内侧神经节隆起前体细胞的体外产生的制作方法

技术特征：
1.一种提供gaba能中间神经元富集的细胞培养物的方法，所述方法包括：a)提供培养基中的灵长类动物多能干(pps)细胞；b)向所述培养基中引入包含以下的因子：i)音速刺猬(shh)路径的活化剂，ii)smad抑制剂；iii)wnt路径抑制剂，iv)神经诱导补充物，和v)notch路径抑制剂；其中步骤a)和b)导致gaba能中间神经元富集的细胞培养物。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述pps细胞为人诱导多能干细胞。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述pps细胞在饲养层不存在下培养。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述pps细胞以悬浮培养进行培养。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中两种或更多种smad抑制剂被引入所述培养物中。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的方法，其中抗凋亡剂被引入所述培养物中。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗凋亡剂是rho
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相关激酶(rock)的抑制剂。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的方法，其中所述pps细胞经过重组方法处理以引入转基因或敲除内源基因。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的方法，还包括分离所述gaba能中间神经元。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述分离包括以机械方式解离拟胚体以产生单细胞或细胞群；将解离的细胞接种在粘附基质上以提供粘附单层；和培养所述粘附单层。11.根据权利要求9所述的方法，其中所述分离包括使用对所述gaba能中间神经元特异性的亲和标签。12.根据权利要求9所述的方法，其中所述分离包括以酶的方式解离拟胚体以产生单细胞或细胞群；将解离的细胞接种在粘附基质上以提供粘附单层；和培养所述粘附单层。13.一种方法，其包括：a)提供培养基中的灵长类动物多能干(pps)细胞；b)向所述培养基中引入包含以下的因子：i)音速刺猬(shh)路径的活化剂，ii)smad抑制剂；和iii)wnt路径抑制剂，以产生mge前体细胞富集的细胞培养物；和c)培养所述mge前体细胞以产生psa
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ncam阴性和/或dlx2阴性细胞。14.根据权利要求13所述的方法，其中步骤c)包括在notch路径抑制剂不存在下培养所述mge前体细胞。15.根据权利要求13或14所述的方法，其中所述mge前体细胞表达nkx2.1。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述mge前体细胞表达olig2。

技术总结
提供了体外生成MGE前体细胞以及富集MGE前体细胞的组合物的方法和系统。所述方法和系统有效产生MGE前体。本文中所公开的方法和系统提供分化成功能性GABA能中间神经元的功能性MGE前体。性MGE前体。性MGE前体。


技术研发人员：C
受保护的技术使用者：加利福尼亚大学董事会
技术研发日：2014.03.14
技术公布日：2021/10/29