细黄链霉菌的培养基及发酵方法与流程

1.本发明涉及生物技术领域，更具体的说是涉及细黄链霉菌的培养基及发酵方法。


背景技术：

2.多年来，化肥农药的大量使用使土壤质量急剧下降，土壤板结、病虫害加剧、连作障碍等问题频发且日益严重，不仅导致农产品的品质下降、成本提高，更导致环境破坏、生态失衡。
3.微生物肥料又称生物肥料、接种剂或菌肥等，是指以微生物的生命活动为核心，使农作物获得特定的肥料效应的一类肥料制品，其不仅可促进农产品生长，还可维护土壤、生态的健康，是治理土壤污染、改善生态环境的有效保障。微生物肥料常用的菌种细黄链霉菌为链霉菌属放线菌，其代谢产物中含有生长素、赤霉素、细胞分裂素和有机酸等生长调节剂，具有转化土壤中氮、磷、钾，提高土壤肥力，减少化肥用量的作用；其产生的放线菌素、放线菌酮和螺旋霉素等活性物质，对革兰氏阳性及阴性细菌、酵母菌、丝状真菌都有抑制作用，常用于农业上防病保苗；同时可作菌肥，能转化土壤中氮磷元素提高土壤肥力，并有刺激作物生长作用。
4.目前关于细黄链霉菌微生物肥料的相关研究较少，细黄链霉菌微生物发酵仍存在菌体生长量低的问题，因此，如何提高细黄链霉菌发酵菌体生长量是本领域技术人员亟待解决的问题。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明提供了细黄链霉菌的培养基及发酵方法，可有效提高细黄链霉菌生长量。
6.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
7.细黄链霉菌的培养基，包括种子培养基和发酵培养基；
8.种子培养基组成：
9.可溶性淀粉20g/l，酵母粉10g/l，葡萄糖5g/l，k2hpo40.2g/l，mgso40.5g/l，feso40.01g/l，nacl0.5g/l，消泡剂0.1ml/l，ph7.2
‑
7.4；
10.发酵培养基组成：
11.可溶性淀粉20g/l，酵母粉10g/l，蔗糖5g/l，豆饼粉15g/l，k2hpo40.1g/l，mgso40.5g/l，nacl6g/l，caco30.5g/l，kno30.5g/l，消泡剂0.1ml/l，ph7.2
‑
7.6。
12.上述细黄链霉菌的培养基应用于细黄链霉菌发酵，可有效提高菌体生长量。
13.细黄链霉菌的发酵方法，包括如下步骤：
14.(1)将细黄链霉菌接入上述种子培养基，培养获得种子液；
15.(2)取种子液接入上述发酵培养基，培养获得发酵液。
16.优选地，步骤(1)中，
17.种子培养过程转速为80
‑
100r/min，培养温度为28
‑
30℃，溶氧控制在40％以上，培
养46h。
18.优选地，步骤(2)中，
19.发酵培养过程转速为100
‑
200r/min，培养温度为30
‑
32℃，发酵前30h溶氧调控40％以上，发酵中后期调节转速和通风，调控溶氧不低于20％，培养112h。
20.由上述技术方案可知，本发明公开细黄链霉菌的培养基及发酵方法可有效提高细黄链霉菌的生长量，进而为细黄链霉菌微生物肥料的工业化生产提供有力保障。
具体实施方式
21.下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
22.实施例1
23.1.种子培养
24.种子罐的培养基按照表1和表2进行配置：
25.表1 15l种子罐
‑
1号培养基成分及含量
26.成分含量料液体积为10l时应加入的质量可溶性淀粉22g/l220g酵母粉8g/l80g葡萄糖5g/l50gk2hpo40.2g/l2gmgso40.5g/l5gfeso40.01g/l0.1gnacl0.5g/l5g泡敌0.1ml/l1ml
27.表2 15l种子罐
‑
2号培养基成分及含量
28.成分含量料液体积为10l时应加入的质量可溶性淀粉20g/l200g酵母粉10g/l100g葡萄糖5g/l50gk2hpo40.2g/l2gmgso40.5g/l5gfeso40.01g/l0.1gnacl0.5g/l5g泡敌0.1ml/l1ml
29.按照表1和表2称取相应的培养基成分，加水溶解，定容至10l，用naoh调ph至7.2
‑
7.4，121℃灭菌30min。
30.用无菌水冲洗细黄链霉菌(购买于中国农业微生物菌种保藏管理中心accc41134)茄形瓶斜面，将一个菌种斜面的冲洗液接种至15l种子罐中，转速为80r/min，温度为30℃，
溶氧调控40％以上，培养46h。
31.镜检发现，2号培养基培养的菌体菌丝比1号培养基粗壮，2号培养基培养所得的种子液中细黄链霉菌的含菌量为0.51
×
109cfu/ml，而1号培养基培养所得的种子液中细黄链霉菌的含菌量为0.37
×
109cfu/ml。
32.2.发酵生产
33.发酵罐的培养基按照表3、4进行配置：
34.表3 50l发酵罐
‑
3号培养基成分及含量
35.成分含量料液体积为35l时应加入的质量可溶性淀粉20g/l700g酵母粉8g/l280g蔗糖5g/l175g豆饼粉18g/l630gk2hpo40.1g/l3.5gmgso40.5g/l17.5gnacl6g/l210gcaco30.5g/l17.5gkno30.5g/l17.5g泡敌0.1ml/l3.5ml
36.表4 50l发酵罐
‑
4号培养基成分及含量
37.成分含量料液体积为35l时应加入的质量可溶性淀粉20g/l700g酵母粉10g/l350g蔗糖5g/l175g豆饼粉15g/l525gk2hpo40.1g/l3.5gmgso40.5g/l17.5gnacl6g/l210gcaco30.5g/l17.5gkno30.5g/l17.5g泡敌0.1ml/l3.5ml
38.按照表3和表4称取培养基各组分，加蒸馏水溶解并定容至35l，用naoh调ph至7.2
‑
7.6，121℃灭菌30min。
39.将上述2号培养基培养好的种子液接种至灭菌后的发酵罐中进行发酵，接种量为20％，100
‑
200r/min，温度为31℃，通风量0.5
‑
1.0(v/v
·
min)，发酵前30h溶氧调控40％以上，发酵中后期调节转速和通风，调控溶氧不低于20％，至发酵培养112h得细黄链霉菌菌液。
40.经平板计数，3号发酵培养基中的细黄链霉菌菌液中的菌数大于1.3
×
109cfu/ml，4号发酵培养基中的细黄链霉菌菌液中的菌数大于2.0
×
109cfu/ml。
41.本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他
实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
42.对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。