一种适于制备高效价感受态细胞的缓冲液及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种适于制备高效价感受态细胞的缓冲液，其特征在于：所述缓冲液命名为tss
‑
hi缓冲液，其配方是：聚乙二醇8000 60g/l
‑
140g/l、二甲基亚砜50
±
5ml/l、甘油80ml/l
‑
120ml/l、氯化镁1.9g/l
‑
4.76g/l、用胰化蛋白胨10g/l、酵母提取物5g/l、氯化钠10g/l配制的lb液体培养基补齐到1l并用盐酸调ph至6.1
±
0.1，121℃高压灭菌后加入无菌4m的氯化锰25.6ml/l
‑
52.6ml/l。2.根据权利要求1所述适于制备高效价感受态细胞的缓冲液，其特征在于：所述tss
‑
hi缓冲液的配方是：聚乙二醇8000 100g/l、二甲基亚砜50ml/l、甘油100ml/l、氯化镁1.9g/l、用胰化蛋白胨10g/l、酵母提取物5g/l、氯化钠10g/l配制的lb液体培养基补齐到1l并用盐酸调ph至6.1，121℃高压灭菌后加入无菌4m的氯化锰36.2ml/l。3.权利要求1或2所述适于制备高效价感受态细胞的缓冲液在制备大肠杆菌高效价的感受态细胞实现dna的高效转化中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述制备大肠杆菌高效价的感受态细胞的方法是：从固体lb平板挑取大肠杆菌单克隆至含lb液体培养基的试管中，培养12小时后转接至50ml三角瓶中使菌的初始od
600
＝0.02，继续培养待od
600
长至0.5时收菌；冰浴10min后4000rpm,10min,4℃离心；弃上淸，加入1ml tss
‑
hi缓冲液并在冰上轻混使菌悬浮，避免产生气泡；再4000rpm,10min,4℃离心；弃上清，加入1ml tss
‑
hi缓冲液在冰上轻混匀，冰浴10min后按30μl/管分装，
‑
80℃存储；所述dna转化的方法是：将5μl kcm液、设定量dna和h2o补齐至25μl，再加入25μl制得的高效价感受态细胞轻柔混匀，冰浴30min，42℃热击90s，冰上放置2min，加250μl lb液体培养基恢复培养1h后涂布相应抗性的平板；其中所述kcm液的配方是：氯化钾37.27g/l,氯化钙16.65g/l,氯化镁23.8g/l，余量为水。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述大肠杆菌是大肠杆菌bw3kd、omnimax、xl1
‑
blue mfr’、stble3、mach1或stbl2。

技术总结
本发明公开了一种适于制备高效价感受态细胞的缓冲液，命名为TSS


技术研发人员：夏永振 杨雨晴 荀鲁盈
受保护的技术使用者：山东大学
技术研发日：2021.07.14
技术公布日：2021/10/15