一种固氮类芽孢杆菌液体发酵的方法与流程

技术特征：
1.一种固氮类芽孢杆菌液体发酵的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)种子菌悬液的制备：将休眠体菌株进行活化后，加入无菌水，得菌悬液；(2)二级种子罐发酵：将步骤(1)的菌悬液和原料a混合后，置于温度30～33℃环境下，风量为第0～4h风量35～45m3/h、第4～8h风量55～70m3/h、第8h～发酵结束风量75～90m3/h，得二级种子发酵液；(3)发酵罐发酵：将二级种子罐中的发酵液接种到发酵罐的原料b中，置于温度30～33℃环境下，风量为第0～4h风量150～200m3/h、第4～8h风量300～400m3/h、第8～12h风量550～650m3/h、第12h～发酵结束风量750～900m3/h，菌体含量≥7
×
108cfu/ml。2.根据权利要求1所述的一种固氮类芽孢杆菌液体发酵的方法，其特征在于，步骤(1)所述活化采用种子培养基，所述种子培养基的原料为每100ml水按重量百分比包括胰蛋白胨0.5％～1.0％、酵母膏0.4％～0.5％、氯化钠1％～1.5％；所述活化的条件为30℃状态下培养4～6h；所述菌悬液的菌浓度≥5
×
108cfu/ml。3.根据权利要求1所述的一种固氮类芽孢杆菌液体发酵的方法，其特征在于，步骤(2)所述菌悬液和原料a按体积比1ml：65～70ml；所述原料a为每100ml水按重量百分比包括为蔗糖1％～2％、蛋白胨0.1％～0.2％、酵母浸膏0.08％～0.1％、碳酸钙0.5％～1.0％、磷酸二氢钾0.02％～0.03％；发酵的时间为15h
±
2h，二级种子发酵液菌体含量≥5
×
108cfu/ml。4.根据权利要求1所述的一种固氮类芽孢杆菌液体发酵的方法，其特征在于，步骤(3)所述原料b为每100ml水按重量百分比包括豆饼粉0.5％～1.0％、酵母膏0.1％～0.2％、硫酸镁0.05％～0.1％、氯化钠1％～1.5％、钼酸钠0.02％、硫酸亚铁0.02％。5.根据权利要求1所述的一种固氮类芽孢杆菌液体发酵的方法，其特征在于，步骤(3)以原料b的质量计，接种量为5％～10％。6.根据权利要求1所述的一种固氮类芽孢杆菌液体发酵的方法，其特征在于，步骤(3)所述发酵的时间为35h
±
2h。

技术总结
本发明公开了一种固氮类芽孢杆菌液体发酵的方法。涉及液体发酵技术领域。包括以下步骤：种子菌悬液的制备；二级种子罐发酵和发酵罐发酵。本发明中可应用于芽孢类细菌的液体发酵，采用菌种的休眠体接种，虽然在前期对菌的延迟期稍有影响，但对于整个的发酵过程来说利大于弊，对于目标产物的形成没有影响，最终菌含量7


技术研发人员：江洋 孟庆伟 任彦慧 张少骅 吴元凤 闫冲 王倩倩 柳慧静 申术霞 马婷
受保护的技术使用者：微生物肥料技术研究推广中心
技术研发日：2021.07.28
技术公布日：2021/10/11