观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法与流程

技术特征：
1.观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，其特征在于，包括如下步骤：a、向日葵种植：a、选种：挑选成熟的比较饱满的种子；b、播种：温室，播种前催芽，种子尖的一头朝下，插进土壤中，再覆一层薄土，用喷壶喷水，让土壤保持湿润的状态，温室光照下出芽；c、移栽：向日葵长出三对真叶之后开始移栽；d、取样：进行快繁与愈伤诱导实验；b、以腋芽为外植体
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进行不定芽诱导：a、样品处理(1)田间选取顶花即将开放或者已经开放的向日葵植株；(2)采回后将整个植株分成几段，保留带腋芽茎段；(3)用洗洁精清洗干净，然后用清水冲洗0.5h；b、外植体制备(1)将所有腋芽切下后，无菌水冲洗一遍，先用75％乙醇浸泡30
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60s，再用10％过氧化氢或者3％次氯酸钠溶液消毒15
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20min或hgcl2消毒浸泡10
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15min，无菌水冲洗4
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5次；然后在超净工作台上吸取多余水分；(2)切取腋芽5mm大小的顶部作为外植体，接种到合适的培养基上；c、不同激素浓度对不同基因型观赏向日葵腋芽诱导不定芽的影响：以腋芽为外植体，在加入等量0.03mg/l naa的ms培养基中添加不同浓度的6
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ba，浓度处理包括0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mg/l共6个浓度梯度，以不同供试基因型4
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6d的腋芽作为外植体材料，研究不定芽的诱导效果；d、不定芽的伸长诱导：设置3
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4个组合，摸索适合不定芽伸长诱导的最佳条件，ms 0.1mg/l ba 0.08mg/l naa。e、再生诱导：ms 0.5mg/l 6
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ba 0.2mg/l iaa 1.0gmgcl2ms 1.0mg/l 6
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ba 0.1mg/l iaa 1.0g mgcl2f、生根诱导：1/2ms 0.5mg/l ibag、再生株系的练苗培养：获得根系发达的向日葵再生植株，开盖练苗2
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3日，喷施水保持叶面湿润，洗净根系培养基，水培成活后移栽；h、实验结果：愈伤组织获得，再生植株获得。2.根据权利要求1所述的观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，其特征在于：所述步骤b中设置不同的激素配比与浓度，3
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4个组合的培养基，1/2ms固体培养基含1.8g/l琼脂，灭菌前调节ph值至5.8
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6.0。3.根据权利要求1所述的观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，其特征在于：所述步骤b中将向日葵外植体接种于含有不同激素的培养基广口瓶中，外植体在培养25
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30d后，分化出初生不定芽，继续培养10
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15d后继代培养1次，温度25
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28℃，日光/黑夜光照时间12h/12h，光照强度1600lux。
4.根据权利要求1所述的观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，其特征在于：所述步骤c中在不同的细胞分裂素和生长素的配比情况下，不同材料诱导出不定芽的难易程度和出芽时间并不一致。

技术总结
本发明公开了观赏向日葵快繁与组织培养植株再生方法，挑选成熟的比较饱满的种子；温室，播种前催芽，种子尖的一头朝下，插进土壤中，再覆一层薄土，用喷壶喷水，让土壤保持湿润的状态，温室光照下出芽。本发明以观赏向日葵腋芽为外植体，研究了不同种类和浓度的植物生长调节剂对向日葵组织培养过程的影响，建立了其离体快速繁殖的技术体系；在向日葵快繁体系建立的基础上，建立向日葵愈伤胚性体细胞的诱导，以建立稳定、高效组织培养再生体系；在向日葵组织再生体系建立的基础上，不断优化再生体系条件，以建立稳定、高效再生体系为目标，进行基因重组载体构建，并建立向日葵的遗传转化体系，为深入基因功能研究提供服务。为深入基因功能研究提供服务。为深入基因功能研究提供服务。


技术研发人员：陈珊宇 丁林云 阮关海 张慧 厉宝仙 怀燕 田燕 孟思洁
受保护的技术使用者：浙江省农业技术推广中心（浙江省蚕种质量检验站）
技术研发日：2021.07.26
技术公布日：2021/10/18