一种制备通用型人源化CAR19-DNT细胞的技术及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种靶向cd19的通用型car-t细胞，其特征在于，所述通用型car-t细胞表达一外源的car构建物，所述car构建物具有如式i所示的结构，l-scfv-h-tm-c-cd3ζ
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(式i)式中，l为无或信号肽序列；scfv为靶向cd19的抗体单链可变区序列；h为无或铰链区；tm为跨膜结构域；c为共刺激信号分子；cd3ζ为源于cd3ζ的胞浆信号传导序列；各
“-”
独立地表示连接上述各元件的连接肽或肽键。2.如权利要求1所述的靶向cd19的通用型car-t细胞，其特征在于，所述靶向cd19的通用型car-t细胞是靶向cd19的通用型car-双阴性t细胞(car19-dnt细胞)。3.如权利要求1所述的靶向cd19的通用型car-t细胞，其特征在于，所述通用型car-t细胞中的tcr未被敲除。4.如权利要求1所述的靶向cd19的通用型car-t细胞，其特征在于，所述car构建物具有如seq id no:14所示的氨基酸序列。5.一种制备如权利要求1所述的靶向cd19的通用型car-dnt细胞的方法，其特征在于，包括步骤：(i)提供一表达载体，所述表达载体中含有编码如式i所示的car构建物的核苷酸序列；l-scfv-h-tm-c-cd3ζ
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(式i)式中，l为无或信号肽序列；scfv为靶向cd19的抗体单链可变区序列；h为无或铰链区；tm为跨膜结构域；c为共刺激信号分子；cd3ζ为源于cd3ζ的胞浆信号传导序列；各
“-”
独立地表示连接上述各元件的连接肽或肽键；(ii)提供一dnt细胞培养液，所述细胞培养液中含有至少一个dnt细胞；将步骤(i)的表达载体转导入对所述dnt细胞，从而获得如权利要求1所述的靶向cd19的通用型car-dnt细胞；和(iii)任选的检测步骤(ii)所获得的通用型car-dnt细胞。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述表达载体为慢病毒表达载体。7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(i)的病毒表达载体中所整合有的多核苷酸序列如seq id no:16所示。8.一种药物组合物，其特征在于，包括：(a)如权利要求1或2所述的靶向cd19的通用型car-t细胞；和(b)药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
9.一种如权利要求1或2所述的靶向cd19的通用型car-t细胞的用途，其特征在于，用于制备预防和/或治疗癌症的药物组合物或制剂。10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述肿瘤选自下组：血液肿瘤、实体瘤、或其组合。

技术总结
本发明提供了一种制备通用型人源化CAR19-DNT细胞的技术及其应用。具体地，本发明提供了一种靶向CD19的通用型CAR-T细胞，所述通用型CAR-T细胞表达一外源的CAR构建物，所述CAR构建物具有如式I所示的结构，L-scFv-H-TM-C-CD3ζ


技术研发人员：杨黎明 王丹 房康 李先才
受保护的技术使用者：浙江瑞加美生物科技有限公司
技术研发日：2020.04.20
技术公布日：2021/10/22