一种利用5SrRNA鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法与流程

技术特征：
1.一种利用5s rrna鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其步骤是：(1)利用总rna提取试剂盒或trizol试剂常规提取动物细胞总rna的方法，提取鱼类性腺组织总rna，利用核酸分析仪测定od260/280值，判断rna纯度；利用琼脂糖凝胶电泳法分离总rna，观察5s rrna,18s rrna和28s rrna的亮度和分布，所述的5s rrna的大小在130～150个核苷酸之间，其在微毛细管电泳的峰值通常在接近140nt的位置，总rna的值指所有覆盖区域所产生的面积大小；(2)将提取的性腺总rna进行微毛细管电泳，根据核酸分析软件所得出的rna类型覆盖区域面积大小，计算其中5s rrna占总rna的比例；(3)根据5s rrna占总rna比例判断鱼类早期发育阶段的生理型雌雄，其中5s rrna比例小于或等于9.0％时判断为精巢组织，5s rrna比例大于或等于12％时判断为卵巢组织。2.根据权利要求1所述的一种利用5s rrna鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中鱼类性腺组织通过解剖或用微量性腺取样工具进行非致死采样，取1mg～100mg的微量性腺组织，利用步骤中(1)的试剂盒进行总rna快速提取。3.根据权利要求1所述的一种利用5s rrna鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中所提及的鱼类性腺组织是指性别分化完成，卵巢中包含有初级卵母细胞的鱼类性腺组织，不包括性腺未分化、已发育成熟或临近产卵期的鱼类性腺组织。4.根据权利要求1所述的一种利用5s rrna鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其特征在于：所述步的骤(1)中性腺组织总rna提取过程中，使用一种除性腺外的同种鱼类组织作为提取性腺组织rna的对照，用同样的方法提取该组织总rna，该组织总rna通过od260/280值测定，琼脂糖凝胶电泳或微毛细管电泳检测判断总rna质量合格，进行后续性腺组织总rna样品分析。5.根据权利要求1所述的一种利用5s rrna鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其特征在于：所述步骤(2)中总rna微毛细管电泳及后续分析依赖于微量核酸分析软件，鉴定5s rrna占总rna比例的软件。6.根据权利要求1所述的一种利用5s rrna鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，其特征在于：所述步骤(3)中鱼类性腺因遭受激素、环境应激条件发生性腺组织全部或部分逆转，精巢全部或部分转变成卵巢，或卵巢全部或部分转变成精巢，5s rrna占总rna比例发生变化，不能准确判断鱼类生理型性别。

技术总结
本发明公开了一种利用5S rRNA鉴定鱼类早期发育阶段生理性别的方法，步骤是：(1)利用总RNA提取试剂盒或TRIzol试剂常规提取动物细胞总RNA的方法，提取鱼类性腺组织总RNA，利用核酸分析仪测定OD260/280值，判断RNA纯度；利用琼脂糖凝胶电泳法分离总RNA，观察5S rRNA,18S rRNA和28S rRNA的亮度和分布；(2)将提取的性腺总RNA进行微毛细管电泳，根据核酸分析软件所得出的RNA类型覆盖区域面积大小，计算其中5S rRNA占总RNA的比例；(3)根据5S rRNA占总RNA比例判断鱼类早期发育阶段的生理型雌雄，其中5S rRNA比例小于或等于9.0％时判断为精巢组织，5S rRNA比例大于或等于12％时判断为卵巢组织。方法易行，操作简便，在12小时以内实现了100尾以上鱼类个体的生理型性别鉴定，确定了鱼类生理性别。定了鱼类生理性别。


技术研发人员：沈志刚 别汉晴 胡晨昊 李波 于跃 鲁子怡 耿龙慧 樊启学 袁勇超
受保护的技术使用者：华中农业大学
技术研发日：2021.07.26
技术公布日：2021/10/23