中和乙型肝炎病毒的抗体和其用途的制作方法

技术特征：
id no:41的氨基酸序列或由其组成，并且v
l
包含根据seq id no:90的氨基酸序列或由其组成。12.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)重链可变区(v
h
)，其包含与根据seq id no:95的氨基酸序列至少90％同一性的氨基酸序列；和(ii)轻链可变区(v
l
)，其包含与根据seq id no:96的氨基酸序列至少90％同一性的氨基酸序列，其中所述抗体或其抗原结合片段结合hbsag的抗原环区并且中和乙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒感染。13.根据权利要求12所述的抗体或其抗原结合片段，其中：(i)所述v
h
包含与根据seq id no:95的氨基酸序列至少95％的同一性的氨基酸序列；和/或(ii)所述v
l
包含与根据seq id no:96的氨基酸序列至少95％的同一性的氨基酸序列。14.根据权利要求12或13所述的抗体或其抗原结合片段，其包含分别根据seq id no:97
‑
102的cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3序列。15.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含人抗体、单克隆抗体、纯化抗体、单链抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv或scfv。16.根据权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是多特异性抗体或抗原结合片段。17.根据权利要求16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是双特异性抗体或抗原结合片段。18.根据权利要求1至17中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或所述抗原结合片段包含fc部分。19.根据权利要求18所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分包含突变，与不包含所述突变的参考fc部分相比，所述突变增强与fcrn的结合。20.根据权利要求18或19所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分包含突变，与不包含所述突变的参考fc部分相比，所述突变增强与fcγr，优选fcγriia或fcγriiia的结合。21.根据权利要求18至20中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分是igg同种型或源自igg同种型。22.根据权利要求19至21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中增强与fcrn的结合的所述突变包含：m428l；n434s；n434h；n434a；n434s；m252y；s254t；t256e；t250q；p257i；q311i；d376v；t307a；e380a；或其任何组合。23.根据权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中增强与fcrn的结合的所述突变包含：(i)m428l/n434s；(ii)m252y/s254t/t256e；(iii)t250q/m428l；(iv)p257i/q311i；
(v)p257i/n434h；(vi)d376v/n434h；(vii)t307a/e380a/n434a；或(viii)(i)
‑
(vii)的任何组合。24.根据权利要求23所述的抗体或其抗原结合片段，其中增强与fcrn的结合的所述突变包含m428l/n434s。25.根据权利要求20至24中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中增强与fcγr的结合的所述突变包含s239d；i332e；a330l；g236a；或其任何组合。26.根据权利要求25所述的抗体或其抗原结合片段，其中增强与fcγr的结合的所述突变包含：(i)s239d/i332e；(ii)s239d/a330l/i332e；(iii)g236a/s239d/i332e；或(iv)g236a/a330l/i332e。27.根据权利要求25或26所述的抗体或其抗原结合片段，其中增强与fcγr的结合的所述突变包含g236a/a330l/i332e或由g236a/a330l/i332e组成，并且任选地不包含s239d。28.根据权利要求18至27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分包含氨基酸取代突变：m428l；n434s；g236a；a330l；和i332e，并且任选地不包含s239d。29.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)重链可变区(v
h
)，其包含根据seq id no:41的氨基酸序列；和(ii)轻链可变区(v
l
)，其包含根据seq id no:89的氨基酸序列，其中所述抗体或其抗原结合片段结合hbsag的抗原环区并且中和乙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒感染。30.根据权利要求29所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含fc部分。31.根据权利要求30所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分源自igg同种型并且包含m428l和n434s取代突变。32.根据权利要求30或31所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分源自igg同种型并且包含g236a、a330l和i332e取代突变，并且任选地不包含s239d突变。33.根据权利要求32所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分包含m428l、n434s、g236a、a330l和i332e取代突变。34.根据权利要求1至11和15至33中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含根据seq id no:91或138的重链(hc)氨基酸序列。35.根据权利要求1至11和15至31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含根据seq id no:92的重链(hc)氨基酸序列。36.根据权利要求1至3、6、7、9、10和15至35中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含根据seq id no:93的轻链(lc)氨基酸序列。37.根据权利要求1、2、4、6、8、11和15至28中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含根据seq id no:94的轻链(lc)氨基酸序列。38.根据权利要求34或36所述的抗体或其抗原结合片段，其包含根据seq id no:91的
所述hc氨基酸序列和根据seq id no:93的所述lc氨基酸序列。39.根据权利要求35或37所述的抗体或其抗原结合片段，其包含根据seq id no:92的所述hc氨基酸序列和根据seq id no:94的所述lc氨基酸序列。40.根据权利要求34或37所述的抗体或其抗原结合片段，其包含根据seq id no:91的所述hc氨基酸序列和根据seq id no:94的所述lc氨基酸序列。41.根据权利要求35或36所述的抗体或其抗原结合片段，其包含根据seq id no:92的所述hc氨基酸序列和根据seq id no:93的所述lc氨基酸序列。42.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)重链(hc)，其包含根据seq id no:91的氨基酸序列；和(ii)轻链(lc)，其包含根据seq id no:93的氨基酸序列，其中所述抗体或其抗原结合片段结合hbsag的抗原环区并且中和乙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒感染。43.根据权利要求1至42中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或所述抗原结合片段能够结合选自hbsag基因型a、b、c、d、e、f、g、h、i和j或其任何组合的基因型的hbsag。44.根据权利要求1至43中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够降低患有hbv感染的哺乳动物体内hbv dna的血清浓度。45.根据权利要求1至44中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够降低患有hbv感染的哺乳动物体内hbsag的血清浓度。46.根据权利要求1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够降低患有hbv感染的哺乳动物体内hbeag的血清浓度。47.根据权利要求1至46中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够降低患有hbv感染的哺乳动物体内hbcrag的血清浓度。48.一种融合蛋白，其包含：(i)细胞外组分，其包含根据权利要求1至47中任一项所述的抗原结合片段；(ii)跨膜结构域；和(iii)细胞内组分，其包含效应结构域或其功能变体或部分，并且任选地包含来自共刺激蛋白的信号传导结构域或其功能变体或部分。49.根据权利要求48所述的融合蛋白，其中所述抗原结合片段包含scfv，所述scfv包含可变重链(v
h
)结构域和/或可变轻链(v
l
)结构域。50.根据权利要求49所述的融合蛋白，其中所述scfv包含肽接头。51.根据权利要求50所述的融合蛋白，其中所述scfv具有v
l
‑
接头
‑
v
h
方向。52.根据权利要求50所述的融合蛋白，其中所述scfv具有v
h
‑
接头
‑
v
l
方向。53.根据权利要求48至52中任一项所述的融合蛋白，其中所述跨膜结构域包含来自cd4、cd8、cd27或cd28的跨膜结构域。54.根据权利要求48至53中任一项所述的融合蛋白，其中所述细胞内组分包含来自cd3ζ的效应结构域。55.根据权利要求48至54中任一项所述的融合蛋白，其中所述细胞内组分进一步包含来自以下中的一者或两者的信号传导结构域：4
‑
1bb(cd137)、cd28、ox40(cd134)、icos
(cd278)、cd27、cd2、cd5、icam
‑
1(cd54)、lfa
‑
1(cd11a/cd18)、gitr、cd30、cd40、baff
‑
r、hvem、light、mkg2c、slamf7、nkp80、cd160、b7
‑
h3，和与cd83特异性结合的配体。56.根据权利要求48至55中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含嵌合抗原受体(car)。57.一种分离的多核苷酸，其包含编码根据权利要求1至56中任一项所述的抗体、抗原结合片段或融合蛋白的核苷酸序列。58.根据权利要求57所述的多核苷酸，其中编码所述抗体、抗原结合片段或融合蛋白的所述核苷酸序列经密码子优化以在宿主细胞中表达。59.根据权利要求57或58所述的多核苷酸，其包含与根据seq id no:103
‑
110和130
‑
136中任一者的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。60.根据权利要求59所述的多核苷酸，其包含根据seq id no:103的v
h
编码核苷酸序列，和根据seq id no:105的v
l
编码核苷酸序列。61.根据权利要求59所述的多核苷酸，其包含根据seq id no:103的v
h
编码核苷酸序列，和根据seq id no:104的v
l
编码核苷酸序列。62.根据权利要求54所述的多核苷酸，其包含根据seq id no:108的v
h
编码核苷酸序列，和根据seq id no:109的v
l
编码核苷酸序列。63.一种编码抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，所述多核苷酸包含根据seq id no:103的v
h
编码核苷酸序列和根据seq id no:110的v
l
编码核苷酸序列，其中所编码的抗体或其抗原结合片段结合hbsag的抗原环区并且中和乙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒感染。64.一种载体，其包含根据权利要求57至63中任一项所述的多核苷酸。65.根据权利要求64所述的载体，其中所述载体包含慢病毒载体或逆转录病毒载体。66.一种宿主细胞，其包含根据权利要求57至63中任一项所述的异源多核苷酸。67.一种药物组合物，其包含：(i)根据权利要求1至47中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；(ii)根据权利要求48至56中任一项所述的融合蛋白；(iii)根据权利要求57至63中任一项所述的多核苷酸；(iv)根据权利要求64或65所述的载体；(v)根据权利要求66所述的宿主细胞；或(vi)(i)
‑
(v)的任何组合。68.根据权利要求67所述的药物组合物，其进一步包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载剂。69.一种试剂盒，其包含：(a)选自以下的组分：(i)根据权利要求1至47中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；(ii)根据权利要求48至56所述的融合蛋白；(iii)根据权利要求57至63中任一项所述的多核苷酸；(iv)根据权利要求64或65所述的载体；(v)根据权利要求66所述的宿主细胞；(vi)根据权利要求67或68所述的药物组合物；或
(vii)(i)
‑
(vi)的任何组合；和(b)使用所述组分预防、治疗、减弱和/或诊断乙型肝炎感染和/或丁型肝炎感染的说明书。70.根据权利要求67或68所述的组合物，或根据权利要求69所述的试剂盒，其进一步包含：(i)聚合酶抑制剂，其中所述聚合酶抑制剂任选地包含拉米夫定(lamivudine)、阿德福韦(adefovir)、恩替卡韦(entecavir)、替比夫定(telbivudine)、替诺福韦(tenofovir)或其任何组合；(ii)干扰素，其中所述干扰素任选地包含ifnβ和/或ifnα；(iii)检查点抑制剂，其中所述检查点抑制剂任选地包含抗pd
‑
1抗体或其抗原结合片段、抗pd
‑
l1抗体或其抗原结合片段和/或抗ctla4抗体或其抗原结合片段；(iv)刺激性免疫检查点分子的激动剂；或(v)(i)
‑
(iv)的任何组合。71.根据权利要求70所述的组合物或试剂盒，其中所述聚合酶抑制剂包含拉米夫定。72.一种产生根据权利要求1至47中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求48至56中任一项所述的融合蛋白的方法，其包括在足以产生所述抗体、其抗原结合片段或融合蛋白的条件下培养根据权利要求66所述的宿主细胞，并且持续足以产生所述抗体、抗原结合片段或融合蛋白的时间。73.(i)根据权利要求1至47中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；(ii)根据权利要求48至56中任一项所述的融合蛋白；(iii)根据权利要求57至63中任一项所述的多核苷酸；(iv)根据权利要求64或65所述的载体；(v)根据权利要求66所述的宿主细胞；和/或(vi)根据权利要求67或68所述的药物组合物在制造预防、治疗、减弱和/或诊断受试者的乙型肝炎感染和/或丁型肝炎感染的药剂中的用途。74.一种预防、治疗和/或减弱受试者的乙型肝炎感染和/或丁型肝炎感染的方法，其包括向所述受试者施用有效量的：(i)根据权利要求1至47中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；(ii)根据权利要求48至56中任一项所述的融合蛋白；(iii)根据权利要求57至63中任一项所述的多核苷酸；(iv)根据权利要求64或65所述的载体；(v)根据权利要求66所述的宿主细胞；和/或(vi)根据权利要求67或68所述的药物组合物。75.根据权利要求74所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用以下中的一者或多者：(vii)聚合酶抑制剂，其中所述聚合酶抑制剂任选地包含拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦、替比夫定、替诺福韦或其任何组合；(viii)干扰素，其中所述干扰素任选地包含ifnβ和/或ifnα；(ix)检查点抑制剂，其中所述检查点抑制剂任选地包含抗pd
‑
1抗体或其抗原结合片段、抗pd
‑
l1抗体或其抗原结合片段和/或抗ctla4抗体或其抗原结合片段；(x)刺激性免疫检查点分子的激动剂；或(xi)(vii)
‑
(x)的任何组合。76.据权利要求74或75所述的方法，其中所述乙型肝炎感染是慢性乙型肝炎感染。77.根据权利要求74至76中任一项所述的方法，其中所述受试者已接受肝移植。78.根据权利要求74至77中任一项所述的方法，其中所述受试者未针对乙型肝炎免疫。79.根据权利要求74至78中任一项所述的方法，其中所述受试者是新生儿。80.根据权利要求74至79中任一项所述的方法，其中所述受试者正在经历血液透析或
已经历血液透析。81.一种用于体外诊断乙型肝炎和/或丁型肝炎感染的方法，所述方法包括：(i)使来自受试者的样品与根据权利要求1至47中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求48至56中任一项所述的融合蛋白接触；和(ii)检测包含抗原和所述抗体或包含抗原和所述抗原结合片段的复合物，或检测包含抗原和所述融合蛋白的复合物。82.根据权利要求81所述的方法，其中所述样品包含从所述受试者分离的血液。83.一种用于检测抗乙型肝炎和/或抗丁型肝炎疫苗中是否存在呈正确构象的表位的方法，所述方法包括：(i)使所述疫苗接触(a)根据权利要求1至47中任一项所述的抗体或其抗原结合片段和/或(b)根据权利要求48至56中任一项所述的融合蛋白；和(ii)判定是否已形成包含抗原和所述抗体，或包含抗原和所述抗原结合片段，或包含抗原和所述融合蛋白的复合物。84.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)重链可变区(v
h
)，其包含根据seq id no:34的cdrh1氨基酸序列、根据seq id no:35或66的cdrh2氨基酸序列、根据seq id no:36的cdrh3氨基酸序列；(ii)轻链可变区(v
l
)，其包含根据seq id no:37的cdrl1氨基酸序列、根据seq id no:38或39的cdrl2氨基酸序列和根据seq id no:58或40的cdrl3氨基酸序列；和(iii)fc部分，其中所述fc部分包含g236a/a330l/i332e。85.根据权利要求84所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分不包含s239d。86.根据权利要求84或85所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分进一步包含m428l/n434s。87.根据权利要求84至86中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述v
h
包含根据seq id no:41或67中任一者的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，并且其中所述v
l
包含根据seq id no:42、59、65、89、90和111
‑
120中任一者的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。88.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)重链可变区(v
h
)，其包含根据seq id no:97的cdrh1氨基酸序列、根据seq id no:98的cdrh2氨基酸序列、根据seq id no:99的cdrh3氨基酸序列；(ii)轻链可变区(v
l
)，其包含根据seq id no:100的cdrl1酸序列、根据seq id no:100的cdrl2酸序列和根据seq id no:102的cdrl3氨基酸序列；和(iii)fc部分，其中所述fc部分包含g236a/a330l/i332e。89.根据权利要求88所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分不包含s239d。90.根据权利要求88或89所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述fc部分进一步包含m428l/n434s。91.根据权利要求88至90中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述v
h
包含根据seq id no:95的氨基酸序列或由其组成，并且其中所述v
l
包含根据seq id no:96的氨基酸序列或由其组成。
92.根据权利要求1至47和84至91中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段：(i)与包括不包含g236a/a330l/i332e的fc部分的参考多肽相比，与人fcγriia、人fcγriiia或两者的结合增强，其中所述人fcγriia任选地为h131或r131，和/或所述人fcγriiia任选地为f158或v158；(ii)与包括不包含g236a/a330l/i332e的fc部分的参考多肽相比，与人fcγriib的结合减弱；(iii)不结合人fcγriib；(iv)与包括不包含g236a/a330l/i332e的fc部分的参考多肽相比，与人c1q的结合减弱；(v)不结合人c1q；(vi)与包括不包含g236a/a330l/i332e的fc部分的参考多肽相比，更大程度地激活人fcγriia、人fcγriiia或两者，其中所述人fcγriia任选地为h131或r131，和/或所述人fcγriiia任选地为f158或v158；(vii)不激活人fcγriib；(viii)与包括不包含g236a/a330l/i332e的fc部分的参考多肽相比，在hbsag存在下更大程度地激活人自然杀伤(nk)细胞，其中所述参考多肽任选地为结合hb ag的抗体，所述hb ag任选地为hbsag；(ix)hbsag ec
50
为约12.75ng/ml到约19.9ng/ml、或约12.75ng/ml到约12.84ng/ml、或约12.79ng/ml、或约16.22ng/ml到约19.9ng/ml、或约17.97ng/ml，和/或(b)hbeag ec
50
约为约10.78ng/ml到约13.72ng/ml、或约10.78ng/ml到约10.93ng/ml、或约10.85ng/ml、或约11.59ng/ml到约13.72ng/ml、或约12.61ng/ml，其中所述hbv任选地为hbv基因型d，并且其中所述ec
50
任选地通过在向hepg2细胞施用所述抗体或抗原结合片段之后第7天，分别测量过表达ntcp且感染所述hbv的所述hepg2细胞分泌的hbsag或hbeag而体外确定；(x)hbsag ec
50
为约10.43ng/ml到约22.41ng/ml、或约13.81ng/ml到约16.56ng/ml、或约15.12ng/ml、或约12.24ng/ml到约22.41ng/ml、或约16.56ng/ml、或约10.43ng/ml到约20.08ng/ml、或约14.47ng/ml，和/或(b)hbeag ec
50
约为约10.39ng/ml到约13.99ng/ml、或约10.63ng/ml到约10.66ng/ml、或约10.64ng/ml、或约10.39ng/ml到约10.60ng/ml、或约10.49ng/ml、或约13.25ng/ml到约13.99ng/ml、或约13.61ng/ml，其中所述hbv任选地为hbv基因型d，并且其中所述ec
50
任选地通过在向hepg2细胞施用所述抗体或抗原结合片段之后第7天，分别测量过表达ntcp且感染所述hbv的所述hepg2细胞分泌的hbsag或hbeag而体外确定；(xi)能够结合hbsag变体，其包含hbsag
‑
y100c/p120t、hbsag
‑
p120t、hbsag
‑
p120s/s143l、hbsag
‑
c121s、hbsag
‑
r122d、hbsag
‑
r122i、hbsag
‑
t123n、hbsag
‑
q129h、hbsag
‑
q129l、hbsag
‑
m133h、hbsag
‑
m133l、hbsag
‑
m133t、hbsag
‑
k141e、hbsag
‑
p142s、hbsag
‑
s143k、hbsag
‑
d144a、hbsag
‑
g145r、hbsag
‑
n146a或其任何组合；(xii)与结合hbsag且包括不包含g236a/a330l/i332e的fc部分的参考抗体或抗原结合片段相比，具有与hbsag变体改善的结合，所述变体包含hbsag
‑
y100c/p120t、hbsag
‑
p120t、hbsag
‑
p120s/s143l、hbsag
‑
c121s、hbsag
‑
r122d、hbsag
‑
r122i、hbsag
‑
t123n、hbsag
‑
q129h、hbsag
‑
q129l、hbsag
‑
m133h、hbsag
‑
m133l、hbsag
‑
m133t、hbsag
‑
k141e、hbsag
‑
p142s、hbsag
‑
s143k、hbsag
‑
d144a、hbsag
‑
g145r、hbsag
‑
n146a或其任何组合；和/或(xiii)能够中和(a)基因型a的hbv，ec
50
为约2.34ng/ml；(b)基因型b的hbv，ec
50
为约2.22ng/ml；(c)基因型c的hbv，ec
50
为约0.92ng/ml；(d)基因型d的hbv，ec
50
为约1.10ng/ml；(e)基因型e的hbv，ec
50
为约1.12ng/ml；(f)基因型f的hbv，ec
50
为约1.93ng/ml；(g)基因型g的hbv，ec
50
为约1.43ng/ml；和/或(h)基因型h的hbv，ec
50
为约1.93ng/ml，其中所述ec
50
任选地使用经工程化以表达hbv基因型的hbsag的重组hdv来确定。

技术总结
本公开涉及抗体和其抗原结合片段，所述抗体和其抗原结合片段能结合乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抗原环区并且能中和乙型肝炎病毒(HBV)和丁型肝炎病毒(HDV)两者的感染。本公开还涉及所述抗体和其抗原结合片段结合的表位，以及包含所述抗原结合片段的融合蛋白，和编码此类抗体和抗体片段的核酸与产生此类抗体和抗体片段的细胞。另外，本公开涉及本公开的抗体和抗体片段在诊断、预防和治疗乙型肝炎和丁型肝炎中的用途。型肝炎中的用途。型肝炎中的用途。


技术研发人员：D
受保护的技术使用者：胡默波斯生物医学公司
技术研发日：2019.12.18
技术公布日：2021/10/21