一种真皮替代物及其制备方法与流程

1.本发明涉及生物材料技术领域，尤其涉及一种真皮替代物及其制备方法。


背景技术：

2.目前，诸如烧伤、外伤、切除、皮瓣去除等导致的全层皮肤缺损均可适用真皮替代物进行创面愈合。
3.目前真皮替代物常采用高分子膜(例如硅胶膜)来作为外层膜，如此真皮替代物的透气能力无法接近皮肤原有的功能；此外，真皮替代物使用时还存在这微生物定殖的风险，从而影响创面的恢复，甚至可能造成感染。
4.因此，亟需一种真皮替代物及其制备方法。


技术实现要素：

5.本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种真皮替代物及其制备方法。
6.为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
7.本发明的第一方面是提供一种真皮替代物，按重量份数计，包括：
[0008][0009]
本发明的第二方面是提供一种如上所述的真皮替代物的制备方法，步骤包括：
[0010]
s1、取湿态的脱细胞基质，将其剪成碎片后，在短时间内进行高速捣碎；
[0011]
s2、取所述脱细胞基质、冰醋酸以及纯化水，混合后降温；
[0012]
s3、在一定的频率下进行匀浆，将收集到的料液再进行若干次匀浆后，滤除粗颗粒，并采用naoh溶液，调节所滤得浆料的ph，离心后即得所述脱细胞基质纤维；
[0013]
s4、取所述脱细胞基质纤维以及所述胶原，混匀并制成水系分散液后，调节其ph至4
‑
8，混合分散均匀后，覆盖上所述脱细胞生物膜，并真空冷冻干燥，切割、包装、灭菌后，即得所述真皮替代物。
[0014]
优选地，步骤s1中，所剪成的碎片小于1cm2，高速捣碎的时间不超过1min。
[0015]
优选地，步骤s2中，按重量百分比取0.5％
‑
3.0％的所述脱细胞基质、0.01％
‑
0.1％的冰醋酸以及余量的纯化水，混合后降温至2℃
‑
8℃。
[0016]
优选地，步骤s3中，匀浆的频率为30hz
‑
35hz。
[0017]
优选地，步骤s3中，匀浆的总次数为6次。
[0018]
优选地，步骤s3中，所采用naoh溶液的浓度为8％
‑
10％。
[0019]
优选地，步骤s3中，浆料调节后的ph为7.5
‑
8.0。
[0020]
优选地，步骤s4中，调节其ph至4
‑
8后，根据含固量添加所述银的盐溶液或盐分散
液，再混合分散均匀。
[0021]
优选地，步骤s4中，银盐包括：硫酸银、氯化银、磺胺嘧啶银、氧化银或纳米银中的至少一种。
[0022]
本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
[0023]
本发明的真皮替代物外层为脱细胞生物膜，可保护创面并防止创面水分过度蒸发，相较于硅胶膜等高分子膜，透气能力更接近皮肤原有的功能；内层为脱细胞基质纤维，可替代缺损的真皮，促进肉芽的生长，以形成用于二次植入表皮的基底；其中所分散的银离子，可抑制微生物定殖，增加创面恢复效果。
附图说明
[0024]
图1为本发明实施例1中所制得的真皮替代物的结构示意图。
具体实施方式
[0025]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0026]
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0027]
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。
[0028]
实施例1
[0029]
如图1所示，本实施例提供一种真皮替代物，其制备的步骤包括：
[0030]
s1、取湿态的脱细胞基质，将其剪成小于1cm2的碎片后，在短时间内(不超过1min)进行高速捣碎；
[0031]
s2、按重量百分比取0.5％(湿重)的所述脱细胞基质、0.01％的冰醋酸以及余量的纯化水，混合后降温至2℃；
[0032]
s3、在30hz的频率下进行匀浆，将收集到的料液再进行5次匀浆后，滤除粗颗粒，并采用浓度为8％的naoh溶液，调节所滤得浆料的ph至7.5，离心后即得所述脱细胞基质纤维；
[0033]
s4、取80份所述脱细胞基质纤维以及20份胶原，混匀并制成水系分散液后，调节其ph至4，混合分散均匀后，覆盖上60份脱细胞生物膜，并真空冷冻干燥，切割、包装、灭菌后，即得所述真皮替代物。
[0034]
实施例2
[0035]
本实施例提供另一种真皮替代物，其制备的步骤包括：
[0036]
s1、取湿态的脱细胞基质，将其剪成小于1cm2的碎片后，在短时间内(不超过1min)进行高速捣碎；
[0037]
s2、按重量百分比取3.0％(湿重)的所述脱细胞基质、0.1％的冰醋酸以及余量的纯化水，混合后降温至8℃；
[0038]
s3、在35hz的频率下进行匀浆，将收集到的料液再进行5次匀浆后，滤除粗颗粒，并采用浓度为10％的naoh溶液，调节所滤得浆料的ph至8.0，离心后即得所述脱细胞基质纤
维；
[0039]
s4、取99份所述脱细胞基质纤维以及1份胶原，混匀并制成水系分散液后，调节其ph至8，并根据含固量添加3份纳米银分散液，混合分散均匀后，覆盖上80份脱细胞生物膜，并真空冷冻干燥，切割、包装、灭菌后，即得所述真皮替代物。
[0040]
实施例3
[0041]
将试验动物固定在大鼠固定器上，剃除手术区域被毛；使用碘伏对手术区域进行消毒；注射3％的戊巴比妥钠对试验动物进行麻醉；切开表皮，抵达真皮层，制造大小约1.5cm
×
1.5cm的表皮破损区域，切除区域内表皮；留每只动物创口的照片；在实验组动物背部敷贴实施例1所制得的真皮替代物，观察并记录止血时间；在对照动物背部敷贴对照样品(普通医用纱布，即经环氧乙烷灭菌的无菌纱布，例如苏械注准20162140204)，观察止血时间，并记录；然后，实验组和对照组在真皮替代物上覆盖无菌纱布；随后使用弹性医用胶布固定；每天观察创口区域：
①
如目测不能观察到真皮替代物外观，需要继续服帖新的真皮替代物，直至伤口愈合；
②
观察伤口是否发白，如果发白则指示存在感染情况，应当清洗创口，更换真皮替代物，并记录；如目测不能观察到真皮替代物外观，需要继续服帖新的真皮替代物，直至伤口愈合；伤后愈合后，记录愈合时间，观察瘢痕情况(拍摄照片)，最后处死动物，取试验区域皮肤展平固定，修洁，取创口中心部位常规石蜡包埋，切片，进行常规h
‑
e染色，在显微镜下观察愈合情况、炎细胞浸润、血管。
[0042]
结果：实施例1所制得的真皮替代物敷在所创造的伤口上后，伤口立刻停止渗血，试验材料被少量血液和组织液浸润，进而与其快速形成结痂；在整个实验过程中用实施例1所制得的真皮替代物和对照品敷贴的伤口均未出现渗血或脓液渗出等感染症状；结痂脱落后，暴露白色柔软新生皮肤，后逐渐长出新生被毛。
[0043]
由于本实施例只切除实验用鼠的表皮层，并不破坏其真皮层，所以表皮愈合后会逐渐生长出新的被毛；本实施例中以创口部位重新开始生长被毛判定为创口完全愈合。如表1所示，实验组和对照组伤口愈合时间均为20天左右且无明显差异，但对照组在27天时有3只大鼠仍旧没有生长出明显的被毛。
[0044]
表1
[0045]
观察项目实验组对照组p值平均愈合时间(天)20.7
±
5.6820.6
±
5.540.97
[0046]
表2
[0047]
[0048][0049]
如表2所示，显微镜下观察创口处完全愈合，无血红细胞浸润，炎性细胞几乎为零，无纤维化痕迹，部分切片可见表皮细胞与基质细胞中间有血管生成，个别切片可见清晰毛囊及根部被毛。整体清晰可见扁平复层表皮细胞覆盖在圆润基细胞之上，形成完整的皮肤结构。
[0050]
综上所述，本发明的真皮替代物能够迅速吸收渗出的血液及组织间液，并与其一同快速结痂，其痂皮可保护创口避免进一步感染，因此可排除感染等因素对伤口愈合时间的影响。另外覆盖本发明的创口与覆盖对照品的创口的愈合时间无明显差异，但从愈合完成度方面评价，实验组略好于对照组。镜下观察伤口切片，本发明覆盖伤口与对照品覆盖伤口无明显差异，均形成具有功能性的完整皮肤结构。
[0051]
以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书及图示内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。