含有产bacillaene的细菌的组合物或其制剂的制作方法

含有产bacillaene的细菌的组合物或其制剂1.本发明涉及产bacillaene的细菌作为益生菌饲料成分的用途和含有产bacillaene的细菌的组合物，以及bacillaene或其衍生物用于治疗细菌性疾病的用途。2.现有技术中先前已公开过某些细菌菌株在饲料工业中作为益生菌成分的用途。益生菌(也称为“直接饲喂微生物”或“dfm”)的功能是通过支持有益细菌的生长和/或抑制致病细菌的生长，以积极的方式影响肠道微生物区系。理想情况下，通过使用益生菌，抗生素生长促进剂(agp)的使用变得多余。但除此之外，益生菌还需要具有其他功能，例如有助于特定饲料成分的消化。3.因此，鉴于现有技术，需要益生菌以积极的方式影响肠道微生物区系，并在此基础上满足至少一种另外的功能。4.bacillaene是一种属于多烯类的次生代谢物，其是从枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)菌株的发酵液中发现并分离出来的(pateletal.,thejournalofantibiotics(1995),vol.48(9),997‑1003)。5.根据本发明，通过用敲除突变株进行实验，出乎意料地发现，bacillaene能够有效抑制商业相关病原体的生长，例如特别是产毒素的产气荚膜梭菌(clostridiumperfringens)(其为坏死性肠炎的原因)、副溶血性弧菌(vibrioparahaemolyticus)(其为甲壳类动物疾病(如早期必死性综合征(earlymortalitysyndrome))的原因)以及肠道沙门氏菌(salmonellaenterica)(其为食物中毒的主要原因之一)。因此，结果证明产bacillaene的细菌适合用作益生菌饲料和食物成分，并且bacillaene或其衍生物适合治疗细菌性疾病。6.因此，本发明的第一个主题为组合物，特别是食物、饲料和治疗组合物以及用于处理植物的组合物，其包含bacillaene或其衍生物，特别是产bacillaene的微生物和/或其含有bacillaene的制剂。7.根据本发明，“bacillaene的衍生物”特别是指bacillaene的氢化变体，特别是文献中记载的dihydrobacillaene。8.因此，本发明的另一主题还为产bacillaene的微生物或其制剂作为益生菌饲料或食物成分的用途。9.本发明的另一主题还特别是产bacillaene的微生物，其适合作为益生菌。为了适合作为益生菌，根据本发明的微生物应优选满足某些标准，例如耐胆汁性(bileresistance)、耐热性和/或在厌氧条件生长的能力。10.根据本发明的产bacillaene的细菌尤其能够抑制选自以下的菌株：梭菌(clostridium)，优选产气荚膜梭菌(c.perfringens)，特别是产气荚膜梭菌atcc13124，沙门氏菌(salmonella)，优选肠道沙门氏菌(salmonellaenterica)，特别是肠道沙门氏菌肠炎亚种dsm14221(salmonellaentericasubsp.entericaenteritidisdsm14221)，大肠杆菌(e.coli)，特别是大肠杆菌atcc11775，以及弧菌(vibrio)，优选副溶血性弧菌(vibrioparahaemolyticus)，特别是副溶血性弧菌dsm10027和/或副溶血性弧菌tw01。11.根据本发明的产bacillaene的微生物优选为细菌，且更优选选自：芽孢杆菌(bacillus)，特别是枯草芽孢杆菌(b.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(b.amyloliquefaciens)、甲基营养型芽孢杆菌(b.methylotrophicus)和萎缩芽孢杆菌(b.atropheus)，以及类芽孢杆菌(paenibacillus)，特别是多粘类芽孢杆菌(p.polymixa)和坚韧类芽孢杆菌(p.durus)。在本发明的非常优选的实施方案中，产bacillaene的微生物为解淀粉芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌。12.根据本发明的产bacillaene的微生物优选进一步的特征在于其能够在2mm胆汁存在时生长，优选在4mm胆汁存在时生长，尤其特征在于，在2mm胆汁存在时，auc5性能值至少为0.5，优选至少0.65，尤其是至少0.8，以及auc10性能值至少为1.2，优选至少1.4,尤其是至少1.6,和/或其能够在0.3wt.‑％胆汁存在时，特别是在0.3wt.‑％鸡胆汁存在时和/或在0.3wt.‑％猪胆汁存在时生长，优选地，特征在于能够在暴露于0.3wt.‑％胆汁，特别是0.3wt.‑％鸡胆汁和/或0.3wt.‑％猪胆汁时，存活至少3小时，优选至少5或8小时。13.根据本发明的产bacillaene的微生物优选进一步的特征在于能够厌氧生长，特别是能够在厌氧条件降解水不溶性纤维素和蛋白质。14.根据本发明的产bacillaene的微生物优选进一步的特征在于至少50％，优选至少70％或90％的孢子在暴露于99℃时存活20分钟。15.解淀粉芽孢杆菌菌株被证明是一种合适的产bacillaene的益生菌，已通过对天然存在的分离株的筛选被鉴定出，并已于2019年2月7日根据国际承认用于专利程序目的的微生物保藏的布达佩斯条约(thebudapesttreatyontheinternationalrecognitionofthedepositofmicroorganismsforthepurposeofpatentprocedure)的规定以赢创德固赛股份有限公司(evonikdegussagmbh)的名义保藏于dsmz(德国微生物与细胞培养研究所莱布尼茨研究所(leibniz‑institutedsmz‑germancollectionofmicroorganismsandcellcultures)，inhoffenstraβe7b,38124braunschweig,germany)，保藏号为dsm33014。16.因此，在本发明的优选实施方案中，产bacillaene的微生物选自：17.a)解淀粉芽孢杆菌菌株dsm33014；18.b)以dsm33014保藏的芽孢杆菌菌株的突变株，其与以dsm33014保藏的芽孢杆菌菌株的基因组序列优选具有至少98％，特别是99％或99.5％的序列同一性，其中该突变株优选表现出耐胆汁性和/或耐热性和/或能够在厌氧条件生长。19.解淀粉芽孢杆菌菌株dsm33014表现出根据seqidno：1的16srdna、根据seqidno：2的yqfd序列、根据seqidno：3的gyrb序列、根据seqidno：4的rpob序列和根据seqidno：5的groel序列。20.因此，在本发明的优选实施方案中，优选的产bacillaene的芽孢杆菌菌株，特别是解淀粉芽孢杆菌菌株dsm33014，具有至少一个，优选至少3个，更优选全部的以下特征：21.a)16srdna序列，其与菌株dsm33014的16srdna序列和/或与seqidno：1具有至少98％，优选至少99％、99.5％或99.8％，更优选100％的序列同一性；22.a)yqfd序列，其与菌株dsm33014的yqfd序列和/或与seqidno：2具有至少98％，优选至少99％、99.5％或99.8％，更优选100％的序列同一性；23.b)gyrb序列，其与菌株dsm33014的gyrb序列和/或与seqidno：3具有至少98％，优选至少99％、99.5％或99.8％，更优选100％的序列同一性的；24.c)rpob序列，其与菌株dsm33014的rpob序列和/或与seqidno：4具有至少98％，优选至少99％、99.5％或99.8％，更优选100％的序列同一性；25.d)groel序列，其与菌株dsm33014的groel序列和/或与seqidno：5具有至少98％，优选至少99％、99.5％或99.8％，更优选100％序列一致性。26.根据本发明的产baciallene的细菌包含允许产生baciallene的基因簇。该基因簇优选包含基因baej、bael、baem、baen和baer，编码baciallene合成蛋白复合物的亚单位，也称为聚酮合酶(polyketidesynthase)或pks蛋白。27.解淀粉芽孢杆菌菌株dsm33014表现出根据seqidno：6的baej序列、根据seqidno：7的bael序列、根据seqidno：8的baem序列、根据seqidno：9的baen序列和根据seqidno：10的baer序列。28.因此，根据本发明，pks蛋白的基因簇优选包含以下基因：29.a)baej基因，其与菌株dsm33014的baej序列和/或seqidno：6的序列具有至少80％，优选至少85％、90％或95％，更优选至少98％或99％，最优选至少100％的序列同一性的；30.b)bael基因，其与菌株dsm33014的bael序列和/或seqidno：7的序列具有至少80％，优选至少85％、90％或95％，更优选至少98％或99％，最优选至少100％的序列同一性；31.a)baem基因，其与菌株dsm33014的baem序列和/或seqidno：8的序列具有至少80％，优选至少85％、90％或95％，更优选至少98％或99％，最优选100％的序列同一性；32.c)baen基因，其与菌株dsm33014的baen序列和/或seqidno：9的序列具有至少80％，优选至少85％、90％或95％，更优选至少98％或99％，最优选至少100％的序列同一性；33.d)baer基因，其与菌株dsm33014的baer序列和/或seqidno：10的序列具有至少80％，优选至少85％、90％或95％，更优选至少98％或99％，最优选至少100％的序列同一性。34.根据本发明的微生物优选是天然分离株(isolates)，但它们也可以是天然分离株的突变株，特别是自发突变株。此外，根据本发明的微生物还可通过基因工程获得，特别是通过将编码产bacillaene的酶亚单位的基因(特别是如上所述的基因baej、bael、baem、baen和baer)整合入微生物中，优选整合入如上所述的微生物中，更优选整合入枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌的菌株中，其中在整合入该基因之前，微生物优选不能产bacillaene。35.术语“自发突变株”是指在没有有意使用诱变剂的情况由天然分离株产生的突变株。此类自发突变株可以通过经典方法获得，诸如在uv光存在时和/或通过应用高温或原生质体形成和/或在亲代菌株易感的某种抗生素存在时生长天然分离株，并测试任何抗性突变株的针对改善的生物活性或改善的增强动物健康(特别是肠道健康)的一项或多项指标的能力。鉴定自发突变株的其它方法是本领域普通技术人员已知的。但除了这些优选的自发突变株外，本发明还包含天然分离株的所有其它种类的突变株，如通过基因工程获得的突变株。36.因此，本发明的一个具体实施方案为天然存在的产bacillaene的菌株的非天然存在的突变株，特别是如之前定义的自发突变株，优选地特征在于如以上在说明书中提及的特征。37.因此，本发明的另一个具体实施方案为产bacillaene的微生物，其通过整合编码产bacillaene的酶的亚单位的基因(特别是如说明书中之前提及的基因baej、bael、baem、baen和baer)而获得。38.在本发明的优选实施方案中，本发明的微生物和制剂口服施用于动物或人类。39.因此，本发明的另一个主题为组合物，诸如饲料、食料(foodstuffs)、饮用水和饲养用水以及治疗组合物，其含有产bacillaene的微生物和/或其制剂和/或bacillaene或其衍生物。40.本发明的另一个主题还是产bacillaene的微生物和/或其制剂作为益生菌成分(dfm)在饲料或食品中的用途。41.根据本发明优选的食料为乳制品，特别是酸奶、奶酪、奶、黄油和夸克乳酪(quark)。42.本发明的微生物的细胞可以作为孢子(其是休眠的)、作为营养细胞(其正在生长)、作为过渡态细胞(其从生长期向孢子形成期转变)或作为至少两种，特别是所有这些类型的细胞的组合而存在，特别是存在于本发明的组合物中。。在优选的实施方案中，本发明的组合物主要包含或仅包含孢子。43.另外或作为替代，微生物的细胞也可以非活的(non‑living)、灭活(inactivated)的形式使用，因为预期非活细胞也仍然具有益生菌作用。使细胞灭活的方法是本领域技术人员已知的。44.当施用于动物时，本发明的产bacillaene的微生物和包含其的组合物优选增强此类动物的健康和/或改善此类动物的总体身体状况和/或改善此类动物的饲料转化率(feedconversionrate)和/或降低此类动物的死亡率和/或提高此类动物的存活率和/或改善此类动物的体重增加和/或提高此类动物的生产力和/或提高此类动物的疾病抗性和/或增加此类动物的免疫应答和/或在此类动物中建立或维持健康的肠道微生物区系和/或减少通过此类动物的粪便排出的病原体。特别是，本发明的微生物和组合物可用于在用于治疗目的施用抗生素后帮助重建肠道微生物区系的健康平衡。45.因此，本发明的另一个主题为一种增强动物健康和/或改善动物的总体身体状况和/或改善动物的饲料转化率和/或降低动物的死亡率和/或提高动物的存活率和/或改善动物的体重增加和/或提高动物的生产力和/或提高动物的疾病抗性和/或增加动物的免疫应答和/或在动物中建立或维持健康肠道微生物区系和/或减少通过动物粪便排出的病原体，其中将本发明的微生物和/或其制剂和/或本发明的组合物和/或bacillaene或其衍生物施用于动物，特别是水生动物。46.因此，本发明的另一个主题还为本发明的微生物和/或制剂和/或组合物用于增强动物的健康和/或用于改善动物的总体身体状况和/或用于改善动物的饲料转化率和/或用于降低动物的死亡率和/或用于提高动物的存活率和/或用于改善动物的体重增加和/或用于提高动物的生产力和/或用于提高动物的疾病抗性和/或用于增加动物的免疫应答和/或用于在动物中建立或维持健康肠道微生物区系和/或用于减少通过动物粪便排出的病原体的用途，其中将本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物施用于动物，并且其中动物特别是水生动物。47.因此，本发明的另一个主题还为如前所述的本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物，其用于增强动物的健康和/或用于改善动物的总体身体状况和/或用于改善动物的饲料转化率和/或用于降低动物的死亡率和/或用于提高动物的存活率和/或用于改善动物的体重增加和/或用于提高动物的生产力和/或用于提高动物的疾病抗性和/或用于增加动物的免疫应答和/或用于在动物中建立或维持健康的肠道微生物区系和/或用于减少通过动物粪便排出的病原体。[0048]“提高动物的生产力”特别是指以下任意种：生产更多或更高品质(quality)的蛋、奶或肉，或提高断奶后代的产量。[0049]本发明的微生物、制剂和组合物的方法和用途可以是治疗性的或非治疗性的。在本发明的特别优选的实施方案中，该方法和用途是非治疗性的，特别是饲养应用。[0050]由于病原细菌和其他成分，未经处理的动物粪肥(manure)可能会对环境产生不利影响，特别是对于动物本身和/或与粪肥接触的人类，这可以通过用本发明的微生物、组合物或制剂喂养动物或直接处理动物的粪肥或动物的垫料(bedding)来避免，因此，本发明的另一主题为一种控制和/或避免粪肥或被污染的液体的有害环境影响的方法，该方法包含将至少一种根据本发明的产bacillaene的微生物和/或其制剂和/或组合物应用于粪肥、被污染的液体、垃圾(litter)、坑(pit)或粪肥池的步骤。优选地，该微生物、制剂或组合物以液体形式(例如通过喷雾)应用，或作为粉末(例如通过撒播)应用。[0051]由于有害细菌可能对垃圾的稠度(consistency)具有负面影响，并且特别可能影响相当流动(fluid)或高度流动的垃圾，这可能导致家禽的足垫损伤(lesions)，而这可以通过用本发明的微生物、组合物或制剂喂养动物来避免，因此是本发明的另一个主题为一种控制和/或改善垃圾的稠度的方法，特别是一种确保垃圾的固体稠度的方法和/或一种避免足垫损伤的方法，该方法包含用至少一种根据本发明的微生物、一种制剂和/或一种组合物喂养动物(特别是家禽)的步骤。[0052]根据本发明的微生物和制剂还可以用于改善饲料和食物组合物的品质以及用于改善水和水性溶液的品质。因此，本发明的另一主题还是一种控制和/或改善饲料或食物组合物的品质以及水或水性溶液的品质(特别是饮用水和/或饲养用水的品质)的方法，其包含将本发明的至少一种微生物和/或至少一种制剂和/或至少一种组合物应用于饲料、食物、水或的水性溶液的步骤。[0053]此外，根据本发明的微生物和制剂还可用于治疗植物的微生物疾病。因此，本发明的另一主题还是一种治疗和/或预防植物(特别是栽培植物)的微生物疾病的方法，其包含将本发明的至少一种微生物和/或至少一种制剂和/或至少一种组合物应用于该植物的步骤。该应用可以以液体形式(诸如通过喷雾)或以固体形式(特别是作为粉末，优选作为配制的粉末)进行。[0054]通过使用本发明的微生物、制剂和组合物，优选实现前述特征中的至少一个的改善，其中该特征的实现优选意指与适当的阴性对照相比至少1％，更优选至少3％或至少5％的改善。可以使用畜牧业领域已知的阴性对照平均值，但优选使用进行了与所测试的动物相同处理但未施用本发明的微生物和/或制剂的阴性对照动物。[0055]除了如上所述由于bacillaene的产生而能够抑制致病细菌生长的能力之外，根据本发明使用的微生物和制剂优选能够抑制其它致病细菌的生长。[0056]特别是，本发明的微生物、制剂和组合物可以有效抑制和/或降低动物肠道中致病细菌生长的量施用于或饲喂给动物。除了梭菌、沙门氏菌、弧菌和大肠杆菌之外，此类致病细菌还包括李斯特菌(listeria)、肠球菌(enterococci)、葡萄球菌(staphylococci)、气单胞菌(aeromonas)、链球菌(streptococci)、弯曲杆菌(campylobacter)、志贺氏菌(shigella)、嗜血杆菌(haemophilus)和短螺旋体(brachyspira)。相关地，本发明的方法可用于减少动物粪便中排出的致病细菌、病毒和原生动物的量。本发明的方法还可用于维持或增加动物肠道中有益细菌诸如乳酸菌(lacticacidbacteria)的生长。通过减少致病细菌和/或增加或维持有益细菌，本发明的组合物能够维持总体健康的肠道微生物区系。[0057]因此，本发明的另一主题还为一种特别是在动物或人肠道中抑制和/或减少致病细菌生长和/或维持和/或增加有益细菌生长的方法，其中将本发明的微生物、制剂和/或组合物施用于动物或人，并且其中致病细菌优选选自梭菌，特别是产气荚膜梭菌、艰难梭菌(c.difficile)、诺维梭菌(c.novyi)、败毒梭菌(c.septicum)和肠道梭菌(c.colinum)，李斯特菌，特别是单核细胞增多性李斯特菌(l.monocytogenes)、西尔李斯特菌(l.seeligeri)和威尔斯李斯特菌(l.welshimeri)，沙门氏菌，特别是肠道沙门氏菌(s.enterica)，包括肠道(enterica)亚种、亚利桑那(arizonae)亚种、邦戈尔(bongori)亚种，且特别是血清型(serovars)亚种，鸡沙门氏菌(s.gallinarum)、鸡白痢沙门氏菌(s.pullorum)、鼠伤寒沙门氏菌(s.typhimurium)、肠炎沙门氏菌(s.enteritidis)、猪霍乱沙门氏菌(s.cholerasuis)、海德堡沙门氏菌(s.heidelberg)、都柏林沙门氏菌(s.dublin)、哈达尔沙门氏菌(s.hadar)、伤寒沙门氏菌(s.typhi)、副伤寒沙门氏菌(s.paratyphi)和婴儿沙门氏菌(s.infantis)，肠球菌，特别是粪肠球菌(e.faecalis)、屎肠球菌(e.faecium)和盲肠肠球菌(e.cecorum)，葡萄球菌，特别是金黄色葡萄球菌(s.aureus)，气单胞菌，链球菌，特别是猪链球菌(s.suis)和鸡链球菌(s.gallinaceus)，弯曲杆菌，特别是空肠弯曲杆菌(c.jejuni)和大肠弯曲杆菌(c.coli)，大肠杆菌，嗜血杆菌，特别是副猪嗜血杆菌(haemophilusparasuis)，短螺旋体(brachyspira)，特别是猪痢疾短螺旋体(brachyspirahyodysenteriae)，以及弧菌，特别是副溶血性弧菌(v.parahaemolyticus)和哈维氏弧菌(v.harveyi)，以及有益细菌优选选自乳酸菌，特别是乳酸杆菌(lactobacilli)和双歧杆菌(bifidobacteria)。在优选的实施方案中，致病微生物选自梭菌，特别是产气荚膜梭菌，沙门氏菌，特别是肠道沙门氏菌，以及弧菌，特别是副溶血性弧菌。[0058]在本发明的优选实施方案中，至少一种致病细菌的量，特别是产气荚膜梭菌、肠道沙门氏菌和/或副溶血性弧菌的量，减少至少0.5log，更优选减少至少1log、2log或3log。[0059]因此，本发明的另一主题还是本发明的微生物、制剂和组合物，用于抑制和/或减少致病细菌的生长和/或用于维持和/或增加有益细菌的生长，特别是在动物或人类肠道中，其中致病细菌优选选自梭菌，特别是产气荚膜梭菌、艰难梭菌(c.difficile)、诺维梭菌(c.novyi)、败毒梭菌(c.septicum)和肠道梭菌(c.colinum)，李斯特菌，特别是单核细胞增多性李斯特菌(l.monocytogenes)、西尔李斯特菌(l.seeligeri)和威尔斯李斯特菌(l.welshimeri)，沙门氏菌，特别是肠道沙门氏菌(s.enterica)，包括肠道(enterica)亚种、亚利桑那(arizonae)亚种、邦戈尔(bongori)亚种，且特别是血清型(serovars)亚种，鸡沙门氏菌(s.gallinarum)、鸡白痢沙门氏菌(s.pullorum)、鼠伤寒沙门氏菌(s.typhimurium)、肠炎沙门氏菌(s.enteritidis)、猪霍乱沙门氏菌(s.cholerasuis)、海德堡沙门氏菌(s.heidelberg)、都柏林沙门氏菌(s.dublin)、哈达尔沙门氏菌(s.hadar)、伤寒沙门氏菌(s.typhi)、副伤寒沙门氏菌(s.paratyphi)和婴儿沙门氏菌(s.infantis)，肠球菌，特别是粪肠球菌(e.faecalis)、屎肠球菌(e.faecium)和盲肠肠球菌(e.cecorum)，葡萄球菌，特别是金黄色葡萄球菌(s.aureus)，气单胞菌，链球菌，特别是猪链球菌(s.suis)和鸡链球菌(s.gallinaceus)，弯曲杆菌，特别是空肠弯曲杆菌(c.jejuni)和大肠弯曲杆菌(c.coli)，大肠杆菌，嗜血杆菌，特别是副猪嗜血杆菌(haemophilusparasuis)，短螺旋体(brachyspira)，特别是猪痢疾短螺旋体(brachyspirahyodysenteriae)，以及弧菌，特别是副溶血性弧菌(v.parahaemolyticus)和哈维氏弧菌(v.harveyi)，以及有益细菌优选选自乳酸菌，特别是乳酸杆菌(lactobacilli)和双歧杆菌(bifidobacteria)。在优选的实施方案中，致病微生物选自梭菌，特别是产气荚膜梭菌，沙门氏菌，特别是肠道沙门氏菌，以及弧菌，特别是副溶血性弧菌。[0060]致病细菌的出现和/或生长增加确实或可能导致某些疾病的爆发。例如，产气荚膜梭菌的出现和/或生长增加可导致肠道疾病的爆发，特别是猪和家禽坏死性肠炎的爆发。产气荚膜梭菌的出现和/或生长增加还可导致其他疾病(如细菌性肠炎、坏疽性皮炎和胆道性肝炎(colangiohepatitis))的爆发。即使是最轻微形式的产气荚膜梭菌感染，也可伴随腹泻(diarrhea)，这导致垃圾潮湿，并进而导致继发性疾病如足垫皮炎。c型产气荚膜梭菌通常被认为是仔猪坏死性肠炎和坏死性出血性肠炎的主要原因，a型与轻度坏死性小肠结肠炎和绒毛萎缩的哺乳和饲喂猪的肠道疾病有关。[0061]艰难梭菌是一种引起新生仔猪腹泻的重要病原体。受影响的仔猪可能有呼吸困难、腹胀、阴囊水肿。[0062]金黄色葡萄球菌金黄色亚种可引起鸡的禽掌炎、母猪的链球菌性乳腺炎，并能产生在人体内引起食物中毒的毒素。[0063]已知盲肠肠球菌会导致肉鸡跛行、关节炎和骨髓炎，通常由关节和/或骨组织的炎症引起。此外，盲肠肠球菌可引起心包炎症。[0064]沙门氏菌细菌是人食物中毒的重要原因，其通常与食用肉类(诸如禽肉、猪肉或由其衍生的产品)有关。因此，控制沙门氏菌是肉类生产行业的重大挑战。在欧洲，2005年进行的一项关于产蛋群体中沙门氏菌流行率的基线研究显示，在整个欧盟水平，20.3％的大型蛋鸡养殖场对肠炎沙门氏菌呈细菌学阳性。在一些国家，流行率甚至高于80％[europeanfoodsafetyauthority(2006),“preliminaryreport:analysisofthebaselinestudyontheprevalenceofsalmonellainlayinghenflocksofgallusgallus”]。[0065]鸡沙门氏菌是鸡伤寒疾病的的原因，而鸡白痢沙门氏菌是鸡白痢疾病的原因，这两种疾病都对家禽业造成了巨大破坏。[0066]大肠弯曲杆菌是一种食源性细菌，大多数人通常因食用含有该细菌的猪肉而感染。它会引起人胃肠炎和急性小肠结肠炎，以及急性腹泻疾病。猪是主要的宿主，但它也可以感染人、鸟类和各种其它动物。[0067]鸡链球菌可导致家禽败血症。大体病变包括脾肿大、肝肿大、肾肿大和充血。还观察到与瓣膜性心内膜炎相关的肝和脾中的多个坏死和/或梗塞区域。[0068]猪链球菌是猪的重要病原体，并且是断奶后仔猪细菌死亡的最重要原因之一，可引起败血症、脑膜炎和多种其它感染。[0069]副溶血性弧菌尤其是甲壳类动物的疾病(如早期必死性综合征(ems)，也称为急性肝胰腺坏死病(ahpnd)，其影响斑筛对虾(penaeusmonodon)和白对虾(penaeusvannamei)的原因。[0070]病原体可以引起其他疾病，如多发性关节炎、纤维素性多发性浆膜炎(fibrinouspolyserositis)、断奶后肠紊乱如断奶后腹泻和水肿疾病以及猪痢疾。[0071]因此，本发明的另一主题还是一种治疗组合物，其包含本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物，特别是用于治疗水生动物的治疗组合物。[0072]因此，本发明的优选主题为一种治疗组合物，其用于治疗疾病，特别是肠道疾病，特别是与以下细菌的感染有关：梭菌，特别是产气荚膜梭菌，和/或沙门氏菌，特别是肠道沙门氏菌，优选肠道沙门氏菌肠炎亚种，和/或弧菌，特别是副溶血性弧菌。[0073]因此，本文中进一步优选的主题为一种治疗组合物，其用于治疗和/或预防动物(优选猪或家禽)的坏死性肠炎和/或坏死性出血性肠炎，特别是亚临床坏死性肠炎和/或坏死性出血性肠炎，该治疗组合物包含本发明的菌株和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物。[0074]因此，在本文中进一步优选的主题为一种治疗组合物，其用于治疗和/或预防动物(优选水产养殖中的动物，更优选甲壳类动物，特别是虾(shrimps)和大虾(prawns))的早期必死性综合征，该治疗组合物包含本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物。[0075]因此，本文中进一步优选的主题为一种治疗组合物，其用于治疗和/或预防由食物中毒引起的疾病，该治疗组合物包含本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物。[0076]因此，本文中另一优选主题为一种治疗组合物，其用于治疗和/或预防动物(优选猪或家禽)的细菌性肠炎、坏疽性皮炎、胆道性肝炎、梭菌病、腹泻、呼吸困难、腹胀、阴囊水肿、禽掌炎、足垫皮炎、链球菌性乳腺炎、跛行、关节炎、多发性关节炎、纤维素性多发性浆膜炎、断奶后肠紊乱如断奶后腹泻和水肿疾病、痢疾、骨髓炎、关节和/或骨组织的炎症、心包炎症、脾肿大、肝肿大、肾肿大、充血、坏死、肝脏或脾脏梗塞、瓣膜性心内膜炎、败血症和/或脑膜炎，该治疗组合物包含本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物。[0077]因此，本发明的另一主题还为治疗和/或预防疾病，特别是肠道疾病，该疾病与以下细菌的感染有关：梭菌，特别是产气荚膜梭菌，和/或沙门氏菌，特别是肠道沙门氏菌，优选肠道沙门氏菌肠炎亚种，和/或弧菌，特别是副溶血性弧菌，其中将本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物施用于需要其的动物，其中该动物优选为猪或家禽。[0078]因此，本发明的另一主题还为治疗和/或预防疾病，特别是肠道疾病，优选坏死性肠炎或坏死性出血性肠炎，特别是亚临床坏死性肠炎或亚临床坏死性出血性肠炎，其中将本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物施用于需要其的动物，其中该动物优选为猪或家禽。[0079]因此，本发明的另一主题还为治疗和/或预防水生动物的疾病，特别是早期必死性综合征，其中将本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物施用于需要其的动物，其中该动物优选为水产养殖的动物，更优选为甲壳类动物，特别是虾(shrimps)和大虾。[0080]因此，本发明的另一主题还为治疗和/或预防由食物中毒引起的疾病，其中将本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物施用于需要其的动物或人。[0081]因此，本发明的另一主题还为治疗和/或预防由食物中毒引起的疾病，其中将本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物施用于动物产品，特别是肉或蛋，以避免人类中毒。[0082]因此，本发明的另一主题还为治疗和/或预防疾病，优选猪或家禽的疾病，其选自：细菌性肠炎、坏疽性皮炎、胆道性肝炎、梭菌病、腹泻、呼吸困难、腹胀、阴囊水肿、禽掌炎、足垫皮炎、链球菌性乳腺炎、跛形、关节炎、多发性关节炎、纤维素性多发性浆膜炎、断奶后肠紊乱如断奶后腹泻和水肿疾病、痢疾、骨髓炎、关节和/或骨组织的炎症、心包炎症、脾肿大、肝肿大、肾肿大、充血、坏死、肝脏或脾脏梗塞、瓣膜性心内膜炎、败血症和/或脑膜炎，其中将本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物施用于需要其的动物。[0083]本发明的微生物和/或制剂和/或组合物可以在整个动物生命或在动物生命的特定阶段或部分期间在多天内在饲料和/或饮用水中施用于动物。例如，微生物和/或制剂和/或组合物可以仅在农场动物的开口饮食(starterdiet)或仅在育肥饮食(finisherdiet)中施用。[0084]本发明的一个特定主题还为一种增强人类健康和/或改善人类总体身体状况和/或提高人类疾病抗性和/或增加人类的免疫应答和/或在人类中建立或维持健康的肠道微生物区系的方法，其中将本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物施用于人类。[0085]因此，本发明的另一主题还为本发明的微生物和/或制剂和/或组合物用于增强人类健康和/或用于改善人类总体身体状况和/或用于提高人类的疾病抗性和/或用于增加人类的免疫应答和/或用于在人类中建立或维持健康的肠道微生物区系的用途，其中将本发明的微生物和/或制剂和/或组合物和/或bacillaene或其衍生物施用于人类。[0086]本发明的组合物，特别是饲料、食物和药物组合物以及饮用水或饲养用水(rearingwater)，优选包含本发明的微生物，并以约1×103cfu至约2×1012cfu/g饲料或ml水的比率施用于动物，特别是以约1×103cfu或约1×104cfu或约1×105cfu或约1×106cfu或约1×107cfu或约1×108cfu或约1×109cfu或约1×1010cfu或约1×1011cfu或约1×1012cfu/g饲料或ml水的比率施用于动物，优选以约1×104cfu至约1×1010cfu/g饲料或ml水的量，更优选以1×104cfu至1×107cfu/g饲料或ml水的量施用于动物。[0087]相应地，本发明的饲料、食物和水组合物中的本发明的菌株和/或制剂的优选的量的范围优选为0.1wt.‑％至10wt.‑％，更优选0.2wt.‑％至5wt.‑％，特别是0.3wt.‑％至3wt.‑％。[0088]本发明的方法可用于所有种类的动物，特别是所有种类的非人类和非昆虫动物，1‑878341‑18‑9。可以在浓缩发酵液之后和/或在干燥期间和/或之后添加载体。根据本发明优选的载体选自碳酸钙、硅藻土和植物油。[0102]本发明的优选实施方案为浓缩组合物，特别是饲料添加剂组合物，即适于制备饲料组合物的组合物，其包含至少一种本发明的微生物和至少一种如前所述的载体，其中该至少一种微生物的含量优选为0.1wt.‑％至10wt.‑％，更优选为0.2wt.‑％至5wt.‑％，特别是0.3wt.‑％至3wt.‑％，最优选为0.4wt.‑％至2.2wt.‑％，而该至少一种载体的含量优选为至少90wt.‑％，优选为90wt.‑％至99.9wt.‑％，更优选为95wt.‑％至99.8wt.‑％，特别是97wt.‑％至99.7wt.‑％，最优选为97.8wt.‑％至99.6wt.‑％，并且其中载体优选基本上由石灰石组成，特别是由具有较小部分(parts)硅藻土和/或植物油的石灰石组成。[0103]含有稳定的微生物的本发明的这些优选的组合物可用于制备饲料和药物组合物以及饮用水和饲养用水，其优选以上述说明书中提及的量包含根据本发明的菌株。在优选的实施方案中，每吨饲料、饮用水或饲养用水使用50克至1000克这种浓缩组合物，特别是50克、100克、250克、500克或1000克这种浓缩组合物，以提供可用于饲养动物的组合物。这些浓缩组合物优选包含至少一种本发明的菌株，其量为1×109cfu至2×1011cfu/g浓缩组合物，特别是2×109至1×1011cfu/g浓缩组合物。[0104]从这些浓缩组合物开始，可以通过将浓缩组合物分别与典型的饲料或食物成分混合来制备饲料和食物组合物。[0105]可以包含在根据本发明的组合物中和/或用于从根据本发明的浓缩组合物开始制备饲料组合物中的合适的典型动物饲料成分包括以下中的一种或多种：蛋白质、碳水化合物、脂肪、其他益生菌、益生元、酶、维生素、免疫调节剂、代乳品(milkreplacers)、矿物质、氨基酸、球虫抑制剂、基于酸的产物(acid‑basedproducts)和/或药物，诸如抗生素。[0106]可根据本发明使用的含碳水化合物的组分为例如草料、粗饲料、小麦粉(wheatmeal)、向日葵粉(sunflowermeal)或大豆粉(soyameal)，及其混合物。[0107]可根据本发明使用的含蛋白质的组分为例如大豆蛋白、豌豆蛋白、小麦谷蛋白或玉米谷蛋白，及其混合物。[0108]可根据本发明使用的含脂肪的组分特别是动物和植物来源的油，如植物油(vegetableoils)，例如大豆油、菜籽油、葵花籽油、亚麻籽油或棕榈油，鱼油，及其混合物。[0109]可根据本发明使用的含有另外含脂肪的组分的蛋白质为例如鱼粉、磷虾粉、双壳类粉(bivalvemeal)、鱿鱼粉或虾壳，及其组合。[0110]可根据本发明与本发明的微生物和制剂组合使用的其他益生菌(dfm)优选为选自以下种的细菌：枯草芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)，迟缓芽孢杆菌(bacilluslentus)，短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)，侧孢芽孢杆菌(bacilluslaterosporus)，凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)，蜂房芽孢杆菌(bacillusalevi)，蜡状芽孢杆菌(bacilluscereus)，栗褐芽孢杆菌(bacillusbadius)，苏云金芽孢杆菌(bacillusthurigiensis)，屎肠球菌(enterococcusfaecium)和乳酸片球菌(pediococcusacidilactici)。优选的实例为枯草芽孢杆菌dsm32539(其于2017年6月14日根据国际承认用于专利程序目的的微生物保藏的布达佩斯条约的规定保藏于dsmz)及其衍生物，地衣芽孢杆菌dsm32314和枯草芽孢杆菌dsm32315(二者均于2016年5月12日根据国际承认用于专利程序目的的微生物保藏的布达佩斯条约的规定保藏于dsmz)及其衍生物，枯草芽孢杆菌pb6(如美国专利号7,247,299中所述并以atcc保藏号pta‑6737保藏)，其由kemin以商标出售，枯草芽孢杆菌c‑3102(如美国专利号4,919,936中所述，并以fermbp‑1096保藏于fermentationresearchinstitute,agencyofindustrialscienceandtechnology，日本)，其由calpis以出售，枯草芽孢杆菌dsm17299，其由chr.hansen以商标出售，地衣芽孢杆菌dsm17236，其由chr.hansen以商标出售，地衣芽孢杆菌dsmz5749和枯草芽孢杆菌dsmz5750孢子的混合物，其由chr.hansen以商标yc出售，枯草芽孢杆菌dsm29784，其由adisseo/novozymes以商标出售，枯草芽孢杆菌，其由chr.hansen以商标出售，或美国专利号6,849,256中所述的凝结芽孢杆菌菌株。其它非芽孢杆菌益生菌，诸如酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)、黑曲霉、米曲霉或汉逊酵母，也可用于本发明的组合物中。特别是在食物组合物中，可以使用已知对人类健康有用的其它益生菌，诸如产乳酸细菌，特别是乳酸杆菌或双歧杆菌。如果所述其它益生菌未配制为本发明组合物的一部分，则它们可与本发明组合物一起(同时或在不同时间)施用。[0111]可根据本发明使用的益生元优选为低聚糖，特别是选自低聚半乳糖、silayloligosaccharide、乳果糖(lactulose)、低聚乳果糖(lactosucrose)、低聚果糖、帕拉金糖或异麦芽糖寡糖、糖基蔗糖(glycosylsucrose)、低聚麦芽糖、低聚异麦芽糖、环糊精、低聚龙胆糖、大豆低聚糖、低聚木糖、葡聚糖、果胶、多聚半乳糖醛酸、鼠李糖聚半乳糖醛酸、甘露聚糖、半纤维素、阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯聚糖、阿拉伯木聚糖、抗性淀粉、mehbiose、壳聚糖、琼脂糖、菊粉、塔格糖、聚葡萄糖和藻酸盐。[0112]可用于根据本发明的饲料组合物中并可以有助于饲料消化的酶优选选自植酸酶(ec3.1.3.8或3.1.3.26)、木聚糖酶(ec3.2.1.8)、半乳聚糖酶(ec3.2.1.89)、半乳糖苷酶，特别是α‑半乳糖苷酶(ec3.2.1.22)、蛋白酶(ec3.4)、磷脂酶，特别是磷脂酶a1(ec3.1.1.32)、a2(ec3.1.1.4)、c(ec3.1.4.3)和d(ec3.1.4.4)、溶血磷脂酶(ec3.1.1.5)，淀粉酶，特别是α‑淀粉酶(ec3.2.1.1)；溶菌酶(ec3.2.1.17)、葡聚糖酶，特别是β‑葡聚糖酶(ec3.2.1.4或ec3.2.1.6)、葡糖淀粉酶、纤维素酶、果胶酶或其任何混合物。[0113]可商购获得的植酸酶的实例包括bio‑feedtmphytase(novozymes)、p和hiphostm(dsmnutritionalproducts)、natuphostm(basf)、和blue(abenzymes)、xp(verenium/dupont)和phy(dupont)。其它优选的植酸酶包括例如wo98/28408、wo00/43503和wo03/066847中描述的那些。[0114]可商购获得的木聚糖酶的实例包括wx和gz(dsmnutritionalproducts)、xt和barley(abvista)、(verenium)和xb(木聚糖酶/β‑葡聚糖酶，dupont)。可商购获得的蛋白酶的实例包括proact(dsmnutritionalproducts)。[0115]可根据本发明使用的维生素为例如维生素a、维生素d3、维生素e、维生素k，例如维生素k3、维生素b12、生物素、胆碱、维生素b1、维生素b2、维生素b6、烟酸、叶酸和泛酸(panthothenate)，例如ca‑d‑泛酸，或其组合。[0116]可以使用的免疫调节剂为例如抗体、细胞因子、喷雾干燥的血浆、白介素或干扰素，或其组合。[0117]可根据本发明使用的矿物为例如硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、硒、锌、钙，镁、钾或钠，或其组合。[0118]可根据本发明使用的氨基酸为例如赖氨酸、丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，或其组合。[0119]因此，本发明的另一实施方案为一种制备动物饲料组合物的方法，其包含将本发明的至少一种微生物和/或至少一种制剂和/或至少一种浓缩组合物，特别是以有效增强动物健康(特别是肠道健康)的量，与饲料成分(诸如蛋白质、脂质和/或碳水化合物)，和任选的其它有益物质(优选地，如前所述)混合，以提供饲养产品。该方法还可包含例如造粒步骤。[0120]可以使用本领域技术人员已知的标准造粒方法，包括干燥或半湿进料的挤出加工。优选的造粒温度为约65℃至约120℃。[0121]本发明的微生物和组合物可以通过根据本领域熟知的方法培养本发明的微生物来获得，包括通过使用例如us6,060,051、ep0287699或us2014/0010792中描述的培养基和其他方法。常规的大规模微生物培养方法包括深层发酵、固态发酵或液体表面培养。在发酵接近结束时，随着营养物耗尽，细胞开始从生长期向孢子形成期转变，使得发酵的最终产物大部分为孢子、代谢物和残余发酵培养基。孢子形成是这些微生物的自然生命周期的一部分，并且通常由细胞响应于营养限制而启动。配置发酵以获得高水平的细胞集落形成单位并促进孢子形成。发酵产生的培养基中的细菌细胞、孢子和代谢物可直接使用或通过常规工业方法如离心、切向流过滤、深层过滤和蒸发来浓缩。浓缩的发酵液可以例如经由渗滤过程洗涤，以去除残余的发酵液和代谢物。[0122]可以使用常规干燥工艺或方法(如喷雾干燥、冷冻干燥、盘式干燥、流化床干燥、转鼓式干燥或蒸发)在添加或不添加载体的情况下干燥发酵液或发酵液浓缩物。所得干燥产物可以进一步加工，例如通过研磨或造粒(granulation)，以获得特定的粒度(particlesize)或物理形式。如上所述，载体也可以在干燥后加入。[0123]作为本发明的特定主题的本发明的微生物的制剂可以是无细胞的制剂或含有细胞碎片的制剂或含有完整细胞和细胞碎片的混合物的制剂。微生物制剂的具体实例为发酵完成后所获得的发酵液的上清液，以及可通过破碎微生物细胞所获得的胞质溶胶制剂。[0124]本发明的微生物的无细胞的制剂可以例如通过离心和/或过滤发酵液和/或通过离心和/或过滤破碎微生物细胞后所获得的悬浮液来获得。根据所使用的技术，这些无细胞制剂可能不会完全没有细胞，但可能仍然包含较少量的细胞或细胞碎片。由于细胞将化合物如代谢物、酶和/或肽分泌到周围培养基中，细胞的上清液包含此类化合物的混合物，特别是由细胞分泌的代谢物、酶和/或肽。因此，在本发明的优选实施方案中，微生物制剂为发酵液的上清液。[0125]包含微生物细胞碎片的组合物可以通过应用本领域技术人员已知的技术例如通过机械方法或通过应用高压来破裂细胞而获得。根据施加的力的程度，获得仅包含破裂细胞的组合物或包含细胞碎片和完整细胞的混合物的组合物。细胞的均质化可以例如通过使用french细胞压榨机(frenchcellpress)、超声波仪、均质器、微流化仪、球磨机、棒磨机、砾磨机、珠磨机、高压磨辊、立轴冲击器、工业混合器、高剪切混合器、桨式混合器和/或mgso4′7h2o和0.2mlkellyt痕量金属溶液(如scholz等,2011中所述)。将致病菌株在合适的条件如液体培养条件生长至600nm的光密度至少为1，然后用无菌抹刀将130μl涂布在琼脂平板表面。对于所有病原体，使用tsbye(30g/ltsb 6g/l酵母提取物)琼脂平板。在干燥的平板中切割出9mm直径的孔。第一孔用作没有培养物的未接种培养基对照，其他孔接种100μl调至od6005的芽孢杆菌培养物。对于大肠杆菌atcc11775和肠道沙门氏菌肠炎亚种dsm14221的试验，将平板在厌氧条件温育24小时后，再在有氧条件温育16小时。分析每个平板在切孔周围出现的抑制圈(inhibitionhalo)。测定从切孔的边缘到清除的菌苔(lawn)的边界的清除区(mm)。将每个圈测量两次(水平、垂直)，然后取平均值。结果见下表1和2。对于副溶血性弧菌dm10027的试验，将芽孢杆菌培养物仅在lbkelly培养基中生长10小时，将od600调节至od600为10，并将琼脂平板在厌氧条件培养24小时后直接分析(参见表3)。对于产气荚膜梭菌atcc13124的抑制试验，在琼脂平板上培养芽孢杆菌培养物16小时，将od600调节至od600为5，并将琼脂平板在厌氧条件培养24小时后直接分析(表4)。[0137]表1：在tsbye培养基上的孔扩散拮抗试验中，编码bacillaene簇的解淀粉芽孢杆菌菌株、baej敲除突变株和其基因组中不携带bacillaene簇的枯草芽孢杆菌菌株对致病性肠道沙门氏菌肠炎亚种dsm14221菌株的抑制能力的对比，病原体清除以mm为单位的值表示。[0138][0139][0140]数据显示，产bacillaene的解淀粉芽孢杆菌菌株抑制肠道沙门氏菌肠炎亚种dsm14221的生长，而baej敲除突变株和不产bacillaene的枯草芽孢杆菌菌株不抑制该病原体。[0141]表2：在tsbye培养基上的孔扩散拮抗试验中，编码bacillaene簇的解淀粉芽孢杆菌菌株、baej敲除突变株和其基因组中不携带bacillaene簇的枯草芽孢杆菌菌株对致病性大肠杆菌atcc11775菌株的抑制能力的对比，病原体清除以mm为单位的值表示。[0142][0143]数据显示，产bacillaene的解淀粉芽孢杆菌菌株抑制大肠杆菌atcc11775的生长，而baej敲除突变体和不产bacillaene的枯草芽孢杆菌菌株不抑制该病原体。[0144]表3：在tsbye培养基上的孔扩散拮抗试验中，编码bacillaene簇的解淀粉芽孢杆菌菌株和baej敲除突变株对致病性副溶血性弧菌dsm10027菌株的抑制能力的对比，病原体清除以mm为单位的值表示。[0145][0146][0147]数据显示，产bacillaene的解淀粉芽孢杆菌菌株抑制副溶血性弧菌dsm10027的生长，而不产bacillaene的baej敲除突变株不抑制该病原体。[0148]表4：在tsbye培养基上的孔扩散拮抗试验中，编码bacillaene簇的解淀粉芽孢杆菌菌株和相应的baej敲除突变株对产气荚膜梭菌atcc13124的抑制能力的对比，病原体清除以mm为单位的值表示。[0149][0150]数据显示，产bacillaene的解淀粉芽孢杆菌菌株抑制产气荚膜梭菌atcc13124的生长，而对于不产bacillaene的baej敲除突变株，观察到对产气荚膜梭菌atcc13124的抑制降低。[0151]在液体环境中分析了解淀粉芽孢杆菌dsm33014对产气荚膜梭菌atcc13124的抑制作用。解淀粉芽孢杆菌dsm33014在10mllbkelly培养基中生长过夜。将培养物离心并在0.2微米乙酸纤维素膜上过滤以除去细胞和孢子。将无细胞和孢子的上清液与双倍强度脑心浸液(granuculttmbhibroth,merck)以1：10混合。作为阴性对照，使用lbkelly代替无细胞和孢子的上清液。使产气荚膜梭菌atcc13124在厌氧条件在37℃时在2xbhi中生长过夜，并以1：10接种到上清液/2xbhi混合物中，以1:100稀释度接种到阴性对照中。在37℃过夜生长后，产气荚膜梭菌atcc13124的培养物在解淀粉芽孢杆菌dsm33014的无细胞和孢子的上清液存在时显示未生长(透明培养基)，但在阴性对照中大量生长(混浊培养基)。因此，编码bacillaene簇的解淀粉芽孢杆菌dsm33014能够在液体中抑制产气荚膜梭菌atcc13124。[0152]参考文献[0153]parente,e.,brienza,c.,moles,m.,&ricciardi,a.1995:acomparisonofmethodsforthemeasurementofbacteriocinactivity.journalofmicrobiologicalmethods,22(1),95‑108.chen,x.‑h.,vater,j.,piel,j.,franke,p.,scholz,r.,schneider,k.,koumoutsi,a.,hitzeroth,g.,grammel,n.,strittmatter,a.w.,gottschalk,g.,süssmuth,r.andborriss,r.2006:structuralandfunctionalcharacterizationofthreepolyketidesynthasegeneclustersinbacillusamyloliquefaciensfzb42.journalofbacteriology,188(11):4024–4036.[0154]实施例2：与在胃肠道中存活相关的菌株特征。[0155]筛选解淀粉芽孢杆菌dsm33014以耐受各种环境和与肠道相关的条件，从而能够在目标动物的肠道中充分发挥其潜力，作为动物直接喂养的微生物/益生菌的优良菌株的特征。[0156]解淀粉芽孢杆菌dsm33014在difco孢子形成培养基中在37℃生长过夜以产生孢子(dsm，每升组成：8gbacto营养肉汤，10ml10％(w/v)kcl，10ml1.2％(w/v)mgso4·7h2o和1ml1mca(no3)2，1ml0.01mmncl2，1ml1mmfeso4)(monteiro等,2005)。该溶液用于评估孢子热稳定性，以确定通过将孢子暴露于80℃10min沉淀稳定性(pelletingstability)(leuschner和bew,2003)和耐胆汁性。将孢子悬浮液的样品点样在ph7的vib板(difcotmvealinfusionbroth,bd)上。将板在37℃温育并分析孢子的长出。[0157]此外，还分析了孢子存活率和营养细胞耐胆汁性的定性评估。将3μl的热处理过的孢子溶液点样到含有0.3％鸡胆汁或0.3％猪胆汁(sigma)的vib板上。将板在37℃温育过夜并分析菌株的生长。[0158]菌株dsm33014的孢子在80℃时热处理10分钟后仍可存活。此外，菌株dsm33014能够在0.3％鸡胆汁或0.3％猪胆汁存在时生长。[0159]参考文献[0160]monteiro,s.m.,clemente,j.j.,henriques,a.o.,gomes,r.j.,carrondo,m.j.andcunha,a.e.2005:aprocedureforhigh‑yieldsporeproductionbybacillussubtilis.biotechnologyprogress,21(4):1026‑31.[0161]scholz,r.,molohon,k.j.,nachtigall,j.,vater,j.,markley,a.l.,süssmuth,r.d.,mitchell,d.a.andborriss,r.2011:plantazolicin,anovelmicrocinb17/streptolysins‑likenaturalproductfrombacillusamyloliquefaciensfzb42.journalofbacteriology,193(1):215‑24.[0162]leuschner,r.g.k.andbew,j.2003:enumerationofprobioticbacillisporesinanimalfeed:interlaboratorystudy.journalofaoacinternational,86(3):568‑75.当前第1页12当前第1页12