一种含nCas3单链核酸内切酶的工程菌、制备方法及应用与流程

技术特征：
1.一种含ncas3单链核酸内切酶的工程菌，其特征在于：所述工程菌以运动发酵单胞菌zymomonas mobilis zm4为基础，将编码cas3蛋白的zmo0681基因内的676,661号的腺嘌呤核苷酸原位替换为胞嘧啶核苷酸；或将编码cas3蛋白的zmo0681基因内的676,209号的腺嘌呤核苷酸原位替换为鸟嘌呤核苷酸且将676,209号的腺嘌呤核苷酸原位替换为胞嘧啶核苷酸；或将编码cas3蛋白的zmo0681基因内的677,497号的胞嘧啶核苷酸原位替换为鸟嘌呤核苷酸且将677,498号的鸟嘌呤核苷酸原位替换为胞嘧啶核苷酸。2.一种含ncas3单链核酸内切酶的工程菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1：将质粒pl2r用bsa i核酸内切酶酶切后，与原间隔序列s(d608)连接，将连接产物用ecor i和xba i核酸内切酶酶切后，与核苷酸替换后的cas3基因序列连接组装，得到单碱基编辑质粒；s2：将单碱基编辑质粒转化到制备成感受态细胞的drm1菌株。3.根据权利要求2所述的一种含ncas3单链核酸内切酶的工程菌的制备方法，其特征在于：所述原间隔序列s(d608)由引物退火过程得到，将seq id no.6和seq id no.7所示的引物各1μl混合到反应缓冲液中，经pcr仪95℃反应5分钟后再降至室温反应10分钟得到。4.根据权利要求2所述的一种含ncas3单链核酸内切酶的工程菌的制备方法，其特征在于：所述核苷酸替换后的cas3基因序列由zm4基因组在seq id no.8
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seq id no.11所示的引物克隆得到。5.根据权利要求2所述的一种含ncas3单链核酸内切酶的工程菌的制备方法，其特征在于：所述原间隔序列s(d608)的序列如seq id no.16所示。6.根据权利要求2所述的一种含ncas3单链核酸内切酶的工程菌的制备方法，其特征在于：所述核苷酸替换后的cas3基因序列如seq id no.17所示。7.如权利要求1所述的一种含ncas3单链核酸内切酶的工程菌在基因编辑中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述基因编辑包括基因敲除、定点突变、插入中的任一种。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述基因敲除包括大片段基因组敲除。

技术总结
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种含nCas3单链核酸内切酶的工程菌、制备方法及应用。本申请通过比对ZM4菌株与其他同样携带内源I型CRISPR


技术研发人员：彭文舫 郝怡乐
受保护的技术使用者：湖北大学
技术研发日：2021.06.08
技术公布日：2021/10/23