一种合成含有二硫键和/或巯基修饰的多肽核酸偶联物的方法与流程

技术特征：
1.一种合成多肽核酸偶联物的方法，所述方法通过多肽连接的马来酰亚胺基团与核酸连接的巯基反应使多肽与核酸偶联得到所述多肽核酸偶联物，其中，所述多肽含有巯基和/或二硫键，所述偶联反应在包含磷酸盐缓冲液的溶液中进行。2.根据权利要求1所述的方法，所述磷酸盐缓冲液的ph值为6.2
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8.0，优选为6.8
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7.6，更优选为6.8。3.根据权利要求1或2所述的方法，所述磷酸盐缓冲液选自磷酸氢钾缓冲液、磷酸氢钠缓冲液、三乙基胺醋酸盐缓冲液或者pbs缓冲液。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，所述多肽连接的马来酰亚胺基团选自马来酰亚胺基丙酸、马来酰亚胺基己酸、甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺或者4
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(n
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马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的方法，所述多肽和核酸的偶联反应中多肽反应物当量为2.5
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25e.q.，优选为5
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20e.q.，更优选为10
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20e.q.。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的方法，所述多肽和核酸的偶联反应中多肽反应物浓度为5
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25mm，优选为10
‑
20mm。7.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的方法，所述多肽溶解于dmso、dmf或者乙腈中进行偶联反应。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的方法，所述多肽和核酸的偶联反应在4℃
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45℃恒温反应2h
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24h，优选为在37℃下恒温反应过夜。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的方法，所述核酸连接的巯基是通过还原核酸二硫键保护基团后得到的。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的方法，所述偶联反应完成后进一步包括纯化步骤。11.根据权利要求10所述的方法，所述纯化步骤包括加入氯化钠和乙醇沉降并洗涤。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的方法，进一步包括通过hplc检测偶联反应的偶联效率。13.根据权利要求12所述的方法，所述hplc检测所述偶联反应的偶联效率为42％
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90％。14.根据权利要求1
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13所述方法制备得到的多肽核酸偶联物。15.权利要求14所述的多肽核酸偶联物在核酸的穿膜递送、核酸的靶向结合、核酸纳米骨架上进行的多肽展示或者以核酸为模板的多肽合成反应中的应用。

技术总结
本发明涉及生物分子合成领域，具体涉及一种合成含二硫键和/或巯基修饰的多肽核酸偶联物的方法，所述方法通过多肽连接的马来酰亚胺基团与核酸连接的巯基反应使多肽与核酸偶联得到所述多肽核酸偶联物，其中，所述多肽含有巯基和/或二硫键，所述偶联反应在包含磷酸盐缓冲液的溶液中进行。本发明的合成方法同之前报导的类似方法相比，副产物更少，转化率更高。转化率更高。


技术研发人员：郭纯 陈晨
受保护的技术使用者：南京金斯瑞生物科技有限公司
技术研发日：2021.04.09
技术公布日：2021/10/18