一种具有协同增效作用的植物油与绿僵菌杀虫组合物及其制备方法与流程

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1.本发明属于害虫防治领域，具体涉及一种具有协同增效作用的植物油与绿僵菌杀虫组合物及其制备方法。


背景技术：

2.生态先行、绿色发展是重大国家战略。化学农药的大量使用是造成农业污染的重要原因，化学农药的无效滥用和害虫抗药性激增的恶性循环，最终导致对人类的急性药害或虽然隐蔽和缓慢但更为严重且不可挽救的病害。昆虫病原微生物在害虫生物防治方面发挥着重要的作用，尤其是绿僵菌作为常用的昆虫病原真菌对鳞翅目、半翅目、双翅目、鞘翅目等害虫有较强的毒杀和拒食作用。其对脊椎动物和人类无害，特异性强；有自然传播感染能力；害虫不易产生抗药性；能保护害虫天敌；容易生产；不污染环境。然而也存在一些缺点：选择性感染只能防治特定种类害虫；感染有潜伏期，杀虫效果慢；作用效果受环境条件影响较大等。如何使其发挥有效广谱的杀虫作用，见效快，并起到可持续控制的作用是目前害虫防控的重要策略。优良的植物油乳剂对环境和人体安全无害，且因是物理防治机制，作物病虫对其没有抗药性，具有杀虫、拒虫、抑病等多种作用。目前，国内外还没有任何专利提及微生物杀虫剂与特定植物油助剂的混配作用效果。


技术实现要素：

3.本发明的目的是提供一种具有协同增效作用的植物油与绿僵菌杀虫组合物。
4.本发明的具有协同增效作用的植物油与绿僵菌杀虫组合物，包括植物油和绿僵菌。
5.优选，所述的植物油为专利号：zl 201810995471.9的酱油渣甘油酯，具体为实施例1中制备的酱油渣甘油酯。
6.优选，所述的植物油是溶液，其浓度为4.55～3.03mg/ml，所述的绿僵菌是溶液，浓度为108个/ml，所述的植物油溶液和绿僵菌溶液的体积比是1:1。
7.优选，所述的植物油是溶液，其浓度为4.49mg/ml，所述的绿僵菌是溶液，浓度为1.32
×
108孢子/ml，所述的植物油溶液和绿僵菌溶液的体积比是2:8～8:2。
8.进一步优选，所述的植物油溶液和绿僵菌溶液的体积比是2:8～6:4。
9.更进一步优选，所述的植物油溶液和绿僵菌溶液的体积比是5:5。
10.本发明利用植物油特性，开发以植物油为助剂的微生物组合物杀虫剂及混配方法，有利于提高病虫害的实际防治效果，减少用药量，降低成本，延长药剂使用寿命。
11.本发明的植物油与绿僵菌组合物触杀效果好，对同翅目、双翅目、鳞翅目、鞘翅目等害虫具有广谱的杀虫效果，该组合物作用机理为：物理防治和生物防治协同增效。前期植物油物理杀虫，后期绿僵菌生物杀虫产生増效，且该混配方法以特定植物油为载体助剂有效提高了绿僵菌入侵昆虫体壁的速度，降低了植物油和绿僵菌在田间施用剂量及杀虫可持
续问题，同时也解决了绿僵菌杀虫见效慢，受环境影响，很难实现对广谱性害虫长期定植感染等问题。其绿色环保，成本低，克服了化学防治的农药残留、费用高、污染等问题。为害虫绿色防控技术研究提供了有效的方法。
附图说明：
12.图1是植物油与绿僵菌杀虫组合物对黄曲条跳甲触杀效果图；
13.图2是不同植物油和绿僵菌配比对柑橘木虱成虫触杀的增效作用。
具体实施方式：
14.以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
15.以下实施例所用的植物油为广东省科学院动物研究所研发的乳化剂(专利号：zl201810995471.9，实施例1中制备的酱油渣甘油酯)，其浓度为0.91kg/l，50倍水稀释：18.20mg/ml，100倍水稀释：9.10mg/ml，200倍水稀释：4.55mg/ml，300倍水稀释：3.03mg/ml，400倍水稀释：2.28mg/ml，800倍水稀释：1.14mg/ml。
16.绿僵菌为绿僵菌cqma421c，可以从商业化公司购买。
17.实施例1：植物油与绿僵菌单独和混配对黄曲条跳甲的触杀作用
18.分别配置200倍水稀释的植物油，108个/ml的绿僵菌孢子悬浮液，200倍水稀释的植物油和108个/ml的绿僵菌孢子悬浮液1:1体积比混合的混配液，300倍水稀释的植物油和108个/ml绿僵菌孢子悬浮液1:1体积比混合的混配液。以去离子水为对照，将每20头黄曲条跳甲成虫装入20*15cm的网袋中，并用定量喷雾器分别对网袋中的昆虫均匀喷洒10ml配置的试剂。记录成虫的死亡数并计算累积死亡率，每个处理3次重复。
19.结果如图1所示，从图1可以看出，单一的200倍水稀释的植物油，108个/ml的绿僵菌孢子悬浮液分别对黄曲条跳甲成虫的100％致死率所需要的时间分别是3d和5d。而200倍水稀释的植物油 108个/ml的绿僵菌孢子悬浮液的1:1体积比混合的混配液和300倍水稀释的植物油 108个/ml的绿僵菌孢子悬浮液的1:1体积比混合的混配液对黄曲条跳甲成虫的100％致死率所需要的时间分别是2d和4d。由此可见，植物油与绿僵菌混配的协同增效作用缩短了对黄曲条跳甲致死的时间。
20.实施例2：植物油与绿僵菌单剂对柑橘木虱成虫的触杀毒力
21.1、植物油药效实验
22.先将植物油与去离子水按照体积比1:1比例震荡搅拌均匀，再加入去离子水至植物油的稀释倍数分别为50倍、100倍、200倍、400倍、800倍，质量浓度分别为18.20mg/ml、9.10mg/ml、4.55mg/ml、2.28mg/ml、1.14mg/ml。分别配置50ml。
23.于供试植物上捕捉柑橘木虱成虫若干，每20只成虫分为一组，分别放入18个网袋中，剪取新鲜的九里香嫩梢一同置入。使用手持喷雾器进行喷雾，对柑橘木虱成虫进行室内毒力测定，使用喷雾瓶按照5个浓度梯度分别均匀喷洒10ml不同浓度的植物油以及去离子水于网袋表面，使网袋表面及九里香嫩梢湿润且水雾均匀分布，每个浓度梯度以及去离子水对照设置三个重复，于室内培养，1d后观察柑橘木虱成虫的死亡情况，记录死亡数，并计算死亡率及lc
50
。1d后的lc
50
为202.522倍，计算浓度为：4.49mg/ml(表1)。
24.2、绿僵菌药效实验
25.经纯化的绿僵菌菌种在pda平板26
±
1℃培养7d，随后从培养基表面收集分生孢子粉。用含0.2％吐温tween
‑
80无菌水过滤收集分生孢子液。在预试实验的基础上，加入去离子水至绿僵菌孢子悬浮液浓度为0.25
×
108个孢子/ml、0.5
×
108个孢子/ml、1
×
108个孢子/ml、2
×
108个孢子/ml、4
×
108个孢子/ml。震荡混匀，分别配置50ml。
26.于供试植物上捕捉柑橘木虱成虫若干，每20只成虫分为一组，分别放入18个网袋中，剪取新鲜的九里香嫩梢一同置入。使用手持喷雾器进行喷雾，对柑橘木虱成虫进行室内毒力测定，使用喷雾瓶按照5个浓度梯度分别均匀喷洒10ml不同浓度的绿僵菌溶液以及去离子水于网袋表面，使网袋表面及九里香嫩梢湿润且药液均匀分布，每个浓度梯度以及去离子水对照设置三个重复，于室内培养，实验后每天将新的九里香嫩梢置入网袋，以确保柑橘木虱食物充足。于1d后观察柑橘木虱成虫的死亡数，并计算死亡率及lc
50
。绿僵菌1d后的lc
50
为1.32
×
108孢子/ml(表1)。
27.表1植物油和绿僵菌单剂对柑橘木虱成虫的毒力(1d)
[0028][0029]
实施例3：植物油与绿僵菌组合物不同混配比例对柑橘木虱成虫的触杀效果分析
[0030]
将植物油用水配制成lc
50
值所对应浓度溶液，即为4.49mg/ml。
[0031]
将绿僵菌配制为lc
50
值所对应浓度溶液，即浓度为1.32
×
108个孢子/ml。
[0032]
将上述植物油溶液和绿僵菌溶液按不同体积比进行混配，混配比例分别为：植物油：绿僵菌＝0:10，1:9，2:8，3:7，4:6，5:5，6:4，7:3，8:2，9:1，10:0。以去离子水为对照，将每20头柑橘木虱成虫装入20*15cm的网袋中，并用定量喷雾器分别对网袋中的昆虫均匀喷洒10ml配置的试剂。记录成虫的死亡数并计算累积死亡率，每个处理3次重复。并利用交互测定法分析混配剂对柑橘木虱成虫的毒力作用。
[0033]
不同配比的混配及对处理1d后的柑橘木虱成虫毒力结果见图2。植物油与绿僵菌配比为2:8，3:7，4:6，5:5，6:4，8:2时试剂死亡率位于等校线的上方，表明这些配比混剂具有对柑橘木虱触杀的增效作用对这6个点向等效线做垂线，垂线段越长，增效作用越大，即增效作用从大到小依次为：5:5，6:4，4:6，3:7，8:2，2:8。