基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒的制作方法

技术特征：
1.一种基于恒温无酶多级扩增的mirna化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由发卡核酸和反应底物组成，所述的发卡核酸包括发卡h1、发卡h2、发卡h3、发卡h4、发卡h5、发卡h6及羟乙基哌嗪乙硫磺酸盐缓冲液；h1核酸分子序列如seq id no：1，h2核酸分子序列如seq id no：2，h3核酸分子序列如seq id no：3，h4核酸分子序列如seq id no：4，h5核酸分子序列如seq id no：5，h6核酸分子序列如seq id no：6；所述的反应底物包括氯化血红素粉末、鲁米诺粉末和30%过氧化氢溶液。2.根据权利要求1所述的基于恒温无酶多级扩增的mirna化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述的发卡还包括h7，h7核酸分子序列如seq id no：7。3.根据权利要求2所述的基于恒温无酶多级扩增的mirna化学发光检测试剂盒，其特征在于，发卡h1、发卡h2、发卡h3、发卡h4、发卡h5、发卡h6的摩尔浓度比为1
‑
2：1
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2：6
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7：8
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9：7
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8：8
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9；或者所述的发卡h1、发卡h2、发卡h3、发卡h4、发卡h5、发卡h6、发卡h7的摩尔浓度比为1
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2：1
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2：6
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7：8
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9：7
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8：8
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9：0.3
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0.8。4.根据权利要求3所述的基于恒温无酶多级扩增的mirna化学发光检测试剂盒，其特征在于，发卡h1、发卡h2、发卡h3、发卡h4、发卡h5、发卡h6的摩尔浓度比为2：2：6：8：7：8；或者所述的发卡h1、发卡h2、发卡h3、发卡h4、发卡h5、发卡h6、发卡h7的摩尔浓度比为2：2：6：8：7：8：0.5。5.一种基于恒温无酶多级扩增的mirna化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括如下步骤：（1）分别将溶于hepes的发卡h1、发卡h2、发卡h3、发卡h4、发卡h5、发卡h6和发卡h7退火，然后按摩尔比混合，加入mirna和hepes共同孵育12小时，再加入氯化血红素溶液孵育1小时，然后将反应液稀释20倍；（2）向稀释20倍的反应液中加入鲁米诺溶液后，置于发光杯中，快速注入过氧化氢溶液，通过微弱化学发光测量仪检测化学发光信号，实现对mirna的检测；所述的h1核酸分子序列如seq id no：1，h2核酸分子序列如seq id no：2，h3核酸分子序列如seq id no：3，h4核酸分子序列如seq id no：4，h5核酸分子序列如seq id no：5，h6核酸分子序列如seq id no：6。6.根据权利要求5所述的基于恒温无酶多级扩增的mirna化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述的发卡还包括h7，h7核酸分子序列如seq id no：7。7.根据权利要求6所述的基于恒温无酶多级扩增的mirna化学发光检测试剂盒，其特征在于，发卡h1、发卡h2、发卡h3、发卡h4、发卡h5、发卡h6的摩尔浓度比为1
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2：1
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2：6
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7：8
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9：7
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8：8
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9；或者所述的发卡h1、发卡h2、发卡h3、发卡h4、发卡h5、发卡h6、发卡h7的摩尔浓度比为
1
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2：1
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2：6
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7：8
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9：7
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8：8
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9：0.3
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0.8。8.根据权利要求7所述的基于恒温无酶多级扩增的mirna化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述的发卡h1、发卡h2、发卡h3、发卡h4、发卡h5、发卡h6的摩尔浓度比为2：2：6：8：7：8；或者所述的发卡h1、发卡h2、发卡h3、发卡h4、发卡h5、发卡h6、发卡h7的摩尔浓度比为2：2：6：8：7：8：0.5。9.根据权利要求1
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4任一项所述的基于恒温无酶多级扩增的mirna化学发光检测试剂盒在制备检测细胞裂解液中的mirna
‑
21的含量的药物上的应用。10.根据权利要求9所述的应用，所述的基于恒温无酶多级扩增的mirna化学发光检测试剂盒通过检测细胞裂解液中的mirna
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21的含量在制备区分肿瘤细胞与正常细胞的药物中的应用，所述的肿瘤细胞包括hepg2、或hl
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7702细胞。

技术总结
本发明公开了一种基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒，通过核酸互补杂交，目标miRNA特异性地打开发卡探针，发生催化发卡自组装反应，生成大量双链DNA产物，双链产物继续引发杂交链式反应，形成含有多个G


技术研发人员：王慧敏 杨慧然
受保护的技术使用者：三峡大学
技术研发日：2021.06.25
技术公布日：2021/10/18