花青素的分离：将步骤（3）中洗至微酸性的大孔吸附树脂柱用2.5 bv、体积浓度为35%的低度乙醇洗脱，洗脱的流速为1.5 bv/h，将低度乙醇洗脱液在温度为56℃、真空度为
‑
0.09mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为18%，再将浓缩液在温度为56℃、真空度为
‑
0.09mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚花青素产品2.69kg；（5）多酚的分离：将步骤（4）中洗脱后的大孔吸附树脂柱再用3 bv、体积浓度为65%的高度乙醇洗脱，洗脱的流速为1.5 bv/h，将高度乙醇洗脱液在温度为58℃、真空度为
‑
0.09 mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为20%，再将浓缩液在温度为58℃、真空度为
‑
0.09mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚多酚产品5.78kg；（6）脱盐、脱色：将步骤（3）中的大孔吸附树脂柱上柱流出液通过串联的阳
‑
阴离子
交换树脂柱（阳离子交换树脂的型号为001
×
12，阳离子交换树脂的用量为30l，阳离子交换树脂柱的高径比为5:1，物料通过阳离子交换树脂柱的流速为1.5 bv/小时；阴离子交换树脂的型号为d945，阴离子交换树脂的用量为30l，阴离子交换树脂柱的高径比为5:1，物料通过阴离子交换树脂柱的流速为1.5 bv/小时），收集阳
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阴离子交换树脂柱上柱流出液，在温度为68℃、真空度为
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0.08 mpa条件下减压浓缩至糖度为60 brix，得桑葚脱色浓缩果汁产品32.67kg；（7）总氨基酸的分离：将步骤（6）中的洗脱过的阳离子交换树脂柱再次用5 bv、浓度为0.6mol/l的稀氨水洗脱，洗脱的流速为2 bv/h，将稀氨水洗脱液减压浓缩，微波干燥，得桑葚总氨基酸产品0.88kg。
52.经高效液相色谱（hplc）外标法测定，本实施例所得桑葚花青素产品的花青素含量为63.19%，桑葚花青素的收率为92.89%；经酒石酸亚铁比色法测定，本实施例所得桑葚多酚产品的多酚含量为85.72%，桑葚多酚的收率为93.48%；经茚三酮显色法测定，本实施例所得桑葚氨基酸产品的氨基酸含量为69.58%，桑葚总氨基酸的收率为91.39%。
53.实施例3本实施例包括以下步骤：（1）原料破碎、冷水浸提：取干燥的桑葚原料100kg，用破碎机破碎至粒径为1～2mm，加入900l温度为10℃冷水（含亚硫酸氢钙，浓度为0.05%），搅拌浸提3小时，粗过滤，收集滤渣和滤液；将滤渣用800l相同的冷水再次搅拌浸提2.5小时，粗过滤，收集滤液；然后合并上述两次滤液，得冷水浸提液；（2）离心：将步骤（1）所得的冷水浸提液用分离因数为3500的沉降式离心机离心，收集离心液；（3）大孔吸附树脂吸附：将步骤（2）所得的离心液通过大孔吸附树脂柱（大孔吸附树脂的型号为lk2mg，大孔吸附树脂柱的高径比为5:1，大孔吸附树脂的用量为180l，上柱的流速为1.0bv/h），收集大孔吸附树脂柱上柱流出液待用；上柱毕，用4 bv纯水以2bv/h的流速，将大孔吸附树脂柱洗至微酸性；（4）花青素的分离：将步骤（3）中洗至微酸性的大孔吸附树脂柱用3bv、体积浓度为30%的低度乙醇洗脱，洗脱的流速为1bv/h，将低度乙醇洗脱液在温度为58℃、真空度为
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0.08mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为23%，再将浓缩液在温度为58℃、真空度为
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0.08mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚花青素产品2.63kg；（5）多酚的分离：将步骤（4）中洗脱后的大孔吸附树脂柱再用3 bv、体积浓度为60%的高度乙醇洗脱，洗脱的流速为1.5 bv/h，将高度乙醇洗脱液在温度为60℃、真空度为
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0.08 mpa的条件下减压浓缩，浓缩至固形物含量为18%，再将浓缩液在温度为60℃、真空度为
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0.08mpa、微波频率为2450mhz的条件下微波干燥，得桑葚多酚产品5.46kg；（6）脱盐、脱色：将步骤（3）中的大孔吸附树脂柱上柱流出液通过串联的阳
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阴离子交换树脂柱（阳离子交换树脂的型号为001
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7，阳离子交换树脂的用量为25l，阳离子交换树脂柱的高径比为6:1，物料通过阳离子交换树脂柱的流速为2bv/小时；阴离子交换树脂的型号为d285，阴离子交换树脂的用量为25l，阴离子交换树脂柱的高径比为6:1，物料通过阴离子交换树脂柱的流速为2bv/小时），收集阳
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阴离子交换树脂柱上柱流出液，在温度为65℃、真空度为
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0.09 mpa条件下减压浓缩至糖度为63 brix，得桑葚脱色浓缩果汁产品
31.43kg；（7）总氨基酸的分离：将步骤（6）中的洗脱过的阳离子交换树脂柱再次用4.5bv、浓度为0.9mol/l的稀氨水洗脱，洗脱的流速为1bv/h，将稀氨水洗脱液减压浓缩，微波干燥，得桑葚总氨基酸产品0.89kg。
54.经高效液相色谱（hplc）外标法测定，本实施例所得桑葚花青素产品的花青素含量为65.49%，桑葚花青素的收率为94.12%；经酒石酸亚铁比色法测定，本实施例所得桑葚多酚产品的多酚含量为83.50%，桑葚多酚的收率为86.02%；经茚三酮显色法测定，本实施例所得桑葚氨基酸产品的氨基酸含量为68.74%，桑葚总氨基酸的收率为91.31%。
55.对比例1对比例1与实施例1相比，区别仅在于步骤（1）中使用的冷水中不加入亚硫酸氢钠，其他原料和提取条件与实施例1均相同。
56.经高效液相色谱（hplc）外标法测定，所得桑葚花青素产品的花青素含量为59.31%，桑葚花青素的收率为85.76%；经酒石酸亚铁比色法测定，本实施例所得桑葚多酚产品的多酚含量为81.37%，桑葚多酚的收率为87.56%；经茚三酮显色法测定，本实施例所得桑葚氨基酸产品的氨基酸含量为69.83%，桑葚总氨基酸的收率为89.74%。
57.对比例2对比例2与实施例1相比，区别仅在于步骤（1）中使用的冷水中亚硫酸氢钠的浓度为0.02%，其他原料和提取条件与实施例1均相同。
58.经高效液相色谱（hplc）外标法测定，所得桑葚花青素产品的花青素含量为60.18%，桑葚花青素的收率为86.82%；经酒石酸亚铁比色法测定，本实施例所得桑葚多酚产品的多酚含量为84.37%，桑葚多酚的收率为91.65%；经茚三酮显色法测定，本实施例所得桑葚氨基酸产品的氨基酸含量为68.68%，桑葚总氨基酸的收率为90.52%。
59.上述实施例是针对本发明其中之部分可行实施例的具体说明，这些实施例并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应属于本发明专利申请的请求保护的范围内。
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