一种用于检测新冠病毒N蛋白的双抗体夹心ELISA试剂盒的制作方法

技术特征：
1.一对适用于新冠病毒n蛋白检测的elisa试剂盒制备的单克隆抗体，其特征在于通过如下方法获得：免疫原制备：原核表达和真核表达的sars
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2病毒n蛋白纯化并经过60℃热处理30分钟与弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂混合，制备免疫原，交叉免疫小鼠；阳性杂交瘤细胞制备:取免疫鼠脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合，以真核表达且热处理后sars
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2病毒n蛋白为阳性抗原正筛选，真核表达且经过热处理的sars病毒n蛋白为阴性抗原负筛选间接elisa筛选得阳性杂交瘤细胞；单克隆抗体:阳性杂交瘤细胞亚克隆建株，腹水制备、纯化，即得22株单克隆抗体，对所述22株单克隆抗体进行生物素标记；夹心抗体配对:对所述22株单克隆抗体进行包被抗体与酶标抗体配对筛选，即得适用于检测新冠病毒的双抗体夹心elisa方法的包被抗体64360a#4:27、酶标抗体64360a#5:42。2.权利要求1所述的包被抗体64360a#4:27，其组成为包括：(a)轻链可变区(i)包含seq id no：01所示氨基酸序列的cdr1区。(ii)包含seq id no：02所示氨基酸序列的cdr2区。(iii)包含seq id no：03所示氨基酸序列的cdr3区。(b)重链可变区(i)包含seq id no：04所示氨基酸序列的cdr1区。(ii)包含seq id no：05所示氨基酸序列的cdr2区。(iii)包含seq id no：06所示氨基酸序列的cdr3区。3.权利要求1所述的检测抗体64360a#5:42，其组成为包括：(a)轻链可变区(i)包含seq id no：07所示氨基酸序列的cdr1区。(ii)包含seq id no：08所示氨基酸序列的cdr2区。(iii)包含seq id no：09所示氨基酸序列的cdr3区。(b)重链可变区(i)包含seq id no：10所示氨基酸序列的cdr1区。(ii)包含seq id no：11所示氨基酸序列的cdr2区。(iii)包含seq id no：12所示氨基酸序列的cdr3区。4.权利要求1所述的elisa检测试剂盒方法，其特征在于，所述包被抗体为64360a#4:27，包被浓度为5μg/ml
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1μg/ml，最适包被浓度为1μg/ml。5.权利要求1所述的elisa检测试剂盒方法，其特征在于，所述检测抗体64360a#5:42为经过辣根过氧化物酶或生物素标记的，辣根过氧化物酶(hrp)标记后的稀释比例为1:5000至1:20000，优选1:10000稀释，生物素标记后的稀释比例为1:5000至1:20000，优选1:5000稀释。6.权利要求1所述的elisa检测试剂盒方法，其特征在于最低检测限为100pg/ml。7.权利要求6所述的elisa检测试剂盒可用于新冠病毒sars
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2的n蛋白的检测，并且与sars病毒无交叉反应。

技术总结
本发明提供一种新冠病毒(SARS


技术研发人员：马晓飞 武鹏程 武雷 孔双泉 金丽珠 尹长城
受保护的技术使用者：北京华大蛋白质研发中心有限公司
技术研发日：2021.06.15
技术公布日：2021/10/11