一种犹素探针的合成方法与流程

技术特征：
1.一种犹素探针的合成方法，其特征在于，所述犹素探针为his6‑
ufm1
‑
pa，包括以下步骤，步骤1：采用多肽固相合成技术分别制备犹素n端酰肼片段和犹素c端酰肼片段；步骤2：采用多肽酰肼连接技术偶联所述犹素n端酰肼片段和犹素c端酰肼片段得到犹素酰肼；步骤3：将所述犹素酰肼进行原位活化和氨解反应，得到所述犹素探针。2.如权利要求1所述的犹素探针的合成方法，其特征在于，所述犹素n端酰肼片段为his6‑
ufm1[s2‑
a
45
]
‑
nhnh2，所述犹素c端酰肼片段为ufm1[c
46
‑
v
82
]
‑
nhnh2。3.如权利要求1或2所述的犹素探针的合成方法，其特征在于，所述步骤1的具体操作如下：1a、将固相合成树脂与fmoc
‑
nhnh2偶联，得到肼树脂；1b、将所述肼树脂脱除fmoc保护基团，并在含有fmoc
‑
氨基酸和缩合剂的溶液中进行多肽链的延伸偶联，得到连有多肽的树脂；1c、将所述连有多肽的树脂裂解脱除树脂和氨基酸侧链保护基，得到多肽溶液；1d、将所述多肽溶液进行浓缩、纯化，得到犹素n端酰肼片段his6‑
ufm1[s2‑
a
45
]
‑
nhnh2和犹素c端酰肼片段ufm1[c
46
‑
v
82
]
‑
nhnh2。4.如权利要求3所述的犹素探针的合成方法，其特征在于，所述步骤1b中，缩合剂为hctu、hbtu和hatu中的一种或多种。5.如权利要求1或2所述的犹素探针的合成方法，其特征在于，所述步骤2的具体操作如下：2a、将所述步骤1得到的犹素n端酰肼片段his6‑
ufm1[s2‑
a
45
]
‑
nhnh2溶于氧化缓冲液，冰盐浴下加入氧化剂反应，随后依次加入硫醇和犹素c端酰肼片段ufm1[c
46
‑
v
82
]
‑
nhnh2并分别反应；2b、加入还原剂，反应制得his6‑
ufm1[s2‑
a
45
‑
c
46
‑
v
82
]
‑
nhnh2；2c、将所述his6‑
ufm1[s2‑
a
45
‑
c
46
‑
v
82
]
‑
nhnh2溶于脱硫缓冲液中，加入自由基引发剂和捕获剂，调节ph至7.0
‑
8.0，进行脱硫反应，制得所述犹素酰肼his6‑
ufm1[s2‑
a
45
‑
a
46
‑
v
82
]
‑
nhnh2。6.如权利要求5所述的犹素探针的合成方法，其特征在于，所述步骤2a中，氧化剂为亚硝酸钠水溶液，硫醇为4
‑
巯基苯基乙酸溶液。7.如权利要求5所述的犹素探针的合成方法，其特征在于，所述步骤2b中，还原剂为三(2
‑
羧乙基)膦溶液。8.如权利要求5所述的犹素探针的合成方法，其特征在于，所述步骤2c中，自由基引发剂为2,2'
‑
氮杂双(2
‑
咪唑啉)，捕获剂为还原型谷胱甘肽和/或叔丁基硫醇。9.如权利要求1或2所述的犹素探针的合成方法，其特征在于，所述步骤3的具体操作如下：将所述步骤2得到的犹素酰肼his6‑
ufm1[s2‑
a
45
‑
a
46
‑
v
82
]
‑
nhnh2溶于氧化缓冲液，冰盐浴下加入氧化剂反应，随后依次加入硫醇和炔丙胺并分别进行反应，制得所述犹素探针。10.如权利要求9所述的犹素探针的合成方法，其特征在于，所述氧化剂为亚硝酸钠水溶液，硫醇为4
‑
巯基苯基乙酸溶液。

技术总结
本发明属于蛋白质化学合成技术领域，具体涉及一种犹素探针的合成方法，包括以下步骤：采用多肽固相合成技术分别制备犹素N端酰肼片段和犹素C端酰肼片段；采用多肽酰肼连接反应偶联所述犹素N端酰肼片段和犹素C端酰肼片段得到犹素酰肼；将所述犹素酰肼进行原位活化和氨解反应，得到所述犹素探针。本发明采用全合成制备犹素酰肼，经酰肼的原位氧化和氨解的“一锅法”获得犹素探针，具备普适性高、操作简单、合成效率高、易功能化修饰、可大量制备等优点。点。点。


技术研发人员：李佳斌 陈聪 卢成飘 梁军 许国强
受保护的技术使用者：苏州大学
技术研发日：2021.07.16
技术公布日：2021/10/23