一种以Clorf100为靶点的男性不育治疗方法与流程

一种以clorf100为靶点的男性不育治疗方法
技术领域
1.本发明涉及男性不育治疗技术领域，具体为一种以clorf100为靶点的男性不育治疗方法。


背景技术：

2.通过研究发现，c1orf100表达在正常人睾丸组织，各级生精细胞及成熟精子中，对精子的发育起关键作用，c1orf100表达量的变化与无精子症生精阻滞的阶段有关，增加c1orf100的表达可以有效治疗无精子症引起的男性不育，因此我们设计了一种以clorf100为靶点的男性不育治疗方法，可以有效治疗无精子症引起的男性不育。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于提供一种以clorf100为靶点的男性不育治疗方法，具备可以有效治疗无精子症引起的男性不育的优点，解决了目前不可有效治疗无精子症引起的男性不育的问题。
4.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种以clorf100为靶点的男性不育治疗方法，包括如下步骤：（一）正常睾丸组织采集：在尸体肾移植时采集2例青壮年有孩子的睾丸组织，作为正常睾丸组织的对照。
5.（二）无精子症睾丸组织采集：采集了手术显微取精的无精子症睾丸组织，作为异常组织的样品。
6.（三）样品分类：根据病理结果将阻滞分为生精阻滞在精原细胞5例、阻滞在精母细胞阶段5例、阻滞在精子细胞阶段5例、唯支持细胞综合症5例，另选取5例梗阻性无精子症做对照，加上正常睾丸组织。
7.（四）样品对比：应用基因芯片比较正常睾丸组织和非梗阻无精子症的睾丸组织可以看出，芯片质量控制良好，基因差异显著。
8.（五）试验：设计合成c1orf100的特异性引物，行rt-pcr验证，发现c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，在唯支持细胞综合症几乎没有表达，设计合成c1orf100的real-timepcr引物，行实时定量pcr扩增，标准曲线制作满意后，扩增模板，模板含量以ct值表示，ct值越高，表明扩增模板的含量越低，在唯支持细胞综合症无精子症扩增40个循环也未能扩增出，c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，蛋白杂交，从蛋白水平证实c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著。
9.优选的，所述步骤三中的样品分为生精阻滞在精原细胞5例、阻滞在精母细胞阶段5例、阻滞在精子细胞阶段5例、唯支持细胞综合症5例，另选取5例梗阻性无精子症做对照，加上正常睾丸组织，共27例。
10.优选的，所述步骤三中样品中需要排除一些不能够进行使用的样品，明确的染色体异常的、azf微缺失的和睾丸前因素的样品都排除在外。
11.优选的，所述步骤四行基因芯片检测，评价为优良，获得差异表达基因。
12.优选的，所述步骤五中c1orf100是与精子生成相关的分子标记，可以应用于诊断标记或治疗靶点，尤其对无精子症生精阻滞的治疗，最终治疗无精子症这类男性不育的诊断或治疗。
13.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：本发明提供的以clorf100为靶点的男性不育治疗方法，通过研究发现，c1orf100表达在正常人睾丸组织，各级生精细胞及成熟精子中，对精子的发育起关键作用，c1orf100表达量的变化与无精子症生精阻滞的阶段有关，增加c1orf100的表达可以有效治疗无精子症引起的男性不育，可以有效治疗无精子症引起的男性不育。
附图说明
14.图1为本发明的相对表达强度结果图；图2为本发明的ct值观察结果图；图3为本发明的对比结果图。
具体实施方式
15.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
16.本发明提供一种技术方案，一种以clorf100为靶点的男性不育治疗方法，包括如下步骤：（一）正常睾丸组织采集：在尸体肾移植时采集2例青壮年有孩子的睾丸组织，作为正常睾丸组织的对照。
17.（二）无精子症睾丸组织采集：采集了手术显微取精的无精子症睾丸组织，作为异常组织的样品。
18.（三）样品分类：根据病理结果将阻滞分为生精阻滞在精原细胞5例、阻滞在精母细胞阶段5例、阻滞在精子细胞阶段5例、唯支持细胞综合症5例，另选取5例梗阻性无精子症做对照，加上正常睾丸组织，共27例，样品中需要排除一些不能够进行使用的样品，明确的染色体异常的、azf微缺失的和睾丸前因素的样品都排除在外。
19.（四）样品对比：应用基因芯片比较正常睾丸组织和非梗阻无精子症的睾丸组织可以看出，芯片质量控制良好，基因差异显著，基因芯片检测，评价为优良，获得差异表达基因。
20.（五）试验：设计合成c1orf100的特异性引物，行rt-pcr验证，发现c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，在唯支持细胞综合症几乎没有表达，设计合成c1orf100的real-timepcr引物，行实时定量pcr扩增，标准曲线制作满意后，扩增模板，模板含量以ct值表示，ct值越高，表明扩增模板的含量越低，在唯支持细胞综合症无精子症扩增40个循环也未能扩增出，c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，蛋白杂交，从蛋白水平证实c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，c1orf100是与精子生成相关的分子标记，可以应用于诊断标记或治疗靶点，尤其对无精子症生精阻滞的治疗，最终治疗无精子症这类男性不育的诊断或治疗。
21.实施例一：在尸体肾移植时采集2例青壮年有孩子的睾丸组织，作为正常睾丸组织的对照，采集了手术显微取精的无精子症睾丸组织，作为异常组织的样品，根据病理结果将阻滞分为生精阻滞在精原细胞5例、阻滞在精母细胞阶段5例、阻滞在精子细胞阶段5例、唯支持细胞综合症5例，另选取5例梗阻性无精子症做对照，加上正常睾丸组织，应用基因芯片比较正常睾丸组织和非梗阻无精子症的睾丸组织可以看出，芯片质量控制良好，基因差异显著，设计合成c1orf100的特异性引物，行rt-pcr验证，发现c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，在唯支持细胞综合症几乎没有表达，设计合成c1orf100的real-timepcr引物，行实时定量pcr扩增，标准曲线制作满意后，扩增模板，模板含量以ct值表示，ct值越高，表明扩增模板的含量越低，在唯支持细胞综合症无精子症扩增40个循环也未能扩增出，c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，蛋白杂交，从蛋白水平证实c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著。
22.实施例二：在实施例一中，再加上下述工序：步骤三中的样品分为生精阻滞在精原细胞5例、阻滞在精母细胞阶段5例、阻滞在精子细胞阶段5例、唯支持细胞综合症5例，另选取5例梗阻性无精子症做对照，加上正常睾丸组织，共27例。
23.在尸体肾移植时采集2例青壮年有孩子的睾丸组织，作为正常睾丸组织的对照，采集了手术显微取精的无精子症睾丸组织，作为异常组织的样品，根据病理结果将阻滞分为生精阻滞在精原细胞5例、阻滞在精母细胞阶段5例、阻滞在精子细胞阶段5例、唯支持细胞综合症5例，另选取5例梗阻性无精子症做对照，加上正常睾丸组织，应用基因芯片比较正常睾丸组织和非梗阻无精子症的睾丸组织可以看出，芯片质量控制良好，基因差异显著，设计合成c1orf100的特异性引物，行rt-pcr验证，发现c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，在唯支持细胞综合症几乎没有表达，设计合成c1orf100的real-timepcr引物，行实时定量pcr扩增，标准曲线制作满意后，扩增模板，模板含量以ct值表示，ct值越高，表明扩增模板的含量越低，在唯支
持细胞综合症无精子症扩增40个循环也未能扩增出，c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，蛋白杂交，从蛋白水平证实c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著。
24.实施例三：在实施例二中，再加上下述工序：步骤三中样品中需要排除一些不能够进行使用的样品，明确的染色体异常的、azf微缺失的和睾丸前因素的样品都排除在外。
25.在尸体肾移植时采集2例青壮年有孩子的睾丸组织，作为正常睾丸组织的对照，采集了手术显微取精的无精子症睾丸组织，作为异常组织的样品，根据病理结果将阻滞分为生精阻滞在精原细胞5例、阻滞在精母细胞阶段5例、阻滞在精子细胞阶段5例、唯支持细胞综合症5例，另选取5例梗阻性无精子症做对照，加上正常睾丸组织，应用基因芯片比较正常睾丸组织和非梗阻无精子症的睾丸组织可以看出，芯片质量控制良好，基因差异显著，设计合成c1orf100的特异性引物，行rt-pcr验证，发现c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，在唯支持细胞综合症几乎没有表达，设计合成c1orf100的real-timepcr引物，行实时定量pcr扩增，标准曲线制作满意后，扩增模板，模板含量以ct值表示，ct值越高，表明扩增模板的含量越低，在唯支持细胞综合症无精子症扩增40个循环也未能扩增出，c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，蛋白杂交，从蛋白水平证实c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著。
26.实施例四：在实施例三中，再加上下述工序：步骤四行基因芯片检测，评价为优良，获得差异表达基因。
27.在尸体肾移植时采集2例青壮年有孩子的睾丸组织，作为正常睾丸组织的对照，采集了手术显微取精的无精子症睾丸组织，作为异常组织的样品，根据病理结果将阻滞分为生精阻滞在精原细胞5例、阻滞在精母细胞阶段5例、阻滞在精子细胞阶段5例、唯支持细胞综合症5例，另选取5例梗阻性无精子症做对照，加上正常睾丸组织，应用基因芯片比较正常睾丸组织和非梗阻无精子症的睾丸组织可以看出，芯片质量控制良好，基因差异显著，设计合成c1orf100的特异性引物，行rt-pcr验证，发现c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，在唯支持细胞综合症几乎没有表达，设计合成c1orf100的real-timepcr引物，行实时定量pcr扩增，标准曲线制作满意后，扩增模板，模板含量以ct值表示，ct值越高，表明扩增模板的含量越低，在唯支持细胞综合症无精子症扩增40个循环也未能扩增出，c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，蛋白杂交，从蛋白水平证实c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著。
28.实施例五：在实施例四中，再加上下述工序：
步骤五中c1orf100是与精子生成相关的分子标记，可以应用于诊断标记或治疗靶点，尤其对无精子症生精阻滞的治疗，最终治疗无精子症这类男性不育的诊断或治疗。
29.在尸体肾移植时采集2例青壮年有孩子的睾丸组织，作为正常睾丸组织的对照，采集了手术显微取精的无精子症睾丸组织，作为异常组织的样品，根据病理结果将阻滞分为生精阻滞在精原细胞5例、阻滞在精母细胞阶段5例、阻滞在精子细胞阶段5例、唯支持细胞综合症5例，另选取5例梗阻性无精子症做对照，加上正常睾丸组织，应用基因芯片比较正常睾丸组织和非梗阻无精子症的睾丸组织可以看出，芯片质量控制良好，基因差异显著，设计合成c1orf100的特异性引物，行rt-pcr验证，发现c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，在唯支持细胞综合症几乎没有表达，设计合成c1orf100的real-timepcr引物，行实时定量pcr扩增，标准曲线制作满意后，扩增模板，模板含量以ct值表示，ct值越高，表明扩增模板的含量越低，在唯支持细胞综合症无精子症扩增40个循环也未能扩增出，c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著，蛋白杂交，从蛋白水平证实c1orf100在正常睾丸组织及梗阻性无精子症病人的睾丸组织强表达，而且生精阻滞阶段越早，表达降低越显著。
30.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。