含苯并咪唑结构的化合物及其制备方法和用途与流程

1.本发明涉及药物化学领域，公开了含苯并咪唑结构的化合物及其制备方法和用途。本发明还公开了含有所述苯并咪唑类化合物(i)或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体的组合物、及其在制备ros1抑制剂中的应用。本发明的化合物可用于治疗肿瘤。
技术背景
2.c-ros原癌基因1酪氨酸激酶(c-ros oncogene 1 tyrosine kinase,ros1)是1987年在鸟肉瘤rna肿瘤病毒中发现的，是一种编码受体酪氨酸激酶(rtk)的原癌基因，属于胰岛素受体家族。研究发现，ros1在正常人肺组织中不表达，但是其在正常成年人体内的肾脏、小脑、末梢神经组织、胃、小肠和结肠等组织中均有表达，特别是在肾脏中的表达最高。2007首次在肺腺癌患者组织中发现。研究发现，ros1的重排在非小细胞肺癌的突变比例约占1％-2％，主要存在于肺腺癌中。由于ros1与alk的激酶活性区域有70％的相似性，美国fda基于临床研究数据，于2016年3月11日批准将alk抑制剂克唑替尼用于治疗ros1突变的转移性非小细胞肺癌患者，也是第一个fda批准的用于治疗ros1突变的转移性非小细胞肺癌患者的靶向药物。2019年8月15日，美国fda加速批准恩曲替尼上市，用于治疗ros1阳性的转移性非小细胞肺癌(nsclc)成年患者。因此，ros1作为新的肺癌驱动基因，已经成为一个明确的肺癌治疗靶点。
3.虽然克唑替尼用于治疗ros1突变的nsclc临床试验取得了成功，但是从目前的临床结果发现，与大多数抗肿瘤药物一样，长期应用后也容易导致耐药性。另外，克唑替尼和恩曲替尼都是非特异性的ros1抑制剂，迄今为止尚未有高选择性的ros1抑制剂。因此，寻找活性强、安全性高的特异性ros1抑制剂具有重大的现实意义。


技术实现要素：

4.发明目的：本发明公开了一类含有苯并咪唑环结构的化合物，并提供了该类化合物的具体制备方法以及作为选择性ros1抑制剂的制药应用。
5.技术方案：
6.本发明公开了通式(i)的化合物或其药学上可接受的盐：
[0007][0008]
其中：r1代表h、cooh、coor4或conhr4，其中r4代表氢、c1～c6烷基；
[0009]
r2代表氢、c1～c5的烷基；
[0010]
r3代表任意取代的苯环或芳杂环，所述的芳香杂环是六元或五元芳杂环，所述的
取代基是卤素，c1～c3的烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基，oh、nr5r6或cn,其中r5、r6代表氢、c1～c6烷基；
[0011]
作为本发明的优选：
[0012]
r1代表h、cooh、coor4或conhr4，其中r4代表氢、c1～c6烷基；
[0013]
r2代表氢、c1～c3的烷基；
[0014]
r3代表任意取代的苯环或芳杂环，所述的芳香杂环是六元或五元芳杂环，所述的取代基是f、cl、br、i、ch3、c2h5、oh、nr5r6、och3、ocf3、cf3或cn,其中r5、r6代表氢、c1～c6烷基；
[0015]
其中：r1进一步优选conh2或conhch3；
[0016]
r2进一步优选h或ch3；
[0017]
r3进一步优选任意取代的苯基，所述的取代基优选f、cl、br、ch3、oh、nh2、och3、ocf3或cf3。
[0018]
更优选地，本发明所述的苯并咪唑类化合物选自以下化合物：
[0019]
[0020]
[0021][0022]
上述化合物的药学上可接受的盐为通式(i)化合物的酸加成盐，其中用于成盐的酸为：氯化氢、溴化氢、硫酸、碳酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或阿魏酸。
[0023]
本发明通式(i)的化合物可用下列方法制备：
[0024][0025]
其中：r1、r2、r3的定义同前；
[0026]
由化合物ii与化合物iii反应制备化合物iv，所用碱选自钠氢、碳酸钾、碳酸钠、叔丁醇钾、氢氧化钠、氢氧化钾、乙醇钠，优选钠氢；所用溶剂选自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、丙酮、1,4-二氧六环、四氢呋喃、乙醇、乙腈、丙酮、水或任意两者组成的混合溶剂，优选n,n-二甲基甲酰胺；
[0027]
由化合物iv与化合物v反应制备化合物vi，所用溶剂选自甲苯、n,n-二甲基甲酰胺、乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环、四氢呋喃、乙醇、乙腈、丙酮、水或任意两者组成的混合溶剂，优选四氢呋喃/水；所用碱选自乙醇钠、乙酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠或三乙胺，优选碳酸钾；所用催化剂是pd(pph3)4、pd(dppf)cl2、pd(pph3)2cl2或pd(oac)2，优选pd(pph3)4。
[0028]
由化合物vi经水解反应制备化合物vii，所用碱选自氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠，优选氢氧化钠；所用溶剂选自水、甲醇、乙醇、四氢呋喃或任意两者组成的混合溶剂，优选甲醇/水。
[0029]
由化合物vii与化合物viii反应制备化合物ix，所用缩合剂选自羰基二咪唑(cdi)、二环己基碳二亚胺(dcc)、二异丙基碳二亚胺(dic)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺(edci)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(pybop)，优选hatu；缚酸剂选自n,n-二异丙基乙胺或三乙胺，优选n,n-二异丙基乙胺。脱水剂选自冰乙酸、多聚磷酸、盐酸，乙酸酐，优选冰乙酸；
[0030]
由化合物ix经还原反应制备化合物i-a，所用溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、1,4-二氧六环、水或任意两者组成的混合溶剂，优选甲醇/四氢呋喃；所用还原剂选自铁粉/稀盐酸、氯化亚锡、硫化钠、钯碳、铂碳、雷尼镍，优选钯碳；
[0031]
本发明还公开了一种药物组合物，其含有上述通式(i)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。所述的化合物可以添加药学上可接受的载体制成常见的药用制剂，如片剂、胶囊、糖浆、悬浮剂、注射剂，可以加入香料、甜味剂、液体或固体填料或稀释剂等常用药用辅料。
[0032]
本发明所述的通式(i)化合物及其水合物、溶剂合物或结晶在制备选择性ros1靶点抑制剂药物中的应用也在本发明的保护范围内。
[0033]
进一步地，其中的ros1抑制剂可用于治疗肿瘤。
[0034]
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：
[0035]
本发明的化合物可以选择性地抑制ros1，可用于制备治疗非小细胞肺癌等癌症的药物，选择性ros1抑制剂的使用可减少脱靶效应，降低毒副作用，提高治疗安全性。
具体实施方式
[0036]
实施例1
[0037]
2-(1-((2-氨基-5-(4-甲基苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-1:r1＝conhch3,r2＝ch3,r3＝4-甲基苯基)的合成
[0038]
2-((5-溴-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸乙酯(iv-1)的合成
[0039]
将化合物ii(5g,22.8mmol)溶解在50ml n,n-二甲基甲酰胺中，冰浴冷却，加入氢化钠(1.10g,0.0274mol)，搅拌，撤去冰浴，缓慢滴加2-溴乙酸乙酯(iii-1)(1.50ml
×
3,34.20mmol)，滴加完毕后，加热至80℃恒温反应12h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)检测原料反应完全。停止加热，冷却至室温后，加入120ml水搅拌，乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)，合并有机层，用饱和氯化钠溶液洗涤(30ml
×
2)，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50:1)纯化得到米黄色固体6.88g，产率：94.43％，m.p.84.2-85.0℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.36(d,j＝1.6hz,1h,arh),8.33(d,j＝1.8hz,1h,arh),5.48(q,j＝6.8hz,1h,chch3),4.15(q,j＝7.1hz,2h,ch2ch3),1.54(d,j＝6.8hz,3h,chch3),1.17(t,j＝7.1hz,3h,ch2ch3).
[0040]
2-((2-硝基-5-(4-甲基苯基)吡啶-3-基)氧基)丙酸乙酯(vi-1)的合成
[0041]
将iv-1(1.00g,3.13mmol)和4-甲基苯硼酸(v-1)(0.64g,4.70mmol)溶解于20ml四氢呋喃中，用2ml水溶解碳酸钾(1.21g,8.77mmol)配置碳酸钾溶液，滴加到反应液中，再加入四(三苯基膦)钯(0.36g,0.31mmol)，氮气保护回流反应24h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)检测原料反应完全。停止加热，冷却至室温，反应体系减压蒸除溶剂，加入20ml乙酸乙酯和15ml分层，水相用乙酸乙酯萃取1次(15ml)，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤(15ml
×
3)，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50:1～10:1梯度洗脱)纯化，得到淡黄色固体1.03g，产率：99.62％，m.p.99.6-102.2℃。1h nmr(300mhz,cdcl3)δ(ppm):8.34(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.56(d,j＝1.6hz,1h,arh),7.46(d,j＝8.2hz,2h,arh),7.34(d,j＝8.0hz,2h,arh),4.94(q,j＝6.8hz,1h,ch3ch),4.26(q,j＝7.1hz,2h,
ch3ch2),2.45(s,3h,arch3),1.75(d,j＝6.8hz,3h,chch3),1.25(t,j＝7.2hz,3h,ch2ch3).
[0042]
2-((2-硝基-5-(4-甲基苯基)吡啶-3-基)氧基)丙酸(vii-1)的合成
[0043]
将vi-1(1.02g,3.09mmol)溶解于15ml甲醇和55ml水中，加入3ml 20％氢氧化钠溶液，加热至70℃反应1h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)检测原料反应完全。停止加热，反应体系冷却至室温，加入30ml乙酸乙酯萃取分液，收集水相，用6mol/l盐酸溶液调节ph至5，乙酸乙酯萃取(30ml
×
2)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得浅黄棕色固体0.81g，产率：86.74％，m.p.182.8-185.6℃。1h-nmr(300mhz,cdcl3)δ(ppm):8.38(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.60(d,j＝1.6hz,1h,arh),7.48(d,j＝8.0hz,2h,arh),7.35(d,j＝8.3hz,2h,arh),5.05(q,j＝6.9hz,1h,ch3ch),2.46(s,3h,arch3),1.81(d,j＝6.8hz,3h,chch3).
[0044]
n-甲基-2-(1-((2-硝基-5-(4-甲基苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(ix-1)的合成
[0045]
将化合物vii-1(0.48g,1.57mmol)，viii-1(0.26g,1.57mmol)和hatu(0.60g,1.57mmol)溶解于6ml n,n-二甲基甲酰胺，缓慢加入dipea(5.56ml,3.14mmol)后，将反应液放置室温下搅拌5h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全。反应体系滴加到35ml水中，析出白色固体，过滤，滤饼用少量水洗涤，烘干得到淡黄色固体后，溶于10ml冰醋酸，120℃回流反应1h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全，停止加热，反应体系冷却至室温，加入40ml水稀释，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(20ml
×
3)洗涤，无水硫酸镁干燥。抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1～3:1梯度洗脱)纯化，得到淡黄色固体0.39g，产率：86.09％，m.p.184-187℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.29(s,1h,nh),9.52(q,j＝3.9hz,1h,conhch3),8.45(s,2h,arh),7.86(d,j＝7.6hz,1h,arh),7.70(dd,j＝7.5,5.3hz,3h,arh),7.35(t,j＝7.2hz,3h,arh),6.42(q,j＝6.7hz,1h,ch3ch),2.90(d,j＝4.7hz,3h,nhch3),2.37(s,3h,arch3),1.89(d,j＝6.5hz,3h,chch3).
[0046]
2-(1-((2-氨基-5-(4-甲基苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-1)的合成
[0047]
将ix-1(0.39g,0.90mmol)溶于10ml四氢呋喃，加入0.1g 10％pd-c后，用氢气换气三次后，放置室温反应，tlc(二氯甲烷：甲醇＝25:1)检测原料反应完后，过滤，减压蒸除溶剂，所得残留物用乙酸乙酯打浆，得到白色固体200mg，产率：55.35％，m.p.185-188℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.18(s,1h,nh),9.63(q,j＝4.6hz,1h,conhch3),7.91-7.83(m,2h,arh),7.71(d,j＝7.9hz,1h,arh),7.59(d,j＝1.5hz,1h,arh),7.46(d,j＝8.1hz,2h,arh),7.35(t,j＝7.8hz,1h,arh),7.19(d,j＝7.9hz,2h,arh),6.14
–
6.06(m,1h,ch3ch),6.03(s,2h,arnh2),2.97(d,j＝4.7hz,3h,nhch3),2.31(s,3h,arch3),1.78(d,j＝6.4hz,3h,chch3).hr-ms(esi)m/z[m h]

calcd for c
21
h
20
n4o,402.1852；found:402.1923
[0048]
实施例2
[0049]
2-(1-((2-氨基-5-(4-氟苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-2:r1＝conhch3,r2＝ch3,r3＝4-氟苯基)的合成
[0050]
2-((5-(4-氟苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸乙酯(vi-2)的合成
[0051]
将iv-1(0.50g,1.57mmol)和4-氟基苯硼酸(v-2)(0.33g,2.35mmol)溶解于10ml四氢呋喃中，用1ml水溶解碳酸钾(0.61g,4.39mmol)配置碳酸钾溶液，滴加到反应液中，再加
入四(三苯基膦)钯(0.18g,0.16mmol)，氮气保护回流反应24h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)检测原料反应完全。停止加热，冷却至室温，反应体系减压蒸除溶剂，加入10ml乙酸乙酯和15ml分层，水相用乙酸乙酯萃取1次(10ml)，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤(10ml
×
3)，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.44g，产率：84.00％，m.p.130-132℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):8.47(d,j＝1.7hz,1h,arh),8.18(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.91(dd,j＝8.9,5.3hz,2h,arh),7.42(t,j＝8.9hz,2h,arh),5.63(q,j＝6.8hz,1h,ch3ch),4.14(q,j＝7.1hz,2h,ch3ch2),1.57(d,j＝6.8hz,3h,chch3),1.15(t,j＝7.1hz,3h,ch2ch3).
[0052]
2-((5-(4-氟苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸(vii-2)的合成
[0053]
将vi-2(0.44g,1.32mmol)溶解于5ml甲醇和20ml水中，加入1.5ml 20％氢氧化钠溶液，加热至70℃反应1h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)检测原料反应完全。停止加热，反应体系冷却至室温，加入10ml乙酸乙酯萃取分液，收集水相，用6mol/l盐酸溶液调节ph至5，乙酸乙酯萃取(10ml
×
2)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得黄色固体0.37g，产率：91.79％，m.p.167-169℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.29(s,1h,cooh),8.45(d,j＝1.6hz,1h,arh),8.11(d,j＝1.6hz,1h,arh),7.90(dd,j＝8.8,5.4hz,2h,arh),7.42(t,j＝8.9hz,2h,arh),5.53(q,j＝6.7hz,1h,ch3ch),1.56(d,j＝6.8hz,3h,chch3).
[0054]
n-甲基-2-(1-((2-硝基-5-(4-氟苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(ix-2)的合成
[0055]
将化合物vii-2(0.56g,1.68mmol)，viii-1(0.25g,1.52mmol)和hatu(0.64g,1.68mmol)溶解于6ml n,n-二甲基甲酰胺，缓慢加入dipea(5.95ml,3.36mmol)后，将反应液放置室温下搅拌5h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全。反应体系滴加到35ml水中，析出白色固体，过滤，滤饼用少量水洗涤，烘干得到淡黄色固体后，将固体溶于5ml冰醋酸，120℃回流反应1h，tlc检测原料反应完全，停止加热，反应体系冷却至室温，加入20ml水稀释，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml
×
3)洗涤，无水硫酸镁干燥。抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.15g，产率：24.09％，m.p.113-116℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):113.27(s,1h,nh),9.49(s,1h,conhch3),8.48(d,j＝8.4hz,2h,arh),7.90(dd,j＝9.0,5.5hz,3h,arh),7.85(d,j＝7.5hz,1h,arh),7.69(d,j＝7.6hz,1h,arh),7.41(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.44(q,j＝6.4hz,1h,ch3ch),2.88(d,j＝4.6hz,3h,nhch3),1.88(d,j＝6.3hz,3h,chch3)
[0056]
2-(1-((2-氨基-5-(4-氟苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-2)的合成
[0057]
将ix-2(0.15g,0.34mmol)溶于10ml四氢呋喃，加入0.05g 10％pd-c后，用氢气换气三次后，放置室温反应，tlc(二氯甲烷：甲醇＝25:1)检测原料反应完后，过滤，减压蒸除溶剂，所得残留物用乙酸乙酯打浆，得到白色固体120mg，产率：87.05％，m.p.198-201℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.25(s,1h,nh),9.71
–
9.64(m,1h,conhch3),7.91(d,j＝5.6hz,2h,arh),7.75(d,j＝7.9hz,1h,arh),7.69
–
7.58(m,3h,arh),7.38(t,j＝7.7hz,1h,arh),7.23(t,j＝8.8hz,2h,arh),6.23
–
6.00(m,3h,arnh
2,
ch3ch),2.99(d,j＝4.1hz,3h,nhch3),1.81(d,j＝6.4hz,3h,chch3).hr-ms(esi)m/z[m na]

calcd for c
22
h
20
fn5o2,428.1601；found:428.1495.
[0058]
实施例3
[0059]
2-(1-((2-氨基-5-(3-甲基苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-3:r1＝conhch3,r2＝ch3,r3＝3-甲基苯基)的合成
[0060]
2-((2-硝基-5-(3-甲基苯基)吡啶-3基)-氧基)丙酸乙酯(vi-3)的合成
[0061]
将iv-1(1.00g,3.13mmol)和3-甲基苯硼酸(v-3)(0.64g,4.70mmol)溶解于20ml四氢呋喃中，用2ml水溶解碳酸钾(1.22g,8.77mmol)配置碳酸钾溶液，滴加到反应液中，再加入四(三苯基膦)钯(0.36g,0.33mmol)，氮气保护回流反应24h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)检测原料反应完全。停止加热，冷却至室温，反应体系减压蒸除溶剂，加入15ml乙酸乙酯和20ml分层，水相用乙酸乙酯萃取1次(15ml)，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤(15ml
×
3)，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.89g，产率：86.08％，m.p.103-106℃。1h nmr(300mhz,cdcl3)δ(ppm):8.46(d,j＝1.6hz,1h,arh),8.14(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.68-7.58(m,2h,arh),7.45(t,j＝7.6hz,1h,arh),7.33(d,j＝7.4hz,1h,arh),5.64(q,j＝6.7hz,1h,ch3ch),4.15(q,j＝7.2hz,2h,ch3ch2),2.41(s,3h,arch3),1.58(d,j＝6.8hz,3h,chch3),1.16(t,j＝7.1hz,3h,ch2ch3).
[0062]
2-((2-硝基-5-(3-甲基苯基)吡啶-3-基)氧基)丙酸(vii-3)
[0063]
将vi-3(0.89g,2.69mmol)溶解于15ml甲醇和55ml水中，加入3ml 20％氢氧化钠溶液，加热至70℃反应1h，tlc检测原料反应完全。停止加热，反应体系冷却至室温，加入30ml乙酸乙酯萃取分液，收集水相，用6mol/l盐酸溶液调节ph至5，乙酸乙酯萃取(30ml
×
2)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得浅黄棕色固体0.70g，产率：86.09％，m.p.187-190℃。1h nmr(300mhz,cdcl3)δ(ppm):8.36(d,j＝1.6hz,1h,arh),7.58(d,j＝1.1hz,1h,arh),7.40(d,j＝7.2hz,1h,arh),7.37
–
7.28(m,3h,arh),5.04(q,j＝7.1hz,1h,ch3ch),2.45(s,3h,arch3),1.78(d,j＝6.6hz,3h,chch3).
[0064]
n-甲基-2-(1-((2-硝基-5-(3-甲基苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(ix-3)的合成
[0065]
将化合物vii-2(0.70g,2.32mmol)，viii-1(0.37g,2.32mmol)和hatu(0.88g,2.32mmol)溶解于6ml n,n-二甲基甲酰胺，缓慢加入dipea(8.22ml,4.64mmol)后，将反应液放置室温下搅拌5h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全。反应体系滴加到35ml水中，析出白色固体，过滤，滤饼用少量水洗涤，烘干得到淡黄色固体后，溶于20ml冰醋酸，120℃回流反应1h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全，停止加热，反应体系冷却至室温，加入40ml水稀释，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(20ml
×
3)洗涤，无水硫酸镁干燥。抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到淡黄色固体0.50g，产率：55.45％，m.p.193-196℃。
[0066]1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.26(s,1h,nh),9.50(d,j＝4.1hz,1h,conhch3),8.42(d,j＝9.5hz,2h,arh),7.86(d,j＝7.9hz,1h,arh),7.70(d,j＝7.7hz,1h,arh),7.57(d,j＝6.4hz,2h,arh),7.41(t,j＝7.8hz,1h,arh),7.38
–
7.27(m,2h,arh),6.41(q,j＝6.3hz,1h,ch3ch),2.88(d,j＝4.6hz,3h,nhch3),2.38(s,3h,arch3),1.89(d,j＝5.9hz,3h,chch3).
[0067]
2-(1-((2-氨基-5-(3-甲基苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-3)的合成
[0068]
将ix-3(0.50g,1.16mmol)溶于20ml四氢呋喃，加入0.10g 10％pd-c后，用氢气换气三次后，放置室温反应，tlc(二氯甲烷：甲醇＝25:1)检测原料反应完后，过滤，减压蒸除溶剂，所得残留物用乙酸乙酯打浆，得到灰白色固体140mg，产率：30.06％，m.p.185-188℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.19(s,1h,nh),9.63(q,j＝4.6hz,1h,conhch3),7.98(d,j＝1.9,1h,arh),7.87(dd,j＝7.6,1.0hz,1h,arh),7.72(dd,j＝8.0,1.0hz,1h,arh),7.70(d,j＝1.9hz,1h,arh),7.52
–
7.38(m,3h,arh),7.36(t,j＝7.8hz,1h,arh),7.08(t,j＝6.5hz,1h,arh),6.21(s,2h,arnh2),6.15(q,j＝6.3hz,1h,ch3ch),2.96(d,j＝4.7hz,3h,nhch3),2.51(s,3h,arch3),1.77(d,j＝6.4hz,3h,chch3).hr-ms(esi)m/z[m h]

calcd for c
23
h
23
n5o2,402.1852；found:402.1926.
[0069]
实施例4
[0070]
2-(1-((2-氨基-5-(3-氟苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-4:r1＝conhch3,r2＝ch3,r3＝3-氟苯基)的合成
[0071]
2-((5-(3-氟苯基)-2-硝基吡啶-3基)-氧基)丙酸乙酯(vi-4)的合成
[0072]
将iv-1(1.00g,3.13mmol)和3-氟苯硼酸(v-4)(0.66g,4.70mmol)溶解于20ml四氢呋喃中，用2ml水溶解碳酸钾(1.22g,8.77mmol)配置碳酸钾溶液，滴加到反应液中，再加入四(三苯基膦)钯(0.36g,0.33mmol)，氮气保护回流反应24h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)检测原料反应完全。停止加热，冷却至室温，减压蒸除溶剂，加入15ml乙酸乙酯和20ml分层，水相用乙酸乙酯萃取1次(15ml)，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤(15ml
×
3)，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.79g，产率：75.50％，m.p.100-105℃。1h nmr(300mhz,cdcl3)δ(ppm):8.33(d,j＝1.8hz,1h,arh),7.56(d,j＝1.8hz,1h,arh),7.52(dd,j＝8.0,2.2hz,1h,arh),7.35(d,j＝7.8hz,1h,arh),7.30
–
7.19(m,2h,arh),4.96(q,j＝6.8hz,1h,ch3ch),4.27(q,j＝7.1hz,2h,ch3ch2),1.75(d,j＝6.8hz,3h,chch3),1.28(t,j＝7.1hz,3h,ch2ch3).
[0073]
2-((5-(3-氟苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸(vii-4)的合成
[0074]
将vi-4(0.79g,2.36mmol)溶解于15ml甲醇和55ml水中，加入3ml 20％氢氧化钠溶液，加热至70℃反应1h，tlc检测原料反应完全。停止加热，反应体系冷却至室温，加入30ml乙酸乙酯萃取分液，收集水相，用6mol/l盐酸溶液调节ph至5，乙酸乙酯萃取(30ml
×
2)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得到淡黄色固体0.62g，产率：85.78％，m.p.188-190℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.35(s,1h,cooh),8.50(d,j＝1.8hz,1h,arh),8.17(d,j＝1.8hz,1h,arh),7.76(dd,j＝10.4,2.3hz,1h,arh),7.70(d,j＝7.4hz,1h,arh),7.61(td,j＝8.0,6.1hz,1h,arh),7.36(td,j＝8.5,2.6hz,1h,arh),5.54(q,j＝6.9hz,1h,ch3ch),1.56(d,j＝6.7hz,3h,chch3).
[0075]
2-(1-((5-(3-氟苯基)-2-硝基-吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(ix-4)的合成
[0076]
将化合物vii-4(0.62g,2.02mmol)，viii-1(0.31g,2.02mmol)和hatu(0.77g,2.02mmol)溶解于6ml n,n-二甲基甲酰胺，缓慢加入dipea(7.16ml,4.04mmol)后，将反应液放置室温下搅拌5h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全。反应体系滴加到35ml水中，析出白色固体，过滤，滤饼用少量水洗涤，烘干得到棕黄色固体后，溶于20ml冰醋酸，120℃回流反应1h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全，停止加热，反应体系冷
却至室温，加入40ml水稀释，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(20ml
×
3)洗涤，无水硫酸镁干燥。抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到淡黄色固体0.30g，产率：48.87％，m.p.210-213℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.27(s,1h,nh),9.62(q,j＝5.4hz,1h,conhch3)8.53(d,j＝8.6hz,1h,arh),8.10(s,1h,arh),7.90(s,1h,arh),7.85(d,j＝7.3hz,1h,arh),7.75(d,j＝9.8hz,1h,arh),7.67(d,j＝7.9hz,1h,arh),7.47(d,j＝4.7hz,2h,arh),7.34(d,j＝7.1hz,1h,arh),6.09(q,j＝6.2hz,1h,ch3ch),2.92(d,j＝4.0hz,3h,nhch3),1.85(d,j＝6.5hz,3h,chch3).
[0077]
2-(1-((2-氨基-5-(3-氟苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-4)的合成
[0078]
将ix-4(0.30g,0.34mmol)溶于20ml四氢呋喃，加入0.10g 10％pd-c后，用氢气换气三次后，放置室温反应，tlc(二氯甲烷：甲醇＝25:1)检测原料反应完后，过滤，减压蒸除溶剂，所得残留物用乙酸乙酯打浆，得到灰白色固体15mg，产率：5.36％，。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.19(s,1h,nh),9.76
–
9.51(m,1h,conhch3),7.89(t,j＝8.8hz,2h,arh),7.72(d,j＝8.1hz,1h,arh),7.60(d,j＝8.8hz,1h,arh),7.38
–
7.32(m,2h,arh),7.27(d,j＝7.5hz,1h,arh),7.14
–
7.02(m,1h,arh),6.95
–
6.84(m,1h,arh),6.16
–
5.96(m,3h,arnh2,chch3),2.96(d,j＝4.6hz,3h,conhch3),1.79(d,j＝6.0hz,3h,chch3).hr-ms(esi)m/z[m h]

calcd for c
22
h
20
fn5o2,406.1601；found:406.1680.
[0079]
实施例5
[0080]
2-(1
–
((2-氨基-5-(2-氟苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-5:r1＝conhch3,r2＝ch3,r3＝2-氟苯基)的合成
[0081]
2-((5-(2-氟苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸乙酯(vi-5)的合成
[0082]
将iv-1(1.00g,3.13mmol)和2-氟苯硼酸(v-5)(0.66g,4.70mmol)溶解于20ml四氢呋喃中，用2ml水溶解碳酸钾(1.22g,8.77mmol)配置碳酸钾溶液，滴加到反应液中，再加入四(三苯基膦)钯(0.36g,0.33mmol)，氮气保护回流反应24h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)检测原料反应完全。停止加热，冷却至室温，减压蒸除溶剂，加入15ml乙酸乙酯和20ml分层，水相用乙酸乙酯萃取1次(15ml)，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤(15ml
×
3)，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.83g，产率：79.32％，m.p.106-109℃。1h nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):8.30(d,j＝1.2hz,1h,arh),7.62(d,j＝1.5hz,1h,arh),7.50-7.43(m,2h,arh),7.33(dd,j＝7.8,1.3hz,1h,arh),7.27
–
7.20(m,1h,arh),4.92(q,j＝6.8hz,1h,ch3ch),4.26(q,j＝7.1hz,2h,ch3ch2),1.74(d,j＝6.8hz,3h,chch3),1.27(t,j＝7.1hz,3h,ch2ch3).
[0083]
2-((5-(2-氟苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸(vii-5)的合成
[0084]
将vi-5(0.83g,2.48mmol)溶解于15ml甲醇和55ml水中，加入3ml 20％氢氧化钠溶液，加热至70℃反应1h，tlc检测原料反应完全。停止加热，反应体系冷却至室温，加入30ml乙酸乙酯萃取分液，收集水相，用6mol/l盐酸溶液调节ph至5，乙酸乙酯萃取(30ml
×
2)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得到淡黄色固体0.30g，产率：39.50％，m.p.165-168℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.40(s,1h,cooh),8.33(s,1h,arh),8.04(s,1h,arh),7.68(t,j＝7.8hz,1h,arh),7.56(t,j＝7.1hz,1h,arh),7.47
–
7.35(m,2h,arh),5.40(q,j＝6.8hz,1h,ch3ch),1.55(d,j＝6.5hz,3h,chch3).
[0085]
2-(1-((5-(2-氟苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(ix-5)的合成
[0086]
将化合物vii-5(0.44g,1.43mmol)，viii-1(0.22g,1.43mmol)和hatu(0.54g,1.43mmol)溶解于6ml n,n-二甲基甲酰胺，缓慢加入dipea(5.03ml,2.86mmol)后，将反应液放置室温下搅拌5h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全。反应体系滴加到35ml水中，析出白色固体，过滤，滤饼用少量水洗涤，烘干得到棕黄色固体后，溶于10ml冰醋酸，120℃回流反应1h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全，停止加热，反应体系冷却至室温，加入20ml水稀释，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml
×
3)洗涤，无水硫酸镁干燥。抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到淡黄色固体0.11g，产率：32.81％，m.p.196-199℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.26(s,1h,nh),9.48(d,j＝4.8hz,1h,conhch3),8.41(s,1h,arh),8.34(s,1h,arh),7.86(d,j＝7.7hz,1h,arh),7.73
–
7.62(m,2h,arh),7.57(d,j＝6.4hz,1h,arh),7.42
–
7.35(m,3h,arh),6.32(q,j＝6.4hz,1h,ch3ch),2.88(d,j＝4.7hz,3h,nhch3),1.87(d,j＝6.5hz,3h,chch3).
[0087]
2-(1
–
((2-氨基-5-(2-氟苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-5)的合成
[0088]
将ix-5(0.11g,0.25mmol)溶于10ml四氢呋喃，加入0.02g 10％pd-c后，用氢气换气三次后，放置室温反应，tlc(二氯甲烷：甲醇＝25:1)检测原料反应完后，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到白色固体15mg，产率：14.80％，m.p.201-204℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.18(s,1h,nh),9.72
–
9.51(m,1h,conhch3),7.87(d,j＝7.3hz,1h,arh),7.79(s,1h,arh),7.72(d,j＝8.0hz,1h,arh),7.55
–
7.43(m,2h,arh),7.39
–
7.29(m,2h,arh),7.28
–
7.20(m,2h,arh),6.18(s,2h,arnh2),5.99(q,j＝6.0hz,1h,ch3ch),2.95(d,j＝3.8hz,3h,nhch3),1.78(d,j＝6.2hz,3h,chch3).hr-ms(esi)m/z[m h]

calcd for c
22
h
20
fn5o2,406.1601；found:406.1680.
[0089]
实施例6
[0090]
2-(1
–
((2-氨基-5-(4-乙基苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-6:r1＝conhch3,r2＝ch3,r3＝4-乙基苯基)的合成
[0091]
2-((5-(4-乙基苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸乙酯(vi-6)的合成
[0092]
将iv-1(1.00g,3.13mmol)和4-乙基苯硼酸(v-6)(0.70g,4.70mmol)溶解于20ml四氢呋喃中，用2ml水溶解碳酸钾(1.22g,8.77mmol)配置碳酸钾溶液，滴加到反应液中，再加入四(三苯基膦)钯(0.36g,0.33mmol)，氮气保护回流反应24h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)检测原料反应完全。停止加热，冷却至室温，减压蒸除溶剂，加入15ml乙酸乙酯和20ml分层，水相用乙酸乙酯萃取1次(15ml)，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤(15ml
×
3)，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.87g，产率：80.71％，m.p.75-78℃。1h nmr(300mhz,cdcl3)δ(ppm):8.35(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.56(d,j＝1.7hz,1h,arh),7.49(d,j＝8.2hz,2h,arh),7.37(d,j＝8.1hz,2h,arh),4.94(q,j＝6.8hz,1h,ch3ch),4.26(q,j＝7.1hz,2h,och2),2.75(q,j＝7.6hz,2h,arch2ch3),1.75(d,j＝6.8hz,3h,chch3),1.31(t,j＝7.6hz,3h,arch2ch3),1.27(t,j＝7.1hz,3h,och2ch3).
[0093]
2-((5-(4-乙基苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸(vii-6)的合成
[0094]
将vi-6(0.87g,2.53mmol)溶解于15ml甲醇和55ml水中，加入3ml 20％氢氧化钠溶
液，加热至70℃反应1h，tlc检测原料反应完全。停止加热，反应体系冷却至室温，加入30ml乙酸乙酯萃取分液，收集水相，用6mol/l盐酸溶液调节ph至5，乙酸乙酯萃取(30ml
×
2)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得到淡黄色固体0.65g，产率：81.22％，m.p.172-175℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.42(s,1h,cooh),8.43(d,j＝1.7hz,1h,arh),8.05(d,j＝1.4hz,1h,arh),7.74(d,j＝8.2hz,2h,arh),7.39(d,j＝8.2hz,2h,arh),5.50(q,j＝6.8hz,1h,ch3ch),2.68(q,j＝7.4hz,2h,ch3ch2),1.56(d,j＝6.8hz,3h,chch3),1.22(t,j＝7.6hz,3h,ch2ch3).
[0095]
2-(1-(5-(4-乙基苯基)-2-硝基-吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(ix-6)的合成
[0096]
将化合物vii-6(0.65g,2.05mmol)，viii-1(0.31g,2.05mmol)和hatu(0.78g,2.05mmol)溶解于6ml n,n-二甲基甲酰胺，缓慢加入dipea(7.27ml,4.10mmol)后，将反应液放置室温下搅拌5h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全。反应体系滴加到35ml水中，析出白色固体，过滤，滤饼用少量水洗涤，烘干得到棕黄色固体后，溶于10ml冰醋酸，120℃回流反应1h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全，停止加热，反应体系冷却至室温，加入20ml水稀释，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml
×
3)洗涤，无水硫酸镁干燥。抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到淡黄色固体0.53g，产率：66.47％，m.p.200-203℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.27(s,1h,nh),9.49(q,j＝4.3hz,1h,conhch3),8.44(d,j＝2.2hz,2h,arh),7.85(dd,j＝7.5,0.9hz,1h,arh),7.74
–
7.66(m,3h,arh),7.40
–
7.35(m,2h,arh),7.34(d,j＝7.8hz,1h,arh),6.41(q,j＝6.4hz,1h,ch3ch),2.88(d,j＝4.8hz,3h,nhch3),2.67(q,j＝7.6hz,2h,ch3ch2),1.88(d,j＝6.5hz,3h,chch3),1.21(t,j＝7.6hz,3h,ch2ch3).
[0097]
2-(1
–
((2-氨基-5-(4-乙基苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-6)的合成
[0098]
将ix-6(0.53g,1.19mmol)溶于20ml四氢呋喃，加入0.05g 10％pd-c后，用氢气换气三次后，放置室温反应，tlc(二氯甲烷：甲醇＝25:1)检测原料反应完后，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到灰白色固体100mg，产率：20.22％，m.p.200-203℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.17(s,1h,nh),9.62(q,j＝4.5hz,1h,conhch3),7.86(dd,j＝6.0,1.5hz,2h,arh),7.71(dd,j＝8.0hz,1.0hz,1h,arh),7.59(d,j＝1.8hz,1h,arh),7.47(d,j＝8.2hz,2h,arh),7.35(t,j＝7.8hz,1h,arh),7.21(d,j＝8.2hz,2h,arh),6.07(q,j＝6.4hz,1h,ch3ch),6.03(s,2h,arnh2),2.96(d,j＝4.7hz,3h,nhch3),2.60(q,j＝7.6hz,2h,ch3ch2),1.78(d,j＝6.5hz,3h,chch3),1.18(t,j＝7.6hz,3h,ch2ch3).hr-ms(esi)m/z[m h]

calcd for c
24
h
25
n5o2,416.2008；found:416.2081.
[0099]
实施例7
[0100]
2-(1
–
((2-氨基-5-(4-甲氧基苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-7:r1＝conhch3,r2＝ch3,r3＝4-甲氧基苯基)的合成
[0101]
2-((5-(4-甲氧基苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸乙酯(vi-7)的合成
[0102]
将iv-1(1.00g,3.13mmol)和4-甲氧基苯硼酸(v-7)(0.72g,4.70mmol)溶解于20ml四氢呋喃中，用2ml水溶解碳酸钾(1.22g,8.77mmol)配置碳酸钾溶液，滴加到反应液中，再加入四(三苯基膦)钯(0.36g,0.33mmol)，氮气保护回流反应24h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝
4:1)检测原料反应完全。停止加热，冷却至室温，减压蒸除溶剂，加入15ml乙酸乙酯和20ml分层，水相用乙酸乙酯萃取1次(15ml)，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤(15ml
×
3)，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.85g，产率：78.41％，m.p.72-75℃。1h nmr(300mhz,cdcl3)δ(ppm):8.30(s,1h,arh),7.51(s,2h,arh),7.48(s,1h,arh),7.03(d,j＝8.6hz,2h,arh),4.92(q,j＝6.4hz,1h,ch3ch),4.24(q,j＝7.1hz,2h,ch3ch2),3.88(s,3h,aroch3),1.72(d,j＝6.9hz,3h,chch3),1.25(t,j＝7.1hz,3h,ch2ch3).
[0103]
2-((5-(4-甲氧基苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸(vii-7)的合成
[0104]
将vi-7(0.85g,2.45mmol)溶解于15ml甲醇和55ml水中，加入3ml 20％氢氧化钠溶液，加热至70℃反应1h，tlc检测原料反应完全。停止加热，反应体系冷却至室温，加入30ml乙酸乙酯萃取分液，收集水相，用6mol/l盐酸溶液调节ph至5，乙酸乙酯萃取(30ml
×
2)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得到黄色固体0.71g，产率：91.10％，m.p.168-171℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.37(s,1h,cooh),8.42(d,j＝1.7hz,1h,arh),8.03(d,j＝1.8hz,1h,arh),7.80(d,j＝8.7hz,2h,arh),7.12(d,j＝8.8hz,2h,arh),5.52(q,j＝6.8hz,1h,ch3ch),3.83(s,3h,och3),1.56(d,j＝6.8hz,3h,chch3).
[0105]
2-(1-((5-(4-甲氧基苯基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(ix-7)的合成
[0106]
将化合物vii-7(0.71g,2.23mmol)，viii-1(0.34g,2.23mmol)和hatu(0.85g,2.23mmol)溶解于6ml n,n-二甲基甲酰胺，缓慢加入dipea(7.90ml,4.46mmol)后，将反应液放置室温下搅拌5h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全。反应体系滴加到35ml水中，析出白色固体，过滤，滤饼用少量水洗涤，烘干得到棕黄色固体后，溶于10ml冰醋酸，120℃回流反应1h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全，停止加热，反应体系冷却至室温，加入20ml水稀释，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml
×
3)洗涤，无水硫酸镁干燥。抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到淡黄色固体0.40g，产率：47.43％，m.p.202-204℃。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.23(s,1h,nh),9.61(s,1h,conhch3),8.73(d,j＝6.1hz,1h,arh),8.60(d,j＝6.1hz,2h,arh),8.20(d,j＝1.9hz,1h,arh),8.04(d,j＝1.1hz,1h,arh),7.78(d,j＝7.4hz,1h,arh),7.68(dd,j＝4.5,1.5hz,2h,arh),7.25(t,j＝7.7hz,1h,arh),6.06(q,j＝6.4hz,1h,ch3ch),3.94(s,3h,och3),2.92(d,j＝4.7hz,3h,nhch3),1.85(d,j＝6.4hz,3h,chch3).
[0107]
2-(1
–
((2-氨基-5-(4-甲氧基苯基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-7)的合成
[0108]
将ix-7(0.40g,0.96mmol)溶于20ml四氢呋喃，加入0.05g 10％pd-c后，用氢气换气三次后，放置室温反应，tlc(二氯甲烷：甲醇＝25:1)检测原料反应完后，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到白色固体200mg，产率：49.90％，m.p.184-187℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.19(s,1h,nh),9.63(q,j＝4.6hz,1h,conhch3),7.92
–
7.78(m,2h,arh),7.72(d,j＝7.8hz,1h,arh),7.58(s,1h,arh),7.50(d,j＝8.7hz,2h,arh),7.35(t,j＝7.8hz,1h,arh),6.95(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.16
–
5.89(m,3h,arnh2,ch3ch),3.77(s,3h,och3),2.96(d,j＝4.5hz,3h,nhch3),1.77(d,j＝6.4hz,3h,chch3).hr-ms(esi)m/z[m h]

calcd for c
23
h
23
n5o3,418.1801；found:418.1880.
[0109]
实施例8
[0110]
2-(1-((2-氨基-5-(1-甲基-1h-吡唑-3-基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-8:r1＝conhch3,r2＝ch3,r3＝1-甲基吡唑-3-基)的合成
[0111]
2-((5-(1-甲基-1h-吡唑-3-基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸乙酯(vi-8)的合成
[0112]
将iv-1(1.00g,3.13mmol)和1-甲基吡唑-4硼酸(v-8)(0.59g,4.70mmol)溶解于20ml四氢呋喃中，用2ml水溶解碳酸钾(1.22g,8.77mmol)配置碳酸钾溶液，滴加到反应液中，再加入四(三苯基膦)钯(0.36g,0.33mmol)，氮气保护回流反应24h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)检测原料反应完全。停止加热，冷却至室温，减压蒸除溶剂，加入15ml乙酸乙酯和20ml分层，水相用乙酸乙酯萃取1次(15ml)，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤(15ml
×
3)，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化，得到淡黄色固体0.50g，产率：49.87％，m.p.105-108℃。1h nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):8.25(s,1h,arh),7.80(d,j＝1.4hz,1h,arh),7.75(d,j＝1.4hz,1h,arh),7.45(s,1h,arh),4.91(q,j＝6.6hz,1h,ch3ch),4.26(q,j＝7.1hz,2h,ch3ch2),4.01(s,3h,nch3),1.74(d,j＝6.8hz,3h,chch3),1.27(t,j＝7.1hz,3h,ch2ch3).
[0113]
2-((5-(1-甲基-1h-吡唑-3-基)-2-硝基吡啶-3-基)氧基)丙酸(vii-8)的合成
[0114]
将vi-8(1.13g,3.35mmol)溶解于15ml甲醇和55ml水中，加入3ml 20％氢氧化钠溶液，加热至70℃反应1h，tlc检测原料反应完全。停止加热，反应体系冷却至室温，加入30ml乙酸乙酯萃取分液，收集水相，用6mol/l盐酸溶液调节ph至5，乙酸乙酯萃取(30ml
×
2)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得到棕黄色固体0.64g，产率：62.04％，m.p.242-244℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.20
–
8.08(m,2h,arh),7.53(d,j＝7.4hz,1h,arh),7.24(d,j＝7.1hz,1h,arh),6.63(q,j＝7.8hz,1h,ch3ch),3.94(s,3h,nch3),2.24(d,j＝3.7hz,3h,chch3).
[0115]
n-甲基-2-(1-(5-((1-甲基-1h-吡唑-3-基)-2-硝基-吡啶-3-基)氧基)乙基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲羧酰胺(ix-8)的合成
[0116]
将化合物vii-8(0.64g,2.19mmol)，viii-1(0.36g,2.19mmol)和hatu(0.83g,2.19mmol)溶解于6ml n,n-二甲基甲酰胺，缓慢加入dipea(7.76ml,4.38mmol)后，将反应液放置室温下搅拌5h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全。反应体系滴加到35ml水中，析出白色固体，过滤，滤饼用少量水洗涤，烘干得到棕黄色固体后，溶于10ml冰醋酸，120℃回流反应1h，tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测原料反应完全，停止加热，反应体系冷却至室温，加入20ml水稀释，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml
×
3)洗涤，无水硫酸镁干燥。抽滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到淡黄色固体0.21g，产率：31.74％，m.p.180-183℃。1h nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):13.22(s,1h,nh),9.52(s,1h,conhch3),8.43
–
8.33(m,3h,arh),8.10(s,1h,arh),7.85(d,j＝8.4hz,1h,arh),7.68(d,j＝7.1hz,1h,arh),7.40
–
7.27(m,1h,arh),6.32(q,j＝6.4hz,1h,ch3ch),3.89(s,3h,nch3),2.93(d,j＝2.2hz,3h,nhch3),1.87(d,j＝4.8hz,3h,chch3).
[0117]
2-(1-((2-氨基-5-(1-甲基-1h-吡唑-3-基)吡啶-3-基)氧基)乙基)-n-甲基-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(i-8)的合成
[0118]
将ix-8(0.21g,0.50mmol)溶于10ml四氢呋喃，加入0.02g 10％pd-c后，用氢气换气三次后，放置室温反应，tlc(二氯甲烷：甲醇＝25:1)检测原料反应完后，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到棕黄色固体10mg，产率：5.11％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):
550向384孔反应板中转移250nl的100倍终浓度化合物，加入10μl终浓度为1.25nm alk或1.25nm c-met或0.3nm ros1的激酶溶液，室温预孵育10分钟(阴性对照孔含10μl激酶缓冲液和250nl 100％dmso；阳性对照孔含10μl的激酶溶液和250nl 100％dmso)。在alk上加入15μl终浓度为30μm的atp和3μm底物22号肽混合溶液起始反应，室温反应25分钟；在c-met上加入15μl终浓度为40.84μm的atp和3μm底物2号肽混合溶液起始反应，室温反应60分钟；在ros1上加入15μl终浓度为26.7μm的atp和3μm底物22号肽混合溶液起始反应，室温反应15分钟，加入30μl含edta的终止检测液停止激酶反应。用caliper ez reader读取转化率。换算抑制率％＝(阳性对照转化率均值％-样品转化率％/(阳性对照转化率均值％-阴性对照转化率均值％)。其中：阴性对照孔，代表没有酶活孔的转化率读数；阳性对照孔，代表没有化合物抑制孔的转化率读数。以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件graphpad prism 5的log(inhibitor)vs.response-variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic
50
值。
[0131]
计算公式：y＝bottom (top-bottom)/(1 10^((logic
50-x)*hillslope))。
[0132]
(2)ba/f3-cd74-ros1细胞抗增殖作用实验
[0133]
实验试剂：
[0134]
ba/f3-cd74-ros转株细胞为实验室内部配制，rpmi 1640培养基和胎牛血清购自biological industries公司，青霉素-链霉素溶液购自corning公司，cell titer glo购自promega公司。
[0135]
实验方法：
[0136]
细胞培养：将细胞用重悬，使用自动细胞计数器计数。根据ba/f3播种密度，每孔2000个细胞，将细胞悬浮液稀释至所需密度。每个孔铺95μl细胞，37℃培养稳定平衡。
[0137]
化合物配制：将化合物溶于dmso，配成20mm储存液，-20℃避光保存待用。细胞培养好后，将化合物配成终浓度200倍的稀释溶液。用培养基稀释化合物，配成终浓度20倍的化合物。每孔加5μl化合物，以加入同样体积的dmso的孔作为对照，37℃，5％co2培养72小时。
[0138]
细胞检测：将细胞板平衡到室温。每孔加40μl celltiter-试剂，振2分钟，静置10分钟。用spectramax paradigm检测。
[0139]
数据分析：
[0140]
使用graphpad prism 5计算ic
50
。其中，max signal为阳性对照孔，只有和化合物同等体积的dmso。min signal为阴性对照孔，只有培养基。
[0141]
(3)实验结果：
[0142]
对本发明部分化合物进行体外ros1、c-met、alk抑制活性筛选，结果见表1。
[0143]
ic
50
:0.01～0.5μm(记为：a)；ic
50
:0.5～5.0μm(记为：b)；ic
50
:>5.0μm(记为：c)。
[0144]
表1.部分化合物对ros1、c-met、alk的抑制活性
[0145][0146][0147]
表1结果显示，本发明化合物对ros1均具有较好的抑制活性，对alk和c-met的抑制活性较弱，其中化合物i-1、i-2、i-3、i-6、i-7和i-9对ros1的选择性较高。
[0148]
对本发明部分化合物进行体ba/f3-cd74-ros1细胞的抑制活性筛选，结果见表2。ic
50
:10.0～100.0nm(记为：a)；ic
50
:100.0～1000.0nm(记为：b)；ic
50
:>1000nm(记为：c)。
[0149]
表2部分化合物对ba/f3-cd74-ros1细胞的抑制活性
[0150][0151]
表2结果显示，本发明化合物对ros1高表达的细胞均有较好的抑制活性。