作为抗衰老剂、尤其用于治疗不孕症的烟酰胺单核苷酸的无机盐的制作方法

作为抗衰老剂、尤其用于治疗不孕症的烟酰胺单核苷酸的无机盐
1.相关申请
2.本技术要求2018年5月15日提交的美国临时申请号62/671,807的优先权和权益，所述临时申请的内容以引用的方式整体并入本文。
技术领域
3.本发明涉及可用于治疗与衰老相关的病症和疾病的烟酰胺单核苷酸的无机盐及其组合物。


背景技术：

4.衰老是涉及生物、物理和生化过程的复杂相互作用的结果，这些相互作用导致细胞和器官功能障碍，其表现为多种疾病和其他结果。例如，女性的生殖力对衰老的影响非常敏感。例如，美国疾病控制中心报道说，在35岁左右的妇女中，辅助生殖技术(art)相关的怀孕百分比和分娩百分比从大约25％的art周期稳步下降，导致单胎活产下降到40岁时的14％(疾病控制和预防中心，美国生殖医学学会，辅助生殖技术协会.2011 assisted reproductive technology national summary report.atlanta(ga)：us dept of health and human services；2013)。这种趋势在大于40岁时明显增加，cdc报道说，大于44岁的妇女成功的可能性非常低。在这个群体中，活产和单胎活产的百分比下降到约1％。通常认为，妇女使用自己的卵子(卵母细胞)时，年龄是影响活产机会的最重要因素。
5.应当理解，卵母细胞因衰老而劣质化是生育力下降的根本因素。例如，据报道，在老年妇女中，卵母细胞容易发生染色体分裂异常，表现出线粒体质量下降、atp产量低、氧化应激增加并且抗氧化剂水平降低(nelson sm，telfer ee，anderson ra.the ageing ovary and uterus：new biological insights.hum reprod update.2013；19：67
‑
83.；wilding m.potential long
‑
term risks associated with maternal aging(the role of the mitochondria).fertil steril.2015；103：1397
‑
401；3.meldrum dr，casper rf，diez
‑
juan a，simon c，domar ad，frydman r.aging and the environment affect gamete and embryo potential：can we intervene？fertil steril.2016；105：548
‑
59)。
6.由于所有前述原因，卵母细胞代表用于评估预期对衰老过程产生影响的治疗模态的优异的靶组织，并且此外，还提供解决年龄相关不孕症的前景。
7.一种用于治疗衰老的此种可能的治疗模态包括提高nad

的治疗水平的剂。nad

是支持多种代谢功能所必需的细胞过程的重要组分。nad

的经典作用是一种辅酶，其在许多基本代谢过程(诸如糖酵解、脂肪酸β氧化或三羧酸循环)中催化细胞氧化还原反应，从而被还原为nadh。除了起这些作用外，nad

还作为消耗nad

的酶(诸如聚adp
‑
核糖聚合酶(parp)、sirtuin和cd38/157胞外酶)的底物起关键作用。已知这些消耗nad

的酶介导许多基本细胞过程。
8.存在五种主要的合成nad

的前体和中间体：色氨酸、烟酰胺、烟酸(na)、烟酰胺核
糖(nr)和烟酰胺单核苷酸(nmn)。nad

可通过多个酶促步骤将氨基酸色氨酸转化为烟酸单核苷酸(namn)从头合成。namn通过nmn/namn腺苷转移酶(nmnat)转化为烟酸二核苷酸(naad

)，然后通过nad

合成酶酰胺化为nad

。
9.在哺乳动物中，nad

生物合成的主要途径是烟酰胺的补救途径。烟酰胺通过此途径中的限速酶烟酰胺磷酸核糖转移酶(nampt)转化为关键的nad 中间体nmn。然后，nmnat将nmn转化成nad

。nampt在调节细胞nad 水平方面起关键作用。在另一方面，烟酸通过烟酸磷酸核糖转移酶(npt)转化为namn。nr需要通过磷酸化nr 16的烟酰胺核糖激酶nmrk1和nmrk2(也称为nrk1和nrk2)转化为nmn。维持足够的nad

生物合成对于细胞存活和功能至关重要。偏离正常的nad

稳态不仅会大幅影响氧化还原反应所需的nad

/nadh库，而且会影响关键细胞功能的nad

依赖性酶的活性。
10.现在，细胞、组织/器官和有机体水平上的nad

水平在衰老过程中下降已成为共识。消耗nad

的酶的活性受这种nad

下降的影响，从而导致各种年龄相关的病理生理
11.烟酰胺腺嘌呤二核苷酸是一种酶辅因子，其对于与还原氧化反应和能量代谢有关的若干种酶的功能至关重要。(katrina l.bogan和charles brenner，nicotinic acid，nicotinamide and nicotinamide riboside：a molecular evaluation of nad
precursor vitamins in nutritions，28，annual review of nutrition 115(2008))。nad

在氨基酸、脂肪酸和碳水化合物的能量代谢中起电子载体的作用(bogan和brenner，annu.rev.nutr.2008，28，115
‑
130)。nad

对于氧化还原反应以及作为parp(聚腺苷二磷酸核糖聚合酶)和sirtuin(sirt1至sirt7)的信号传导的底物，在已表明在老化过程中至关重要的dna修复、能量代谢、细胞存活和昼夜节律的调节方面至关重要(bronkowski，m.s.和sinclair，d.，nat.rev.mole.cell.bio.，17，679
‑
690，(2016))。提高nad

浓度会延迟酵母、苍蝇(files)和小鼠的衰老(mouchiroud等人cell 154，464
‑
471，2014)。最近还证明，nad

直接调节蛋白质与蛋白质的相互作用，对这种相互作用的调节可以预防癌症和辐射暴露并且对衰老有直接影响(li等人，science 355，1312
‑
1317，2017)。因此，越来越多的证据支持这种想法，即使用nad

中间体(诸如nmn和nr)进行干预可通过恢复可用的nad

来增强系统，并减轻与衰老相关的生理衰退。
12.虽然nad

可由氨基酸色氨酸从头合成，但此过程并非在所有组织中都发生，这需要大多数细胞依靠补救途径(如上所述)由主要可通过饮食来源获得的其他细胞内中间体再生nad

(christopher r.martens，等人，nat.commun.9，1286，(2018)以及bogan，k.l.和brenner，c.，annu.rev.nutr.28，115
‑
130，(2008))。也可施用其他nad前体(如烟酸和烟酰胺)来增强nad细胞的生物利用度。然而，烟酸的临床相关水平在治疗剂量下与不期望的潮红相关(mackay，d.，hathcock，j.和guarneri，e.，nutr.rev.70，357
‑
366(2012))。并且尽管nad浓度升高，但是烟酰胺并不能可靠地激活(并且甚至可能抑制)sirtuin(bitterman，k.j.，等人，j.biol.chem.277，45099
‑
45107(2002)；guan，x.，等人，plos one.9，e107729(2014)；和trammell，s.a.等人nat.commun.7，12948(2016))。因此，施用烟酸或烟酰胺不太可能被广泛用于随着年龄的增长维持健康和功能。
13.与烟酸和烟酰胺相比，在动物模型中，施用nad

代谢物(诸如烟酰胺单核苷酸(nmn)或烟酰胺核糖(nr))似乎会增加nad

的水平并改善多种生理功能(yoshino，j.等人，cell metab.14，528
‑
536(2011)；mills，k.f.等人，cell metab.24，795
‑
806(2016)；和
frederick，d.w.等人，cell metab.24，269
‑
282(2016))。据报道，这些代谢物中的至少一种在人类中具有良好的耐受性，从而导致nad水平的升高和生理功能的改善，尽管还需要进一步的研究来证实此探索性研究的发现(christopher r.martens，等人，nat.commun.9，1286，(2018))。此外，最近的研究表明，单次剂量的nr以剂量依赖的方式刺激健康人的血细胞nad

代谢(trammell，s.a.等人，nat.commun.7，12948(2016))，这表明了这种代谢物的局限性。然而，许多已知的nad 代谢物在各种生理环境中是不稳定的，并且因此不能用于向需要此类代谢物以提高患者中nad 水平的所述患者施用的可行药物。
14.考虑到nad

在关键细胞和生理途径中起核心作用，开发可提高疾病状态和/或衰老过程中nad

水平的具有改善的特性的新型稳定剂对于改善人的病症是必需的。


技术实现要素：

15.本文提供了nmn的无机盐，所述盐与nmn相比令人惊讶地增加细胞nad

水平至更大的程度。
16.本发明的第一方面涉及式(i)的盐：(i)，
[0017][0018]
及其对映异构体、立体异构体和互变异构体，
[0019]
其中
[0020]
a为nr
a
r
b
；
[0021]
m1和m1为无机阳离子；
[0022]
r1和r2独立为h、c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、(c0‑
c3亚烷基)c(o)c1‑
c6烷基、
‑
c(o)or
a
、
‑
c(o)nr
a
r
b
或
‑
[ch2‑
ch2‑
o]
n
‑
r
a
，
[0023]
或r1和r2连同其连接的原子一起形成任选地被选自以下的一个或多个取代基取代的5元杂环：c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基、(c0‑
c3亚烷基)c3‑
c8环烷基、(c0‑
c3亚烷基)杂环烷基、(c0‑
c3亚烷基)c6‑
c
14
芳基和(c0‑
c3亚烷基)杂芳基；
[0024]
r
a
和r
b
在每次出现时独立地为h或c1‑
c6烷基，其中所述烷基任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：(c0‑
c3亚烷基)c3‑
c8环烷基、(c0‑
c3亚烷基)杂环烷基、(c0‑
c3亚烷基)c6‑
c
14
芳基和(c0‑
c3亚烷基)杂芳基；
[0025]
k为1或2；并且
[0026]
n为1至8的整数，
[0027]
前提条件是m1不为na
[0028]
本公开的另一方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含与药学上可接受的载剂缔合的式ia的盐或其药学上可接受的盐。
[0029]
本公开的另一方面涉及一种治疗或预防年龄相关不孕症的方法，所述方法包括向
有此需要的受试者施用有效量的式(i)的盐或其对映异构体、立体异构体或互变异构体。
[0030]
本公开的另一方面涉及一种治疗或预防不孕症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的式(i)的盐或其对映异构体、立体异构体或互变异构体。
[0031]
本公开的另一方面涉及一种式(i)的盐或其对映异构体、立体异构体或互变异构体，其用于制造用于治疗年龄相关不孕症的药物。
[0032]
本公开的另一方面涉及一种式(i)的盐或其对映异构体、立体异构体或互变异构体，其用于制造用于治疗不孕症的药物。
[0033]
在另一方面，本发明涉及一种治疗或预防年龄相关病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的式i的盐的药物组合物。
[0034]
本公开的另一方面涉及一种改善卵母细胞质量和成熟的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的式i的盐。
[0035]
本公开的另一方面涉及式(i)的盐或其对映异构体、立体异构体或互变异构体在制造用于治疗年龄相关病症的药物中的用途。
[0036]
在另一方面，本发明包括在植入受试者之前用式(i)的盐对卵母细胞进行离体处理，用于治疗年龄相关不孕症。
[0037]
在另一方面，本发明包括在植入受试者之前用式(i)的盐对囊胚进行离体处理，用于治疗年龄相关不孕症。
[0038]
在另一方面，本发明包括在植入受试者之前用式(i)的盐对卵母细胞进行离体处理，用于治疗不孕症。
[0039]
在另一方面，本发明包括在植入受试者之前用式(i)的盐对囊胚进行离体处理，用于治疗不孕症。
[0040]
在另一方面，提供一种式(i)的盐作为用于离体处理细胞的溶液中的组分，用于治疗年龄相关病症。在一些实施方案中，年龄相关病症是年龄相关不孕症。在其他方面，提供一种式(i)的盐作为用于离体处理细胞的溶液中的组分，用于治疗不孕症。
[0041]
本公开的另一方面涉及一种用于制备式(i)的盐的方法，所述方法包括使式ii的烟酰胺单核苷酸衍生物在有效产生式i的盐的合适条件下与碱金属氢氧化物接触。
[0042]
本公开还涉及加速从疾病或病症中恢复的方法。所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的式(i)的盐与所述疾病的开具的治疗的组合。
[0043]
在另一方面，本公开涉及一种用于体外授精的细胞培养基，其包含：一种或多种式(i)的盐和培养剂。
[0044]
本公开的另一方面涉及通过以下方法制备的式i的盐，所述方法包括使式ii的烟酰胺单核苷酸衍生物在有效产生式i的盐的合适条件下与碱金属氢氧化物接触。
具体实施方式
[0045]
本公开涉及式(i)的盐和包含式(i)的盐的组合物，其可用于治疗或预防年龄相关病症，诸如年龄相关不孕症等其他此类病症。本公开的方法可通过预防或缓解抗衰老过程以及有助于细胞恢复过程而用于治疗多种疾病和病症。
[0046]
式(i)的盐在临床上可达到的剂量下强效且有效；在多种潜在剂型中稳定；具有可接受的溶解度、可接受的ph值，是结晶的，吸水倾向降低，易于处理
‑
所有这些都与药物的开
发、制造和用途相一致。另外，本文所公开的盐提供增加的生物活性以增加细胞nad

水平。
[0047]
本公开的一个方面涉及式i的盐
[0048][0049]
其中a、k、m1、r1和r2如本文所述。
[0050]
冠词“一个/种(a/an)”在本公开中用来指代一个/种或多于一个/种(即，至少一个/种)的冠词的语法对象。作为举例，“一个/种要素”是指一个/种要素或多于一个/种要素。
[0051]
除非另外指示，否则术语“和/或”在本公开中用于指“和”或“或”。
[0052]
术语“任选取代的”应理解为意指给定的化学部分(例如，烷基)可以(但不要求)键合其他取代基(例如，杂原子)。例如，任选取代的烷基可以是完全饱和的烷基链(即，纯烃)。或者，相同的任选取代的烷基可具有不同于氢的取代基。例如，它可在沿着链的任何点处与卤素原子、羟基或本文所述的任何其他取代基结合。因此，术语“任选取代的”意指给定的化学部分具有含有其他官能团的潜力，但不一定具有任何其他的官能团。在所述基团的任选取代中使用的合适的取代基包括但不限于卤素、氧代基、
‑
oh、
‑
cn、
‑
cooh、
‑
ch2cn、
‑
o
‑
(c1‑
c6)烷基、(c1‑
c6)烷基、c1‑
c6烷氧基、(c1‑
c6)卤代烷基、c1‑
c6卤代烷氧基、
‑
o
‑
(c2‑
c6)烯基、
‑
o
‑
(c2‑
c6)炔基、(c2‑
c6)烯基、(c2‑
c6)炔基、
‑
oh、
‑
op(o)(oh)2、
‑
oc(o)(c1‑
c6)烷基、
‑
c(o)(c1‑
c6)烷基、
‑
oc(o)o(c1‑
c6)烷基、
‑
nh2、
‑
nh((c1‑
c6)烷基)、
‑
n((c1‑
c6)烷基)2、
‑
nhc(o)(c1‑
c6)烷基、
‑
c(o)nh(c1‑
c6)烷基、
‑
s(o)2(c1‑
c6)烷基、
‑
s(o)nh(c1‑
c6)烷基和s(o)n((c1‑
c6)烷基)2。取代基本身可以是任选取代的。如本文所用，“任选取代的”还指取代的或未取代的，其含义如下文所述。
[0053]
如本文所用，术语“取代的”意指指定的基团或部分带有一个或多个适合的取代基，其中所述取代基可在一个或多个位置连接至所述指定的基团或部分。例如，被环烷基取代的芳基可表示所述环烷基通过键或通过与所述芳基稠合并共享两个或更多个共同原子而连接至所述芳基的一个原子。
[0054]
如本文所用，术语“未取代的”意指指定的基团不带有取代基。
[0055]
除非另外具体定义，否则术语“芳基”是指具有1至3个芳环的环状芳族烃基，包括单环或双环基团，诸如苯基、联苯基或萘基。在含有两个芳环(双环等)的情况下，芳基的芳环可在单个点处连接(例如联苯基)或稠合(例如萘基)。芳基可在任何连接点处任选地被一个或多个取代基，例如1至5个取代基取代。示例性取代基包括但不限于：
‑
h、卤素、
‑
o
‑
(c1‑
c6)烷基、(c1‑
c6)烷基、
‑
o
‑
(c2‑
c6)烯基、
‑
o
‑
(c2‑
c6)炔基、(c2‑
c6)烯基、(c2‑
c6)炔基、
‑
oh、
‑
op(o)(oh)2、
‑
oc(o)(c1‑
c6)烷基、
‑
c(o)(c1‑
c6)烷基、
‑
oc(o)o(c1‑
c6)烷基、nh2、nh((c1‑
c6)烷基)、n((c1‑
c6)烷基)2、
‑
s(o)2‑
(c1‑
c6)烷基、
‑
s(o)nh(c1‑
c6)烷基和s(o)n((c1‑
c6)烷基)2。取代基本身可以是任选取代的。此外，当含有两个稠环时，本文所定义的芳基可具有与完全芳
环稠合的饱和或部分饱和的环。这些芳基的示例性环体系包括但不限于苯基、联苯基、萘基、蒽基、萉基(phenalenyl)、菲基、茚满基、茚基、四氢萘基、四氢苯并轮烯基(tetrahydrobenzoannulenyl)等。
[0056]
除非另外具体定义，否则“杂芳基”意指5至24个环原子的单价单环芳族基团或多环芳族基团，其含有一个或多个选自n、o或s的环杂原子，其余的环原子为c。如本文所定义的杂芳基还意指双环杂芳族基团，其中杂原子选自n、o或s。芳族基团任选地独立地被本文所述的一个或多个取代基取代。实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡唑基、嘧啶基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、吡嗪基、吲哚基、噻吩
‑2‑
基、喹啉基、苯并吡喃基、异噻唑基、噻唑基、噻二唑、吲唑、苯并咪唑基、噻吩并[3，2
‑
b]噻吩、三唑基、三嗪基、咪唑并[1，2
‑
b]吡唑基、呋喃并[2，3
‑
c]吡啶基、咪唑并[1，2
‑
a]吡啶基、吲唑基、吡咯并[2，3
‑
c]吡啶基、吡咯并[3，2
‑
c]吡啶基、吡唑并[3，4
‑
c]吡啶基、噻吩并[3，2
‑
c]吡啶基、噻吩并[2，3
‑
c]吡啶基、噻吩并[2，3
‑
b]吡啶基、苯并噻唑基、吲哚基、吲哚啉基、吲哚啉酮基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃基、苯并呋喃、苯并二氢吡喃基、硫代苯并二氢吡喃基、四氢喹啉基、二氢苯并噻嗪、二氢苯并噁烷基(dihydrobenzoxanyl)、喹啉基、异喹啉基、1，6
‑
萘啶基、苯并[de]异喹啉基、吡啶并[4，3
‑
b][1，6]萘啶基、噻吩并[2，3
‑
b]吡嗪基、喹唑啉基、四唑并[1，5
‑
a]吡啶基、[1，2，4]三唑并[4，3
‑
a]吡啶基、异吲哚基、吡咯并[2，3
‑
b]吡啶基、吡咯并[3，4
‑
b]吡啶基、吡咯并[3，2
‑
b]吡啶基、咪唑并[5，4
‑
b]吡啶基、吡咯并[1，2
‑
a]嘧啶基、四氢吡咯并[1，2
‑
a]嘧啶基、3，4
‑
二氢
‑
2h
‑12
‑
吡咯并[2，1
‑
b]嘧啶、二苯并[b，d]噻吩、吡啶
‑2‑
酮、呋喃并[3，2
‑
c]吡啶基、呋喃并[2，3
‑
c]吡啶基、1h
‑
吡啶并[3，4
‑
b][1，4]噻嗪基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、呋喃并[2，3
‑
b]吡啶基、苯并噻吩基、1，5
‑
萘啶基、呋喃并[3，2
‑
b]吡啶、[1，2，4]三唑并[1，5
‑
a]吡啶基、苯并[1，2，3]三唑基、咪唑并[1，2
‑
a]嘧啶基、[1，2，4]三唑并[4，3
‑
b]哒嗪基、苯并[c][1，2，5]噻二唑基、苯并[c][1，2，5]噁二唑、1，3
‑
二氢
‑
2h
‑
苯并[d]咪唑
‑2‑
酮、3，4
‑
二氢
‑
2h
‑
吡唑并[1，5
‑
b][1，2]噁嗪基、4，5，6，7
‑
四氢吡唑并[1，5
‑
a]吡啶基、噻唑并[5，4
‑
d]噻唑基、咪唑并[2，1
‑
b][1，3，4]噻二唑基、噻吩并[2，3
‑
b]吡咯基、3h
‑
吲哚基以及它们的衍生物。此外，当含有两个稠环时，本文所定义的杂芳基可具有与完全芳环稠合的饱和或部分饱和的环。这些杂芳基的示例性环体系包括吲哚啉基、吲哚啉酮基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃、苯并二氢吡喃基、硫代苯并二氢吡喃基、四氢喹啉基、二氢苯并噻嗪、3，4
‑
二氢
‑
1h
‑
异喹啉基、2，3
‑
二氢苯并呋喃、吲哚啉基、吲哚基和二氢苯并噁烷基。
[0057]
卤素或“卤代基”是指氟、氯、溴或碘。
[0058]
烷基是指含有1
‑
12个碳原子的直链或支链饱和烃。(c1‑
c6)烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、新戊基和异己基。
[0059]“烷氧基”是指在链中含有末端“o”的含有1
‑
12个碳原子的直链或支链饱和烃，即
‑
o(烷基)。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、叔丁氧基或戊氧基。
[0060]“烯基”是指含有2
‑
12个碳原子的直链或支链不饱和烃。“烯基”在链中含有至少一个双键。烯基的双键可不结合或结合至另一个不饱和基团。烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、戊烯基或己烯基。烯基可以是未取代的或取代的。如本文所定义，烯基可以是直链或支链的。
[0061]“炔基”是指含有2
‑
12个碳原子的直链或支链不饱和烃。“炔基”在链中含有至少一个三键。烯基的实例包括乙炔基、炔丙基、正丁炔基、异丁炔基、戊炔基或己炔基。炔基可以是未取代的或取代的。
[0062]
术语“亚烷基(alkylene)”或“亚烷基(alkylenyl)”是指二价烷基。上述单价烷基中的任一个可通过从烷基中夺取第二氢原子而为亚烷基。如本文所定义，亚烷基还可以是c1‑
c6亚烷基。亚烷基可进一步是c1‑
c4亚烷基。典型的亚烷基包括但不限于：
‑
ch2‑
、
‑
ch(ch3)
‑
、
‑
c(ch3)2‑
、
‑
ch2ch2‑
、
‑
ch2ch(ch3)
‑
、
‑
ch2c(ch3)2‑
、
‑
ch2ch2ch2‑
、
‑
ch2ch2ch2ch2‑
等。
[0063]“环烷基”意指含有3
‑
18个碳原子(例如，c3‑
c
10
)的单环或多环饱和碳环(例如，稠环、桥接环或螺环)。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降冰片烷基(norboranyl)、降冰片烯基(norborenyl)、双环[2.2.2]辛基或双环[2.2.2]辛烯基。
[0064]“杂环基”或“杂环烷基”意指含有碳原子和取自氧、氮或硫的杂原子的单环或多环(例如，稠环、桥接环或螺环)，并且其中不存在环碳原子或杂原子之间共享的离域电子(芳香性)。杂环烷基可为3、4、5、6、7、8、9、10、11或12元环。杂环烷基环结构可被一个或多个取代基取代。取代基本身可以是任选取代的。杂环基环的实例包括但不限于氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基(azetadinyl)、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、吡喃基、硫代吡喃基、四氢吡喃基、二羟喹喔啉基(dioxalinyl)、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基s
‑
氧化物、硫代吗啉基s
‑
二氧化物、哌嗪基、氮杂基、氧杂基、二氮杂基、托烷基(tropanyl)、噁唑烷酮基以及高托烷基(homotropanyl)。根据本公开，3至10元杂环基是指含有3与10个之间原子的饱和或部分饱和的非芳环结构，其中存在至少一个选自组n、o或s的杂原子。
[0065]
术语“羟烷基”意指如上文所定义的烷基，其中所述烷基被一个或多个
‑
oh基团取代。羟烷基的实例包括ho
‑
ch2‑
、ho
‑
ch2‑
ch2‑
和ch3‑
ch(oh)
‑
。
[0066]
如本文所用，术语“卤代烷基”是指被一个或多个卤素取代的如本文所定义的烷基。卤代烷基的实例包括但不限于三氟甲基、二氟甲基、五氟乙基、三氯甲基等。
[0067]
如本文所用，术语“卤代烷氧基”是指被一个或多个卤素取代的如本文所定义的烷氧基。卤代烷基的实例包括但不限于三氟甲氧基、二氟甲氧基、五氟乙氧基、三氯甲氧基等。
[0068]
如本文所用，术语“氰基”是指具有通过三键(即c≡n)与氮原子连接的碳原子的取代基。
[0069]
如本文所用，术语“胺”是指伯胺(r
‑
nh2，r≠h)、仲胺(r2‑
nh，r2≠h)和叔胺(r3‑
n，r≠h)。取代的胺意指其中至少一个氢原子已被取代基替换的胺。
[0070]
如本文所用，术语“氨基”意指含有至少一个氮原子的取代基。具体地，术语“氨基”中包括
‑
nh2、
‑
nh(烷基)或烷基氨基、
‑
n(烷基)2或二烷基氨基、酰胺
‑
、尿素
‑
、脲和磺酰胺取代基。
[0071]
如本文所用，术语“氧代基”是指“＝o”基团。
[0072]
术语“异构体”是指具有相同组成和分子量、但物理和/或化学特性不同的盐和/或化合物。结构差异可在构造(几何异构体)或在旋转偏振光平面的能力(立体异构体)方面。关于立体异构体，式(i)的盐可具有一个或多个不对称碳原子，并且可作为外消旋体、外消旋混合物以及作为单独的对映异构体或非对映异构体存在。
[0073]
术语“阳离子”涵盖所有有机和无机带正电的离子。式(i)的化合物中的阳离子可包括但不限于“handbook of pharmaceutical salts：properties，selections and use”，stahl，h.和wermuth，c.编，verlag helvetica chemica acta，zurich，wiley
‑
vch，2002中所述的那些。
[0074]
术语“无机阳离子”是指任何带正电的无机原子或原子团。示例性的无机阳离子为碱金属(例如锂、钠和钾)、碱土金属(例如钙和镁)、锰、亚铁、钴、铊、二价锰和铵(nh
4
)。
[0075]
如本文所用，术语“降解”意指化学上的分解。降解与熔融不同，它涉及化学键的断裂或新化学键的形成。降解的方法可包括水解、溶剂分解、热分解或氧化。
[0076]
本公开还包括药物组合物，所述药物组合物包含有效量的所公开的盐和药学上可接受的载剂。代表性“药学上可接受的盐”包括例如水溶性和水不溶盐类，诸如乙酸盐、安索酸盐(4，4
‑
二氨基二苯乙烯
‑
2，2
‑
二磺酸盐)、苯磺酸盐、苯甲酸盐(benzonate)、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁酸盐、钙盐、依地酸钙、右旋樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、克拉维酸盐、二盐酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐(fumerate)、延胡索酸盐(fiunarate)、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、对羟乙酰氨基苯胂酸盐(glycollylarsanilate)、六氟磷酸盐、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、海巴明(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟萘甲酸盐、碘化物、异硫代硫酸盐(isothionate)、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂酸盐、镁盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、n
‑
甲基葡萄糖胺铵盐、3
‑
羟基
‑2‑
萘甲酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐(1，1
‑
亚甲基
‑
双
‑2‑
羟基
‑3‑
萘甲酸盐，恩贝酸盐(einbonate))、泛酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐、苦味酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、对
‑
甲苯磺酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、苏拉明酸盐(suramate)、丹宁酸盐、酒石酸盐、氯茶碱盐(teoclate)、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物以及戊酸盐。
[0077]“患者”或“受试者”是哺乳动物，例如人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、马、牛、猪或非人灵长类动物，诸如猴、黑猩猩、狒狒或恒河猴。
[0078]
当与盐或药物组合物结合使用时，“有效量”是有效治疗或预防如本文所述的受试者的疾病的量。
[0079]
如本公开所用，术语“载剂”涵盖载剂、赋形剂以及稀释剂并且意指涉及将药剂从受试者身体的一个器官或者部分携带或运输到身体另一个器官或部分的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。
[0080]
如本文所用，术语“治疗”与术语“预防”同义，并且意在表示疾病发展的推迟，预防疾病的发展和/或降低此类将要或预期发展的症状的严重性。因此，这些术语包括缓解现有的疾病症状、预防另外的症状、缓解或预防症状的根本原因、抑制病症或疾病，例如，阻止病症或疾病的发展、减轻病症或疾病、引起病症或疾病的消退、减轻疾病或病症引起的病状、或停止或缓和疾病或病症的症状。
[0081]
除非另外指示，否则术语“病症”在本公开中用于意指术语疾病、疾患或患病，并且与所述术语可互换地使用。
[0082]
如本公开所用，术语“施用(administer)”、“施用(administering)”或“施用(administration)”是指直接向受试者施用所公开的盐或组合物，或向所述受试者施用所
述盐或组合物的前药衍生物或类似物，所述前药衍生物或类似物在受试者体内可以形成等效量的活性盐。
[0083]
术语“卵母细胞”与术语“卵”同义，并且在本公开中用于意指雌性哺乳动物配子母细胞或生殖细胞。
[0084]
术语“受精卵”在本公开中用于意指在受精过程中卵母细胞和精子融合形成的受精的卵或二倍体细胞。
[0085]
术语“囊胚”在本公开中用于意指其中发生了细胞分化的哺乳动物胚胎，其由内部细胞团或成胚细胞、腔和外层或滋养层组成。
[0086]
本公开的盐
[0087]
本公开涉及式(i)的盐及其对映异构体、立体异构体和互变异构体，其可用于治疗与衰老和细胞恢复相关的疾病和病症，诸如年龄相关不孕症。
[0088]
在一些实施方案中，式i的盐具有式(ia)的结构ia：
[0089][0090]
在一些实施方案中，式i的盐具有式ib的结构：
[0091][0092]
在一些实施方案中，式i的盐具有式ic的结构：
[0093][0094]
在一些实施方案中，式i的盐具有式id的结构：
[0095][0096]
在一些实施方案中，式i的盐具有式ie的结构：
[0097][0098]
在一些实施方案中，式i的盐具有式if的结构：
[0099][0100]
在一些实施方案中，式i的盐具有式ig的结构：
[0101][0102]
在一些实施方案中，式i的盐具有式ik的结构：
[0103][0104]
在一些实施方案中，式i的盐具有式il的结构：
[0105][0106]
在一些实施方案中，式i的盐具有式im的结构：
[0107][0108]
在一些实施方案中，式i的盐具有式in的结构：
[0109][0110]
在一些实施方案中，式i的盐具有式io的结构：
[0111][0112]
在一些实施方案中，式i的盐具有式ip的结构：
[0113][0114]
在一些实施方案中，式i的盐具有式iq的结构：
[0115][0116]
在一些实施方案中，式i的盐具有式ir的结构：
[0117][0118]
在一些实施方案中，式i的盐具有式is的结构：
[0119][0120]
在式i的盐的一个实施方案中，a为nr
a
r
b
。
[0121]
在式i的盐的另一个实施方案中，m1为阳离子。在另一个实施方案中，m1为阳离子原子。在另一个实施方案中，m1为但不限于li

、na

、k

、rb

、cs

、be
2
、mg
2
、ca
2
、sr
2
、zn
2
和ba
2
。在另一实施方案中，m1为li

。在另一个实施方案中，m1为na

。在另一个实施方案中，m1为k

。在另一个实施方案中，m1为rb

。在另一个实施方案中，m1为cs

。m1也可以是二价阳离子，诸如ca
2
、be
2
、mg
2
、ca
2
、sr
2
、zn
2
和ba
2
。在一个实施方案中，m1为ca
2
。
[0122]
在本发明的一些实施方案中，ra在每次出现时独立地为h或c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
a
为h。在其他实施方案中，r
a
为c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
a
为被选自以下的一个或多个取代基取代的c1‑
c6烷基：c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基、(c0‑
c3亚烷基)c3‑
c8环烷基、(c0‑
c3亚烷基)杂环烷基、(c0‑
c3亚烷基)c6‑
c
14
芳基或(c0‑
c3亚烷基)杂芳基。在其他实施方案中，r
a
为被选自c1‑
c6烷基的一个或多个取代基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，ra为被一个或c2‑
c6烯基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，ra为被一个或多个c2‑
c6炔基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，ra为被一个或多个(c0‑
c3亚烷基)c3‑
c8环烷基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
a
为被一个或多个(c0‑
c3亚烷基)杂环烷基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
a
为被一个或多个(c0‑
c3亚烷基)c6‑
c
14
芳基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
a
为被一个或多个(c0‑
c3亚烷基)杂芳基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
a
为甲基。在其他实施方案中，r
a
为被选自以下的一个或多个取代基取代的甲基：c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基、(c0‑
c3亚烷基)c3‑
c8环烷基、(c0‑
c3亚烷基)杂环烷基、(c0‑
c3亚烷基)c6‑
c
14
芳基或(c0‑
c3亚烷基)杂芳基。
[0123]
在本发明的一些实施方案中，rb在每次出现时独立地为h或c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
b
为h。在其他实施方案中，r
b
为c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
b
为被选自以下的一个或多个取代基取代的c1‑
c6烷基：c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基、(c0‑
c3亚烷基)c3‑
c8环烷基、(c0‑
c3亚烷基)杂环烷基、(c0‑
c3亚烷基)c6‑
c
14
芳基或(c0‑
c3亚烷基)杂芳基。在其他实施方案中，r
b
为被选自c1‑
c6烷基的一个或多个取代基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
b
为被一个或c2‑
c6烯基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
b
为被一个或多个c2‑
c6炔基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
b
为被一个或多个(c0‑
c3亚烷基)c3‑
c8环烷基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
b
为被一个或多个(c0‑
c3亚烷基)杂环烷基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
b
为被一个或多个(c0‑
c3亚烷基)c6‑
c
14
芳基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
b
为被一个或多个(c0‑
c3亚烷基)杂芳基取代的c1‑
c6烷基。在其他实施方案中，r
b
为甲基。在其他实施方案中，r
b
为被选自以下的一个或多个取代基取代的甲基：c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基、(c0‑
c3亚烷基)c3‑
c8环烷基、(c0‑
c3亚烷基)杂环烷基、(c0‑
c3亚
烷基)c6‑
c
14
芳基或(c0‑
c3亚烷基)杂芳基。
[0124]
在另一实施方案中，r1独立地为h、c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、(c0‑
c3亚烷基)c(o)c1‑
c6烷基、
‑
c(o)or
a
、
‑
c(o)nr
a
r
b
或
‑
[ch2‑
ch2‑
o]
n
‑
r
a
。在另一个实施方案中，r1为h。在另一个实施方案中，r1为c1‑
c6烷基。在另一个实施方案中，r1为c1‑
c6卤代烷基。在另一个实施方案中，r1为(c0‑
c3亚烷基)c(o)c1‑
c6烷基。在另一个实施方案中，r1为
‑
c(o)or
a
。在另一个实施方案中，r1为
‑
[ch2‑
ch2‑
o]
n
‑
r
a
。在另一个实施方案中，r1为c(o)c1‑
c6烷基。
[0125]
在一个实施方案中，r2独立地为h、c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、(c0‑
c3亚烷基)c(o)c1‑
c6烷基、
‑
c(o)or
a
、
‑
c(o)nr
a
r
b
或
‑
[ch2‑
ch2‑
o]
n
‑
r
a
。在另一个实施方案中，r2为h。在另一个实施方案中，r2为c1‑
c6烷基。在另一个实施方案中，r2为c1‑
c6卤代烷基。在另一个实施方案中，r2为(c0‑
c3亚烷基)c(o)c1‑
c6烷基。在另一个实施方案中，r2为
‑
c(o)or
a
。在另一个实施方案中，r2为
‑
[ch2‑
ch2‑
o]
n
‑
r
a
。在另一个实施方案中，r1为c(o)c1‑
c6烷基。
[0126]
在式i的盐的另一实施方案中，r1和r2连同其连接的原子一起可形成5元杂环。在式i的盐的又一实施方案中，r1和r2连同其连接的原子一起可形成被选自以下的一个或多个取代基取代的5元杂环：c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基、(c0‑
c3亚烷基)c3‑
c8环烷基、(c0‑
c3亚烷基)杂环烷基、(c0‑
c3亚烷基)c6‑
c
14
芳基和(c0‑
c3亚烷基)杂芳基。
[0127]
在另一个实施方案中，n在每次出现时为1、2、3、4、5、6、7或8。在另一个实施方案中，n为1。在另一个实施方案中，n为2。在另一个实施方案中，n为3。在另一个实施方案中，n为4。在另一个实施方案中，n为5。在另一个实施方案中，n为6。在另一个实施方案中，n为7。在另一个实施方案中，n为8。
[0128]
在一个实施方案中，k为1。在另一个实施方案中，k为2。
[0129]
在另一个实施方案中，式(i)的盐选自下组：
[0130][0131]
[0132]
用于制备盐的方法
[0133]
本技术的盐可通过各种方法(包括标准化学方法)来制备。合适的合成途径在下文给出的方案中描述。
[0134]
本公开的另一个方面涉及用于制备式(i)的盐的方法。所述方法包括在有效产生式(i)的产物盐的合适条件下使式(ii)的烟酰胺单核苷酸衍生物与碱金属氢氧化物接触
[0135]
在一个实施方案中，制备本公开的盐的方法涉及将发生反应的气氛氮化。在另一个实施方案中，制备本公开的盐的第一步骤涉及用氮气充入核苷酸，然后加入去离子水以产生nmn溶液。在一个实施方案中，第二步骤涉及将碱金属氢氧化物逐滴加入所得的nmn溶液中以将ph提高至约6.5。
[0136]
在本发明的一个实施方案中，制备式(i)的盐的方法涉及使式(ii)的化合物
[0137][0138]
在有效产生式(i)的盐的条件下与碱金属氢氧化物接触。
[0139]
在一个实施方案中，碱金属氢氧化物选自lioh、naoh、koh、mg(oh)2、ca(oh)2、zn(oh)2和ba(oh)2。
[0140]
本文所述的方法提供了添加材料、试剂和反应物的顺序，以不仅获得式(i)的盐的高纯度，而且还获得式(i)的盐的稳定形式。逆转上述添加顺序，即将固体单核苷酸(nmn)添加到水性碱金属氢氧化物中，会得到明显不纯的产物，其容易过早降解。因此，盐的形成不是简单地以任何顺序混合材料、试剂和反应物的必然结果，相反，与通过以相反的顺序混合试剂所产生的产物相比，所描述的逐步添加似乎产生了更稳定和可溶的式(i)的盐。
[0141]
尽管不希望受到理论的限制，但据推测，式i的盐的糖苷键在将固体nmn添加至水性碱中的条件下易于增加降解的风险，从而产生基本上不纯的包含降解产物烟酰胺和核糖的产物，而不是所需的具有可接受纯度的产物。
[0142]
本公开还设想了有机合成领域中已知的制备式(i)的盐的类似方法，如通过以下合成方案1部分所阐述的那样。
[0143]
本领域技术人员将认识到式(i)的盐中是否存在立体中心。因此，本公开包括两种可能的立体异构体(除非在合成中说明)，并且不仅包括外消旋盐，而且包括单独的对映异构体和/或非对映异构体。当需要化合物或盐作为单一对映异构体或非对映异构体时，其可通过立体特异性合成或通过拆分最终产物或任何方便的中间体来获得。最终产物、中间体或起始材料的拆分可通过本领域已知的任何适合的方法来实现。参见，例如，
″
stereochemistry of organic compounds
″
，e.l.eliel，s.h.wilen和l.n.mander(wiley
‑
lnterscience，1994)。
[0144]
本文所述的盐和化合物可由可商购获得的起始材料制备或使用已知的有机、无机和/或酶促方法合成。
[0145]
式(i)的盐可以有机合成领域的技术人员众所周知的多种方式制备。举例来说，式(i)的盐可使用下文所述的方法，以及在合成有机化学领域已知的合成方法，或者本领域的技术人员所了解的其变化形式来合成。这些方法包括但不限于下文描述的那些方法。本技术的盐可通过按照通用方案1中概述的步骤来合成，所述步骤包括组装各种中间体的顺序。起始材料是可商购获得的或通过报告的文献中已知的方法或如所示制备的。
[0146]
方案1
[0147][0148]
本文所述的式(i)的盐可以根据方案1中概述的一般程序制备。前体和可商购获得的烟酰胺单核苷酸的缩合通常在合适的溶剂(例如，甲醇和水的混合物)的存在下用碱金属氢氧化物进行。加热混合物以缓慢蒸发溶剂。也可以在合适的温度和压力条件下将所得的混合物冷冻干燥以获得所需的产物盐。
[0149]
由上述过程产生的对映异构体、非对映异构体、顺式/反式异构体的混合物可通过手性盐技术、使用正相、反相或手性柱的色谱法，根据分离的性质而分离成它们的单一组分。
[0150]
应当理解，在以上所示的描述和式中，除非另外指示，否则基团m

代表如上文所定义的m1。此外，出于合成目的，通用方案1的盐仅具有所选基团的代表性，以说明本文所定义的式(i)的盐的一般合成方法。
[0151]
还应理解，本文所公开的盐具有中性电荷，并且式i的结构仅代表属类，如果需要，其可与抗衡离子平衡以使盐呈现中性电荷。此类抗衡离子可包括但不限于溴、氯和三氟甲磺酸酯。在一个实施方案中，本公开的盐可原位生成而无需从溶液中分离。在一些实施方案中，本文所设想的盐可为离散的1∶1或1∶2盐。在一些实施方案中，盐也可以其他比率存在，例如，1∶1.5、1∶5和1∶10。
[0152]
使用盐的方法
[0153]
本公开的另一个方面涉及一种治疗或预防与衰老、细胞退化和/或细胞恢复相关的疾病或病症的方法。此类疾病和病症的非限制性实例包括不孕症、年龄相关不孕症、年龄相关眼功能丧失、骨密度降低、肥胖症和胰岛素不敏感性。在一个实施方案中，式(i)的盐可用于治疗年龄相关不孕症。在另一个实施方案中，式(i)的盐可用于治疗生育力。
[0154]
本技术的另一个方面涉及一种治疗或预防年龄相关疾病或病症的方法。所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的式i的盐的药物组合物。
[0155]
本公开的又一方面涉及改善卵母细胞或囊胚质量和成熟的方法。所述方法包括使卵母细胞或囊胚与包含式(i)的盐的ivf培养基接触一段有效时间。
[0156]
在另一个方面，本公开提供含有式(i)的盐的培养基。式(i)的盐可用于在植入患有不孕症或年龄相关不孕症的患者之前将卵子、卵母细胞和/或囊胚暴露增强nad 产量所需的时间段的培养基中。在一些实施方案中，提供了包含式(i)的盐的培养基。在一些实施方案中，根据卵子、卵母细胞或囊胚所处的成熟和发育的阶段，培养基包含卵子、卵母细胞
或囊胚所必需的各种试剂和因子。例如，培养基可含有下表1中列出的可用于ivf培养基中的任何剂或因子：
[0157]
表1
[0158][0159][0160]
还提供了一种用于体外授精的细胞培养基，其包含：一种或多种式(i)的盐和培养剂。
[0161]
在一个实施方案中，培养剂为无机盐、能量基质、氨基酸、螯合剂、ph指示剂、抗生素、血清、维生素、生长因子或其任何组合。在一个实施方案中，无机盐为氯化钙、氯化镁、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸一钠、磷酸二钠或其任何组合。
[0162]
在一个实施方案中，能量基质为葡萄糖、丙酮酸、乳酸、丙酮酸或其任何组合。
[0163]
在一个实施方案中，氨基酸为必需氨基酸。在一个实施方案中，必需氨基酸为精氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸或其任何组合。
[0164]
在一个实施方案中，氨基酸为非必需氨基酸。
[0165]
在一个实施方案中，非必需氨基酸为丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、丝氨酸或其任何组合。
[0166]
在一个实施方案中，螯合剂为笼型螯合物、乙酰丙酮、氨基多羧酸、atmp、bapta、bdth2、柠檬酸、穴醚、地拉罗司(deferasirox)、2，3
‑
二氢苯甲酸、2，3
‑
二巯基
‑1‑
丙烷磺酸、二巯基琥珀酸、dota、dtpmp、eddha、edds、edtmp、依替膦酸(etidronic acid)、fura
‑
2、葡萄糖酸、高柠檬酸、亚氨基二乙酸、indo
‑
1、腈三乙酸、喷替酸(dtpa)、膦酸盐、植物螯合肽(phytochelati)、聚天冬氨酸、聚天冬氨酸钠、柠檬酸三钠、转铁蛋白、edta、egta或其任何组合。
[0167]
在一个实施方案中，ph指示剂为酚红、溴百里酚蓝、茜素红、9
‑
氨基吖啶或其任何
组合。
[0168]
在一个实施方案中，抗生素为放线菌素d、氨苄青霉素、羧苄青霉素、头孢噻肟、膦胺霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、青霉素、多粘菌素b、链霉素或其任何组合。
[0169]
在一个实施方案中，血清为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、胎牛血清、合成血清或其任何组合。
[0170]
在一个实施方案中，维生素为抗坏血酸、生物素、甲萘醌亚硫酸氢钠、丝裂霉素c、二盐酸吡哆胺、乙酸视黄酯、(
‑
)
‑
核黄素、( )
‑
l
‑
抗坏血酸钠、( )
‑
α
‑
生育酚、维生素b
12
、盐酸硫胺素、肌醇(i
‑
inositol)、盐酸吡哆醛、烟酰胺、叶酸、d
‑
泛酸钙、氯化胆碱或其任何组合。
[0171]
在一个实施方案中，生长因子为肾上腺髓质素、血管生成素、骨形态发生蛋白、巨噬细胞集落刺激因子(m
‑
csf)、粒细胞集落刺激因子(g
‑
csf)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm
‑
csf)、表皮生长因子、肝配蛋白(ephrin)、促红细胞生成素、成纤维细胞生长因子、生长分化因子
‑
9、肝细胞生长因子、胰岛素、类胰岛素生长因子、白细胞介素、角质形成细胞生长因子、迁移刺激因子、巨噬细胞刺激蛋白、肌生长抑制素、神经营养因子、t细胞生长因子、血小板生成素、转化生长因子、肿瘤坏死因子
‑
α、血管内皮生长因子或其任何组合。
[0172]
在一个实施方案中，细胞培养基还包含卵母细胞、受精卵、囊胚或其任何组合
[0173]
此外，还提供了ivf培养基的试剂盒，所述ivf培养基包含卵母细胞或囊胚成熟所必需的各种剂和因子，包括一种或多种式(i)的盐。这些剂和辅助因子可溶解于溶液中以在植入需要治疗不孕症或年龄相关不孕症的患者之前暴露卵母细胞或囊胚之前不久用于产生ivf培养基。
[0174]
本发明还涉及式i的盐及其对映异构体、立体异构体和互变异构体在制造用于治疗衰老、细胞恢复、细胞退化或不孕症的药物中的用途。在某些实施方案中，治疗的不孕症为年龄相关不孕症。
[0175]
本发明的另一个方面是一种包含式i的盐和药学上可接受的载剂的药物组合物。
[0176]
本发明的另一个方面是一种包含式i的盐和包含治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂的药学上可接受的载剂的药物组合物。
[0177]
在一些实施方案中，式(i)的盐或包含本发明的盐和药学上可接受的载剂的药物组合物的施用诱导细胞周期或细胞存活力的变化。
[0178]
在一些实施方案中，式(i)的盐或包含本发明的盐和药学上可接受的载剂的药物组合物的施用诱导与衰老相关的病症或疾病的预防性变化。
[0179]
所公开的盐的施用可经由治疗剂的任何施用模式来完成。这些模式包括全身或局部施用，诸如口服、经鼻、胃肠外、经皮、皮下、阴道、经颊、直肠或局部施用模式。
[0180]
根据预期的施用模式，所公开的组合物可呈固体、半固体或液体剂型，例如像注射剂、片剂、栓剂、丸剂、定时释放胶囊(time
‑
release capsule)、酏剂、酊剂、乳剂、糖浆、粉末、液体、混悬液等，有时呈单位剂量并且与常规制药惯例一致。同样，它们也可以静脉内(推注和输注)、腹膜内、皮下或肌内形式施用，并且所有均使用药学领域的技术人员熟知的形式。
[0181]
可以分别根据常规的混合、制粒或包衣方法制备药物组合物，并且本发明的药物组合物可以含有按重量或体积计约0.1％至约99％、约5％至约90％或约1％至约20％的所
公开的盐。
[0182]
在一个实施方案中，本发明涉及一种通过混合至少一种本发明的药学上可接受的盐以及任选的一种或多种药学上可接受的载剂、添加剂或赋形剂来制备本发明的药物组合物的方法。
[0183]
在另一个实施方案中，本发明涉及一种通过混合至少一种本发明的药学上可接受的盐和一种或多种另外的治疗剂来制备本发明的药物组合物的方法。
[0184]
当用于所述方法时，式(i)的盐的有效剂量范围为约0.5mg至约5000mg范围内的治疗病状所需的所公开的盐。用于体内或体外使用的组合物可含有约0.5、5、20、50、75、100、150、250、500、750、1000、1250、2500、3500或5000mg或剂量列表中一个量到另一个量的范围内的所公开的盐。在一个实施方案中，所述组合物呈可被刻痕的片剂形式。
[0185]
利用所公开的盐的给药方案根据多种因素进行选择，所述因素包括患者的类型、物种、年龄、体重、性别和医学状况；待治疗的病状的严重性；施用途径；患者的肾功能或肝功能；以及所采用的特定所公开的盐。具有本领域普通技术的医师或兽医可容易地确定和开出预防、抵抗或停滞病状的进展所需的药物的有效量。
[0186]
说明性的药物组合物是片剂和明胶胶囊，其包含本发明的盐和药学上可接受的载剂，诸如a)稀释剂，例如净化的水、甘油三酯油诸如氢化或部分氢化的植物油或其混合物、玉米油、橄榄油、葵花籽油、红花油、鱼油(诸如epa或dha)或它们的酯或甘油三酯或其混合物、ω
‑
3脂肪酸或其衍生物、乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素、钠、糖精、葡萄糖和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、它的镁盐或钙盐、油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠和/或聚乙二醇；也用于片剂；c)粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、碳酸镁、天然糖(诸如葡萄糖或β
‑
乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶诸如阿拉伯胶、黄芪胶或藻酸钠、蜡和/或聚乙烯吡咯烷酮，如果需要；d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、甲基纤维素、膨润土、黄原胶、藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂；f)乳化剂或分散剂，诸如tween 80、labrasol、hpmc、doss、caproyl 909、labrafac、labrafil、peceol、transcutol、capmul mcm、capmul pg
‑
12、captex 355、gelucire、维生素e tgps或其他可接受的乳化剂；和/或g)增强盐的吸收的剂，诸如环糊精、羟丙基
‑
环糊精、peg400、peg200。
[0187]
为了由式(i)的盐制备药物组合物，惰性的药学上可接受的载剂可为固体或液体。固体形式制品包括粉剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂可包含约5％至约95％的活性成分。合适的固体载剂是本领域已知的，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖或乳糖。片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂可以用作适合口服施用的固体剂型。药学上可接受的载剂和用于各种组合物的制造方法的实例可以在a.gennaro(编)，remington
′
s pharmaceutical sciences，第18版，(1990)，mack publishing co.，easton，pa.中找到。
[0188]
液体形式制品包括溶液、悬浮液和乳剂。例如，用于胃肠外注射的水或水
‑
丙二醇溶液，或添加用于口服溶液、悬浮液和乳剂的甜味剂和遮光剂。液体形式制品还可包括用于鼻内施用的溶液。
[0189]
液体，尤其是可注射的组合物可以例如通过溶解、分散等来制备。例如，将所公开的盐溶解在药学上可接受的溶剂中或与药学上可接受的溶剂混合，所述药学上可接受的溶剂诸如水、盐水、水性右旋糖、甘油、乙醇等，从而形成可注射的等渗溶液或悬浮液。蛋白质，
诸如白蛋白、乳糜颗粒或血清蛋白，可用于溶解所公开的化合物。
[0190]
胃肠外施用通常用于皮下、肌肉内或静脉内注射和输注。注射剂可以常规形式来制备，即以液体溶液或悬浮液形式或适合于在注射之前溶解于液体中的固体形式。
[0191]
适用于吸入的气溶胶制品可包括溶液和粉末形式的固体，其可与药学上可接受的载剂诸如惰性压缩气体例如氮气组合。
[0192]
还包括意图就在临使用之前转变成用于口服或胃肠外施用的液体形式制品的固体形式制品。此类液体形式包括溶液、悬浮液和乳剂
[0193]
实施例
[0194]
通过以下实施例和合成方案进一步说明本公开，所述实施例和合成方案不应解释为将本公开在范围或精神上限制于本文所述的具体程序。应当理解，提供所述实施例以说明某些实施方案，并且由此不意图限制本公开的范围。应当进一步理解，在不背离本公开的精神和/或所附权利要求的范围的情况下，可采取本领域技术人员可想到的各种其他实施方案、修改以及等效物。
[0195]
使用通用合成方法制备本文所公开的以下盐，所述方法包括但不限于诸如kcl、nacl、licl、naoh、lioh或koh的试剂。也使用合适的溶剂，诸如甲醇、乙醇、水、乙酸、乙二醇、异丙醇。
[0196]
在以下实施例和本文其他地方使用的缩写是：
[0197]
acoh乙酸
[0198]
anh.无水
[0199]
atm气氛
[0200]
饱和水性
[0201]
br宽峰
[0202]
boc叔丁氧基羰基
[0203]
盐水饱和水性氯化钠
[0204]
n
‑
buli正丁基锂
[0205]
n
‑
buoh正丁醇
[0206]
calc’d计算值
[0207]
cdcl3氘化氯仿
[0208]
cdi羰基二咪唑
[0209]
chloroform
‑
d氘化氯仿
[0210]
d双重峰
[0211]
dd两个双重峰
[0212]
dt两个三重峰
[0213]
d2o氘化水(氧化氘)
[0214]
dce二氯乙烷
[0215]
dcm二氯甲烷
[0216]
diad偶氮二甲酸二异丙酯
[0217]
dipean，n
‑
二异丙基乙胺
[0218]
dmacn，n
‑
二甲基乙酰胺
[0219]
dmapn，n
‑
二甲基吡啶
‑4‑
胺
[0220]
dme1，2
‑
二甲氧基乙烷
[0221]
dmedan，n
′‑
二甲基乙二胺
[0222]
dmfn，n
‑
二甲基甲酰胺
[0223]
dmso二甲亚砜
[0224]
dmso
‑
d6氘化二甲亚砜
[0225]
eda乙二胺
[0226]
edc1
‑
乙基
‑3‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳二亚胺
[0227]
et2o乙醚
[0228]
etoac乙酸乙酯
[0229]
etoh乙醇
[0230]
esi电喷雾电离
[0231]
g克
[0232]
h小时
[0233]
h氢
[0234]1hnmr核磁共振(质子核)
[0235]
hatu[双(二甲基氨基)亚甲基]
‑
1h
‑
1，2，3
‑
三唑并[4，5
‑
b]吡啶鎓3
‑
氧化物六氟磷酸盐
[0236]
hbtu3
‑
[双(二甲基氨基)亚甲基]
‑
3h
‑
苯并三唑
‑1‑
氧化物六氟磷酸盐
[0237]
hobt羟基苯并三唑
[0238]
hplc高压(或高效)液相色谱法
[0239]
hz赫兹
[0240]
j偶合常数
[0241]
khco3碳酸氢钾
[0242]
khmds六甲基二硅氮烷钾
[0243]
koac乙酸钾
[0244]
lcms液相色谱
‑
质谱法
[0245]
lhmds六甲基二硅氮烷锂
[0246]
[#]m摩尔浓度
[0247]
m多重峰
[0248]
[m h]

分子离子加氢
[0249]
[m
‑
tbu h]

分子离子减叔丁基加氢
[0250]
mcpba间氯过氧苯甲酸
[0251]
me2nh二甲胺
[0252]
me4nbr溴化四甲基铵
[0253]
mecn乙腈
[0254]
menh2甲胺
[0255]
meoh甲醇
[0256]
甲醇
‑
d4氘化甲醇
[0257]2‑
methf2
‑
甲基四氢呋喃
[0258]
mg毫克
[0259]
mhz兆赫
[0260]
min分钟
[0261]
mmol毫摩尔
[0262]
ml毫升
[0263]
ms质谱
[0264]
mses质谱电喷雾
[0265]
ms2o甲磺酸酐
[0266]
mtbe甲基叔丁基醚
[0267]
mw微波
[0268]
m/z质荷比
[0269]
μl微升
[0270]
n2氮气
[0271]
nahco3碳酸氢钠
[0272]
nmn烟酰胺单核苷酸
[0273]
nisn
‑
碘代琥珀酰亚胺
[0274]
nmpn
‑
甲基
‑2‑
吡咯烷酮
[0275]
nmr核磁共振
[0276]
peppsi
‑
ipr[1，3
‑
双(2，6
‑
二异丙基苯基)咪唑
‑2‑
亚基](3
‑
氯吡啶基)二氯化钯(ii)
[0277]
pdcl2(amphos)双(二
‑
叔丁基(4
‑
二甲基氨基苯基)膦)二氯钯(ii)
[0278]
pd2(dba)3三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
[0279]
pd(oac)2乙酸钯(ii)
[0280]
pdcl2(dppf)[1，1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(ii)
[0281]
pdcl2(mecn)2双(乙腈)二氯钯(ii)
[0282]
pdcl2(pph3)2双(三苯基膦二氯化钯(ii)
[0283]
pd(p(cy)3)2cl2二氯双(三环己基膦)钯(ii)
[0284]
pd(pph3)4四(三苯基膦)钯(0)
[0285]
pd(t
‑
bu3p)2双(三
‑
叔丁基膦)钯(0)
[0286]
ph酸碱度
[0287]
pmb4
‑
甲氧基苄基
[0288]
pmbcl4
‑
甲氧基苄基氯
[0289]
ppm百万分率
[0290]
prep制备型
[0291]
py吡啶
[0292]
q四重峰
[0293]
qd四个双重峰
[0294]
quant.定量
[0295]
quin.
ꢀꢀ
五重峰
[0296]
quind五个双重峰
[0297]
rbf圆底烧瓶
[0298]
rt保留时间
[0299]
rt室温
[0300]
s单峰
[0301]
sat.饱和的
[0302]
sat.aq.饱和水性溶液
[0303]
semcl2
‑
(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯
[0304]
t三重峰
[0305]
t
‑
buli叔丁基锂
[0306]
td三个双重峰
[0307]
tms三甲基甲硅烷基
[0308]
tmscl三甲基甲硅烷基氯
[0309]
tt三个三重峰
[0310]
t3p聚膦酸酐
[0311]
tbab溴化四丁基铵
[0312]
tea三乙胺
[0313]
tfa三氟乙酸
[0314]
tfaa三氟乙酸酐
[0315]
thf四氢呋喃
[0316]
tlc薄层色谱法
[0317]
tppo三苯基氧化膦
[0318]
xantphos4，5
‑
双(二苯基膦基)
‑
9，9
‑
二甲基氧杂蒽
[0319]
xphos2
‑
二环己基膦基
‑2′
，4
′
，6
′‑
三异丙基联苯
[0320]
实施例1.((2r，3s，4r，5r)
‑5‑
(3
‑
氨基甲酰基吡啶
‑1‑
鎓
‑1‑
基)
‑
3，4
‑
二羟基四氢呋喃
‑2‑
基)甲基磷酸钠(i
‑
001)的合成
[0321][0322]
向配备有水冷凝器、橡胶隔垫和内部温度计的50ml3nrbf中注入nmn(0.200g，0.598mmol，1当量)和4ml蒸馏去离子水，并混合以形成溶液。将此溶液使用冰/水浴冷却以使内部温度低于10℃(溶液的ph为3.34)。然后通过注射器向此溶液中缓慢逐滴添加5.70ml的0.1mnaoh溶液，以防止温度升高。在此添加后，ph为约7.01。然后移出烧瓶，将其放在小kugel上，该kugel附接到在外部30℃下拉至小于1mbar的油泵(高于此温度会导致产物降解)。这将缓慢除去水。确保接收瓶已冷却。一旦干燥，产物就呈现为无色固体。产量：87.8mg(83％)；熔点：79℃
‑
83℃(降解，校正的)，130℃时脱气)；分析数据。1h
‑
nmr(400mhz，d2o)δ＝9.62(s，1h)，9.35(d，1h)，9.01(d，1h)，8.32(t，1h)，6.21(d，1h)，4.69(t，1h)，4.65(p，1h)，
4.50(m，1h)，4.23(dq，1h)，4.05(dq，1h)ppm
[0323]
实施例2.((2r，3s，4r，5r)
‑5‑
(3
‑
氨基甲酰基吡啶
‑1‑
鎓
‑1‑
基)
‑
3，4
‑
二羟基四氢呋喃
‑2‑
基)甲基磷酸钾(i
‑
002)的合成
[0324][0325]
向配备有水冷凝器和内部温度计的50ml 3n rbf中注入nmn(0.300g，0.897mmol，1当量)和5ml蒸馏去离子水，并混合以形成溶液。将此溶液使用冰/水浴冷却以使内部温度低于10℃。然后向此溶液中缓慢逐滴添加8.79ml的0.1m koh溶液，以防止温度升高，ph为6.0
‑
6.2。然后将烧瓶移出，并使用液氮冷冻无色溶液。当烧瓶冷冻后，将其连接至冷冻干燥机。这将缓慢除去水。一旦干燥，产物就呈现为无色固体。产量：334.1mg。熔点：105.3℃
‑
111.8℃(降解，校正的)，130℃时脱气)。分析数据。1h
‑
nmr(400mhz，d2o)δ＝9.61(s，1h)，9.35(d，1h)，9.02(d，1h)，8.33(dd，1h)，6.21(d，1h)，4.68(t，1h)，4.65(p，1h)，4.50(m，1h)，4.25(dq，1h)，4.08(dq，1h)ppm
[0326]
实施例3.((2r，3s，4r，5r)
‑5‑
(3
‑
氨基甲酰基吡啶
‑1‑
鎓
‑1‑
基)
‑
3，4
‑
二羟基四氢呋喃
‑2‑
基)甲基磷酸钙(i
‑
003)的合成
[0327][0328]
在氮气下向配备有水冷凝器、橡胶隔垫和内部温度计的50ml 2n rbf中注入nmn(0.100g，0.299mmol，1当量)和15ml蒸馏去离子水，并混合以形成溶液。将此溶液使用冰/水浴冷却以使内部温度低于5℃。然后向此溶液中添加caoh(11.1mg，0.149mmol，0.50当量)。在接下来的10分钟内，搅拌的悬浮液变成溶液，并且仅留下非常微弱的固体残余物。然后将所得的溶液冷冻干燥过夜，以得到无色固体。产量：0.103g。分析数据：1h
‑
nmr(400mhz，d2o)δ＝9.55(s，2h)，9.30(d，2h)，8.98(d，2h)，8.29(app t，2h)，6.18(d，2h)，4.62(m，4h)，4.46(m，2h)，4.22(m，2h)，4.03(m，2h)ppm。
[0329]
实施例4.((2r，3s，4r，5r)
‑5‑
(3
‑
氨基甲酰基吡啶
‑1‑
鎓
‑1‑
基)
‑
3，4
‑
二羟基四氢呋喃
‑2‑
基)甲基磷酸镁(i
‑
004)的合成
[0330][0331]
在氮气下向配备有水冷凝器、橡胶隔垫和内部温度计的50ml 2n rbf中注入nmn
(0.100g，0.299mmol，1当量)和15ml蒸馏去离子水，并混合以形成溶液。将此溶液使用冰/水浴冷却以使内部温度低于5℃。然后向此溶液中添加碳酸镁(碱性)(12.6mg，0.149mmol，0.50当量)。在接下来的10分钟内，搅拌的悬浮液变成溶液，并且仅留下非常微弱的固体残余物。ph的测量结果为5.8
‑
6.1。然后将所得的溶液冷冻干燥过夜，以得到无色固体。产量：0.105g。分析数据：1h
‑
nmr(400mhz，d2o)δ＝9.35(s，1h)，9.26(d，1h)，8.98(d，1h)，8.25(t，1h)，6.23(d，1h)，4.65(p，1h)，4.57(t，1h)，4.48(m，1h)，4.33(dq，1h)，4.19(dq，1h)ppm。
[0332]
实施例5.((2r，3s，4r，5r)
‑5‑
(3
‑
氨基甲酰基吡啶
‑1‑
鎓
‑1‑
基)
‑
3，4
‑
二羟基四氢呋喃
‑2‑
基)甲基磷酸锂(i
‑
005)
[0333][0334]
向配备有水冷凝器和内部温度计的50ml 2n rbf中注入nmn(0.100g，0.299mmol，1当量)和15ml蒸馏去离子水，并在氮气下混合以形成溶液/微弱的悬浮液(标注1)。将此溶液使用冰/水浴冷却(溶液的ph＝1.8)。然后通过注射器向此溶液中缓慢逐滴添加2.84ml的0.1m lioh溶液，以防止温度升高。在此添加后，ph为6.4
‑
6.7。然后将溶液转移至100ml 1n rbf中，并冷冻干燥过夜。这会得到淡黄色至淡米色固体。产量：95.0mg，93.4％。熔点：～130℃(降解
‑
脱气，校正的)。分析数据：1h
‑
nmr(400mhz，d2o)δ＝9.58(s，1h)，9.31(d，1h)，8.98(d，1h)，8.28(t，1h)，6.18(d，1h)，4.65(t，1h)，4.59(p，1h)，4.45(m，1h)，4.19(dq，1h)，4.02(dq，1h)ppm。
[0335]
实施例6.nad细胞测定
[0336]
基于以引用的方式并入本文的zhu和rand，plos one(2012)的nad循环方法来测定nad水平。将cov434细胞维持在6孔板中，并用浓度为200um的所指示的化合物处理4小时。将培养基除去，将板在冷pbs中洗涤，并将细胞从含有10mm烟酰胺、50mm tris hcl、0.1％triton x
‑
100的nad提取缓冲液中刮落。将细胞通过超声处理5秒进行均质化，并将样品在4度下以7,000g离心5分钟。取等分试样用于之后的蛋白质测定，然后使样品在4度下穿过14,000g下的10kda amicon过滤器30分钟，以从样品中除去蛋白质。将每个样品以技术性一式三份进行测量，其中将25μl样品添加到100μladh循环混合物(0.2mg/ml乙醇脱氢酶、2％乙醇、100mm tris ph 8.5)中。使样品在室温下循环10分钟，之后添加50μl mtt/pms溶液(0.1mm吩嗪硫酸甲酯、0.8mm 3
‑
(4，5
‑
二甲基噻唑
‑2‑
基)
‑
2，5
‑
二苯基溴化四唑鎓)、100mm tris
‑
hcl ph 8.5)。然后将板孵育15分钟，并在570nm处测量吸光度。从标准曲线推断nad浓度，并将其标准化为通过bca蛋白测定确定的蛋白浓度。
[0337]
上述测定的结果示于(下)表2中。通过所比较的盐与其母体对应物之间的按摩尔/摩尔的直接比较，获得倍数增加。
[0338]
表2
[0339][0340]
从细胞nad 测试中，令人惊讶和出乎意料地发现，与nmn相比，nmn的无机盐增加了源自人卵巢细胞的cov434细胞中nad 的水平。此类结果表明nmn的无机盐是可用于治疗与nad 缺乏有关的疾病和病症的分子。
[0341]
等效方案
[0342]
仅使用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文确切描述的具体实施方案的许多等效方案。此类等效方案意图涵盖在以下权利要求书的范围内。