WISKOTT-ALDRICH综合征的造血干细胞基因疗法的制作方法

技术特征：
1.一种表达载体，其包含可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列，所述第一核酸序列编码用于敲低hprt的shrna；以及可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列，所述第二核酸序列编码wiskott
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aldrich综合征蛋白。2.权利要求1的表达载体，其中所述shrna包含seq id no:32的发夹环序列。3.权利要求1的表达载体，其中所述shrna包含seq id no:26的核酸序列。4.权利要求1的表达载体，其中所述shrna与选自seq id no:23、seq id no:24和seq id no:25的核酸序列具有至少95％序列相同性。5.权利要求1的表达载体，其中所述shrna与选自seq id no:34和seq id no:35的核酸序列具有至少95％序列相同性。6.权利要求1的表达载体，其中所述shrna与选自seq id no:21和seq id no:22的核酸序列具有至少95％序列相同性。7.权利要求1的表达载体，其中所述shrna与seq id no:36的核酸序列具有至少95％序列相同性。8.前述权利要求中任一项的表达载体，其中所述第一表达控制序列包含pol iii启动子或pol ii启动子。9.权利要求8的表达载体，其中所述pol iii启动子包含7sk。10.权利要求9的表达载体，其中所述7sk启动子具有与seq id no:28的核酸序列具有至少95％序列相同性的核酸序列。11.权利要求9的表达载体，其中所述7sk启动子具有seq id no:28的核酸序列。12.权利要求9的表达载体，其中所述7sk启动子具有seq id no:29的核酸序列。13.前述权利要求中任一项的表达载体，其中所述第二核酸编码野生型wiskott
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aldrich综合征蛋白。14.前述权利要求中任一项的表达载体，其中所述第二核酸编码密码子优化的wiskott
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aldrich综合征蛋白。15.权利要求1
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12中任一项的表达载体，其中编码wiskott
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aldrich综合征蛋白的第二核酸具有与seq id no:1、2、3和4中任一个具有至少95％相同性的序列。16.权利要求1
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12中任一项的表达载体，其中编码wiskott
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aldrich综合征蛋白的第二核酸具有与seq id no:1、2、3和4中任一个具有至少97％相同性的序列。17.权利要求1
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12中任一项的表达载体，其中编码wiskott
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aldrich综合征蛋白的第二核酸具有与seq id no:1、2、3和4中任一个具有至少99％相同性的序列。18.权利要求1
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12中任一项的表达载体，其中编码wiskott
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aldrich综合征蛋白的第二核酸具有包含seq id no:1、2、3和4中任一个的序列。19.前述权利要求中任一项的表达载体，其中所述第二表达控制序列包含mnd启动子。20.权利要求19的表达载体，其中所述mnd启动子具有与seq id no:7、8、9、10、11和12中任一个具有至少95％相同性的核酸序列。21.前述权利要求中任一项的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列位于可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列的下游。
22.权利要求21的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列与可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列朝向相同方向。23.权利要求21的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列朝向第一方向，其中可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列朝向第二方向，并且其中所述第一方向和所述第二方向相反。24.权利要求1
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20中任一项的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列位于可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列的上游。25.权利要求24的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列与可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列朝向相同方向。26.权利要求24的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列朝向第一方向，其中可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列朝向第二方向，并且其中所述第一方向和所述第二方向相反。27.权利要求1
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20中任一项的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列朝向第一方向，其中可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列朝向第二方向，并且其中所述第一方向和所述第二方向相反。28.权利要求27的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列位于可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列的下游。29.权利要求27的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列位于可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列的上游。30.权利要求1
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20中任一项的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列与可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列朝向相同方向。31.权利要求30的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列位于可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列的下游。32.权利要求30的表达载体，其中可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列位于可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列的上游。33.权利要求1
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12中任一项的表达载体，其中所述第二核酸序列编码肽，所述肽包含与seqs id no:5和6中任一个具有至少95％相同性的氨基酸序列；并且所述第一核酸序列编码核酸分子，所述核酸分子与seq id no:16或其互补序列具有至少95％相同性。34.前述权利要求中任一项的表达载体，其中所述表达载体进一步包含选自以下的绝缘子：650chs4绝缘子、400chs4绝缘子和泡沫病毒绝缘子。35.前述权利要求中任一项的表达载体，其中所述表达载体进一步包含绝缘子，所述绝缘子具有选自seq id no:38、seq id no:39和seq id no:40的核酸序列。36.前述权利要求中任一项的表达载体，其中所述表达载体是慢病毒表达载体。37.权利要求36的表达载体，其中所述慢病毒表达载体是整合缺陷型慢病毒载体。38.一种表达盒，其包含与seq id no:15的核酸序列具有至少90％相同性的核酸序列。39.权利要求38的表达盒，其中所述核酸序列与seq id no:15的核酸序列具有至少95％相同性。40.一种慢病毒表达载体，其包含权利要求38
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39中任一项的表达盒，并且进一步包含选自以下的绝缘子：650chs4绝缘子、400chs4绝缘子和泡沫病毒绝缘子。
41.权利要求40的慢病毒表达载体，其中所述绝缘子具有选自seq id no:38、seq id no:39和seq id no:40的核酸序列。42.一种宿主细胞，其用权利要求1
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37中任一项的表达载体或者权利要求40
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41中任一项的慢病毒表达载体转导。43.权利要求42的宿主细胞，其中所述宿主细胞是基本上hprt缺陷的。44.权利要求42
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43中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞表达wiskott
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aldrich综合征蛋白。45.权利要求42
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44中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞用药学上可接受的载剂配制。46.权利要求42
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45中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞是造血干细胞。47.一种宿主细胞，其是基本上hprt缺陷的，并且表达包含seq id no:5和6中任一个的氨基酸序列的肽。48.权利要求47的宿主细胞，其中所述宿主细胞是造血干细胞。49.一种宿主细胞，其是基本上hprt缺陷的，并且表达与seq id no:5和6中任一个的氨基酸序列具有至少95％相同性的肽，其中所述宿主细胞通过用表达载体转导hsc来制备，所述表达载体包含可操作地连接至第一核酸序列的第一表达控制序列，所述第一核酸序列编码用于敲低hprt的shrna；以及可操作地连接至第二核酸序列的第二表达控制序列，所述第二核酸序列编码wiskott
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aldrich综合征蛋白。50.权利要求49的宿主细胞，其中所述第二核酸编码野生型wiskott
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aldrich综合征蛋白。51.权利要求49的宿主细胞，其中所述第二核酸编码密码子优化的wiskott
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aldrich综合征蛋白。52.权利要求49
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51中任一项的宿主细胞，其中所述第二表达控制序列是mnd启动子。53.权利要求49
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52中任一项的宿主细胞，其中所述表达载体进一步包含绝缘子，所述绝缘子具有包含seq id no:38、39和40中任一个的核酸序列。54.权利要求49
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53中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞是造血干细胞。55.一种药物组合物，其包含权利要求1
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37中任一项的表达载体或者权利要求40
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41中任一项的慢病毒表达载体，以及药学上可接受的载剂。56.一种药物组合物，其包含权利要求42
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54中任一项的宿主细胞。57.一种选择转导的细胞的方法，其包括：用权利要求1
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37中任一项的表达载体或者权利要求40
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41中任一项的慢病毒表达载体转导细胞群；以及通过用嘌呤类似物选择转导的细胞来富集转导的细胞群。58.权利要求57的方法，其中所述嘌呤类似物选自6tg和6
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巯嘌呤。59.权利要求57
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58中任一项的方法，其中所述转导的细胞是hsc。60.权利要求57的方法，其中所述hsc是同种异体hsc。61.权利要求57的方法，其中所述hsc是自体hsc。62.权利要求57的方法，其中所述hsc是同胞匹配的hsc。
63.一种减轻与wiskott
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aldrich综合征相关的病理的方法，其包括向需要治疗的患者给药治疗有效量的权利要求42
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54中任一项的宿主细胞。64.权利要求63的方法，其中所述与wiskott
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aldrich综合征相关的病理选自微血小板减少症、湿疹、自身免疫性疾病和复发性感染。65.权利要求63的方法，其中所述复发性感染包括复发性皮肤感染。66.权利要求65的方法，其中所述复发性感染选自中耳炎、皮肤脓肿、肺炎、小肠结肠炎、脑膜炎、脓毒和泌尿道感染。67.权利要求64的方法，其中所述湿疹是难治性湿疹。68.权利要求64的方法，其中所述自身免疫性疾病选自溶血性贫血、脉管炎、关节炎、中性粒细胞减少症、炎性肠病和iga肾病、henoch
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nlein样紫癜、皮肌炎、复发性血管性水肿和葡萄膜炎。69.一种多核苷酸，其包含与seq id no:14的核酸序列具有至少95％序列相同性的第一核酸序列，以及与seq id no:15的核酸序列具有至少95％序列相同性的第二核酸序列。70.权利要求69的多核苷酸，其进一步包含具有seq id no:13的核酸序列。71.权利要求69的多核苷酸，其进一步包含具有seq id no:41的核酸序列。72.权利要求69的多核苷酸，其进一步包含具有seq id no:31的核酸序列。73.权利要求69的多核苷酸，其进一步包含选自seq id no:38、seq id no:39和seq id no:40的核酸序列。74.权利要求69
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73中任一项的多核苷酸，其中所述第一核酸序列位于所述第二核酸序列的上游。75.权利要求74的多核苷酸，其中所述第一核酸序列包含与所述第二核酸序列相同的方向。76.权利要求75的多核苷酸，其中所述相同的方向是正向的方向。77.权利要求75的多核苷酸，其中所述第一核酸序列包含与所述第二核酸序列不同的方向。78.权利要求77的多核苷酸，其中所述不同的方向是相反的方向。79.权利要求69
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73中任一项的多核苷酸，其中所述第一核酸序列位于所述第二核酸序列的下游。80.权利要求79的多核苷酸，其中所述第一核酸序列包含与所述第二核酸序列相同的方向。81.权利要求80的多核苷酸，其中所述相同的方向是正向的方向。82.权利要求79的多核苷酸，其中所述第一核酸序列包含与所述第二核酸序列不同的方向。83.权利要求82的多核苷酸，其中所述不同的方向是相反的方向。84.权利要求69
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73中任一项的多核苷酸，其中所述第一核酸序列朝向第一方向，其中所述第二核酸序列朝向第二方向，并且其中所述第一方向和所述第二方向相反。85.权利要求84的多核苷酸，其中所述第一核酸序列位于所述第二核酸序列的下游。86.权利要求84的多核苷酸，其中所述第一核酸序列位于所述第二核酸序列的上游。87.权利要求69
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73中任一项的多核苷酸，其中所述第一核酸序列朝向与所述第二核酸
序列相同的方向。88.权利要求87的多核苷酸，其中所述第一核酸序列位于所述第二核酸序列的下游。89.权利要求87的多核苷酸，其中所述第一核酸序列位于所述第二核酸序列的上游。90.一种多核苷酸，其包含与seq id no:42
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57中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。91.权利要求90的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:42
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57中任一个具有至少95％相同性。92.权利要求90的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:42
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57中任一个具有至少97％相同性。93.权利要求90的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:42
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57中任一个具有至少98％相同性。94.权利要求90的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:42
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57中任一个具有至少99％相同性。95.一种多核苷酸，其具有seq id no:42
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57中的任一个。96.一种表达载体，其包含(a)编码ptl20c的核酸序列；(b)编码wasp表达盒的核酸；以及(c)编码7sk/sh734表达盒的核酸。97.权利要求96的表达载体，其进一步包含编码绝缘子的核酸序列。98.权利要求96的表达载体，其中所述wasp表达盒位于所述7sk/sh734表达盒的上游。99.权利要求98的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:44、45、48和49中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。100.权利要求98的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:44、45、48和49中任一个具有至少95％相同性的核酸序列。101.权利要求98的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:51、53、55和57中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。102.权利要求98的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:51、53、55和57中任一个具有至少95％相同性的核酸序列。103.权利要求96的表达载体，其中所述wasp表达盒位于所述7sk/sh734表达盒的上游，并且其中所述7sk/sh734表达盒包含相对于所述wasp表达盒相反的方向。104.权利要求103的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:45、49、53、57中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。105.权利要求103的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:45、49、53、57中任一个具有至少95％相同性的核酸序列。106.权利要求96的表达载体，其中所述wasp表达盒位于所述7sk/sh734表达盒的上游，并且其中所述7sk/sh734表达盒与所述wasp表达盒朝向相同的方向。107.权利要求106的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:44、48、51、55中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。108.权利要求106的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:44、48、51、55中任一个具有至少95％相同性的核酸序列。109.权利要求96的表达载体，其中所述wasp表达盒位于所述7sk/sh734表达盒的下游。
110.权利要求109的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:42、43、46和47中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。111.权利要求109的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:42、43、46和47中任一个具有至少95％相同性的核酸序列。112.权利要求109的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:50、52、54和56中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。113.权利要求109的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:50、52、54和56中任一个具有至少95％相同性的核酸序列。114.权利要求96的表达载体，其中所述wasp表达盒位于所述7sk/sh734表达盒的下游，并且其中所述7sk/sh734表达盒包含相对于所述wasp表达盒相反的方向。115.权利要求114的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:43、47、52和56中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。116.权利要求114的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:43、47、52和56中任一个具有至少95％相同性的核酸序列。117.权利要求96的表达载体，其中所述wasp表达盒位于所述7sk/sh734表达盒的下游，并且其中所述7sk/sh734表达盒和所述wasp表达盒朝向相同方向。118.权利要求117的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:42、46、50和54中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。119.权利要求117的表达载体，其中所述表达载体具有与seq id no:42、46、50和54中任一个具有至少95％相同性的核酸序列。120.权利要求96
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119中任一项的表达载体在制备用于治疗wiskott
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aldrich综合征的药物组合物中的用途，所述药物组合物包含宿主细胞以及药学上可接受的载剂或赋形剂。121.一种多核苷酸，其包含与seq id no:58具有至少90％相同性的核酸序列。122.权利要求121的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:58具有至少95％相同性。123.权利要求121的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:58具有至少96％相同性。124.权利要求121的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:58具有至少97％相同性。125.权利要求121的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:58具有至少98％相同性。126.权利要求121的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:58具有至少99％相同性。127.一种多核苷酸，其具有seq id no:58。128.一种多核苷酸，其包含与seq id no:59具有至少90％相同性的核酸序列。129.权利要求128的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:59具有至少95％相同性。130.权利要求128的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:59具有至少96％相同性。
131.权利要求128的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:59具有至少97％相同性。132.权利要求128的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:59具有至少98％相同性。133.权利要求128的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:59具有至少99％相同性。134.一种多核苷酸，其具有seq id no:59。135.一种多核苷酸，其包含与seq id no:63和65中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。136.权利要求135的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:63和65中任一个具有至少95％相同性。137.权利要求135的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:63和65中任一个具有至少96％相同性。138.权利要求135的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:63和65中任一个具有至少97％相同性。139.权利要求135的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:63和65中任一个具有至少98％相同性。140.权利要求135的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:63和65中任一个具有至少99％相同性。141.一种多核苷酸，其具有seq id no:63和65中的任一个。142.一种多核苷酸，其包含与seq id no:64和66中任一个具有至少90％相同性的核酸序列。143.权利要求142的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:64和66中任一个具有至少95％相同性。144.权利要求142的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:64和66中任一个具有至少96％相同性。145.权利要求142的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:64和66中任一个具有至少97％相同性。146.权利要求142的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:64和66中任一个具有至少98％相同性。147.权利要求142的多核苷酸，其中所述核酸序列与seq id no:64和66中任一个具有至少99％相同性。148.一种多核苷酸，其具有seq id no:64和66中的任一个。

技术总结
本公开提供表达载体，其包含至少两个核酸序列，即编码抗HPRT RNAi的核酸序列，以及编码Wiskott


技术研发人员：M
受保护的技术使用者：美国杰特贝林生物制品有限公司
技术研发日：2019.12.23
技术公布日：2021/10/19