一种黑茶提取物的制备方法及产品和应用与流程

1.本发明涉及黑茶的加工领域，具体涉及一种黑茶提取物的制备方法及产品和应用。


背景技术：

2.嘌呤(c5h4n4)是含有两个相邻碳氮环的杂环芳香化合物，是生物体内核算的重要组成部分，是存在于所有人体细胞和多数事物中的一种天然的活性生物碱。嘌呤类物质对人体内部的能量供应、代谢调节及辅酶合成等方面都起着十分重要的作用。嘌呤类物质主要包括腺嘌呤(a)、鸟嘌呤(g)、次黄嘌呤(h)和黄嘌呤(x)，其中腺嘌呤(a)和鸟嘌呤(g)是所有生物体内dna、rna组成的最小单元之一，也是在人体中以结合态存在最多的两种嘌呤物质，广泛参与人体的多种生命活动，比如遗传、代谢等；次黄嘌呤(h)、黄嘌呤(x)是嘌呤合成和分解代谢的中间体，是尿酸(uric acid,ua)形成的必须前提物质。尿酸则是嘌呤碱基的最终代谢产物。
3.人体内的嘌呤类物质来源分为内源性和外源性两部分，体内的合成代谢及人体组织中核酸的分解导致内源性嘌呤代谢，每天约600mg,占整体嘌呤代谢水平80％，动物和植物来源的食物摄入导致体内外源性嘌呤形成，约占整体嘌呤水平20％。人体从食物中获得的嘌呤类物质极少会被机体直接或间接利用，几乎全部转化成尿酸，进而通过肾脏等器官排出体外。但如果体内嘌呤代谢发生紊乱、尿酸的排出与生成失衡，则会引起机体内血清尿酸浓度升高，当血清尿酸浓度＞68mg/l,则会导致一些代谢疾病的发生，如高尿酸导致痛风病症。
4.目前治疗痛风常用的二类降尿酸药物：一类是抑制尿酸产生的，如非布司他、别嘌醇等，主要是抑制黄嘌呤氧化酶的活性，黄嘌呤氧化酶(简称xod)是生物体内嘌呤代谢关键酶。xod催化嘌呤碱基生成尿酸是生物体内嘌呤代谢的关键节点。抑制其活性就减少尿酸的合成；另一类是增加尿酸排泄的药物，如苯溴马隆，阻止肾对尿酸的循环重吸收，强制排出；这二类药物的最大不足是对肝肾有严重的副作用，有时对肝肾的损害甚至大于高尿酸的损害。
5.中国专利文献cn109662171a公开了一种含黄嘌吟氧化酶活性抑制剂的黑茶饮品的制备方法和应用。该制备方法包括如下步骤：s1、将黑茶与水按一定的比例混合后加热，得到含一定量茶多酚及茶褐素的黑茶水提取液；s2、将步骤s1得到的黑茶水提取液通过滤膜过滤去除不需要的成分，得到黑茶水提取精制液；s3、将步骤s2得到的黑茶水提取精制液通过高温加热处理，得到含有黄嘌吟氧化酶活性抑制剂的黑茶饮品。该制备方法已经生产出含黄嘌呤氧化酶抑制剂的产品《小黑神》，经沈阳药科大学的药理实验证实能显著性抑制黄嘌呤氧化酶的活性。但是该发明没有公开或知晓是黑茶中的什么成分导致了其含嘌吟氧化酶活性抑制剂，对黄嘌吟氧化酶活性抑制剂并不清楚。本领域技术人员只知晓该黑茶饮品的制备方法，将含有一定量茶多酚(包括茶褐素)的黑茶水提取液经过滤去除不需要的物质、再经过高温加热即制得含有黄嘌呤氧化酶活性抑制剂。而一般的黑茶水都具有一定量
茶多酚(包括茶褐素)。
6.中国专利文献cn108450602a公开了一种降尿酸风味黑茶饮料，，是以茯砖茶、六堡茶、普洱熟茶、花香型红茶、荷叶、青钱柳为主要原料，经过浸提后添加柠檬片、昆仑雪菊、金银花、罗汉果提取物及甜菊糖提取物调味，过滤、灭菌制得。该发明对黑茶、荷叶、青钱柳、金银花的配用，使茶饮料具有降尿酸、清热解毒的功效。而其说明书又记载了该发明所生产的饮料，综合了茶、荷叶、青钱柳、柠檬、金银花、昆仑雪菊的效果，在保健方面，有显著降低尿酸的效果。该发明也没有公开其内部机理，不清楚是综合了茶、荷叶、青钱柳、柠檬、金银花、昆仑雪菊的什么成分导致了其可以显著降低尿酸。


技术实现要素：

7.有鉴于此，本发明的目的在于提出一种黑茶提取物的制备方法及产品和应用，该黑茶提取物的具体组成和含量能够更好地抑制黄嘌吟氧化酶活性，从而减少尿酸的合成进而降低尿酸，预防与治疗痛风。
8.所采用的技术方案为：
9.本发明的一种黑茶提取物的制备方法，包括如下步骤：
10.s1.称取干制的黑茶，以料液重量体积比为1:10
‑
15加入温热的75
‑
85℃水，将黑茶浸泡提取，提取时间为20
‑
30分钟；其中重量体积比为g:ml；
11.s2.60
‑
70℃保温，超高压500
‑
550mpa,第一次保压,提取5
‑
8分钟；第二次保压,在30
‑
40℃保温，提取10
‑
15分钟，得到黑茶提取物，其中黑茶提取物中茶多酚的含量为330
‑
390mg/g,茶多糖的含量为130
‑
160mg/g,黄酮类物质30
‑
39μg/ml。
12.进一步地，s1中，以料液重量体积比为1:15加入温热的80℃水，将黑茶浸泡提取，提取时间为20分钟。
13.进一步地，s1中，60℃保温，超高压500mpa,第一次保压,提取5分钟；第二次保压,在30℃保温，提取10分钟。
14.进一步地，还包括如下步骤：s3.步骤s2中得到的黑茶提取物浓缩至粘稠状，冻干成粉末。
15.进一步地，所述黑茶为天尖茶、百两茶、茯砖茶中的一种。
16.本发明的一种黑茶提取物，其是由上述方案所述的制备方法制备得到的。
17.本发明的黑茶提取物在制备用于治疗或预防以高尿酸导致痛风病症的食品或药物中的应用。
18.本发明的有益效果在于：
19.通过本发明的超高压法制备得到的黑茶提取物，其含有茶多酚的含量为330
‑
390mg/g,茶多糖的含量为130
‑
160mg/g,黄酮类物质30
‑
39μg/ml，该黑茶提取物的具体组成和含量能够更好地抑制黄嘌吟氧化酶活性，从而减少尿酸的合成进而降低尿酸，预防与治疗痛风。
具体实施方式
20.下面通过具体的实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将
本发明的保护范围局限于此。
21.实施例1
22.本实施例的一种黑茶提取物的制备方法，包括如下步骤：
23.s1.称取干制的黑茶100g，以料液重量体积比为1:15加入温热的80℃水1500ml，将黑茶浸泡提取，提取时间为20分钟；
24.s2. 60℃保温，超高压500mpa,第一次保压,提取5分钟；第二次保压,在30℃保温，提取10分钟，得到黑茶提取物。
25.s3.步骤s2中得到的黑茶提取物浓缩至粘稠状，冻干成粉末，制得黑茶提取物样品。本实施例的黑茶为天尖茶。
26.干物质含量测定：参照gb 5009.3
‑
2010《食品中水分的测定》中恒重法；
27.茶多酚含量测定：参照gb/t8313
‑
2008《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》中福林
‑
酚比色法；
28.茶多糖含量测定：用本技术领域的苯酚
‑
硫酸法。
29.黄酮类物质含量测定：用本技术领域的三波长
‑
分光光度法测定总黄酮。
30.测得黑茶提取物中茶多酚的含量为384mg/g,茶多糖的含量为123mg/g,黄酮类物质38μg/ml。黑茶提取物的得率为31.92％；
31.实施例2
32.参照实施例1，与实施例1不同的是，本实施例的黑茶为茯砖茶。
33.测得黑茶提取物中茶多酚的含量为331mg/g,茶多糖的含量为152mg/g,黄酮类物质31μg/ml。黑茶提取物的得率为26.73％。
34.实施例3
35.参照实施例1，与实施例1不同的是，本实施例的黑茶为百两茶。
36.测得黑茶提取物中茶多酚的含量为362mg/g,茶多糖的含量为147mg/g,黄酮类物质34μg/ml。黑茶提取物的得率为21.85％。
37.对比例1
38.参照实施例2，与实施例2不同的是，本对比例的s2步骤中，采用超高压400mpa。
39.测得黑茶提取物中茶多酚的含量为324mg/g,茶多糖的含量为141mg/g,黄酮类物质27μg/ml。黑茶提取物的得率为24.81％。
40.对比例2
41.参照实施例1，与实施例1不同的是，本对比例采用热水浸提法制备黑茶提取物：
42.称取黑茶100g,以料液比为1:15(w/v)与蒸馏水混合均匀，于95℃热水中浸提30min,加热期间，用玻璃棒搅拌均匀，使黑茶充分浸没于水中。加热完毕后，先用纱布滤出茶渣，在减压抽滤，收集滤液，于25℃，800r/min的条件下离心20min,取上清液。于旋转蒸发仪中浓缩至粘稠状，冻干成粉末，制得黑茶提取物样品。
43.测得黑茶提取物中茶多酚的含量为315mg/g,茶多糖的含量为117mg/g,黄酮类物质22μg/ml。黑茶提取物的得率为21.47％。
44.对比例3
45.参照实施例1，与实施例1不同的是，本对比例采用醇提法制备黑茶提取物：
46.称取黑茶100g,按料液比为1:15(w/v)加入体积分数为80％的乙醇溶液，加热回流
提取2h。冷却过滤后，于旋转蒸发仪中浓缩至粘稠状，冻干成粉末，制得黑茶提取物样品。
47.测得黑茶提取物中茶多酚的含量为374mg/g,茶多糖的含量为112mg/g,黄酮类物质25μg/ml。黑茶提取物的得率为28.51％。
48.xod抑制活性测定：
49.酶促反应在0.2m ph7.5的盐酸盐缓冲溶液中进行。用少量1.0m naoh溶液溶解黄嘌呤，用盐酸盐缓冲溶液稀释至0.42mm。用盐酸盐缓冲溶液稀释xod溶液(酶活为4.55u/ml)以制备xod工作液(酶活0.05u/ml)。实施例1
‑
3以及对比例1
‑
3得到的黑茶提取物样品用相应溶剂二甲基亚砜(dmso)稀释至合适质量浓度(dmso终浓度低于0.5％)，以测定它们的xod抑制活性。
50.精确称取溶解后的实施例1
‑
3以及对比例1
‑
3的黑茶提取物样品，每一实施例或对比例均配制成梯度浓度样品溶液(0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2mg/ml)。
51.向96孔酶标板微孔中加入50μl的上述在溶剂溶解后的实施例1
‑
3以及对比例1
‑
3的黑茶提取物样品梯度溶液和50μlxod工作液(0.05u/ml),25℃保温5min后加入150μl黄嘌呤溶液(0.42mm)以启动酶促反应。反应进行60min时，加入80μl1.0m hcl溶液终止反应。于290nm处测定吸光值。对照组用磷酸盐缓冲溶液(0.2m，ph7.5)代替样品溶液，背景组用缓冲液代替酶溶液。阳性对照组用同浓度的别嘌呤醇溶液代替黑茶提取物样品溶液，每组做4个平行，求xod抑制率。计算公式如下：
52.xod抑制率(％)＝{1
‑
[aa
‑
a0)
‑
(ab
‑
a0)]/(aa
‑
a0)}
×
100
[0053]
式中，aa为对照组的吸光值；
[0054]
a0为背景组的吸光值；
[0055]
ab为实验组的吸光值。
[0056]
测试结果参见表1。
[0057]
表1
[0058][0059]
综上实验，可以得到：
[0060]
1.超高压提取法高于热水浸提法和醇提法，这可能是因为超高压的剪切作用会破坏细胞的细胞壁、细胞膜、细胞器，导致细胞渗透性加强，使更多的活性物质溶出，从而获得更高的得率。
[0061]
2.针对黑茶的超高压提取法，500mpa比400mpa具有更高的得率。
[0062]
3.对xod的活性抑制，可能跟茶多酚、茶多糖和黄酮类物质的含量和相互比值有关，黑茶提取物中茶多酚的含量为330
‑
390mg/g,茶多糖的含量为130
‑
160mg/g,黄酮类物质30
‑
39μg/ml，对xod活性抑制率较佳，不在这个范围或相互比值下，其活性抑制率较低。
[0063]
4.为了得到较佳的xod活性抑制率，采用500mpa或以上的超高压法来提取黑茶提取物是较佳的。相比于热水浸提法和醇提法，能够得到茶多酚的含量为330
‑
390mg/g,茶多糖的含量为130
‑
160mg/g,黄酮类物质30
‑
39μg/ml，从而得到较佳的xod活性抑制率。
[0064]
作为一种应用，该含有茶多酚的含量为330
‑
390mg/g,茶多糖的含量为130
‑
160mg/g,黄酮类物质30
‑
39μg/ml的黑茶提取物，可以应用于制备用于治疗或预防以高尿酸导致痛风病症的食品或药物。例如用这种黑茶提取物去煮食材，能够控制食材中外源性嘌呤的摄入，从而预防通风隐患。
[0065]
上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。