一种超声辅助酶解制备单环刺螠内脏抗氧化肽的方法与流程

技术特征：
1.一种单环刺螠内脏抗氧化肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）单环刺螠内脏脱脂、烘干、粉碎，过筛；（2）将单环刺螠内脏粉按一定比例的料液比进行溶液配制，然后加入适量木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶，保持反应体系在最适ph条件下进行超声处理；（3）超声处理0.5~1h后转入常规酶解；（4）酶解结束后，高温灭活蛋白酶，离心收集上清液；（5）在上清液中添加颗粒状活性炭脱色除味，随后真空抽滤，收集滤液；（6）将滤液依次进行超滤和sephadex g
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25凝胶层析步骤，收集层析滤液；（7）采用lc
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ms/ms鉴定单环刺螠内脏抗氧化肽，分别为p1、p2和p3。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中单环刺螠内脏粉按料液比为1：25~1：30，然后加入1~2%木瓜蛋白酶、2~3%胰蛋白酶、1~2%碱性蛋白酶，保持反应体系在ph 7~8条件下进行超声处理。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中超声条件为700w以下、20~40 min，转入常规酶解，即酶解过程中保持ph7~8、温度40~60℃下酶解1~2 h。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中的灭活蛋白酶条件为95℃10~20min；离心时间为10 min，转速为7500 r/min。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（5）中颗粒状活性炭添加量为1%~3%，反应条件为60℃2h以内。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（6）中的超滤步骤是将蛋白溶液依次通过分子量为30 kda和10 kda的超滤膜，从而获得蛋白分子量< 10 kda的蛋白溶液。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（6）中的sephadex g
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25凝胶层析步骤是将冻干后的<10 kda组分配制成一定浓度上样，进样体积为5~10 ml，洗脱速度为0.2~0.6ml/min。8.根据权利要求1
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7任一所述制备方法制备的单环刺螠内脏抗氧化肽，其特征在于：包括p1、p2和p3，所述p1的氨基酸序列如seqidno.1所示，具体为：vtsalvgpr；所述p2的氨基酸序列如seqidno.2所示，具体为：iglgdeglrr；所述p3的氨基酸序列如seqidno.3所示，具体为：tkirneisdlner。9.如权利要求1
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7任一所述的制备方法或制备权利要求8的抗氧化肽的制备方法在单环刺螠多肽提取中应用。10.如权利要求8所述的抗氧化肽或权利要求1
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7任一所述制备方法制备的抗氧化肽在制备氧化损伤药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种单环刺螠内脏抗氧化肽的制备方法。制备过程为：首先将单环刺螠内脏脱脂烘干粉碎；然后加入蛋白酶结合超声辅助酶解；酶解结束后高温灭活蛋白酶，并离心收集上清液；接着添加颗粒状活性炭脱色除味；采用超滤和Sephadex G


技术研发人员：贺晓云 陆佳俊 黄昆仑 刘清亮 许文涛 孙艳丽 周秀芝 张瑞英
受保护的技术使用者：山东拜尔检测股份有限公司
技术研发日：2021.09.16
技术公布日：2021/10/23